本发明属于植物类，特别是一种乌蔹莓的培育技术。
背景技术：
乌蔹莓又名：猪婆藤、大叶五爪龙、过江龙、五叶藤、五爪金龙。乌蔹莓多年生草质藤本，根块状、近圆形。嫩枝有柔毛，后变无毛，茎有纵棱。卷须与叶对生，上部分叉。叶互生，掌状复叶，小叶5片，排列成鸟趾状；小叶片椭圆状卵形，先端短尖，基部楔形，两侧的4片小叶较小，成对生于同一小柄上，边缘有锯齿，两面仅中脉有短柔毛。5~6月开花，花小，黄绿色，排成聚伞花序生于叶腋。7~9月结果，果实卵球形，直径约7毫米，成熟时紫黑色。夏秋采全草，鲜用或晒干。生长分布于我国南方诸省及山东省。多生于山坡灌丛中、草丛中、林边、荒野、田间。味苦、酸，性寒。具有活血散瘀，解毒消肿，凉血的功用。乌蔹莓中药材是一类具有特殊用途的经济植物，一般以其根、茎、叶等器官为收获对象。多倍体植物中的染色体加倍，往往表现出植株的巨大性，能较好地满足中药生产的需求。若能将其培育为多倍体并固定下来，则可能提高其药用价值，同时为选育优质乌蔹莓找到一套实施办法。
技术实现要素：
本发明的目的在于提供一种通过人工授粉、非共生萌发、诱变剂处理、壮苗培养和试管苗移栽等各阶段，以秋水仙碱和氟乐灵混合液作为多倍体诱变剂处理乌蔹莓原球茎，提高了诱变率，处理一次即可获得数量可观的乌蔹莓，从而实现了本发明的目的。
本发明的一种乌蔹莓的培育技术，其特征在于包括以下步骤：
（1）人工授粉：按常规方法进行栽培管理，选定株系优良的乌蔹莓植株作为亲本，在乌蔹莓开花后进行异花授粉；
（2）非共生萌发：在乌蔹莓果发育基本成熟而果实未开裂时，经75%的酒精溶液消毒8分钟后，用无菌水冲洗8次后置于0.1%升汞溶液消毒20分钟，经无菌水冲洗8次后用无菌滤纸吸干，然后用无菌解剖刀沿蒴果纵轴方向将蒴果切开，用接种针将黄色种胚接种到萌发培养基上培养，培养36天后种子萌发成原球茎；
（3）诱变剂处理：将非共生萌发开成的原球茎转入含有诱变剂的液体分化培养基中，在29℃条件下进行间歇振荡诱变处理500小时；
（4）壮苗培养：将经诱变处理的原球茎乌蔹莓接种到壮苗培养基上培养，进一步形成10cm高的带根小苗；
（5）试管苗移栽：将培养瓶瓶盖打开并置于自然光照下炼苗8天后，将试管苗从培养瓶中取出，洗掉根部培养基，栽入由泥炭土和松树皮2：3混合成的基质中并按常规进行大田栽培管理；
上述（2）～（4）各步骤中的培养条件均为：培养温度32℃，每天光照16小时，光照强度2100lx。
步骤（2）所述的萌发培养基为：2.2g/l花宝1号+2.2g/l蛋白胨+210ml/l椰子汁+38g/l蔗糖+8.0g/l琼脂+1.2g/l活性炭，其余为ms培养基的有机物成分，ph为5.9。
步骤（3）所述的液体分化培养基为：1/2ms+2.2mg/l6-ba+0.8mg/lnaa+38g/l蔗糖+2.2g/l蛋白胨+0.6g/l酸性水解酪蛋白+1.2g/l活性炭，ph为5.9。
步骤（3）所述的诱变剂为0.06%秋水仙碱+0.05%氟乐灵的混合液。
步骤（4）所述的壮苗培养基为：2.2g/l花宝1号+2.2g/l花宝2号+1.8mg/lnaa+2.2g/l蛋白胨+0.6g/l酸性水解酪蛋白+38g/l蔗糖+8.2g/l琼脂+1.2g/l活性炭，其余为ms培养基的有机物成分，ph为5.9。
步骤（5）所述的试管苗为经染色体计数后选取染色体数目为2n=80的试管苗。
本发明具有的特点，简单、易行、诱变率高的特点。本发明处理一次即可获得数量可观的乌蔹莓，遗传育种提供亲本材料，也为乌蔹莓的新品种培育提供新的一条途径。
具体实施方式
下面实施例是对本发明的进一步说明，不是对本发明的限制。
实施例1
1、品种选育南方地方的强壮苗。
2、培育过程
（1）人工授粉：按常规方法进行栽培管理，开花进行异花授粉后120天蒴果成熟。
（2）非共生萌发：在蒴果发育基本成熟而未开裂时，经75%的酒精溶液消毒5分钟后，用无菌水冲洗3次后置于0.1%升汞溶液消毒10分钟，经无菌水冲洗4次后用无菌滤纸吸干，然后用无菌解剖刀沿蒴果纵轴方向将蒴果切开，用接种针将黄色种胚接种到萌发培养基上培养，培养25天后种子萌发成原球茎。所采用的萌发培养基为：1.8g/l花宝1号+1.5g/l蛋白胨+300ml/l椰子汁+28g/l蔗糖+5.0g/l琼脂+1.0g/l活性炭，其余为ms培养基的有机物成分，ph为5.8。
（3）诱变剂处理：将非共生萌发开成的原球茎转入含有0.01%秋水仙碱和0.02%氟乐灵混合液的液体分化培养基中，在26℃条件下进行间歇振荡诱变处理260小时，经染色体计数，诱导率为73%。所采用的液体分化培养基为：1/2ms+1.5mg/l6-ba+0.5mg/lnaa+26g/l蔗糖+1.2g/l蛋白胨+1.0g/l酸性水解酪蛋白+0.5g/l活性炭，ph为5.8。
