一种日本血吸虫单性虫体快速制备方法与流程

本发明涉及日本血吸虫研究的技术领域，尤其是涉及一种日本血吸虫单性虫体快速制备方法。

背景技术：

日本血吸虫病是一种人和动物都会感染的寄生虫病，流行范围广，对人和家畜均产生严重的危害。虽然我国在日本血吸虫病的防治上已经取得了巨大成就，但是由于中间宿主钉螺难以消灭及日本血吸虫重复感染现象严重，全面控制日本血吸虫病传播的前景仍不容乐观。

在日本血吸虫研究中，常需要获得单一性别的尾蚴、童虫或成虫。常用的制备方法是用单一毛蚴“一对一”感染钉螺，经2个半月的培养后而获得。这种制备方法存在的问题是：钉螺需要2个半月的培养时间，培养时间过长；其次，“一对一”感染钉螺操作复杂。

中国专利cn102177858a公布了一种日本血吸虫阳性钉螺的制备方法，包括以下步骤：将日本血吸虫虫卵孵化的毛蚴与sf9细胞共培养，获得毛蚴发育成的母胞蚴；将母胞蚴显微注射到阴性钉螺体内；继续饲养注射了母胞蚴的钉螺，并通过检测该钉螺是否为阳性，获得日本血吸虫阳性钉螺。培养的阳性钉螺释放的尾蚴，与野生阳性钉螺释放的尾蚴，具有同样的感染性，且具有与日本血吸虫相同的生物学特性。

但是日本血吸虫阳性钉螺并不等同于日本血吸虫虫体，在日本血吸虫相关研究中，常用到单性尾蚴、单性童虫或单性成虫。常规方法制备，需要从单一毛蚴感染钉螺开始，费时费力。

技术实现要素：

本发明的目的就是为了克服上述现有技术存在的缺陷而提供一种日本血吸虫单性虫体快速制备方法。

本发明方法可快速得到单一性别的虫体，节省研究过程的整体时间，可用于日本血吸虫组学研究。

本发明的目的可以通过以下技术方案来实现：

一种日本血吸虫单性虫体快速制备方法，用单个阳性钉螺释放的全部日本血吸虫尾蚴仅感染一只动物，在感染后特定时间，通过筛选动物体内的童虫或成虫性别而得到单一性别的虫体。

进一步地，所述动物包括小鼠或兔子。

进一步地，所述特定时间为至少3周，此时可区分虫体性别。

进一步地，所得单一性别的虫体是多基因型混合群体，便于组学研究，且避免虫体个性差异干扰。

进一步地，所述阳性钉螺可以为市售的标准化日本血吸虫感染的阳性钉螺。

进一步地，所述单个阳性钉螺也可以采用多只日本血吸虫毛蚴感染单一钉螺后的钉螺替代。

进一步地，本发明的方法可以采用多只日本血吸虫毛蚴感染单一钉螺后，用单个钉螺释放的全部日本血吸虫尾蚴仅感染一只动物，在感染后特定时间，通过筛选动物体内的童虫或成虫性别而得到单一性别的虫体。

与现有技术相比，本发明具有以下优点及有益效果：

1、本发明的方法省去了钉螺培养时间过长(2.5月)的培养时间，整个过程可快速获得大量的单一性别虫体，单雌虫或单雄虫。

2、本发明的方法避免了“一对一”感染操作复杂性，而多只日本血吸虫毛蚴感染单一钉螺“多对一”感染操作方便。

3、本发明方法所得单一性别的虫体是多基因型混合群体，便于组学研究，且避免虫体个性差异干扰，不足之处是混合虫体中不同基因型比例不能控制，不适用于基因组测序研究。而“一对一”感染组中，虽然也得到单性虫体，但基因型一致。

4、本发明的方法可以用多只毛蚴感染钉螺，不同于以往一对一处理，方便易行。在收日本血吸虫尾蚴时或经尾蚴感染动物后收日本血吸虫童虫或成虫时，进行筛选，即可得到单性虫体。

