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技术领域：
】本发明涉及生物
技术领域：
，具体涉及一种火麻种子诱导愈伤组织的方法。
背景技术：
：火麻，又称为线麻和汗麻等，是桑科火麻属一年生草本植物。火麻籽去皮后为火麻仁，火麻仁中含有多种营养物质，如维生素b、维生素e、树脂、挥发油等成分。火麻仁富含油脂，其油脂油含量为30％，高于大豆的脂肪油含量，不饱和脂肪酸占70％-80％，主要为亚油酸，亚麻酸及油酸，含量分别为0.61％，24.42％，52.32％，其中亚油酸和亚麻酸的比例接近2.5，为人体摄取脂肪酸的最佳比例。其中，不饱和脂肪酸有抗氧化、抗肿瘤、增强免疫力的作用，可以明显降低高密度蛋白血清胆固醇的含量，从而降低心脏病、中风、高血压等疾病的发病率，而亚麻酸含量对高血压、动脉粥样硬化等心血管疾病有较好的防治作用。因此，火麻具有较高的营养价值和保健价值。目前，火麻的繁殖技术主要以种子繁殖，即有性繁殖为主，存在种子发芽率低、催芽时间长且发芽不一致、产生变异的可能性大等缺点，以上问题严重阻碍了火麻的规模化生产，无法满足市场对火麻的需求。技术实现要素：本发明的发明目的在于：针对上述存在的问题，提供一种火麻种子诱导愈伤组织的方法。本发明火麻种子诱导愈伤组织的方法利用火麻的种子作为外植体进行组织培养诱导愈伤组织，诱导率高且诱导得到的愈伤组织质量好，为火麻种子的后续培养分化获得大量健壮组培苗提供了基础。为了实现上述目的，本发明采用的技术方案如下：一种火麻种子诱导愈伤组织的方法，包括以下步骤：(1)预处理：挑选完整饱满、大小均一的火麻种子，用流水冲洗后，采用超声波处理20min，并将火麻种子保持浸泡在介质中30-50min，其中，处理前10min的介质为40-45℃的水，处理后10min的介质为ggr溶液；将超声波处理后的火麻种子放入铺有湿布的培养皿中，再盖上一层湿布后，于25℃下放置8-10h；(2)消毒处理：将上述经过预处理的火麻种子剥去种皮后得火麻仁，用流水将所述火麻仁冲洗10-20min后，用体积分数为70％-75％的酒精处理15-30s，再用无菌水冲洗3次，再用质量分数为0.1％的升汞处理8-11min，最后用无菌水冲洗3次；(3)接种培养：将上述经过消毒处理的火麻仁接种于诱导培养基中培养，即得火麻愈伤组织；所述诱导培养基的组成为：在ms培养基中添加2.0-2.3mg/l的2,4-d、0.1-0.3mg/l的6-ba、1-2mg/l的ggr和0.1-0.2mg/l的ga3。进一步的，步骤(1)中，所述超声波的功率为100-120w、频率为30khz。进一步的，步骤(1)中，所述ggr溶液的质量浓度为25-35mg/l。进一步的，步骤(2)中，所述无菌水冲洗的时间为60-70s/次。进一步的，步骤(3)中，所述培养过程为：暗培养3-6d后转光照培养，光照时间12-14h/d，光照强度为1500-1800lx。进一步的，步骤(3)中，所述诱导培养基的组成为：在ms培养基中添加2.1mg/l的2,4-d、0.2mg/l的6-ba、1.3mg/l的ggr和0.1mg/l的ga3。其中，ggr为绿色植物生长调节素，6-ba为6-苄氨基腺嘌呤，ga3为赤霉素，2,4-d是2,4-二氯苯氧乙酸类除草剂。综上所述，由于采用了上述技术方案，本发明的有益效果是：(1)本发明的预处理中，在前10min，以水为介质结合超声波，提升火麻种子的含水量，利于火麻仁后续的萌发，在后10min，以ggr溶液为介质结合超声波，利于解除火麻种子的休眠，促进火麻种子的萌发并对后续种子遇愈伤组织的诱导具有一定促进作用，因此，本采用超声波结合两种介质对火麻种子进行处理，可有效提升火麻种子的萌发率，并对诱导率具有一定程度的促进作用；其中，经过本发明预处理的种子比仅经过以水或ggr溶液为介质进行超声波处理的种子的萌发率提高了3.3-4.8％，比仅以水或ggr溶液进行浸泡处理的种子的萌发率提高了6-9％；而经过本发明预处理的种子比仅经过以水为介质进行超声波处理的种子的愈伤组织诱导率提升了3.7-5.1％。此外，超声波处理还可提升消毒处理的灭菌效果，有效降低了后续接种培养过程中的污染率。(2)经过本发明预处理和消毒处理的火麻仁，进一步结合本发明的诱导培养基进行培养，可充分吸收诱导培养基中配比科学合理的各个营养成分，从而有效诱导并促进了火麻仁愈伤组织的形成，得到的愈伤组织质量好、生活力强，为火麻种子的后续培养分化获得大量健壮组培苗提供了基础。【具体实施方式】下面将结合具体实施例来对本发明作进一步的说明。