本发明属于生物农业技术领域，尤其涉及一株黑牛肝菌菌株及其驯化方法。
背景技术
黑牛肝菌(phlebopusportentosus)，又称暗褐网柄牛肝菌，是一种珍贵的热带兼性菌根食用菌，分布于斯里兰卡、越南、印度尼西亚、泰国、巴西、墨西哥、澳大利亚，新西兰及我国云南、广西和海南等地。黑牛肝菌品质鲜嫩、味道鲜美、营养价值丰富、高蛋白、低脂肪，富含17种人体必需氨基酸及丰富的磷、钾、钙、镁、铁、锌等人体必须的矿质元素，是较好的健康食品并具有很好的药用价值，深受消费者喜爱。
黑牛肝菌是我们认识的牛肝菌类食用菌中极少数发生进化、可以离开宿宿主树进行营腐生生活，用栽培腐生菌的方法在菇房内进行栽培，且获得产量的唯一一种牛肝菌种类。kai-pingji等(2011)报道将黑牛肝菌固体菌种接种土壤基质和菌棒覆土人工栽培黑牛肝菌，但出菇及产量均不稳定。石泉(2014)报道黑牛肝菌人工栽培，以瓶栽模式实现工厂化的周年生产，但菌株的稳定性差，出菇及产量均不稳定，对生产带来极大影响，制约了生产规模的扩大及产业的发展。驯化出适宜工厂化栽培、性能稳定的菌株成为黑牛肝菌规模化栽培急需解决的问题。
总之，现有的黑牛肝菌的栽培技术菌株的稳定性差，出菇及产量不稳定，给对于黑牛肝菌的大规模栽培带来巨大影响，限制了产业化规模。
技术实现要素：
本发明提供一株黑牛肝菌菌株及其驯化方法，以解决现有的黑牛肝菌栽培技术中的缺陷。
为解决上述问题，本发明提供一株黑牛肝菌菌株，所述黑牛肝菌菌株为黑牛肝菌hz14080菌株，保藏编号为：cgmccno.15271。
经过基因组测序及分析，所述黑牛肝菌菌株包含有seqno.1中的基因片段序列。
此外，为解决上述问题，本发明还提供一种黑牛肝菌菌株的驯化方法，包括：
培育低温环境下的基于宿主树的子实体并采集；
通过所述子实体培养母种；
对所述母种进行菌丝培养和覆土，得到覆土菌丝；
将所述覆土菌丝进行低温诱导，得到牛肝菌种菇；
提取所述牛肝菌种菇的组织块，培养形成f1代母种；
对所述f1代母种进行二次诱导培养，得到黑牛肝菌菌株。
优选地，所述“通过所述子实体培养母种”包括：
切取所述子实体的菌柄和菌盖交界处，得到菌肉组织块；
将所述菌肉组织块姐终于培养基，在25-28℃下暗光培养20-30天，得到所述母种。
优选地，所述菌肉组织块为长×宽×厚＝0.5cm×0.5cm×0.3cm的菌肉组织块。
优选地，所述“对所述母种进行菌丝培养和覆土，得到覆土菌丝”包括：
对所述母种进行扩培，得到液体菌种；
将所述液体菌种接种于26-28℃、暗光条件下的第一培养容器中，培养30天；
在所述培养容器中菌丝上覆盖土壤，在27-29℃条件下培养10天，得到进入崔蕾期的所述覆土菌丝。
优选地，所述“将所述覆土菌丝进行低温诱导，得到牛肝菌种菇”，包括：
将所述覆土菌丝接种于第二培养容器中，在24-26℃，暗光条件下，保持24小时；
将培养温度升温至27-28℃，培养2天，得到所述牛肝菌种菇。
优选地，所述“提取所述牛肝菌种菇的组织块，培养形成f1代母种”包括：
选择120-140g的所述牛肝菌种菇，切取菌柄与菌盖交界处的种菇组织块，培养成为f1代母种。
优选地，所述“对所述f1代母种进行二次诱导培养，得到黑牛肝菌菌株”包括：
对所述f1代母种进行菌丝培养和覆土，得到f2代覆土菌丝；
将所述覆土菌丝进行低温诱导，得到f2代牛肝菌母种；
对所述f2代牛肝菌母种重复进行丝培养和覆土及低温诱导5-8次，直至得到达到采收条件的黑牛肝菌菌株。
优选地，所述采收条件为：
出菇率≥98％，子实体均重100-120g。
