本发明涉及一种紫皮石斛组织培养方法。
背景技术：
：紫皮石斛是以齿瓣石斛为代表的一类兰科石斛属植物，是名贵药用植物石斛的一个品种。齿瓣石斛又名紫皮兰，为兰科植物齿瓣石斛dendrobiumdevoninumpaxt.。喜温暖，湿润，半阴半阳的环境。紫皮石斛作为药食两用的植物，可以鲜食，也可以经人工搓制加工成紫皮枫斗。此外，紫皮石斛可经过深加工制成饮料、片剂、胶囊剂、冲剂等。紫皮石斛种苗的繁殖方法分有性繁殖和无性繁殖两大类。在石斛的天然生长过程中，以有性繁殖为主，无性繁殖为辅。人工栽培则以无性繁殖为主。无性繁殖是指利用种苗，茎杆、芽及植株的某一器官，长成新的植株。组培繁殖法是无性繁殖的一种。目前的组培繁殖法是剥取石斛茎尖与芽的生长点，少数采用茎条芽一部分，经严格消毒后，在无菌的条件下植入培养基中，经2～3个月的培养，在培养过程中，小苗不断分生，以1变2、2变的逐渐扩大，待小苗长满培养基时，再取出分植，称为继代或扩繁，经过几次扩繁后，再改变培养基成分，促其生根，待生根苗长到一定的高度时，即可取出进行炼苗。但是目前的组培繁殖存在萌发率低及生根率低的问题，而且苗的成活率很低。技术实现要素：本发明的目的在于提供一种紫皮石斛组织培养方法。为实现本发明的目的，本发明采用以下技术方案：一种紫皮石斛组织培养方法，包括紫皮石斛种子培养萌发成圆球茎，壮苗培养，诱导生根，炼苗四个步骤，其中，所述紫皮石斛种子培养萌发成圆球茎中使用的种子培养基包含以下成分：一、种子培养基配方所述壮苗培养中使用的壮苗培养基包含以下成分：二、壮苗培养基配方试剂名称规定量(mg/l)试剂名称规定量(mg/l)硝酸钾2000硫酸亚铁27.8硝酸铵1750甘氨酸2.0硫酸镁370盐酸硫胺素0.2磷酸二氢钾170盐酸吡哆醇0.65氯化钙550烟酸0.5硫酸铜0.025肌醇50氯化钴0.025naa1-10硫酸锰16.96-ba5-10硫酸锌8.6香蕉200000硼酸6.2碳粉500碘化钾0.83蔗糖30000钼酸钠0.25na2-edta37.3所述诱导生根中使用的生根培养基包含以下成分：三、生根培养基配方试剂名称规定量(mg/l)试剂名称规定量(mg/l)硝酸钾1650硫酸亚铁27.8硝酸铵1350甘氨酸2.0硫酸镁270盐酸硫胺素0.2磷酸二氢钾130盐酸吡哆醇0.65氯化钙450烟酸0.5硫酸铜0.025肌醇5氯化钴0.025naa1-10硫酸锰16.96-ba0.1-10硫酸锌8.6香蕉100000硼酸6.2碳粉500碘化钾0.83蔗糖18000钼酸钠0.25艾比蒂生根粉0.1-1na2-edta37.3所述种子培养萌发成圆球茎步骤中，成熟紫皮石斛种子经消毒处理后播种于种子培养基中培养，一星期转绿，继续培养20-30天，经过种胚膨大、萌发形成绿色圆球茎；培养条件为25-26℃，光照为1600-18001x，光照时间为10h/d。所述的消毒处理过程为：自来水加洗洁精冲洗3分钟后用75％酒精消毒30秒，之后用35％双氧水消毒10分钟，然后用无菌水冲洗三次。所述壮苗步骤中，圆球茎转入壮苗培养基中进行壮苗培养，经过80-90天壮苗培养，获得高度达到1.5-3cm的幼苗，培养条件：温度25-26℃，光照度1900-2100lx，光照时间为12h/d。本发明具有以下优点：1.本发明提供紫皮石斛的组织培养方法，紫皮石斛种子萌发率高，在90％以上，获得的幼苗粗壮，主根系发达，种植成活率在90％以上。2.种子培养基对紫皮石斛种子的萌发有重要影响，本发明提供的种子培养基可以使紫皮石斛种子萌发在90％以上。3.本发明采用的壮苗培养基可以促进圆球茎生成粗壮的幼苗。4.本发明采用的生根培养基可以促进幼苗生根，所得的主根系发达，有利于在炼苗及种植中成活。具体实施方式下面结合具体实施例对本发明做进一步的详细说明，但不构成对本发明的任何限制，任何在本发明权利要求范围内所做的有限修改，仍在本发明的权利要求保护范围内。实施例1紫皮石斛组织培养分四个阶段，分别是种子萌发、壮苗培养、诱导生根和炼苗四个阶段，所以在本发明提供的紫皮石斛组织培养方法包括紫皮石斛种子萌发成为圆球茎，壮苗培养，生根，炼苗四个步骤，具体培养过程如下：(1)种子萌发成为圆球茎：取成熟紫皮石斛种子进行消毒处理，用自来水加洗洁精冲洗3分钟，然后75％酒精消毒30秒，再用35％双氧水消毒10分钟，最后用无菌水冲洗三次后播种于种子培养基中培养，一星期转绿，继续培养20-30天，经过种胚膨大、萌发形成绿色圆球茎，种子的萌发率在90％以上。