本发明涉及生物制剂领域，主要涉及一种抑菌剂、其制备方法及应用，具体涉及一种防治细菌性褐斑病的抑菌剂、其制备方法及应用。
背景技术：
平菇是世界四大食用菌之一，也是栽培量最大的食用菌。每年因病虫害而造成的经济损失难以估计。近年来，由托拉斯假单胞杆菌Pseudomonas tolaasii Paine引起的平菇细菌性褐斑病危害重，且寄主范围广，还可侵染双孢蘑菇Agaricus bisporus、金针菇Flammulina velutipes等多类食用菌。随着周年生产的实行和栽培规模的逐渐扩大，平菇细菌性褐斑病日益严重，尤其春秋季节。菇场内一旦发生褐斑病，就很难彻底防治，经常是逐年加重，严重时发病率达80％以上。细菌性褐斑病不仅影响平菇产量，更重要的是降低平菇品质，每年给平菇生产造成严重的损失，迫切需要寻求有效的预防控制手段。
目前控制平菇细菌性褐斑病蔓延的主要措施是农业防治及喷洒抗生素，但是抗生素的广泛使用而引起的各种问题也接踵而来，如造成残毒、土质退化、污染环境及抗药性的产生等。对于人体健康、生态环境造成了很大的威胁，不利于农业生产的可持续发展。目前绿色农业、食品安全、无公害蔬菜、无污染蔬菜的概念已日益深入人心。
1980年以来，利用生物制剂进行植物病虫害的生物防治方法逐渐受到人们的重视。由于竹醋液本身成分复杂，主要成分是有机酸、酚类、酮类、醇类及酯类等，这些成分具有抑菌性，并且不同成分间有协同增效作用，是天然的、无毒的、安全的抑菌剂。
CN 1537630 A公开了一种含竹醋、壳聚糖、银离子的药剂及其制备方法和应用，该药剂用于防治脚气等皮肤疾病。该申请并没有公开具体竹醋和壳聚糖的比例，且其针对的是皮肤疾病。目前，国际上尚无竹醋液作为平菇细菌性褐斑病的生物农药的报道。
技术实现要素：
本发明的目的在于针对目前对平菇细菌性褐斑病缺乏有效的生物防治手段，提供一种抑菌剂、其制备方法及应用，所述抑菌剂可以有效防治平菇细菌性褐斑病，并可以显著提高平菇产量。
为实现上述目的，本发明采取如下技术方案：
一方面，本发明提供一种抑菌剂，所述抑菌剂包括竹醋液和壳聚糖；
其中，所述竹醋液和壳聚糖的体积比为(1-20):1。
所述竹醋液和壳聚糖的体积比为1:1、2:1、3:1、4:1、5:1、6:1、7:1、8:1、9:1、10:1、11:1、12:1、13:1、14:1、15:1、16:1、17:1、18:1、19:1或20:1。
本发明中，有些菌类在种植时会产生褐斑病，是由于托拉斯假单胞杆菌引起的，会互相传播，造成菌类的死亡，而本发明抑菌剂通过特定的竹醋液和壳聚糖的比例，相互作用，能够特定的针对菌类的托拉斯假单胞杆菌，能够有效的杀灭托拉斯假单胞杆菌，防治菌类的褐斑病。
优选地，所述竹醋液和壳聚糖的体积比为(4-16):1，优选为(8-12):1，进一步优选为10:1。
优选地，所述竹醋液的质量百分比为1-10％，例如可以是1％、2％、3％、4％、5％、6％、7％、8％、9％或10％，优选为2-6％，进一步优选为4％。
优选地，所述壳聚糖的质量百分比为0.1-5％，例如可以是0.1％、0.2％、0.3％、0.4％、0.5％、0.6％、0.7％、0.9％、1％、1.2％、1.5％、1.8％、2％、2.2％、2.5％、2.8％、3％、3.2％、3.5％、3.8％、4％、4.2％、4.5％、4.8％或5％，优选为0.3-3％，进一步优选为0.5％。
第二方面，本发明提供如第一方面所述的抑菌剂的制备方法，包括如下步骤：
(1)将竹醋液和活性炭粉混合，搅拌静置，取出上清液即竹醋液；
(2)将步骤(1)得到的上清液即竹醋液按配方量与壳聚糖混合，搅拌均匀，制备得到所述抑菌剂。
优选地，所述活性炭和竹醋液的质量体积比为1:(10-40)，例如可以是1:10、1:11、1:12、1:13、1:14、1:15、1:16、1:17、1:18、1:19、1:20、1:21、1:22、1:23、1:24、1:25、1:26、1:27、1:28、1:29、1:30、1:31、1:32、1:33、1:34、1:35、1:36、1:37、1:38、1:39或1:40，优选为1:(12-30)，进一步优选为1:(15-20)，最优选为1:20。