本发明提供一株黑牛肝菌菌株及其驯化方法。其中，所述黑牛肝菌菌株为黑牛肝菌hz14080菌株，保藏编号为：cgmccno.15271。本发明通过提供一种黑牛肝菌菌株及其栽培方法，使该种黑牛肝菌菌株更加适宜工业化栽培，处理方法简单快速，菌株稳定性强、出菇及产量稳定，从而为黑牛肝菌的大规模工业化栽培创造了便利条件。
具体实施方式
下面结合具体实施例的方式对本发明的技术方案做进一步的详细说明，但并不构成对本发明的任何限制，任何人在本发明权利要求范围内所做的有限次的修改，仍在本发明的权利要求范围之内。
本发明提供一株黑牛肝菌菌株，所述黑牛肝菌菌株为黑牛肝菌hz14080菌株，保藏编号为：cgmccno.15271。
上述，本发明所提供的黑牛肝菌菌株，为黑牛肝菌hz14080菌株，已经于2018年01月12日保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，保藏编号为cgmccno.15271。具体保藏信息如下表：
本发明提供一株黑牛肝菌菌株。本发明通过提供一株黑牛肝菌菌株，使该种黑牛肝菌菌株更加适宜工业化栽培，处理方法简单快速，菌株稳定性强、出菇及产量稳定，从而为黑牛肝菌的大规模工业化栽培创造了便利条件。
优选地，所述黑牛肝菌菌株包含有seqno.1中的基因片段序列。
上述，黑牛肝菌hz14080菌株菌种的鉴定可以包括但不限于使用基因组测序及分析，hz14080菌株与其它菌株和已发表的黑牛肝菌基因组数据进行比较，含有独特基因片段，且这些片段并未在其它菌株出现。hz14080菌株特定基因片段序列参见seqno.1。
此外，为解决上述问题，本发明还提供一种黑牛肝菌菌株的驯化方法，包括：
培育低温环境下的基于宿主树的子实体并采集；
通过所述子实体培养母种；
对所述母种进行菌丝培养和覆土，得到覆土菌丝；
将所述覆土菌丝进行低温诱导，得到牛肝菌种菇；
提取所述牛肝菌种菇的组织块，培养形成f1代母种；
对所述f1代母种进行二次诱导培养，得到黑牛肝菌菌株。
上述，在本实施例中，宿主树可以包括但不限于柚子树、栀子树(栀子花)和咖啡树等。
上述，需要理解的是，子实体(fruitingbody，sporocarp，fructification)是高等真菌的产孢构造，即果实体，由已组织化了的菌丝体组成。在担子菌中又叫担子果，在子囊菌中又叫子囊果。无论是有性生殖还是无性生殖，无论结构简单或复杂，都称其产孢结构为子实体。
上述，以柚子、栀子花、咖啡树为黑牛肝菌宿主树，诱导自然生长的子实体在低温期生长，从而使培育的子实体在低温期生长，使自然子实体具备抗低温特性。
优选地，所述“通过所述子实体培养母种”包括：
切取所述子实体的菌柄和菌盖交界处，得到菌肉组织块；
将所述菌肉组织块姐终于培养基，在25-28℃下暗光培养20-30天，得到所述母种。
上述，在本实施例中，采集低温期生长的子实体，培养母种包括：在得到子实体后，采集其中质量达到100g-250g、成熟度60％--85％、菌管孔口未开、建壮的子实体，切取菌柄与菌盖交界处的菌肉组织块，接种于m1培养基，于25℃-28℃温度，暗光培养20天--30天，菌落长至6-8cm，获得具备抗低温特性的黑牛肝种质，作为母种。
优选地，所述菌肉组织块为长×宽×厚＝0.5cm×0.5cm×0.3cm的菌肉组织块。
优选地，所述“对所述母种进行菌丝培养和覆土，得到覆土菌丝”包括：
对所述母种进行扩培，得到液体菌种；
将所述液体菌种接种于26-28℃、暗光条件下的第一培养容器中，培养30天；