（4）壮苗培养：将经诱变处理的乌蔹莓茎接种到壮苗培养基上培养，进一步形成10cm高的带根小苗。所采用的壮苗培养基为：1.2g/l花宝1号+1.2g/l花宝2号+0.6mg/lnaa+2.2g/l蛋白胨+0.6g/l酸性水解酪蛋白+36g/l蔗糖+3.2g/l琼脂+1.2g/l活性炭，其余为ms培养基的有机物成分，ph为5.8。
（5）试管苗移栽：将培养瓶瓶盖打开并置于自然光照下炼苗6天后，将试管苗从培养瓶中取出，洗掉根部培养基，栽入由泥炭土和松树皮2：3混合成的基质中并按常规大田栽培管理，成活率达92%。
上述（2）~（4）各步骤中的培养条件均为：培养温度29℃，每天光照15小时，光照强度1600lx。
实施例2
1、品种选健壮苗。
2、培育过程
（1）人工授粉：按常规方法进行栽培管理，开花进行异花授粉后100天蒴果成熟。
（2）非共生萌发：在乌蔹莓蒴果发育基本成熟而未开裂时，经78%的酒精溶液消毒3分钟后，用无菌水冲洗6次后置于0.2%升汞溶液消毒12分钟，经无菌水冲洗4次后用无菌滤纸吸干，然后用无菌解剖刀沿蒴果纵轴方向将蒴果切开，用接种针将黄色种胚接种到萌发培养基上培养，培养25天后种子萌发成原球茎。所采用的萌发培养基为：1.2g/l花宝1号+2.2g/l蛋白胨+110ml/l椰子汁+26g/l蔗糖+6.5g/l琼脂+0.5g/l活性炭，其余为ms培养基的有机物成分，ph为5.9。
（3）诱变剂处理：将非共生萌发开成的原球茎转入含有0.1%秋水仙碱和0.15%氟乐灵混合液的液体分化培养基中，在26℃条件下进行间歇振荡诱变处理380小时，经染色体计数，诱导率为75%。所采用的液体分化培养基为：1/2ms+0.5mg/l6-ba+0.3mg/lnaa+26g/l蔗糖+2.2g/l蛋白胨+0.6g/l酸性水解酪蛋白+0.6g/l活性炭，ph为5.9。
（4）壮苗培养：将经诱变处理的原球茎接种到壮苗培养基上培养，进一步形成10cm高的带根小苗。所采用的壮苗培养基为：1.6g/l花宝1号+1.2g/l花宝2号+1.6mg/lnaa+1.2g/l蛋白胨+0.5g/l酸性水解酪蛋白+32g/l蔗糖+3.2g/l琼脂+1.2g/l活性炭，其余为ms培养基的有机物成分，ph为5.9。
（5）试管苗移栽：将培养瓶瓶盖打开并置于自然光照下炼苗7天后，将试管苗从培养瓶中取出，洗掉根部培养基，栽入由泥炭土和松树皮2：3混合成的基质中并按常规大田栽培管理，成活率达96%。
上述（2）～（4）各步骤中的培养条件均为：培养温度26℃，每天光照12小时，光照强度2100lx。
实施例3
1、品种为健壮的乌蔹莓。
2、培育过程
（1）人工授粉：按常规方法进行栽培管理，乌蔹莓开花进行异花授粉后93天蒴果成熟。
（2）非共生萌发：在乌蔹莓蒴果发育基本成熟而未开裂时，经75%的酒精溶液消毒6分钟后，用无菌水冲洗5次后置于0.3%升汞溶液消毒18分钟，经无菌水冲洗8次后用无菌滤纸吸干，然后用无菌解剖刀沿蒴果纵轴方向将蒴果切开，用接种针将黄色种胚接种到萌发培养基上培养，培养26天后种子萌发成原球茎。所采用的萌发培养基为：2.0g/l花宝1号+2.0g/l蛋白胨+60ml/l椰子汁+26g/l蔗糖+8.0g/l琼脂+1.0g/l活性炭，其余为ms培养基的有机物成分，ph为5.9。
（3）诱变剂处理：将非共生萌发开成的原球茎转入含有0.05%秋水仙碱和0.04%氟乐灵混合液的液体分化培养基中，在28℃条件下进行间歇振荡诱变处理420小时，经染色体计数，诱导率为76%。所采用的液体分化培养基为：1/2ms+2.0mg/l6-ba+1.0mg/lnaa+40g/l蔗糖+3.0g/l蛋白胨+0.3g/l酸性水解酪蛋白+0.9g/l活性炭，ph为5.9。
（4）壮苗培养：将经诱变处理的乌蔹莓原球茎接种到壮苗培养基上培养，进一步形成9cm高的带根小苗。所采用的壮苗培养基为：2.0g/l花宝1号+1.5g/l花宝2号+1.0mg/lnaa+2.0g/l蛋白胨+0.4g/l酸性水解酪蛋白+38g/l蔗糖+5.0g/l琼脂+2.0g/l活性炭，其余为ms培养基的有机物成分，ph为5.9。
（5）试管苗移栽：将培养瓶瓶盖打开并置于自然光照下炼苗8天后，将试管苗从培养瓶中取出，洗掉根部培养基，栽入由泥炭土和松树皮2：3混合成的基质中并按常规的大田栽培管理，乌蔹莓成活率达98%。
上述（2）～（4）各步骤中的培养条件均为：培养温度28℃，每天光照15小时，光照强度1600lx。