本发明属于植物的人工栽培技术领域；具体涉及一种大麻茎尖组织培养快速繁殖方法。
背景技术：
大麻(cannabissatival.)，是大麻科(cannabinaceae)大麻属(cannabis)一年生草本植物。大麻是世界也是中国最古老、历史最悠久的栽培作物之一，大麻浑身是宝，可从农业种植延伸到纺织、服装、造纸、军需、化工、新型建材、生物能源、食品保健、医药、饲料等十几个产业链。
由于大麻中含有一种致幻成瘾的活性成分—四氢大麻酚(thc)，易被不法分子用来非法生产毒品，造成社会危害，许多国家把大麻也一并列为禁种作物，导致许多珍贵的种质资源遗失，对大麻的研究远远落后于其他经济作物。大麻有雌雄异株和雌雄同株之分，但由于同一群体内不同个体间表现多样性，种质杂合度高，遗传背景非常复杂且遗传学与分子生物学的基础研究也比较少，通过引种、系选、杂交、杂种优势、诱变等方法存在周期长、田间选择难度大、抗源不足等问题。为了加速育种工作，许多研究者也利用温室进行育种，但由于光照不足、苗期温度过高等条件的影响，导致大麻幼苗徒长而出现倒伏死亡现象的发生，这也会给育种工作带来困难。生物技术是解决这些问题的有效途径，即可加速种质资源改良进程，稳定优良性状，又可解决温室育种的弊端。
在以往大麻再生体系的研究中，整个再生过程周期较长。申请号为200610088353.7的中国专利，将种子消毒后接种于发芽培养基，30天后才将茎尖接种到侧芽培养基中，40天后获得侧芽，生根培养需要60天，培养周期长。选用种子消毒后接种培养基产生的无菌苗的下胚轴为外植体，从种子接种到生根获得新的植株需要100多天的时间，影响实验周期的紧密性。
技术实现要素：
本发明目的是提供一种大麻茎尖组织培养快速繁殖方法。
本发明通过以下技术方案实现：
一种大麻茎尖组织培养快速繁殖方法，包括如下步骤：
步骤1、种子消毒：挑选成熟、饱满、有光泽的大麻种子，先用洗涤液洗涤后用自来水冲洗，再在超净台中用浓度为75％的乙醇浸泡，然后用无菌水冲洗，再用0.1％的升汞溶液浸泡，然后用无菌水冲洗至水体澄清，用无菌滤纸吸干种子表面水分，得到消毒后的大麻种子；
步骤2、发芽培养：将步骤1消毒后的大麻种子接种于如下发芽培养基中，ms培养基，蔗糖25～30g/l，琼脂7～8g/l，ph5.7～5.9，培养温度为23～25℃，光照强度1800～2300lux，每天16h光照、8h黑暗条件下培养，培养天数8～10天，得到大麻无菌苗茎尖；
步骤3、再生培养：将步骤2得到的大麻无菌苗茎尖接种到如下的再生培养基中：含激素的ms培养基，蔗糖25～30g/l，琼脂7～8g/l，ph5.7～5.9，培养温度为23～25℃，光照强度1800～2300lux，每天16h光照、8h黑暗条件下培养，培养天数15～20天，得到大麻茎尖再生植株；
步骤4、生根培养：将步骤3得到的茎尖再生植株接种到如下的生根培养基中，含激素的ms培养基或含激素的1/2ms培养基，蔗糖30g/l，琼脂8g/l，ph5.8，培养温度为23～25℃，光照强度2300lux，每天16h光照、8h黑暗条件下培养，培养时间为20～30天，得到生根的植株。
本发明所述的一种大麻茎尖组织培养快速繁殖方法，步骤1中乙醇浸泡的时间为2～3min，无菌水冲洗次数3～4次，升汞溶液浸泡处理时间6～7min。
本发明所述的一种大麻茎尖组织培养快速繁殖方法，步骤2中的ms培养基是由大量元素、微量元素、铁盐和有机成份组成，其中所述的大量元素包括1500～1650mg/l的nh4no3、120～170mg/l的kh2po4、1200～1500mg/l的kno3、350～400mg/l的cacl2·2h2o、300～350mg/l的mgso4·7h2o，所述的微量元素包括0.83mg/l的ki、22.3mg/l的mnso4·4h2o、6.2mg/l的h3bo3、8.6mg/l的znso4·7h2o、0.25mg/l的na2moo4·2h2o、0.025mg/l的cuso4·5h2o和0.025mg/l的cocl2·6h2o，所述的铁盐为硫酸亚铁27.8mg/l、乙二胺四乙酸二钠37.3mg/l，所述的有机成份包括90～95mg/l的肌醇、1.0～3.0mg/l的甘氨酸、0.1～0.2mg/l的盐酸硫胺素、0.5～1.0mg/l的盐酸吡哆醇、0.5～1.0mg/l的烟酸。
本发明所述的一种大麻茎尖组织培养快速繁殖方法，步骤2中的ms培养基是由大量元素、微量元素、铁盐和有机成份组成，其中所述的大量元素包括1600mg/l的nh4no3、150mg/l的kh2po4、1300mg/l的kno3、370mg/l的cacl2·2h2o、320mg/l的mgso4·7h2o，所述的微量元素包括0.83mg/l的ki、22.3mg/l的mnso4·4h2o、6.2mg/l的h3bo3、8.6mg/l的znso4·7h2o、0.25mg/l的na2moo4·2h2o、0.025mg/l的cuso4·5h2o和0.025mg/l的cocl2·6h2o，所述的铁盐为硫酸亚铁27.8mg/l、乙二胺四乙酸二钠37.3mg/l，所述的有机成份包括92mg/l的肌醇、1.0mg/l的甘氨酸、0.1mg/l的盐酸硫胺素、0.5mg/l的盐酸吡哆醇、0.5mg/l的烟酸。
