本发明涉及石斛栽培技术领域，具体是一种移栽成活率高的富硒铁皮石斛苗培育方法。
背景技术：
硒是一种人和动物所必需的微量元素，具有清除自由基抗氧化、延缓衰老、抗癌、增强免疫力、拮抗重金属等生物学特性。硒总体分为无机硒和有机硒两大类：前者包括硒酸盐、亚硒酸盐等，无机硒对于人和动物来说吸收效果差，毒性风险大，使用不当极易造成硒中毒；后者主要是指与生物有机分子结合形态的硒，对人和动物来说有机硒吸收率高，毒性风险小，更适合补硒的要求。植物是人类和动物获取硒的主要来源。在硒化合物的营养作用中，有机硒大于无机硒，植物硒大于动物硒。国内目前尚不能人工合成植物有机硒，获取植物有机硒的途径大多是依靠植物转化技术来实现的，利用作物的生物转化提高有机硒的含量而进入食物链供人和动物食用是一项主要的富硒技术。
铁皮石斛别称铁皮兰、吊兰、云南铁皮、铁皮吊兰，是兰科石斛属多年生草本植物，铁皮石斛是石斛类药材的上品，素有“中华仙草-药中黄金”之美称，以茎入药，含有多糖、石斛碱、生物碱等有效成分，具有滋阴清热、生津益胃、润喉明目等功效，在抗肿瘤、提高人体免疫力、治疗胃肠道疾病、抗衰老、抗氧化、抗血小板聚集、降低血糖、治疗白内障等方面均有良好疗效。富硒铁皮石斛将硒通过铁皮石斛的转化形成植物硒，进一步提高了铁皮石斛的保健效果，具有广阔的市场前景。然而，富硒铁皮石斛对生长环境要求苛刻，成苗困难，采用传统的分株、扦插等人工繁殖方法进行繁殖，增殖速度非常低，同时，还存在组培苗质量难以保证等问题，极大地制约了富硒铁皮石斛生产规模的扩大。
技术实现要素：
本发明的目的在于提供一种移栽成活率高的富硒铁皮石斛苗培育方法，以解决上述背景技术中提出的问题。
为实现上述目的，本发明提供如下技术方案：
一种移栽成活率高的富硒铁皮石斛苗培育方法，步骤如下：
1）取铁皮石斛茎段，在90%的酒精中浸泡1-2min，取出，用无菌水冲洗2-3次，然后放入0.1%的氯化汞溶液中浸泡5-8min，再用无菌水冲洗4-5次，获得无菌铁皮石斛茎段；
2）将无菌铁皮石斛茎段沿横截面切成薄片，获得组织薄片；
3）将组织薄片放入诱导培养基中，在22-25℃、无光照的条件下进行原球茎的萌发，获得原球茎；
4）将原球茎接种于增殖培养基中，在24-26℃、光照6h/d、光照强度200-300lux的条件下进行原球茎的增殖，获得增殖原球茎；
5）将增殖原球茎接种于生根培养基中，在25-28℃、光照10h/d、光照强度600-700lux的条件下进行生根培养，获得高度为2.0-2.5cm并长出2-3片真叶的组培苗；
6）将组培苗接种至幼苗培养基中，在25-30℃、光照15h/d、光照强度1700-1800lux的条件下进行培养，获得高度为3.5-4.0cm的幼苗；
7）将幼苗转接至成苗培养基中，在25-30℃、光照15h/d、光照强度2800-3000lux的条件下进行培养，获得高度为6-7cm、根长为1-2cm的成苗，成苗可出瓶炼苗及移栽。
作为本发明进一步的方案：步骤2）中，所述组织薄片的厚度为1-2mm。
作为本发明再进一步的方案：步骤3）中，所述诱导培养基为采用1/2ms培养基并加入5g/l蛋白胨、8g/l甘草提取液、0.4mg/l的亚硒酸钠，混合均匀后，于110℃灭菌处理20min，即可。
作为本发明再进一步的方案：步骤4）中，所述增殖培养基为采用1/2ms培养基并加入10g/l土豆汁、10g/l琼脂、5g/l赤芍提取液、8mg/l6-苄氨基嘌呤、0.5mg/l的亚硒酸钠，混合均匀后，于110℃灭菌处理20min，即可。
作为本发明再进一步的方案：步骤5）中，所述生根培养基为采用ms培养基并加入15g/l香蕉汁、0.5g/l萘乙酸、3g/l山大颜提取液、0.5mg/l的亚硒酸钠，混合均匀后，于110℃灭菌处理20min，即可。