在所述培养容器中菌丝上覆盖土壤，在27-29℃条件下培养10天，得到进入崔蕾期的所述覆土菌丝。
上述，在本实施例中，菌丝培养、覆土包括：将所获得的母种扩培为液体菌种，然后接种栽培瓶，在26℃-28℃温度，于暗光条件下培养菌丝生长，培养30天，菌丝长满栽培瓶基质。在栽培瓶瓶口覆盖一层土壤，并在27℃-29℃暗光培养10天，菌丝长满覆土层，进入崔蕾期，从而得到覆土菌丝。
优选地，所述“将所述覆土菌丝进行低温诱导，得到牛肝菌种菇”，包括：
将所述覆土菌丝接种于第二培养容器中，在24-26℃，暗光条件下，保持24小时；
将培养温度升温至27-28℃，培养2天，得到所述牛肝菌种菇。
上述，本实施例中，低温诱导崔蕾出菇包括：在所述覆土菌丝长满覆土层后，将培养温度降低至24℃-26℃，保持24小时，然后将培养温度回调至27℃--28℃，继续培养2天，土面上大量原基形成，出菇，得到所述牛肝菌种菇，出菇率≥98％，单个子实体重100g-140g。
优选地，所述“提取所述牛肝菌种菇的组织块，培养形成f1代母种”包括：
选择120-140g的所述牛肝菌种菇，切取菌柄与菌盖交界处的种菇组织块，培养成为f1代母种。
上述，本实施例中培养f1代母种包括：牛肝菌种菇中选择重120g--140g、菇形规整、肉质紧实的子实体20个-30个，切取菌柄与菌盖交界处的组织块，培养形成f1代母种。
优选地，所述“对所述f1代母种进行二次诱导培养，得到黑牛肝菌菌株”包括：
对所述f1代母种进行菌丝培养和覆土，得到f2代覆土菌丝；
将所述覆土菌丝进行低温诱导，得到f2代牛肝菌母种；
对所述f2代牛肝菌母种重复进行丝培养和覆土及低温诱导5-8次，直至得到达到采收条件的黑牛肝菌菌株。
优选地，所述采收条件为：
出菇率≥98％，子实体均重100-120g。
上述，在本实施例中，进行重复人工栽培、优选，包括：f1代母种，进行重复的培养方法，包括覆土培养和低温诱导，培养栽培瓶及低温诱导崔蕾出菇，优选获得f2代母种，如此重复5-8次，直至获得出菇率≥98％、单个子实体平均重100g-120g、在2天-3天完成采收、菇形规整、肉质坚实的优良菌种-黑牛肝菌菌株，可用于工厂化栽培。
在本实施例中，菌株14080，为在柚子园进行喷淋、盖膜，并采集于柚子树下的牛肝菌子实体，经分离培养获得的母种。经7次低温诱导、重复优选获得。本实施例所提供的黑牛肝菌菌株应用于工厂化栽培生产，栽培黑牛肝菌出菇率达98％、单个子实体平均重110g，2天-3天完成采收、菇形规整，肉质坚实，品质优良，是目前的主栽菌株。
为了便于理解本发明，下面结合实施例来进一步说明本发明的技术方案。申请人声明，本发明通过上述实施例来说明本发明的详细工艺设备和工艺流程，但本发明并不局限于上述详细工艺设备和工艺流程，即不意味着本发明必须依赖上述详细工艺设备和工艺流程才能实施。所属技术领域的技术人员应该明了，对本发明的任何改进，对本发明产品各原料的等效替换及辅助成分的添加、具体方式的选择等，均落在本发明的保护范围和公开范围之内。
实施例1：
本实施例提供一株黑牛肝菌菌株，通过如下驯化方法制备而成：
s1，培育低温环境下的基于柚子树作为宿主树的子实体并采集；
s2，切取所述子实体的菌柄和菌盖交界处，得到长×宽×厚＝0.5cm×0.5cm×0.3cm的菌肉组织块；
s3，将所述菌肉组织块姐终于培养基，在25℃下暗光培养20天，得到所述母种。
s4，对所述母种进行扩培，得到液体菌种；
s5，将所述液体菌种接种于26℃、暗光条件下的第一培养容器中，培养30天；
s6，在所述培养容器中菌丝上覆盖土壤，在27℃条件下培养10天，得到进入崔蕾期的所述覆土菌丝。