本发明所述的一种大麻茎尖组织培养快速繁殖方法，步骤3或4中的含激素的ms培养基是由大量元素、微量元素、铁盐、有机成份、激素组成，其中所述的大量元素包括1500～1650mg/l的nh4no3、120～170mg/l的kh2po4、1200～1500mg/l的kno3、350～400mg/l的cacl2·2h2o、300～350mg/l的mgso4·7h2o，所述的微量元素包括0.83mg/l的ki、22.3mg/l的mnso4·4h2o、6.2mg/l的h3bo3、8.6mg/l的znso4·7h2o、0.25mg/l的na2moo4·2h2o、0.025mg/l的cuso4·5h2o和0.025mg/l的cocl2·6h2o，所述的铁盐为硫酸亚铁27.8mg/l、乙二胺四乙酸二钠37.3mg/l，所述的有机成份包括90～95mg/l的肌醇、1.0～3.0mg/l的甘氨酸、0.1～0.2mg/l的盐酸硫胺素、0.5～1.0mg/l的盐酸吡哆醇、0.5～1.0mg/l的烟酸，激素为1.0～2.0mg/l6-苄氨基腺嘌呤、1.0～2.0mg/l激动素。
本发明所述的一种大麻茎尖组织培养快速繁殖方法，步骤3或4中的含激素的ms培养基是由大量元素、微量元素、铁盐、有机成份、激素组成，其中所述的大量元素包括1550mg/l的nh4no3、130mg/l的kh2po4、1250mg/l的kno3、370mg/l的cacl2·2h2o、330mg/l的mgso4·7h2o，所述的微量元素包括0.83mg/l的ki、22.3mg/l的mnso4·4h2o、6.2mg/l的h3bo3、8.6mg/l的znso4·7h2o、0.25mg/l的na2moo4·2h2o、0.025mg/l的cuso4·5h2o和0.025mg/l的cocl2·6h2o，所述的铁盐为硫酸亚铁27.8mg/l、乙二胺四乙酸二钠37.3mg/l，所述的有机成份包括93mg/l的肌醇、2.0mg/l的甘氨酸、0.2mg/l的盐酸硫胺素、0.6mg/l的盐酸吡哆醇、0.6mg/l的烟酸，激素为1.0mg/l6-苄氨基腺嘌呤、1.0mg/l激动素。
本发明所述的一种大麻茎尖组织培养快速繁殖方法，步骤3或4中的含激素的ms培养基是由大量元素、微量元素、铁盐、有机成份、激素组成，其中所述的大量元素包括1550mg/l的nh4no3、130mg/l的kh2po4、1250mg/l的kno3、370mg/l的cacl2·2h2o、330mg/l的mgso4·7h2o，所述的微量元素包括0.83mg/l的ki、22.3mg/l的mnso4·4h2o、6.2mg/l的h3bo3、8.6mg/l的znso4·7h2o、0.25mg/l的na2moo4·2h2o、0.025mg/l的cuso4·5h2o和0.025mg/l的cocl2·6h2o，所述的铁盐为硫酸亚铁27.8mg/l、乙二胺四乙酸二钠37.3mg/l，所述的有机成份包括93mg/l的肌醇、2.0mg/l的甘氨酸、0.2mg/l的盐酸硫胺素、0.6mg/l的盐酸吡哆醇、0.6mg/l的烟酸，激素为2.0mg/l6-苄氨基腺嘌呤、2.0mg/l激动素。
本发明所述的一种大麻茎尖组织培养快速繁殖方法，步骤4中的含激素的1/2ms培养基是由大量元素、微量元素、铁盐、有机成份、激素组成，其中所述的大量元素包括700～800mg/l的nh4no3、60～80mg/l的kh2po4、600～750mg/l的kno3、175～200mg/l的cacl2·2h2o、150～175mg/l的mgso4·7h2o，所述的微量元素包括0.83mg/l的ki、22.3mg/l的mnso4·4h2o、6.2mg/l的h3bo3、8.6mg/l的znso4·7h2o、0.25mg/l的na2moo4·2h2o、0.025mg/l的cuso4·5h2o和0.025mg/l的cocl2·6h2o，所述的铁盐为硫酸亚铁27.8mg/l、乙二胺四乙酸二钠37.3mg/l，所述的有机成份包括90～95mg/l的肌醇、1.0～3.0mg/l的甘氨酸、0.1～0.2mg/l的盐酸硫胺素、0.5～1.0mg/l的盐酸吡哆醇、0.5～1.0mg/l的烟酸，激素为0.1～0.15mg/l吲哚丁酸、0.05～0.1mg/lα-萘乙酸。