作为本发明再进一步的方案：步骤6）中，所述幼苗培养基为采用ms培养基并加入20g/l香蕉汁、10mg/l6-苄氨基嘌呤、5g/l甘草提取液、0.8mg/l的亚硒酸钠，混合均匀后，于110℃灭菌处理20min，即可。
作为本发明再进一步的方案：步骤7）中，所述成苗培养基为采用ms培养基并加入20g/l香蕉汁、10mg/l6-苄氨基嘌呤、0.5mg/l多效唑、1mg/l的亚硒酸钠，混合均匀后，于110℃灭菌处理20min，即可。
作为本发明再进一步的方案：所述甘草提取液的制备方法如下：将甘草粉碎后，加入15-20倍重量的水，浸泡2h，煎煮2h，过滤，获得第一煎煮液和第一煎煮渣，将第一煎煮渣再次加入10-12倍重量的水，浸泡1h，煎煮1h，过滤，获得第二煎煮液和第二煎煮渣，将第一煎煮液和第二煎煮液合并，蒸发浓缩为60℃下相对密度为1.10的浓缩液，即可获得甘草提取液。
作为本发明再进一步的方案：所述赤芍提取液和山大颜提取液的制备方法均与甘草提取液的制备方法相同。
与现有技术相比，本发明的有益效果是：
本发明所培育的富硒铁皮石斛苗采用组培技术进行繁殖，增殖效率非常高，能够有效满足市场对富硒铁皮石斛苗的需求，具有广阔的市场前景；本发明所培育的富硒铁皮石斛苗生长好，移栽成活率高，质量稳定，有利于富硒铁皮石斛生产规模的扩大。
具体实施方式
下面结合具体实施方式对本发明的技术方案作进一步详细地说明。
实施例1
一种移栽成活率高的富硒铁皮石斛苗培育方法，步骤如下：
1）取铁皮石斛茎段，在90%的酒精中浸泡1min，取出，用无菌水冲洗2次，然后放入0.1%的氯化汞溶液中浸泡5min，再用无菌水冲洗4次，获得无菌铁皮石斛茎段；
2）将无菌铁皮石斛茎段沿横截面切成薄片，获得组织薄片，所述组织薄片的厚度为1mm；
3）将组织薄片放入诱导培养基中，在22℃、无光照的条件下进行原球茎的萌发，获得原球茎，所述诱导培养基为采用1/2ms培养基并加入5g/l蛋白胨、8g/l甘草提取液、0.4mg/l的亚硒酸钠，混合均匀后，于110℃灭菌处理20min，即可；
4）将原球茎接种于增殖培养基中，在24℃、光照6h/d、光照强度200lux的条件下进行原球茎的增殖，获得增殖原球茎，所述增殖培养基为采用1/2ms培养基并加入10g/l土豆汁、10g/l琼脂、5g/l赤芍提取液、8mg/l6-苄氨基嘌呤、0.5mg/l的亚硒酸钠，混合均匀后，于110℃灭菌处理20min，即可；
5）将增殖原球茎接种于生根培养基中，在25℃、光照10h/d、光照强度600lux的条件下进行生根培养，获得高度为2.0-2.5cm并长出2-3片真叶的组培苗，所述生根培养基为采用ms培养基并加入15g/l香蕉汁、0.5g/l萘乙酸、3g/l山大颜提取液、0.5mg/l的亚硒酸钠，混合均匀后，于110℃灭菌处理20min，即可；
6）将组培苗接种至幼苗培养基中，在25℃、光照15h/d、光照强度1700lux的条件下进行培养，获得高度为3.5-4.0cm的幼苗，所述幼苗培养基为采用ms培养基并加入20g/l香蕉汁、10mg/l6-苄氨基嘌呤、5g/l甘草提取液、0.8mg/l的亚硒酸钠，混合均匀后，于110℃灭菌处理20min，即可；
7）将幼苗转接至成苗培养基中，在25℃、光照15h/d、光照强度2800lux的条件下进行培养，获得高度为6-7cm、根长为1-2cm的成苗，成苗可出瓶炼苗及移栽，所述成苗培养基为采用ms培养基并加入20g/l香蕉汁、10mg/l6-苄氨基嘌呤、0.5mg/l多效唑、1mg/l的亚硒酸钠，混合均匀后，于110℃灭菌处理20min，即可。