培养条件为25-26℃，光照为1600-1800lx，光照时间为10h/d。(2)壮苗培养：将步骤(1)中产生的圆球茎转入壮苗培养基中进行壮苗培养，经过80-90天壮苗培养，高度达到1.5-3cm的粗壮幼苗出现，培养条件：温度25-26℃，光照度1900-2100lx，光照时间为12h/d。(3)诱导生根：将步骤(2)得到的幼苗转入生根培养基进行诱导生根，长成具有发达主根系的生根苗。(4)炼苗：将步骤(3)得到的生根苗进行炼苗驯化，使其适应外部生长环境。完成炼苗后，所得驯化苗移栽大棚或室外，同时种植管理，驯化苗成活率在90％以上。种子培养基配方试剂名称规定量(mg/l)试剂名称规定量(mg/l)硝酸钾1200硫酸亚铁21.8硝酸铵1050甘氨酸2.0硫酸镁370盐酸硫胺素0.1磷酸二氢钾170盐酸吡哆醇0.5氯化钙440烟酸0.5硫酸铜0.025肌醇100氯化钴0.025naa1-10硫酸锰16.96-ba5-10硫酸锌8.6马铃薯100000硼酸6.2碳粉250碘化钾0.83蔗糖30000钼酸钠0.25水解乳蛋白700na2-edta37.3壮苗培养基配方试剂名称规定量(mg/l)试剂名称规定量(mg/l)硝酸钾2000硫酸亚铁27.8硝酸铵1750甘氨酸2.0硫酸镁370盐酸硫胺素0.2磷酸二氢钾170盐酸吡哆醇0.65氯化钙550烟酸0.5硫酸铜0.025肌醇50氯化钴0.025naa1-10硫酸锰16.96-ba5-10硫酸锌8.6香蕉200000硼酸6.2碳粉500碘化钾0.83蔗糖30000钼酸钠0.25na2-edta37.3生根培养基配方种子培养基中的naa的规定量在1-10mg/l范围内调整，6-ba的规定量在5-10mg/l范围内调整，都能够使紫皮石斛种子萌发率达到90％以上。如，naa的规定量为1mg/l、1.5mg/l、2mg/l、2.5mg/l、3mg/l、3.5mg/l、4mg/l、4.5mg/l、5mg/l、5.5mg/l、6mg/l、6.5mg/l、7mg/l、7.5mg/l、8mg/l、8.5mg/l、9mg/l、9.5mg/l和10mg/l均可。6-ba的规定量为5mg/l、5.5mg/l、6mg/l、6.5mg/l、7mg/l、7.5mg/l、8mg/l、8.5mg/l、9mg/l、9.5mg/l和10mg/l均可。壮苗培养基中的naa的规定量在1-10mg/l范围内调整，6-ba的规定量在5-10mg/l范围内调整，都能够使紫皮石斛的圆球茎长出粗壮的幼苗。如，naa的规定量为1mg/l、1.5mg/l、2mg/l、2.5mg/l、3mg/l、3.5mg/l、4mg/l、4.5mg/l、5mg/l、5.5mg/l、6mg/l、6.5mg/l、7mg/l、7.5mg/l、8mg/l、8.5mg/l、9mg/l、9.5mg/l和10mg/l均可。6-ba的规定量为5mg/l、5.5mg/l、6mg/l、6.5mg/l、7mg/l、7.5mg/l、8mg/l、8.5mg/l、9mg/l、9.5mg/l和10mg/l均可。生根培养基中的naa的规定量在1-10mg/l范围内调整，6-ba的规定量在5-10mg/l范围内调整，艾比蒂生根粉的规定量在0.1-1mg/l范围内调整，幼苗长出发达的主根系。如，naa的规定量为1mg/l、1.5mg/l、2mg/l、2.5mg/l、3mg/l、3.5mg/l、4mg/l、4.5mg/l、5mg/l、5.5mg/l、6mg/l、6.5mg/l、7mg/l、7.5mg/l、8mg/l、8.5mg/l、9mg/l、9.5mg/l和10mg/l均可。6-ba的规定量为5mg/l、5.5mg/l、6mg/l、6.5mg/l、7mg/l、7.5mg/l、8mg/l、8.5mg/l、9mg/l、9.5mg/l和10mg/l均可。艾比蒂生根粉的规定量为0.1mg/l、0.2mg/l、0.3mg/l、0.4mg/l、0.5mg/l、0.6mg/l、0.7mg/l、0.8mg/l、0.9mg/l、1mg/l均可。当前第1页12