s7，将所述覆土菌丝接种于第二培养容器中，在24℃，暗光条件下，保持24小时；
s8，将培养温度升温至27℃，培养2天，得到所述牛肝菌种菇。
s9，选择120-140g的所述牛肝菌种菇，切取菌柄与菌盖交界处的种菇组织块，培养成为f1代母种。
s10，对所述f1代母种进行菌丝培养和覆土，得到f2代覆土菌丝；
s11，将所述覆土菌丝进行低温诱导，得到f2代牛肝菌母种；
s12，对所述f2代牛肝菌母种重复进行丝培养和覆土及低温诱导5-8次，直至得到达到出菇率≥98％，子实体均重100-120g的采收条件的黑牛肝菌菌株。
实施例1所得到的菌株采集于柚子树下的牛肝菌子实体，经分离培养获得的母种。经7次低温诱导、重复优选获得。在应用于工厂化栽培生产，栽培黑牛肝菌出菇率达98％、单个子实体平均重110g，2天-3天完成采收、菇形规整，肉质坚实，品质优良，是目前的主栽菌株。
实施例2：
本实施例提供一株黑牛肝菌菌株，通过如下驯化方法制备而成：
s1，培育低温环境下的基于栀子树作为宿主树的子实体并采集；
s2，切取所述子实体的菌柄和菌盖交界处，得到长×宽×厚＝0.5cm×0.5cm×0.3cm的菌肉组织块；
s3，将所述菌肉组织块姐终于培养基，在26℃下暗光培养25天，得到所述母种。
s4，对所述母种进行扩培，得到液体菌种；
s5，将所述液体菌种接种于27℃、暗光条件下的第一培养容器中，培养30天；
s6，在所述培养容器中菌丝上覆盖土壤，在28℃条件下培养10天，得到进入崔蕾期的所述覆土菌丝。
s7，将所述覆土菌丝接种于第二培养容器中，在25℃，暗光条件下，保持24小时；
s8，将培养温度升温至27.5℃，培养2天，得到所述牛肝菌种菇。
s9，选择120-140g的所述牛肝菌种菇，切取菌柄与菌盖交界处的种菇组织块，培养成为f1代母种。
s10，对所述f1代母种进行菌丝培养和覆土，得到f2代覆土菌丝；
s11，将所述覆土菌丝进行低温诱导，得到f2代牛肝菌母种；
s12，对所述f2代牛肝菌母种重复进行丝培养和覆土及低温诱导5-8次，直至得到达到出菇率≥98％，子实体均重100-120g的采收条件的黑牛肝菌菌株。
实施例2所得到的菌株采集于柚子树下的牛肝菌子实体，经分离培养获得的母种。经7次低温诱导、重复优选获得。在应用于工厂化栽培生产，栽培黑牛肝菌出菇率达97.7％、单个子实体平均重100g，2天-3天完成采收、菇形规整，肉质坚实，品质优良。
实施例3：
本实施例提供一株黑牛肝菌菌株，通过如下驯化方法制备而成：
s1，培育低温环境下的基于咖啡树作为宿主树的子实体并采集；
s2，切取所述子实体的菌柄和菌盖交界处，得到长×宽×厚＝0.5cm×0.5cm×0.3cm的菌肉组织块；
s3，将所述菌肉组织块姐终于培养基，在28℃下暗光培养30天，得到所述母种。
s4，对所述母种进行扩培，得到液体菌种；
s5，将所述液体菌种接种于28℃、暗光条件下的第一培养容器中，培养30天；
s6，在所述培养容器中菌丝上覆盖土壤，在29℃条件下培养10天，得到进入崔蕾期的所述覆土菌丝。
s7，将所述覆土菌丝接种于第二培养容器中，在26.8℃，暗光条件下，保持24小时；
s8，将培养温度升温至28℃，培养2天，得到所述牛肝菌种菇。
s9，选择120-140g的所述牛肝菌种菇，切取菌柄与菌盖交界处的种菇组织块，培养成为f1代母种。
s10，对所述f1代母种进行菌丝培养和覆土，得到f2代覆土菌丝；
s11，将所述覆土菌丝进行低温诱导，得到f2代牛肝菌母种；