本发明所述的一种大麻茎尖组织培养快速繁殖方法，步骤4中的含激素的1/2ms培养基是由大量元素、微量元素、铁盐、有机成份、激素组成，其中所述的大量元素包括750mg/l的nh4no3、70mg/l的kh2po4、700mg/l的kno3、180mg/l的cacl2·2h2o、160mg/l的mgso4·7h2o，所述的微量元素包括0.83mg/l的ki、22.3mg/l的mnso4·4h2o、6.2mg/l的h3bo3、8.6mg/l的znso4·7h2o、0.25mg/l的na2moo4·2h2o、0.025mg/l的cuso4·5h2o和0.025mg/l的cocl2·6h2o，所述的铁盐为硫酸亚铁27.8mg/l、乙二胺四乙酸二钠37.3mg/l，所述的有机成份包括90mg/l的肌醇、1.0mg/l的甘氨酸、0.1mg/l的盐酸硫胺素、0.5mg/l的盐酸吡哆醇、0.5mg/l的烟酸，激素为0.1mg/l吲哚丁酸、0.05mg/lα-萘乙酸。
本发明所述的一种大麻茎尖组织培养快速繁殖方法，步骤4中的含激素的1/2ms培养基是由大量元素、微量元素、铁盐、有机成份、激素组成，其中所述的大量元素包括750mg/l的nh4no3、70mg/l的kh2po4、700mg/l的kno3、180mg/l的cacl2·2h2o、160mg/l的mgso4·7h2o，所述的微量元素包括0.83mg/l的ki、22.3mg/l的mnso4·4h2o、6.2mg/l的h3bo3、8.6mg/l的znso4·7h2o、0.25mg/l的na2moo4·2h2o、0.025mg/l的cuso4·5h2o和0.025mg/l的cocl2·6h2o，所述的铁盐为硫酸亚铁27.8mg/l、乙二胺四乙酸二钠37.3mg/l，所述的有机成份包括90mg/l的肌醇、1.0mg/l的甘氨酸、0.1mg/l的盐酸硫胺素、0.5mg/l的盐酸吡哆醇、0.5mg/l的烟酸，激素为0.15mg/l吲哚丁酸、0.1mg/lα-萘乙酸。
本发明所述的一种大麻茎尖组织培养快速繁殖方法，步骤4中的含激素的1/2ms培养基是由大量元素、微量元素、铁盐、有机成份、激素组成，其中所述的大量元素包括750mg/l的nh4no3、70mg/l的kh2po4、700mg/l的kno3、180mg/l的cacl2·2h2o、160mg/l的mgso4·7h2o，所述的微量元素包括0.83mg/l的ki、22.3mg/l的mnso4·4h2o、6.2mg/l的h3bo3、8.6mg/l的znso4·7h2o、0.25mg/l的na2moo4·2h2o、0.025mg/l的cuso4·5h2o和0.025mg/l的cocl2·6h2o，所述的铁盐为硫酸亚铁27.8mg/l、乙二胺四乙酸二钠37.3mg/l，所述的有机成份包括90mg/l的肌醇、1.0mg/l的甘氨酸、0.1mg/l的盐酸硫胺素、0.5mg/l的盐酸吡哆醇、0.5mg/l的烟酸，激素为0.1mg/l吲哚丁酸、0.075mg/lα-萘乙酸。
本发明所述的一种大麻茎尖组织培养快速繁殖方法，所述的“大麻”包括雌雄异株和雌雄同株的工业大麻。
本发明所述的一种大麻茎尖组织培养快速繁殖方法，利用茎尖组织培养快速繁殖得到再生植株，实验周期短，整个周期只需43～60天，生根效果好，根系变粗且长势较好，提高移栽成活率，
本发明所述的一种大麻茎尖组织培养快速繁殖方法，观察根系生长情况，用尺测量十个根的粗度，并记录；所得到的生根植株按照常规方法进行移栽，统计移栽成活率，得到的结果生根的植株生根率为85.67±1.53％，根粗为9.67±0.42mm，移栽成活率为86.67％。
本发明所述的一种大麻茎尖组织培养快速繁殖方法，能够加速种质资源改良进程，稳定优良性状，又可解决温室育种的弊端。
附图说明
图1为具体实施方式一方法制备的大麻无菌苗照片；
图2为具体实施方式一方法制备的大麻茎尖苗照片；
图3为具体实施方式一方法制备的大麻茎尖再生植株照片；
图4为具体实施方式一方法制备的大麻生根植株根部照片；
图5为具体实施方式二方法制备的大麻生根植株根部照片；
图6为具体实施方式三方法制备的大麻生根植株根部照片；
图7为具体实施方式四方法制备的大麻生根植株根部照片；
图8为具体实施方式五方法制备的大麻生根植株根部照片。
具体实施方式
具体实施方式一：
一种大麻茎尖组织培养快速繁殖方法，包括如下步骤：
步骤1、种子消毒：挑选成熟、饱满、有光泽的大麻种子，先用洗涤液洗涤后用自来水冲洗，再在超净台中用浓度为75％的乙醇浸泡，然后用无菌水冲洗，再用浓度为0.1％的升汞溶液浸泡，然后用无菌水冲洗至水体澄清，用无菌滤纸吸干种子表面水分，得到消毒后的大麻种子；
步骤2、发芽培养：将步骤1消毒后的大麻种子接种于如下发芽培养基中，ms培养基，蔗糖30g/l，琼脂8g/l，ph5.8，培养温度为23～25℃，光照强度2300lux，每天16h光照、8h黑暗条件下培养，培养天数10天，得到大麻无菌苗茎尖；