5、本发明方法是目前研究者获得单性虫体的快速且理想的方法，适用于日本血吸虫病药物及疫苗研究和开发机构、大学、研究所和制药公司使用。

附图说明

图1日本血吸虫性别观察及str基因多态性分析。

a：示单一日本血吸虫毛蚴感染单一钉螺及获得日本血吸虫尾蚴的流程示意，即“一对一”感染；

b：“一对一”感染组中，单一钉螺释放全为雌虫；

b1、b2：str分析显示雌虫间没有差异；b3、b4：str分析显示雌虫间存在差异；

c：“一对一”感染组中，单一钉螺释放全为雄虫；

c1、c2：str分析显示雄虫间没有差异；c3、c4：str分析显示雄虫间存在差异；

d：示多毛蚴感染单一钉螺的生活史，即“多对一”感染；

e：“多对一”感染组中，单一钉螺释放全为雌虫；

e1、e2：str分析显示雌虫间没有差异；e3、e4：str分析显示雌虫间存在差异；

f：“多对一”感染组中，单一钉螺释放全为雄虫；

f1、f2：str分析显示雄虫间没有差异；f3、f4：str分析显示雄虫间存在差异；

g：“多对一”感染组中，单一钉螺释放雌雄并存；

g1、g2：str分析显示虫体间没有明显差异；g3、g4：str分析显示虫体间存在差异。

具体实施方式

下面结合附图和具体实施例对本发明进行详细说明。

实施例1

进行日本血吸虫性别观察及str基因多态性分析

采用单一日本血吸虫毛蚴感染单一钉螺，并获得日本血吸虫尾蚴的流程，即“一对一”感染，示意如图1中a所示，

b表示“一对一”感染组中，单一钉螺释放全为雌虫，b1、b2：str分析显示雌虫间没有差异；b3、b4：str分析显示雌虫间存在差异；

c表示“一对一”感染组中，单一钉螺释放全为雄虫，c1、c2：str分析显示雄虫间没有差异；c3、c4：str分析显示雄虫间存在差异；

日本血吸虫毛蚴“一对一”感染钉螺组，所释放尾蚴只有单一性别，即雄性或雌性。感染了4只钉螺，其中释放雌性尾蚴的为一只，释放雄性尾蚴的为三只，雌雄并存的为0，数据如表1所示。

采用多只日本血吸虫毛蚴感染单一钉螺后，即“多对一”感染，用单个钉螺释放的全部日本血吸虫尾蚴仅感染一只小鼠的过程如图1中d所示，在感染小鼠后3周取虫，此时可区分虫体性别。

e表示“多对一”感染组中，用单个钉螺释放的全部日本血吸虫尾蚴仅感染一只小鼠后，释放全为雌虫；e1、e2：str分析显示雌虫间没有差异；e3、e4：str分析显示雌虫间存在差异；

f表示“多对一”感染组中，用单个钉螺释放的全部日本血吸虫尾蚴仅感染一只小鼠后，释放全为雄虫；f1、f2：str分析显示雄虫间没有差异；f3、f4：str分析显示雄虫间存在差异；

g表示“多对一”感染组中，用单个钉螺释放的全部日本血吸虫尾蚴仅感染一只小鼠后，释放雌雄并存；g1、g2：str分析显示虫体间没有明显差异；g3、g4：str分析显示虫体间存在差异。

在“多对一”感染的43只小鼠所释放虫体的性别可见，17只小鼠体内的虫体为混合性别，19只为全雌性，7只为全雄性，数据见表1。

表1单个钉螺或小鼠所释放尾蚴的性别比例

该实验结果表明，本发明方法可快速获得大量的单一性别虫体，单雌虫或单雄虫。经微卫星分析，群内基因型多样。而“一对一”感染组中，虽然也得到单性虫体，但基因型一致。

以上分析表明，本方法获得单性虫体，快速、省力。而且，所得虫体适宜于组学研究，可有效避免虫体个体差异。

上述的对实施例的描述是为便于该技术领域的普通技术人员能理解和使用发明。熟悉本领域技术的人员显然可以容易地对这些实施例做出各种修改，并把在此说明的一般原理应用到其他实施例中而不必经过创造性的劳动。因此，本发明不限于上述实施例，本领域技术人员根据本发明的揭示，不脱离本发明范畴所做出的改进和修改都应该在本发明的保护范围之内。