所述甘草提取液的制备方法如下：将甘草粉碎后，加入15倍重量的水，浸泡2h，煎煮2h，过滤，获得第一煎煮液和第一煎煮渣，将第一煎煮渣再次加入10倍重量的水，浸泡1h，煎煮1h，过滤，获得第二煎煮液和第二煎煮渣，将第一煎煮液和第二煎煮液合并，蒸发浓缩为60℃下相对密度为1.10的浓缩液，即可获得甘草提取液。所述赤芍提取液和山大颜提取液的制备方法均与甘草提取液的制备方法相同。
实施例2
一种移栽成活率高的富硒铁皮石斛苗培育方法，步骤如下：
1）取铁皮石斛茎段，在90%的酒精中浸泡1min，取出，用无菌水冲洗3次，然后放入0.1%的氯化汞溶液中浸泡6min，再用无菌水冲洗4次，获得无菌铁皮石斛茎段；
2）将无菌铁皮石斛茎段沿横截面切成薄片，获得组织薄片，所述组织薄片的厚度为1.5mm；
3）将组织薄片放入诱导培养基中，在23℃、无光照的条件下进行原球茎的萌发，获得原球茎，所述诱导培养基为采用1/2ms培养基并加入5g/l蛋白胨、8g/l甘草提取液、0.4mg/l的亚硒酸钠，混合均匀后，于110℃灭菌处理20min，即可；
4）将原球茎接种于增殖培养基中，在25℃、光照6h/d、光照强度200lux的条件下进行原球茎的增殖，获得增殖原球茎，所述增殖培养基为采用1/2ms培养基并加入10g/l土豆汁、10g/l琼脂、5g/l赤芍提取液、8mg/l6-苄氨基嘌呤、0.5mg/l的亚硒酸钠，混合均匀后，于110℃灭菌处理20min，即可；
5）将增殖原球茎接种于生根培养基中，在26℃、光照10h/d、光照强度600lux的条件下进行生根培养，获得高度为2.0-2.5cm并长出2-3片真叶的组培苗，所述生根培养基为采用ms培养基并加入15g/l香蕉汁、0.5g/l萘乙酸、3g/l山大颜提取液、0.5mg/l的亚硒酸钠，混合均匀后，于110℃灭菌处理20min，即可；
6）将组培苗接种至幼苗培养基中，在28℃、光照15h/d、光照强度1800lux的条件下进行培养，获得高度为3.5-4.0cm的幼苗，所述幼苗培养基为采用ms培养基并加入20g/l香蕉汁、10mg/l6-苄氨基嘌呤、5g/l甘草提取液、0.8mg/l的亚硒酸钠，混合均匀后，于110℃灭菌处理20min，即可；
7）将幼苗转接至成苗培养基中，在28℃、光照15h/d、光照强度2900lux的条件下进行培养，获得高度为6-7cm、根长为1-2cm的成苗，成苗可出瓶炼苗及移栽，所述成苗培养基为采用ms培养基并加入20g/l香蕉汁、10mg/l6-苄氨基嘌呤、0.5mg/l多效唑、1mg/l的亚硒酸钠，混合均匀后，于110℃灭菌处理20min，即可。
所述甘草提取液的制备方法如下：将甘草粉碎后，加入16倍重量的水，浸泡2h，煎煮2h，过滤，获得第一煎煮液和第一煎煮渣，将第一煎煮渣再次加入10倍重量的水，浸泡1h，煎煮1h，过滤，获得第二煎煮液和第二煎煮渣，将第一煎煮液和第二煎煮液合并，蒸发浓缩为60℃下相对密度为1.10的浓缩液，即可获得甘草提取液。所述赤芍提取液和山大颜提取液的制备方法均与甘草提取液的制备方法相同。
实施例3
一种移栽成活率高的富硒铁皮石斛苗培育方法，步骤如下：
1）取铁皮石斛茎段，在90%的酒精中浸泡1.5min，取出，用无菌水冲洗3次，然后放入0.1%的氯化汞溶液中浸泡7min，再用无菌水冲洗4次，获得无菌铁皮石斛茎段；
2）将无菌铁皮石斛茎段沿横截面切成薄片，获得组织薄片，所述组织薄片的厚度为1.5mm；
3）将组织薄片放入诱导培养基中，在24℃、无光照的条件下进行原球茎的萌发，获得原球茎，所述诱导培养基为采用1/2ms培养基并加入5g/l蛋白胨、8g/l甘草提取液、0.4mg/l的亚硒酸钠，混合均匀后，于110℃灭菌处理20min，即可；