步骤3、再生培养：将步骤2得到的大麻无菌苗茎尖接种到如下的再生培养基中：含激素的ms培养基，蔗糖30g/l，琼脂8g/l，ph5.8，培养温度为23～25℃，光照强度1800～2300lux，每天16h光照、8h黑暗条件下培养，培养天数20天，得到大麻茎尖再生植株；
步骤4、生根培养：将步骤3得到的大麻茎尖再生植株接种到如下的生根培养基中，含激素的1/2ms培养基，蔗糖30g/l，琼脂8g/l，ph5.8，培养温度为23～25℃，光照强度2300lux，每天16h光照、8h黑暗条件下培养，培养时间为30天，得到生根的植株。
本实施方式所述的一种大麻茎尖组织培养快速繁殖方法，步骤1中乙醇浸泡的时间为3min，无菌水冲洗次数4次，升汞溶液浸泡处理时间7min。
本实施方式所述的一种大麻茎尖组织培养快速繁殖方法，步骤2中的ms培养基是由大量元素、微量元素、铁盐和有机成份组成，其中所述的大量元素包括1600mg/l的nh4no3、150mg/l的kh2po4、1300mg/l的kno3、370mg/l的cacl2·2h2o、320mg/l的mgso4·7h2o，所述的微量元素包括0.83mg/l的ki、22.3mg/l的mnso4·4h2o、6.2mg/l的h3bo3、8.6mg/l的znso4·7h2o、0.25mg/l的na2moo4·2h2o、0.025mg/l的cuso4·5h2o和0.025mg/l的cocl2·6h2o，所述的铁盐为硫酸亚铁27.8mg/l、乙二胺四乙酸二钠37.3mg/l，所述的有机成份包括92mg/l的肌醇、1.0mg/l的甘氨酸、0.1mg/l的盐酸硫胺素、0.5mg/l的盐酸吡哆醇、0.5mg/l的烟酸。
本实施方式所述的一种大麻茎尖组织培养快速繁殖方法，步骤3中的含激素的ms培养基是由大量元素、微量元素、铁盐、有机成份、激素组成，其中所述的大量元素包括1550mg/l的nh4no3、130mg/l的kh2po4、1250mg/l的kno3、370mg/l的cacl2·2h2o、330mg/l的mgso4·7h2o，所述的微量元素包括0.83mg/l的ki、22.3mg/l的mnso4·4h2o、6.2mg/l的h3bo3、8.6mg/l的znso4·7h2o、0.25mg/l的na2moo4·2h2o、0.025mg/l的cuso4·5h2o和0.025mg/l的cocl2·6h2o，所述的铁盐为硫酸亚铁27.8mg/l、乙二胺四乙酸二钠37.3mg/l，所述的有机成份包括93mg/l的肌醇、2.0mg/l的甘氨酸、0.2mg/l的盐酸硫胺素、0.6mg/l的盐酸吡哆醇、0.6mg/l的烟酸，激素为1.0mg/l6-苄氨基腺嘌呤、1.0mg/l激动素。
本实施方式所述的一种大麻茎尖组织培养快速繁殖方法，步骤4中的含激素的1/2ms培养基是由大量元素、微量元素、铁盐、有机成份、激素组成，其中所述的大量元素包括750mg/l的nh4no3、70mg/l的kh2po4、700mg/l的kno3、180mg/l的cacl2·2h2o、160mg/l的mgso4·7h2o，所述的微量元素包括0.83mg/l的ki、22.3mg/l的mnso4·4h2o、6.2mg/l的h3bo3、8.6mg/l的znso4·7h2o、0.25mg/l的na2moo4·2h2o、0.025mg/l的cuso4·5h2o和0.025mg/l的cocl2·6h2o，所述的铁盐为硫酸亚铁27.8mg/l、乙二胺四乙酸二钠37.3mg/l，所述的有机成份包括90mg/l的肌醇、1mg/l的甘氨酸、0.1mg/l的盐酸硫胺素、0.5mg/l的盐酸吡哆醇、0.5mg/l的烟酸，激素为0.1mg/l吲哚丁酸、0.05mg/lα-萘乙酸。
本实施方式所述的一种大麻茎尖组织培养快速繁殖方法，图1为具体实施方式一方法制备的大麻无菌苗照片，图2为具体实施方式一方法制备的大麻茎尖苗照片，图3为具体实施方式一方法制备的大麻茎尖再生植株照片。从图1中能够看出种子培养10天后，无菌苗的生理状态很好，叶片舒展，挺拔；从图2中能够看出生长较好的茎尖，中心叶片再生良好，没有死亡；从图3中能够看出茎尖再生分化出三对真叶，且长势良好。
本实施方式所述的一种大麻茎尖组织培养快速繁殖方法，图4为具体实施方式一方法制备的大麻生根植株根部照片，从图4中观察根系生长情况，用尺测量十个根的粗度，并记录；所得到的生根植株按照常规方法进行移栽，统计移栽成活率，得到的结果如表1所示：本实施方式生根的植株生根率为62.00±4.00％，根粗为5.53±0.15mm，移栽成活率为43.33％。
表1具体实施方式一生根率、根粗和移栽成活率记录表
具体实施方式二：
一种大麻茎尖组织培养快速繁殖方法，包括如下步骤：