优选地，步骤(1)所述的搅拌时间为0.2-5h，例如可以是0.2h、0.3h、0.4h、0.5h、0.6h、0.7h、0.8h、0.9h、1h、1.2h、1.4h、1.5h、1.8h、1.9h、2h、2.2h、2.3h、2.5h、2.8h、3h、3.2h、3.3h、3.5h、3.8h、4h、4.2h、4.5h、4.8h或5h，优选为0.3-3h，进一步优选为0.5h。
优选地，步骤(1)所述的静置时间为1-10天，例如可以是1天、2天、3天、4天、5天、6天、7天、8天、9天或10天，优选为2-8天，进一步优选为3-6天，最优选为3天。
优选地，步骤(2)所述的搅拌时间为1-20min，例如可以是1min、2min、3min、4min、5min、6min、7min、8min、9min、10min、11min、12min、13min、14min、15min、16min、17min、18min、19min或20min，优选为2-15min，进一步优选为3-10min，最优选为3min。
作为优选技术方案，所述抑菌剂的制备方法包括如下步骤：
(1)将质量体积比为1:(10-40)的活性炭粉和竹醋液混合，搅拌0.2-5h，静置1-10天，取出上清液即竹醋液；
(2)将步骤(1)得到的上清液即竹醋液按体积比为(1-20):1与壳聚糖混合，搅拌1-20min，混合均匀，制备得到所述抑菌剂。
第三方面，本发明提供一种抑菌栽培液，所述抑菌栽培液包括第一方面所述的抑菌剂。
第四方面，本发明提供一种生长促进剂，包括如第一方面述的抑菌剂。
优选地，所述抑菌剂的质量浓度为1-5％，例如可以是1％、1.5％、2％、2.5％、3％、3.5％、4％、4.5％或5％，优选为1-3％，进一步优选为2.5％。
本发明抑菌剂的浓度在1-5％以上时，拌在培养料中，起到促进菌丝生长的效果。
第五方面，本发明提供一种如第一方面所述的抑菌剂、如第二方面所述的制备方法制备得到的抑菌剂、如第三方面所述的抑菌栽培液或如第四方面所述的农药用于平菇、金针菇或双孢蘑菇中的任意一种或至少两种的组合的细菌性褐斑病的防治。
与现有技术相比，本发明具有如下优点：
(1)本发明抑菌剂针对性强，通过特定的竹醋液和壳聚糖的比例，相互作用，能够特定的针对菌类的托拉斯假单胞杆菌，能够有效的杀灭托拉斯假单胞杆菌，防治菌类的褐斑病；
(2)本发明制备的抑菌剂的抑菌带可达到8.95mm以上，防治效果可达73.21％以上；
(3)本发明抑菌剂制备过程简单，易于实施和操作，可实现工业化大规模生产，可为企业带来良好的经济效益，具备广阔的前景。
具体实施方式
为更进一步阐述本发明所采取的技术手段及其效果，以下结合本发明的优选实施例来进一步说明本发明的技术方案，但本发明并非局限在实施例范围内。
下述实施例中所使用的实验方法如无特殊说明，均为常规方法。
下述实施例中所用的材料、试剂等，如无特殊说明，均可从商业途径得到。
实施例1
所述抑菌剂的制备方法包括如下步骤：
(1)将质量体积比为1:20的活性炭粉和质量百分比为4％竹醋液混合，搅拌0.5h，静置3天，取出上清液即竹醋液；
(2)将步骤(1)得到的上清液即竹醋液按体积比为10:1与质量百分比为0.5％壳聚糖混合，搅拌3min，混合均匀，制备得到所述抑菌剂。
实施例2
所述抑菌剂的制备方法包括如下步骤：
(1)将质量体积比为1:10的活性炭粉和质量百分比为5％竹醋液混合，搅拌0.2h，静置1天，取出上清液即竹醋液；
(2)将步骤(1)得到的上清液即竹醋液按体积比为1:1与质量百分比为1％壳聚糖混合，搅拌1min，混合均匀，制备得到所述抑菌剂。
实施例3
所述抑菌剂的制备方法包括如下步骤：
(1)将质量体积比为1:15的活性炭粉和质量百分比为2％竹醋液混合，搅拌0.8h，静置2天，取出上清液即竹醋液；
(2)将步骤(1)得到的上清液即竹醋液按体积比为3:1与质量百分比为0.3％壳聚糖混合，搅拌5min，混合均匀，制备得到所述抑菌剂。