s12，对所述f2代牛肝菌母种重复进行丝培养和覆土及低温诱导5-8次，直至得到达到出菇率≥98％，子实体均重100-120g的采收条件的黑牛肝菌菌株。
实施例3所得到的菌株采集于柚子树下的牛肝菌子实体，经分离培养获得的母种。经8次低温诱导、重复优选获得。在应用于工厂化栽培生产，栽培黑牛肝菌出菇率达96.9％、单个子实体平均重120g，2天-3天完成采收、菇形规整，肉质坚实。
实施例4：
本实施例提供一株黑牛肝菌菌株，通过如下驯化方法制备而成：
s1，培育低温环境下的基于柚子树作为宿主树的子实体并采集；
s2，切取所述子实体的菌柄和菌盖交界处，得到长×宽×厚＝0.5cm×0.5cm×0.3cm的菌肉组织块；
s3，将所述菌肉组织块姐终于培养基，在28℃下暗光培养30天，得到所述母种。
s4，对所述母种进行扩培，得到液体菌种；
s5，将所述液体菌种接种于26℃、暗光条件下的第一培养容器中，培养30天；
s6，在所述培养容器中菌丝上覆盖土壤，在27℃条件下培养10天，得到进入崔蕾期的所述覆土菌丝。
s7，将所述覆土菌丝接种于第二培养容器中，在25℃，暗光条件下，保持24小时；
s8，将培养温度升温至27.5℃，培养2天，得到所述牛肝菌种菇。
s9，选择120-140g的所述牛肝菌种菇，切取菌柄与菌盖交界处的种菇组织块，培养成为f1代母种。
s10，对所述f1代母种进行菌丝培养和覆土，得到f2代覆土菌丝；
s11，将所述覆土菌丝进行低温诱导，得到f2代牛肝菌母种；
s12，对所述f2代牛肝菌母种重复进行丝培养和覆土及低温诱导5-8次，直至得到达到出菇率≥98％，子实体均重100-120g的采收条件的黑牛肝菌菌株。
实施例4所得到的菌株采集于柚子树下的牛肝菌子实体，经分离培养获得的母种。经7次低温诱导、重复优选获得。在应用于工厂化栽培生产，栽培黑牛肝菌出菇率达98％、单个子实体平均重90-140g，2天-3天完成采收、菇形规整，肉质坚实。
实施例5：
本实施例提供一株黑牛肝菌菌株，通过如下驯化方法制备而成：
s1，培育低温环境下的基于柚子树作为宿主树的子实体并采集；
s2，切取所述子实体的菌柄和菌盖交界处，得到长×宽×厚＝0.5cm×0.5cm×0.3cm的菌肉组织块；
s3，将所述菌肉组织块姐终于培养基，在25.5℃下暗光培养20-30天，得到所述母种。
s4，对所述母种进行扩培，得到液体菌种；
s5，将所述液体菌种接种于26.5℃、暗光条件下的第一培养容器中，培养30天；
s6，在所述培养容器中菌丝上覆盖土壤，在28℃条件下培养10天，得到进入崔蕾期的所述覆土菌丝。
s7，将所述覆土菌丝接种于第二培养容器中，在25.5℃，暗光条件下，保持24小时；
s8，将培养温度升温至28℃，培养2天，得到所述牛肝菌种菇。
s9，选择120-140g的所述牛肝菌种菇，切取菌柄与菌盖交界处的种菇组织块，培养成为f1代母种。
s10，对所述f1代母种进行菌丝培养和覆土，得到f2代覆土菌丝；
s11，将所述覆土菌丝进行低温诱导，得到f2代牛肝菌母种；
s12，对所述f2代牛肝菌母种重复进行丝培养和覆土及低温诱导5-8次，直至得到达到出菇率≥98％，子实体均重100-120g的采收条件的黑牛肝菌菌株。
实施例5所得到的菌株采集于柚子树下的牛肝菌子实体，经分离培养获得的母种。经7次低温诱导、重复优选获得。在应用于工厂化栽培生产，栽培黑牛肝菌出菇率达97.8％、单个子实体平均重190-140g，2天-3天完成采收、菇形规整，肉质坚实。
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