步骤1、种子消毒：挑选成熟、饱满、有光泽的大麻种子，先用洗涤液洗涤后用自来水冲洗，再在超净台中用浓度为75％的乙醇浸泡，然后用无菌水冲洗，再用浓度为0.1％的升汞溶液浸泡，然后用无菌水冲洗至水体澄清，用无菌滤纸吸干种子表面水分，得到消毒后的大麻种子；
步骤2、发芽培养：将步骤1消毒后的大麻种子接种于如下发芽培养基中，ms培养基，蔗糖25g/l，琼脂7g/l，ph5.7，培养温度为23～25℃，光照强度1800lux，每天16h光照、8h黑暗条件下培养，培养天数10天，得到大麻无菌苗茎尖；
步骤3、再生培养：将步骤2得到的大麻无菌苗茎尖接种到如下的再生培养基中：含激素的ms培养基，蔗糖25g/l，琼脂7g/l，ph5.7，培养温度为23～25℃，光照强度1800lux，每天16h光照、8h黑暗条件下培养，培养天数20天，得到大麻茎尖再生植株；
步骤4、生根培养：将步骤3得到的大麻茎尖再生植株接种到如下的生根培养基中，含激素的1/2ms培养基，蔗糖30g/l，琼脂8g/l，ph5.8，培养温度为23～25℃，光照强度2300lux，每天16h光照、8h黑暗条件下培养，培养时间为25天，得到生根的植株。
本实施方式所述的一种大麻茎尖组织培养快速繁殖方法，步骤1中乙醇浸泡的时间为3min，无菌水冲洗次数4次，升汞溶液浸泡处理时间7min。
本实施方式所述的一种大麻茎尖组织培养快速繁殖方法，步骤2中的ms培养基是由大量元素、微量元素、铁盐和有机成份组成，其中所述的大量元素包括1500mg/l的nh4no3、120mg/l的kh2po4、1200mg/l的kno3、350mg/l的cacl2·2h2o、300mg/l的mgso4·7h2o，所述的微量元素包括0.83mg/l的ki、22.3mg/l的mnso4·4h2o、6.2mg/l的h3bo3、8.6mg/l的znso4·7h2o、0.25mg/l的na2moo4·2h2o、0.025mg/l的cuso4·5h2o和0.025mg/l的cocl2·6h2o，所述的铁盐为硫酸亚铁27.8mg/l、乙二胺四乙酸二钠37.3mg/l，所述的有机成份包括90～95mg/l的肌醇、1.0～3.0mg/l的甘氨酸、0.1～0.2mg/l的盐酸硫胺素、0.5mg/l的盐酸吡哆醇、0.5mg/l的烟酸。
本实施方式所述的一种大麻茎尖组织培养快速繁殖方法，步骤3中的含激素的ms培养基是由大量元素、微量元素、铁盐、有机成份、激素组成，其中所述的大量元素包括1500mg/l的nh4no3、120mg/l的kh2po4、1200mg/l的kno3、350mg/l的cacl2·2h2o、300mg/l的mgso4·7h2o，所述的微量元素包括0.83mg/l的ki、22.3mg/l的mnso4·4h2o、6.2mg/l的h3bo3、8.6mg/l的znso4·7h2o、0.25mg/l的na2moo4·2h2o、0.025mg/l的cuso4·5h2o和0.025mg/l的cocl2·6h2o，所述的铁盐为硫酸亚铁27.8mg/l、乙二胺四乙酸二钠37.3mg/l，所述的有机成份包括90mg/l的肌醇、1mg/l的甘氨酸、0.1mg/l的盐酸硫胺素、0.5mg/l的盐酸吡哆醇、0.5mg/l的烟酸，激素为1.0mg/l6-苄氨基腺嘌呤、1.0mg/l激动素。
本实施方式所述的一种大麻茎尖组织培养快速繁殖方法，步骤4中的含激素的1/2ms培养基是由大量元素、微量元素、铁盐、有机成份、激素组成，其中所述的大量元素包括700mg/l的nh4no3、60mg/l的kh2po4、600mg/l的kno3、175mg/l的cacl2·2h2o、150mg/l的mgso4·7h2o，所述的微量元素包括0.83mg/l的ki、22.3mg/l的mnso4·4h2o、6.2mg/l的h3bo3、8.6mg/l的znso4·7h2o、0.25mg/l的na2moo4·2h2o、0.025mg/l的cuso4·5h2o和0.025mg/l的cocl2·6h2o，所述的铁盐为硫酸亚铁27.8mg/l、乙二胺四乙酸二钠37.3mg/l，所述的有机成份包括90mg/l的肌醇、1mg/l的甘氨酸、0.1mg/l的盐酸硫胺素、0.5mg/l的盐酸吡哆醇、0.5mg/l的烟酸，激素为0.15mg/l吲哚丁酸、0.1mg/lα-萘乙酸。
本实施方式所述的一种大麻茎尖组织培养快速繁殖方法，图5为具体实施方式二方法制备的大麻生根植株根部照片，观察根系生长情况，用尺测量十个根的粗度，并记录；所得到的生根植株按照常规方法进行移栽，统计移栽成活率，得到的结果生根的植株生根率为75.00±3.00％，根粗为7.33±1.26mm，移栽成活率为63.33％。
表2具体实施方式二生根率、根粗和移栽成活率记录表
具体实施方式三：
一种大麻茎尖组织培养快速繁殖方法，包括如下步骤：
