本发明涉及农用杀菌剂应用领域,具体涉及含茉莉酸甲酯的组合物在柑橘溃疡病的应用。
背景技术：
近年来,随着广西种植的柑橘品种的增多,溃疡病的发生也越来越普遍,柑橘溃疡病防治措施有很多，化学防治是重要措施。现化学防治的药剂中铜制剂防治效果较好，但容易诱发螨害和易产生药害，影响果品质量。因此，寻求高效、低毒、安全的柑橘溃疡病防治药剂显得尤为重要。
中生菌素，英文名称为：zhongshengmycin，为n-糖甙类抗生素杀菌剂，其抗菌谱广，能够抗革兰氏阳性，阴性病菌，分枝杆菌，酵母菌及丝状真菌。特别对农作物致病菌和白菜软腐病菌、黄瓜角斑病菌、水稻白叶枯病菌、水稻细菌性条斑病、柑橘溃疡病等均具有明显的抗菌活性。
茉莉酸甲酯(methyljasmonate，ja_me)，是一类脂肪酸的衍生物，存在于高等植物体内的内源生长调节物质，是一种植物诱导抗病研究领域应用较广的高活性激发子，在诱导植物抗病性方面的作用已备受人们关注。大量试验证实，茉莉酸类(jasmonates，jas)作为植物抗病反应的重要信号分子，能激活与植物抗病反应相关的防御保护机制，诱导植物产生对多种病害的系统获得抗性。
在农业生产中，通过不同作用机理的有效成分进行复配，是延缓病害产生抗性常用的方法，中生菌素与茉莉酸甲酯作用机理不同，在一定比例范围内混配具有很好的增效作用，目前关于中生菌素与茉莉酸甲酯的混配用于柑橘溃疡病在国内外尚未见相关报道。
技术实现要素：
本发明要解决的技术问题是，提供含茉莉酸甲酯的组合物在柑橘溃疡病的应用，能显着提高药效，能有效的控制病害的发展，并且有利于缓解病菌抗药性。
为了解决上述技术问题，本发明采取的技术方案是：含茉莉酸甲酯的组合物在柑橘溃疡病的应用。
所述组合物的有效成分由中生菌素和茉莉酸甲酯组成，中生菌素和茉莉酸甲酯的重量比为3-20:1,优选的，中生菌素和茉莉酸甲酯的重量比为4:1和8:1。
所述的中生菌素在组合物中的重量百分比为2-10％，茉莉酸甲酯在组合物中的重量百分比为0.5-5％。
所述的组合物加入适当的辅助剂可加工成农业上可接受的任意剂型，优选为可湿性粉剂。
所述的组合物制备成可湿性粉剂需要的辅助剂包括填料、粘结剂、分散剂、润湿剂、崩解剂或其它有益于有效成分在制剂中稳定和药效发挥的物质，都是农药制剂领域中常用或允许使用的各种成份。
本发明具有以下优点和显著的技术效果:
(1)活性成分中生菌素和茉莉酸甲酯的作用机理不同,相互混配病菌不易产生抗性；室内生测结果表明，中生菌素和茉莉酸甲酯合理混配对柑橘溃疡病病菌增效明显，有利于减少农药施用量和降低农药成本，延长中生菌素的生命周期。
(2)茉莉酸甲酯作为植物体内的内源生长调节物质能提高植物体对病虫害、干旱、高温、低温等条件下的抗逆反应，有助于提高植物免疫力，有利于减轻病害的发展。
具体实施方式
以下结合实施例对本发明的技术方案和有益效果作进一步说明，本发明所述的百分比均为重量百分比。
一、制备实施例
实施例1：5％中生菌素·茉莉酸甲酯可湿性粉剂
配方：按量称取中生菌素4.0％，茉莉酸甲酯1.0％、烷基萘磺酸盐5.0％、十二烷基硫酸钠3.5％，白炭黑10％,硅藻土补足至100％。
实施例2：4.5％中生菌素·茉莉酸甲酯可湿性粉剂
配方：按量称取中生菌素4％、茉莉酸甲酯0.5％、烷基苯磺酸钙盐2.5％、十二烷基硫酸钠4.5％,膨润土补足至100％。
实施例3：12.5％中生菌素·茉莉酸甲酯可湿性粉剂
配方：按量称取中生菌素10％、茉莉酸甲酯2.5％、烷基苯磺酸钙盐4.5％、十二烷基硫酸钠5％,高岭土补足至100％。
实施例4：10.5％中生菌素·茉莉酸甲酯可湿性粉剂
配方：按量称取中生菌素10％，茉莉酸甲酯0.5％、木质素磺酸盐6％、无患子粉4％、白炭黑10％，高岭土补足至100％。
实施例5：8.5％中生菌素·茉莉酸甲酯可湿性粉剂
配方：按量称取中生菌素8.0％，茉莉酸甲酯0.5％、木质素磺酸盐2.5％、十二烷基苯磺酸钠2.5％,高岭土补足至100％。
实施例6：15％中生菌素·茉莉酸甲酯可湿性粉剂
配方：按量称取中生菌素10.0％，茉莉酸甲酯5.0％、烷基萘磺酸盐8％、十二烷基硫酸钠3.5％，白炭黑10％,硅藻土补足至100％。
上述实施例1-6的制备方法为，按配方比例称量好各成分,在混合缸中混合均匀，经气流粉碎机粉碎后再混合均匀，即可制得中生菌素·茉莉酸甲酯可湿性粉剂产品。
二、生物活性实施例
本发明的生物活性试验采用室内生测毒力测定和大田药效试验相结合的方法。