实施例4
所述抑菌剂的制备方法包括如下步骤：
(1)将质量体积比为1:25的活性炭粉和质量百分比为6％竹醋液混合，搅拌1h，静置5天，取出上清液即竹醋液；
(2)将步骤(1)得到的上清液即竹醋液按体积比为8:1与质量百分比为3％壳聚糖混合，搅拌8min，混合均匀，制备得到所述抑菌剂。
实施例5
所述抑菌剂的制备方法包括如下步骤：
(1)将质量体积比为1:30的活性炭粉和质量百分比为1％竹醋液混合，搅拌2h，静置4天，取出上清液即竹醋液；
(2)将步骤(1)得到的上清液即竹醋液按体积比为12:1与质量百分比为0.1％壳聚糖混合，搅拌10min，混合均匀，制备得到所述抑菌剂。
实施例6
所述抑菌剂的制备方法包括如下步骤：
(1)将质量体积比为1:32的活性炭粉和质量百分比为10％竹醋液混合，搅拌3h，静置6天，取出上清液即竹醋液；
(2)将步骤(1)得到的上清液即竹醋液按体积比为15:1与质量百分比为5％壳聚糖混合，搅拌12min，混合均匀，制备得到所述抑菌剂。
实施例7
所述抑菌剂的制备方法包括如下步骤：
(1)将质量体积比为1:35的活性炭粉和竹醋液混合，搅拌4h，静置7天，取出上清液即竹醋液；
(2)将步骤(1)得到的上清液即竹醋液按体积比为18:1与壳聚糖混合，搅拌15min，混合均匀，制备得到所述抑菌剂。
实施例8
所述抑菌剂的制备方法包括如下步骤：
(1)将质量体积比为1:40的活性炭粉和竹醋液混合，搅拌5h，静置10天，取出上清液即竹醋液；
(2)将步骤(1)得到的上清液即竹醋液按体积比为20:1与壳聚糖混合，搅拌20min，混合均匀，制备得到所述抑菌剂。
实施例9
所述抑菌剂的制备方法包括如下步骤：
(1)将质量体积比为1:38的活性炭粉和竹醋液混合，搅拌3.5h，静置8天，取出上清液即竹醋液；
(2)将步骤(1)得到的上清液即竹醋液按体积比为13:1与壳聚糖混合，搅拌12min，混合均匀，制备得到所述抑菌剂。
实施例10
所述抑菌剂的制备方法包括如下步骤：
(1)将质量体积比为1:16的活性炭粉和竹醋液混合，搅拌2.5h，静置3天，取出上清液即竹醋液；
(2)将步骤(1)得到的上清液即竹醋液按体积比为10:1与壳聚糖混合，搅拌5min，混合均匀，制备得到所述抑菌剂。
对比例1
对比例1与实施例1的不同仅在于竹醋液按体积比为0.5:1与壳聚糖混合，其他组分的比例和制备方法都与实施例1一致。
对比例2
对比例2与实施例1的不同仅在于竹醋液按体积比为25:1与壳聚糖混合，其他组分的比例和制备方法都与实施例1一致。
对比例3
CN 1537630 A
对比例3与实施例1的不同仅在于还添加了银离子，其他组分的比例和制备方法都与实施例1一致。
对比例4
CN 103931741 A
对比例4与实施例1的不同仅在于还添加了茶多酚2份、绿茶粉2份、花椒提取物8份、花椒叶提取物10份，其他组分的比例和制备方法都与实施例1一致。
将实施例1-10和对比例1-4制备的抑菌剂进行抑菌能力测定和田间试验，结果如下表1所示；
表1
从表1可以看出，本申请制备的抑菌剂的抑菌带可达到8.95mm以上，防治效果可达73.21％以上，而通过实施例和对比例的对比可以发现，调节竹醋液和壳聚糖的比例会明显降低抑菌剂的抑菌效果，而加入别的组分也会降低抑菌剂的抑菌效果。
实施例11
将实施例1制备的抑菌剂稀释至2.5％的浓度，添加入配料中，搅拌均匀，进行种植，促进了菌丝的生长。
实施例12
将实施例1制备的抑菌剂稀释至3％的浓度，添加入配料中，搅拌均匀，进行种植，促进了菌丝的生长。
实施例13
将实施例1制备的抑菌剂稀释至5％的浓度，添加入配料中，搅拌均匀，进行种植，促进了菌丝的生长。
申请人声明，本发明通过上述实施例来说明本发明的详细方法，但本发明并不局限于上述详细方法，即不意味着本发明必须依赖上述详细方法才能实施。所属技术领域的技术人员应该明了，对本发明的任何改进，对本发明产品各原料的等效替换及辅助成分的添加、具体方式的选择等，均落在本发明的保护范围和公开范围之内。