步骤1、种子消毒：挑选成熟、饱满、有光泽的大麻种子，先用洗涤液洗涤后用自来水冲洗，再在超净台中用浓度为75％的乙醇浸泡，然后用无菌水冲洗，再用浓度为0.1％的升汞溶液浸泡，然后用无菌水冲洗至水体澄清，用无菌滤纸吸干种子表面水分，得到消毒后的大麻种子；
步骤2、发芽培养：将步骤1消毒后的大麻种子接种于如下发芽培养基中，ms培养基，蔗糖30g/l，琼脂8g/l，ph5.9，培养温度为25℃，光照强度2300lux，每天16h光照、8h黑暗条件下培养，培养天数8天，得到大麻无菌苗茎尖；
步骤3、再生培养：将步骤2得到的大麻无菌苗茎尖接种到如下的再生培养基中：含激素的ms培养基，蔗糖30g/l，琼脂8g/l，ph5.9，培养温度为25℃，光照强度2300lux，每天16h光照、8h黑暗条件下培养，培养天数15天，得到大麻茎尖再生植株；
步骤4、生根培养：将步骤3得到的大麻茎尖再生植株接种到如下的生根培养基中，含激素的ms培养基，蔗糖30g/l，琼脂8g/l，ph5.8，培养温度为25℃，光照强度2300lux，每天16h光照、8h黑暗条件下培养，培养时间为30天，得到生根的植株。
本实施方式所述的一种大麻茎尖组织培养快速繁殖方法，步骤1中乙醇浸泡的时间为2min，无菌水冲洗次数4次，升汞溶液浸泡处理时间7min。
本实施方式所述的一种大麻茎尖组织培养快速繁殖方法，步骤2中的ms培养基是由大量元素、微量元素、铁盐和有机成份组成，其中所述的大量元素包括1650mg/l的nh4no3、170mg/l的kh2po4、1500mg/l的kno3、400mg/l的cacl2·2h2o、350mg/l的mgso4·7h2o，所述的微量元素包括0.83mg/l的ki、22.3mg/l的mnso4·4h2o、6.2mg/l的h3bo3、8.6mg/l的znso4·7h2o、0.25mg/l的na2moo4·2h2o、0.025mg/l的cuso4·5h2o和0.025mg/l的cocl2·6h2o，所述的铁盐为硫酸亚铁27.8mg/l、乙二胺四乙酸二钠37.3mg/l，所述的有机成份包括95mg/l的肌醇、3.0mg/l的甘氨酸、0.2mg/l的盐酸硫胺素、1.0mg/l的盐酸吡哆醇、1.0mg/l的烟酸。
本实施方式所述的一种大麻茎尖组织培养快速繁殖方法，步骤3中的含激素的ms培养基是由大量元素、微量元素、铁盐、有机成份、激素组成，其中所述的大量元素包括1650mg/l的nh4no3、170mg/l的kh2po4、1500mg/l的kno3、400mg/l的cacl2·2h2o、350mg/l的mgso4·7h2o，所述的微量元素包括0.83mg/l的ki、22.3mg/l的mnso4·4h2o、6.2mg/l的h3bo3、8.6mg/l的znso4·7h2o、0.25mg/l的na2moo4·2h2o、0.025mg/l的cuso4·5h2o和0.025mg/l的cocl2·6h2o，所述的铁盐为硫酸亚铁27.8mg/l、乙二胺四乙酸二钠37.3mg/l，所述的有机成份包括95mg/l的肌醇、3mg/l的甘氨酸、0.2mg/l的盐酸硫胺素、1.0mg/l的盐酸吡哆醇、1.0mg/l的烟酸，激素为2.0mg/l6-苄氨基腺嘌呤、2.0mg/l激动素。
本实施方式所述的一种大麻茎尖组织培养快速繁殖方法，步骤4中的含激素的ms培养基是由大量元素、微量元素、铁盐、有机成份、激素组成，其中所述的大量元素包括1650mg/l的nh4no3、170mg/l的kh2po4、1500mg/l的kno3、400mg/l的cacl2·2h2o、350mg/l的mgso4·7h2o，所述的微量元素包括0.83mg/l的ki、22.3mg/l的mnso4·4h2o、6.2mg/l的h3bo3、8.6mg/l的znso4·7h2o、0.25mg/l的na2moo4·2h2o、0.025mg/l的cuso4·5h2o和0.025mg/l的cocl2·6h2o，所述的铁盐为硫酸亚铁27.8mg/l、乙二胺四乙酸二钠37.3mg/l，所述的有机成份包括95mg/l的肌醇、3.0mg/l的甘氨酸、0.2mg/l的盐酸硫胺素、1.0mg/l的盐酸吡哆醇、1.0mg/l的烟酸，激素为2.0mg/l6-苄氨基腺嘌呤、2.0mg/l激动素。
本实施方式所述的一种大麻茎尖组织培养快速繁殖方法，图6为具体实施方式三方法制备的大麻生根植株根部照片，观察根系生长情况，用尺测量十个根的粗度，并记录；所得到的生根植株按照常规方法进行移栽，统计移栽成活率，得到的结果生根的植株生根率为78.00±3.00％，根粗为7.67±0.21mm，移栽成活率为70.00％。
表3具体实施方式三生根率、根粗和移栽成活率记录表
具体实施方式四：
一种大麻茎尖组织培养快速繁殖方法，包括如下步骤：