实施例1：中生菌素、茉莉酸甲酯及复配剂对柑橘溃疡病菌的室内毒力测定
试验对象：柑橘溃疡病菌(xanthomonascitri(hahse))(采自田间，并经分离纯化)
试验方法：试验参考《农药生物测定技术》(陈年春主编，北京农业大学出版社出版)，以及中华人民共和国农业行业标准ny/t1156.16-2008《农药室内生物测定试验准则杀菌剂第16部分：抑制细菌生长量试验浑浊度法》，采用浑浊度法测定中生菌素、茉莉酸甲酯及混配对柑橘溃疡病菌的室内毒力。
a、靶标细菌的培养：选用na培养基(nutrientagar)培养基(1lna培养基含聚蛋白胨5g，酵母粉1g，牛肉浸膏3g，蔗糖15g，琼脂17g，用10mol/l的naoh调至ph7.0)于30℃细菌培养箱中钝化培养柑橘溃疡病菌48h，挑取单菌落于30mlna液体培养基中，置于28℃-30℃条件下震荡培养(120r/min)18-30h至靶标菌生长到对数生长期。
b、药剂中生菌素和茉莉酸甲酯处理与培养：中生菌素母药直接用蒸馏水溶解为20μg/ml母液，设置5个系列质量浓度梯度，茉莉酸甲酯0.1％的吐温-80水溶液稀释为80μg/ml母液，设置5个系列质量浓度梯度，按设计的浓度定量加入药剂于30mlna液体培养基中，每处理设置4个重复，并设不含有效成分的处理作空白对照(ck)。向各处理培养基中分别接种对数生长期的靶标细菌100ul菌液，置于28℃-30℃条件下震荡培养(120r/min)16-20h至未加药剂的对照菌生长达到对数生长期时，测定并记载各处理的浑浊度。
浑浊度的测定：测定药剂处理前和处理后的菌在600nm的光吸收值。
计算方法：
用dps数据处理软件进行统计分析，计算各药剂的ec50，将防治效果换算成几率值(y)，药液浓度(ug/ml)转换成对数值(x)，以最小二乘法计算毒力方程和抑制中浓度ec50，然后按孙云沛法计算药剂的毒力指数及共毒系数(ctc)。
实测毒力指数(ati)＝(标准药剂ec50/供试药剂ec50)×100
理论毒力指数(tti)＝a药剂毒力指数×混剂中a的百分含量+b药剂毒力指数×混剂中b的百分含量
共毒系数(ctc)＝[混剂实测毒力指数(ati)/混剂理论毒力指数(tti)]×100
当ctc≤80，组合物表现为拮抗作用，当80<ctc<120，组合物表现为相加作用，当ctc≥120，组合物表现为增效作用。
测定结果见表1。
表1：中生菌素、茉莉酸甲酯及复配剂对柑橘溃疡病的室内毒力测定表
测定结果表明，当中生菌素和茉莉酸甲酯的配比为3-20:1时,共毒系数(ctc)大于120，当中生菌素和茉莉酸甲酯的重量比为4:1、8:1时，共毒系数为170.7、175.0，混配剂对柑橘溃疡病的增效明显，两者混配有利于减少各单剂的用量，在田间试验中有很好的指导价值。
实施例2：制备实施例1所得的制剂防治砂糖橘溃疡病的田间试验
试验位于广西南宁市郊，2015年9-10月高温多雨溃疡病盛发期。将5％中生菌素·茉莉酸甲酯可湿性粉剂兑水稀释1500倍，在砂糖橘溃疡病发病初期，对植株进行均匀喷雾，以叶片充分湿润为标准，第一次药后7d再喷施1次，共施药2次，末次药后15天的防治果为89.6％。对照药剂5％中生菌素可湿性粉剂兑水稀释1000倍、5％茉莉酸甲酯可湿性粉剂兑水稀释300倍，采用相同施药方法，末次药后15天的防效分别为73.5％和68.2％。
这说明中生菌素和茉莉酸甲酯复配后对砂糖橘溃疡病的防效明显好于对照单剂，中生菌素和茉莉酸甲酯合理混配有利于提高药效，降低农药成本。
实施例3：制备实施例2所得的制剂防治马水桔溃疡病的田间试验
试验位于广西桂林市荔浦县，2016年8-19月高温多雨季节处于溃疡病盛发期。将4.5％中生菌素·茉莉酸甲酯可湿性粉剂兑水稀释1500倍，在马水桔溃疡病发病初期，对马水桔植株进行均匀喷雾，以叶片充分湿润为标准，第1次药后7d再喷施1次，共施药2次，末次药后15天的防治效果为87.5％。对照药剂5％中生菌素可湿性粉剂兑水稀释1000倍、5％茉莉酸甲酯可湿性粉剂兑水稀释300倍，采用相同施药方法，末次药后15天的防治效果分别为72.6％、和64.82％。
这说明中生菌素和茉莉酸甲酯复配后对马水桔橘溃疡病的防效明显好于对照单剂，中生菌素和茉莉酸甲酯合理混配有利于提高药效，降低农药成本，有利于缓解病菌对抗生素类农药中生菌素的抗性，延长其生命周期。
试验中，试验药剂对柑橘类果树安全，生长无不良影响，因此值得在农业生产中推广应用。