4）将原球茎接种于增殖培养基中，在25℃、光照6h/d、光照强度300lux的条件下进行原球茎的增殖，获得增殖原球茎，所述增殖培养基为采用1/2ms培养基并加入10g/l土豆汁、10g/l琼脂、5g/l赤芍提取液、8mg/l6-苄氨基嘌呤、0.5mg/l的亚硒酸钠，混合均匀后，于110℃灭菌处理20min，即可；
5）将增殖原球茎接种于生根培养基中，在26℃、光照10h/d、光照强度600lux的条件下进行生根培养，获得高度为2.0-2.5cm并长出2-3片真叶的组培苗，所述生根培养基为采用ms培养基并加入15g/l香蕉汁、0.5g/l萘乙酸、3g/l山大颜提取液、0.5mg/l的亚硒酸钠，混合均匀后，于110℃灭菌处理20min，即可；
6）将组培苗接种至幼苗培养基中，在28℃、光照15h/d、光照强度1800lux的条件下进行培养，获得高度为3.5-4.0cm的幼苗，所述幼苗培养基为采用ms培养基并加入20g/l香蕉汁、10mg/l6-苄氨基嘌呤、5g/l甘草提取液、0.8mg/l的亚硒酸钠，混合均匀后，于110℃灭菌处理20min，即可；
7）将幼苗转接至成苗培养基中，在28℃、光照15h/d、光照强度2900lux的条件下进行培养，获得高度为6-7cm、根长为1-2cm的成苗，成苗可出瓶炼苗及移栽，所述成苗培养基为采用ms培养基并加入20g/l香蕉汁、10mg/l6-苄氨基嘌呤、0.5mg/l多效唑、1mg/l的亚硒酸钠，混合均匀后，于110℃灭菌处理20min，即可。
所述甘草提取液的制备方法如下：将甘草粉碎后，加入18倍重量的水，浸泡2h，煎煮2h，过滤，获得第一煎煮液和第一煎煮渣，将第一煎煮渣再次加入11倍重量的水，浸泡1h，煎煮1h，过滤，获得第二煎煮液和第二煎煮渣，将第一煎煮液和第二煎煮液合并，蒸发浓缩为60℃下相对密度为1.10的浓缩液，即可获得甘草提取液。所述赤芍提取液和山大颜提取液的制备方法均与甘草提取液的制备方法相同。
实施例4
一种移栽成活率高的富硒铁皮石斛苗培育方法，步骤如下：
1）取铁皮石斛茎段，在90%的酒精中浸泡2min，取出，用无菌水冲洗2次，然后放入0.1%的氯化汞溶液中浸泡7min，再用无菌水冲洗4次，获得无菌铁皮石斛茎段；
2）将无菌铁皮石斛茎段沿横截面切成薄片，获得组织薄片，所述组织薄片的厚度为2mm；
3）将组织薄片放入诱导培养基中，在25℃、无光照的条件下进行原球茎的萌发，获得原球茎，所述诱导培养基为采用1/2ms培养基并加入5g/l蛋白胨、8g/l甘草提取液、0.4mg/l的亚硒酸钠，混合均匀后，于110℃灭菌处理20min，即可；
4）将原球茎接种于增殖培养基中，在25℃、光照6h/d、光照强度200lux的条件下进行原球茎的增殖，获得增殖原球茎，所述增殖培养基为采用1/2ms培养基并加入10g/l土豆汁、10g/l琼脂、5g/l赤芍提取液、8mg/l6-苄氨基嘌呤、0.5mg/l的亚硒酸钠，混合均匀后，于110℃灭菌处理20min，即可；
5）将增殖原球茎接种于生根培养基中，在27℃、光照10h/d、光照强度700lux的条件下进行生根培养，获得高度为2.0-2.5cm并长出2-3片真叶的组培苗，所述生根培养基为采用ms培养基并加入15g/l香蕉汁、0.5g/l萘乙酸、3g/l山大颜提取液、0.5mg/l的亚硒酸钠，混合均匀后，于110℃灭菌处理20min，即可；
6）将组培苗接种至幼苗培养基中，在30℃、光照15h/d、光照强度1700lux的条件下进行培养，获得高度为3.5-4.0cm的幼苗，所述幼苗培养基为采用ms培养基并加入20g/l香蕉汁、10mg/l6-苄氨基嘌呤、5g/l甘草提取液、0.8mg/l的亚硒酸钠，混合均匀后，于110℃灭菌处理20min，即可；