步骤1、种子消毒：挑选成熟、饱满、有光泽的大麻种子，先用洗涤液洗涤后用自来水冲洗，再在超净台中用浓度为75％的乙醇浸泡，然后用无菌水冲洗，再用浓度为0.1％的升汞溶液浸泡，然后用无菌水冲洗至水体澄清，用无菌滤纸吸干种子表面水分，得到消毒后的大麻种子；
步骤2、发芽培养：将步骤1消毒后的大麻种子接种于如下发芽培养基中，ms培养基，蔗糖30g/l，琼脂8g/l，ph5.8，培养温度为23～25℃，光照强度2300lux，每天16h光照、8h黑暗条件下培养，培养天数8天，得到大麻无菌苗茎尖；
步骤3、再生培养：将步骤2得到的大麻无菌苗茎尖接种到如下的再生培养基中：含激素的ms培养基，蔗糖30g/l，琼脂8g/l，ph5.8，培养温度为23～25℃，光照强度1800～2300lux，每天16h光照、8h黑暗条件下培养，培养天数15天，得到大麻茎尖再生植株；
步骤4、生根培养：将步骤3得到的大麻茎尖再生植株接种到如下的生根培养基中，含激素的1/2ms培养基，蔗糖30g/l，琼脂8g/l，ph5.8，培养温度为23～25℃，光照强度2300lux，每天16h光照、8h黑暗条件下培养，培养时间为25天，得到生根的植株。
本实施方式所述的一种大麻茎尖组织培养快速繁殖方法，步骤1中乙醇浸泡的时间为2min，无菌水冲洗次数4次，升汞溶液浸泡处理时间7min。
本实施方式所述的一种大麻茎尖组织培养快速繁殖方法，步骤2中的ms培养基是由大量元素、微量元素、铁盐和有机成份组成，其中所述的大量元素包括1600mg/l的nh4no3、150mg/l的kh2po4、1300mg/l的kno3、370mg/l的cacl2·2h2o、320mg/l的mgso4·7h2o，所述的微量元素包括0.83mg/l的ki、22.3mg/l的mnso4·4h2o、6.2mg/l的h3bo3、8.6mg/l的znso4·7h2o、0.25mg/l的na2moo4·2h2o、0.025mg/l的cuso4·5h2o和0.025mg/l的cocl2·6h2o，所述的铁盐为硫酸亚铁27.8mg/l、乙二胺四乙酸二钠37.3mg/l，所述的有机成份包括92mg/l的肌醇、1.0mg/l的甘氨酸、0.1mg/l的盐酸硫胺素、0.5mg/l的盐酸吡哆醇、0.5mg/l的烟酸。
本实施方式所述的一种大麻茎尖组织培养快速繁殖方法，步骤3中的含激素的ms培养基是由大量元素、微量元素、铁盐、有机成份、激素组成，其中所述的大量元素包括1550mg/l的nh4no3、130mg/l的kh2po4、1250mg/l的kno3、370mg/l的cacl2·2h2o、330mg/l的mgso4·7h2o，所述的微量元素包括0.83mg/l的ki、22.3mg/l的mnso4·4h2o、6.2mg/l的h3bo3、8.6mg/l的znso4·7h2o、0.25mg/l的na2moo4·2h2o、0.025mg/l的cuso4·5h2o和0.025mg/l的cocl2·6h2o，所述的铁盐为硫酸亚铁27.8mg/l、乙二胺四乙酸二钠37.3mg/l，所述的有机成份包括93mg/l的肌醇、2.0mg/l的甘氨酸、0.2mg/l的盐酸硫胺素、0.6mg/l的盐酸吡哆醇、0.6mg/l的烟酸，激素为1.0mg/l6-苄氨基腺嘌呤、1.0mg/l激动素。
本实施方式所述的一种大麻茎尖组织培养快速繁殖方法，步骤4中的含激素的1/2ms培养基是由大量元素、微量元素、铁盐、有机成份、激素组成，其中所述的大量元素包括750mg/l的nh4no3、70mg/l的kh2po4、700mg/l的kno3、180mg/l的cacl2·2h2o、160mg/l的mgso4·7h2o，所述的微量元素包括0.83mg/l的ki、22.3mg/l的mnso4·4h2o、6.2mg/l的h3bo3、8.6mg/l的znso4·7h2o、0.25mg/l的na2moo4·2h2o、0.025mg/l的cuso4·5h2o和0.025mg/l的cocl2·6h2o，所述的铁盐为硫酸亚铁27.8mg/l、乙二胺四乙酸二钠37.3mg/l，所述的有机成份包括90mg/l的肌醇、1mg/l的甘氨酸、0.1mg/l的盐酸硫胺素、0.5mg/l的盐酸吡哆醇、0.5mg/l的烟酸，激素为0.1mg/l吲哚丁酸、0.075mg/lα-萘乙酸。
本实施方式所述的一种大麻茎尖组织培养快速繁殖方法，图7为具体实施方式四方法制备的大麻生根植株根部照片，从图7中观察根系生长情况，用尺测量十个根的粗度，并记录；所得到的生根植株按照常规方法进行移栽，统计移栽成活率，得到的结果如表4所示：本实施方式生根的植株生根率为83.00±2.00％，根粗为9.00±1.32mm，移栽成活率为83.33％。
表4具体实施方式四生根率、根粗和移栽成活率记录表
具体实施方式五：