实施例1一种火麻种子诱导愈伤组织的方法，包括以下步骤：(1)预处理：挑选完整饱满、大小均一的火麻种子，用流水冲洗后，采用功率为100w、频率为30khz的超声波处理20min，并将火麻种子保持浸泡在介质中30min，其中，处理前10min的介质为40℃的水，处理后10min的介质为质量浓度为25mg/l的ggr溶液；将超声波处理后的火麻种子放入铺有湿布的培养皿中，再盖上一层湿布后，于25℃下放置8h；(2)消毒处理：将上述经过预处理的火麻种子剥去种皮后得火麻仁，用流水将所述火麻仁冲洗10min后，用体积分数为70％的酒精处理15s，再用无菌水冲洗3次，再用质量分数为0.1％的升汞处理8min，最后用无菌水冲洗3次,且述无菌水冲洗的时间为60s/次；(3)接种培养：将上述经过消毒处理的火麻仁接种于诱导培养基中,暗培养3d后转光照培养，且光照时间12h/d、光照强度为1500lx，即得火麻愈伤组织；所述诱导培养基的组成为：在ms培养基中添加2.0mg/l的2,4-d、0.1mg/l的6-ba、1mg/l的ggr和0.1mg/l的ga3。实施例2一种火麻种子诱导愈伤组织的方法，包括以下步骤：(1)预处理：挑选完整饱满、大小均一的火麻种子，用流水冲洗后，采用功率为110w、频率为30khz的超声波处理20min，并将火麻种子保持浸泡在介质中45min，其中，处理前10min的介质为43℃的水，处理后10min的介质为质量浓度为32mg/l的ggr溶液；将超声波处理后的火麻种子放入铺有湿布的培养皿中，再盖上一层湿布后，于25℃下放置9h；(2)消毒处理：将上述经过预处理的火麻种子剥去种皮后得火麻仁，用流水将所述火麻仁冲洗15min后，用体积分数为72％的酒精处理25s，再用无菌水冲洗3次，再用质量分数为0.1％的升汞处理10min，最后用无菌水冲洗3次,且述无菌水冲洗的时间为65s/次；(3)接种培养：将上述经过消毒处理的火麻仁接种于诱导培养基中,暗培养5d后转光照培养，且光照时间13h/d、光照强度为1600lx，即得火麻愈伤组织；所述诱导培养基的组成为：在ms培养基中添加2.1mg/l的2,4-d、0.2mg/l的6-ba、1.3mg/l的ggr和0.1mg/l的ga3。实施例3一种火麻种子诱导愈伤组织的方法，包括以下步骤：(1)预处理：挑选完整饱满、大小均一的火麻种子，用流水冲洗后，采用功率为120w、频率为30khz的超声波处理20min，并将火麻种子保持浸泡在介质中50min，其中，处理前10min的介质为45℃的水，处理后10min的介质为质量浓度为35mg/l的ggr溶液；将超声波处理后的火麻种子放入铺有湿布的培养皿中，再盖上一层湿布后，于25℃下放置10h；(2)消毒处理：将上述经过预处理的火麻种子剥去种皮后得火麻仁，用流水将所述火麻仁冲洗20min后，用体积分数为75％的酒精处理30s，再用无菌水冲洗3次，再用质量分数为0.1％的升汞处理11min，最后用无菌水冲洗3次,且述无菌水冲洗的时间为70s/次；(3)接种培养：将上述经过消毒处理的火麻仁接种于诱导培养基中,暗培养3-6d后转光照培养，且光照时间14h/d、光照强度为1800lx，即得火麻愈伤组织；所述诱导培养基的组成为：在ms培养基中添加2.3mg/l的2,4-d、0.3mg/l的6-ba、2mg/l的ggr和0.2mg/l的ga3。效果验证：以本发明实施例1-3作为实验组1-3，观察统计各组在实验过程中的污染率(污染率＝出现肉眼可见的真菌菌落或细菌菌落的种子/供试种子总数)、萌发率(萌发率＝萌芽种子数/供试种子总数)、诱导率(诱导率＝诱导出愈伤组织的种子数/供试种子总数)和高质量诱导率(高质量诱导率＝诱导出高质量愈伤组织的种子数/供试种子总数；高质量愈伤组织表现为：愈伤组织色泽淡黄而纯净、表面干燥紧实、体积较大)；以仅未经过实施例1中的超声波处理，其余步骤均与实施例1相同的火麻仁种子诱导愈伤组织的方法作为对比例，观察统计在培养过程中种子的污染率；统计结果见表1和表2：表1各组种子污染率组别实验组1实验组2实验组3对比例污染率(％)2.92.52.73.8由表1可知，实施例1-3的种子污染率相对于对比例降低了25.7-34.2％，说明本发明的超声波处理可提升消毒处理的灭菌效果，有效降低了后续接种培养过程中的污染率。表2实施例1-3各组种子培养情况组别实验组1实验组2实验组3萌发率(％)919389诱导率(％)878885高质量诱导率(％)828483由表2可知，实施例1-3的火麻种子具有较高的萌发率、诱导率且和高质量诱导率，说明本发明火麻仁种子诱导愈伤组织的方法可有效诱导并促进了火麻仁愈伤组织的形成，得到的愈伤组织质量好、生活力强，为火麻种子的后续培养分化获得大量健壮组培苗提供了基础。上述说明是针对本发明较佳可行实施例的详细说明，但实施例并非用以限定本发明的专利申请范围，凡本发明所提示的技术精神下所完成的同等变化或修饰变更，均应属于本发明所涵盖专利范围。当前第1页12