7）将幼苗转接至成苗培养基中，在30℃、光照15h/d、光照强度2800lux的条件下进行培养，获得高度为6-7cm、根长为1-2cm的成苗，成苗可出瓶炼苗及移栽，所述成苗培养基为采用ms培养基并加入20g/l香蕉汁、10mg/l6-苄氨基嘌呤、0.5mg/l多效唑、1mg/l的亚硒酸钠，混合均匀后，于110℃灭菌处理20min，即可。
所述甘草提取液的制备方法如下：将甘草粉碎后，加入20倍重量的水，浸泡2h，煎煮2h，过滤，获得第一煎煮液和第一煎煮渣，将第一煎煮渣再次加入11倍重量的水，浸泡1h，煎煮1h，过滤，获得第二煎煮液和第二煎煮渣，将第一煎煮液和第二煎煮液合并，蒸发浓缩为60℃下相对密度为1.10的浓缩液，即可获得甘草提取液。所述赤芍提取液和山大颜提取液的制备方法均与甘草提取液的制备方法相同。
实施例5
一种移栽成活率高的富硒铁皮石斛苗培育方法，步骤如下：
1）取铁皮石斛茎段，在90%的酒精中浸泡2min，取出，用无菌水冲洗3次，然后放入0.1%的氯化汞溶液中浸泡8min，再用无菌水冲洗5次，获得无菌铁皮石斛茎段；
2）将无菌铁皮石斛茎段沿横截面切成薄片，获得组织薄片，所述组织薄片的厚度为2mm；
3）将组织薄片放入诱导培养基中，在25℃、无光照的条件下进行原球茎的萌发，获得原球茎，所述诱导培养基为采用1/2ms培养基并加入5g/l蛋白胨、8g/l甘草提取液、0.4mg/l的亚硒酸钠，混合均匀后，于110℃灭菌处理20min，即可；
4）将原球茎接种于增殖培养基中，在26℃、光照6h/d、光照强度300lux的条件下进行原球茎的增殖，获得增殖原球茎，所述增殖培养基为采用1/2ms培养基并加入10g/l土豆汁、10g/l琼脂、5g/l赤芍提取液、8mg/l6-苄氨基嘌呤、0.5mg/l的亚硒酸钠，混合均匀后，于110℃灭菌处理20min，即可；
5）将增殖原球茎接种于生根培养基中，在28℃、光照10h/d、光照强度700lux的条件下进行生根培养，获得高度为2.0-2.5cm并长出2-3片真叶的组培苗，所述生根培养基为采用ms培养基并加入15g/l香蕉汁、0.5g/l萘乙酸、3g/l山大颜提取液、0.5mg/l的亚硒酸钠，混合均匀后，于110℃灭菌处理20min，即可；
6）将组培苗接种至幼苗培养基中，在30℃、光照15h/d、光照强度1800lux的条件下进行培养，获得高度为3.5-4.0cm的幼苗，所述幼苗培养基为采用ms培养基并加入20g/l香蕉汁、10mg/l6-苄氨基嘌呤、5g/l甘草提取液、0.8mg/l的亚硒酸钠，混合均匀后，于110℃灭菌处理20min，即可；
7）将幼苗转接至成苗培养基中，在30℃、光照15h/d、光照强度3000lux的条件下进行培养，获得高度为6-7cm、根长为1-2cm的成苗，成苗可出瓶炼苗及移栽，所述成苗培养基为采用ms培养基并加入20g/l香蕉汁、10mg/l6-苄氨基嘌呤、0.5mg/l多效唑、1mg/l的亚硒酸钠，混合均匀后，于110℃灭菌处理20min，即可。
所述甘草提取液的制备方法如下：将甘草粉碎后，加入20倍重量的水，浸泡2h，煎煮2h，过滤，获得第一煎煮液和第一煎煮渣，将第一煎煮渣再次加入12倍重量的水，浸泡1h，煎煮1h，过滤，获得第二煎煮液和第二煎煮渣，将第一煎煮液和第二煎煮液合并，蒸发浓缩为60℃下相对密度为1.10的浓缩液，即可获得甘草提取液。所述赤芍提取液和山大颜提取液的制备方法均与甘草提取液的制备方法相同。
本发明所培育的富硒铁皮石斛苗采用组培技术进行繁殖，增殖效率非常高，能够有效满足市场对富硒铁皮石斛苗的需求，具有广阔的市场前景；本发明所培育的富硒铁皮石斛苗生长好，移栽成活率高，质量稳定，有利于富硒铁皮石斛生产规模的扩大。
上面对本发明的较佳实施方式作了详细说明，但是本发明并不限于上述实施方式，在本领域的普通技术人员所具备的知识范围内，还可以在不脱离本发明宗旨的前提下作出各种变化。