一种大麻茎尖组织培养快速繁殖方法，包括如下步骤：
步骤1、种子消毒：挑选成熟、饱满、有光泽的大麻种子，先用洗涤液洗涤后用自来水冲洗，再在超净台中用浓度为75％的乙醇浸泡，然后用无菌水冲洗，再用浓度为0.1％的升汞溶液浸泡，然后用无菌水冲洗至水体澄清，用无菌滤纸吸干种子表面水分，得到消毒后的大麻种子；
步骤2、发芽培养：将步骤1消毒后的大麻种子接种于如下发芽培养基中，ms培养基，蔗糖30g/l，琼脂8g/l，ph5.8，培养温度为23～25℃，光照强度2300lux，每天16h光照、8h黑暗条件下培养，培养天数8天，得到大麻无菌苗茎尖；
步骤3、再生培养：将步骤2得到的大麻无菌苗茎尖接种到如下的再生培养基中：含激素的ms培养基，蔗糖30g/l，琼脂8g/l，ph5.8，培养温度为23～25℃，光照强度1800～2300lux，每天16h光照、8h黑暗条件下培养，培养天数15天，得到大麻茎尖再生植株；
步骤4、生根培养：将步骤3得到的大麻茎尖再生植株接种到如下的生根培养基中，含激素的ms培养基，蔗糖30g/l，琼脂8g/l，ph5.8，培养温度为23～25℃，光照强度2300lux，每天16h光照、8h黑暗条件下培养，培养时间为20天，得到生根的植株。
本实施方式所述的一种大麻茎尖组织培养快速繁殖方法，步骤1中乙醇浸泡的时间为2min，无菌水冲洗次数4次，升汞溶液浸泡处理时间7min。
本实施方式所述的一种大麻茎尖组织培养快速繁殖方法，步骤2中的ms培养基是由大量元素、微量元素、铁盐和有机成份组成，其中所述的大量元素包括1600mg/l的nh4no3、150mg/l的kh2po4、1300mg/l的kno3、370mg/l的cacl2·2h2o、320mg/l的mgso4·7h2o，所述的微量元素包括0.83mg/l的ki、22.3mg/l的mnso4·4h2o、6.2mg/l的h3bo3、8.6mg/l的znso4·7h2o、0.25mg/l的na2moo4·2h2o、0.025mg/l的cuso4·5h2o和0.025mg/l的cocl2·6h2o，所述的铁盐为硫酸亚铁27.8mg/l、乙二胺四乙酸二钠37.3mg/l，所述的有机成份包括92mg/l的肌醇、1.0mg/l的甘氨酸、0.1mg/l的盐酸硫胺素、0.5mg/l的盐酸吡哆醇、0.5mg/l的烟酸。
本实施方式所述的一种大麻茎尖组织培养快速繁殖方法，步骤3中的含激素的ms培养基是由大量元素、微量元素、铁盐、有机成份、激素组成，其中所述的大量元素包括1550mg/l的nh4no3、130mg/l的kh2po4、1250mg/l的kno3、370mg/l的cacl2·2h2o、330mg/l的mgso4·7h2o，所述的微量元素包括0.83mg/l的ki、22.3mg/l的mnso4·4h2o、6.2mg/l的h3bo3、8.6mg/l的znso4·7h2o、0.25mg/l的na2moo4·2h2o、0.025mg/l的cuso4·5h2o和0.025mg/l的cocl2·6h2o，所述的铁盐为硫酸亚铁27.8mg/l、乙二胺四乙酸二钠37.3mg/l，所述的有机成份包括93mg/l的肌醇、2.0mg/l的甘氨酸、0.2mg/l的盐酸硫胺素、0.6mg/l的盐酸吡哆醇、0.6mg/l的烟酸，激素为1.0mg/l6-苄氨基腺嘌呤、1.0mg/l激动素。
本实施方式所述的一种大麻茎尖组织培养快速繁殖方法，步骤4中的含激素的ms培养基是由大量元素、微量元素、铁盐、有机成份、激素组成，其中所述的大量元素包括1550mg/l的nh4no3、130mg/l的kh2po4、1250mg/l的kno3、370mg/l的cacl2·2h2o、330mg/l的mgso4·7h2o，所述的微量元素包括0.83mg/l的ki、22.3mg/l的mnso4·4h2o、6.2mg/l的h3bo3、8.6mg/l的znso4·7h2o、0.25mg/l的na2moo4·2h2o、0.025mg/l的cuso4·5h2o和0.025mg/l的cocl2·6h2o，所述的铁盐为硫酸亚铁27.8mg/l、乙二胺四乙酸二钠37.3mg/l，所述的有机成份包括93mg/l的肌醇、2.0mg/l的甘氨酸、0.2mg/l的盐酸硫胺素、0.6mg/l的盐酸吡哆醇、0.6mg/l的烟酸，激素为1.0mg/l6-苄氨基腺嘌呤、1.0mg/l激动素。
表5具体实施方式五生根率、根粗和移栽成活率记录表
本实施方式所述的一种大麻茎尖组织培养快速繁殖方法，图8为具体实施方式五方法制备的大麻生根植株根部照片，从图8中观察根系生长情况，用尺测量十个根的粗度，并记录；所得到的生根植株按照常规方法进行移栽，统计移栽成活率，得到的结果如表5所示：本实施方式生根的植株生根率为85.67±1.53％，根粗为9.67±0.42mm，移栽成活率为86.67％。