本发明涉及农药
技术领域：
，具体涉及一种含有香芹酚的组合物、杀菌剂及其制备方法和应用。
背景技术：
：茄科劳尔氏菌ralstoniasolanacearum引起的植物细菌性青枯病是一种广泛分布于热带、亚热带和某些温带地区的世界性病害，是多种农作物减产的主要原因，特别是对烟草危害更重。由于青枯病菌传播迅速、寄主范围广，防治十分困难，号称“植物癌症”。烟草疫霉phytophthoranicotianae是典型的土传病原菌，现在被认为是最具毁灭性卵菌病害之一，能够侵染超过255种植物，包括严重危害的烟草(nicotianaspp.)、番茄(lycopersicumesculentum)和柑橘(citrusspp.)等，特别是在烟草上引起黑胫病危害尤其严重。由于寄主多样性和生态区域分布广泛，其造成的巨大损失难以估计，是植物病害防治的持续挑战。烟草青枯病的防治主要依赖农用硫酸链霉素，随着我国农用硫酸链霉素停产，生产上亟需替代药剂。现有防治药剂主要为铜制剂，防治效果差，且污染环境。烟草黑胫病防治主要为甲霜灵、烯酰吗啉等化学药剂，易造成农药残留、环境污染和病原菌抗药性等负面效应。由于两种病害在田间常混合发生，生产上缺乏对两种病害均有防治效果的药剂，单一药剂仅对某一种病害有效，导致防治效果差，施药成本高。技术实现要素：本发明的目的在于提供一种含有香芹酚的组合物、杀菌剂及其制备方法和应用。本发明提供的组合物对烟草青枯病和黑胫病均具有良好的防治效果。利用本发明的组合物制备的杀菌剂对烟草青枯病的防效达50％以上，对烟草黑胫病的防效达65％以上。为了实现上述发明目的，本发明提供以下技术方案：本发明提供了一种含有香芹酚的组合物，包括香芹酚和野菊精油，所述香芹酚和野菊精油的体积比为(1～10):(10～1)。优选地，所述香芹酚和野菊精油的体积比为(7～9):(3～2)。本发明还提供了一种包括上述技术方案所述的组合物的杀菌剂，包括以下质量份的原料制备而成：所述组合物15～25份、乳化剂3.5～6.5份、共乳化剂1.5～2.5份、防冻剂2～4份、抗氧化剂0.5～1.5份和水51～87份。优选地，所述乳化剂包括聚醚磷酸酯、酚醚磷酸酯、苯乙基酚聚氧乙烯醚磷酸酯、烷基酚聚氧乙烯醚、壬基酚聚氧乙烯醚磷酸酯和十二烷基苯磺酸钙中的一种或几种。优选地，所述共乳化剂包括正丁醇、正己醇和十三烷醇中的一种或几种。优选地，所述防冻剂包括乙二醇和/或丙三醇。优选地，所述抗氧化剂包括二丁基羟基甲苯。本发明还提供了上述技术方案所述组合物在防治青枯病病害中的应用。本发明还提供了上述技术方案所述组合物在防治黑胫病病害中的应用。本发明还提供了上述技术方案所述杀菌剂在防治青枯病和/或黑胫病病害中的应用。本发明提供了一种含有香芹酚的组合物、杀菌剂及其制备方法和应用。本发明提供的组合物将香芹酚与野菊精油复配具有增效作用，对烟草青枯病和黑胫病均具有良好的防治效果。利用本发明的组合物制备的杀菌剂对烟草青枯病的防效达50％以上，对烟草黑胫病的防效达65％以上，对两种病害具有综合防治的效果。具体实施方式本发明提供了一种含有香芹酚的组合物，包括香芹酚和野菊精油，所述香芹酚和野菊精油的体积比为(1～10):(10～1)，优选为(7～9):(3～2)。本发明对所述香芹酚和野菊精油的来源没有特殊限定，采用常规市售的纯品产品即可。本发明还提供了一种包括上述技术方案所述的组合物的杀菌剂，包括以下质量份的原料制备而成：所述组合物15～25份、乳化剂3.5～6.5份、共乳化剂1.5～2.5份、防冻剂2～4份、抗氧化剂0.5～1.5份和水51～87份。本发明提供的杀菌剂包括质量份为15～25份的组合物，优选为20份。在本发明中，所述组合物对烟草青枯病和黑胫病均具有防治效果。本发明提供的杀菌剂包括质量份为3.5～6.5份的乳化剂，优选为5份。本发明对所述乳化剂的种类没有特殊限定，优选聚醚磷酸酯、酚醚磷酸酯、苯乙基酚聚氧乙烯醚磷酸酯、烷基酚聚氧乙烯醚、壬基酚聚氧乙烯醚磷酸酯和十二烷基苯磺酸钙中的一种或几种。本发明对所述乳化剂的来源没有特殊限定，采用常规市售产品即可。在本发明中，所述乳化剂具有乳化、润湿、分散和粘度调节等的作用。本发明提供的杀菌剂包括质量份为1.5～2.5份的共乳化剂，优选为2份。本发明对所述共乳化剂的种类没有特殊限定，优选正丁醇、正己醇和十三烷醇中的一种或几种。本发明对所述共乳化剂的来源没有特殊限定，采用常规市售产品即可。在本发明中，所述共乳化剂具有调节乳化剂亲水亲油平衡值等作用。本发明提供的杀菌剂包括质量份为2～4份的防冻剂，优选为3份。本发明对所述防冻剂的种类没有特殊限定，优选乙二醇和/或丙三醇。本发明对所述防冻剂的来源没有特殊限定，采用常规市售产品即可。在本发明中，所述防冻剂具有提高作物抗病抗低温和抗冻的作用。本发明提供的杀菌剂包括质量份为0.5～1.5份的抗氧化剂，优选为1份。本发明对所述抗氧化剂的种类没有特殊限定，优选二丁基羟基甲苯。本发明对所述抗氧化剂的来源没有特殊限定，采用常规市售产品即可。在本发明中，所述抗氧化剂具有抗氧化的作用。本发明还提供了上述技术方案所述杀菌剂的制备方法，优选包括：将所述乳化剂、共乳化剂、防冻剂、抗氧化剂和水混合，得到水相；将所述组合物与得到的水相混合，得到杀菌剂。本发明对所述组合物和水相混合的先后顺序没有特殊限定，将组合物加入水相或将水相加入组合物中均可。本发明对所述混合的方式没有特殊限定，优选采用剪切均化的混合方法，所述混合的时间优选为25～35min。本发明还提供了上述技术方案所述组合物在防治青枯病病害中的应用。在本发明中，所述青枯病病害优选为烟草青枯病。本发明还提供了上述技术方案所述组合物在防治黑胫病病害中的应用。在本发明中，所述黑胫病病害优选为烟草黑胫病。本发明还提供了上述技术方案所述杀菌剂在防治青枯病和黑胫病病害中的应用。在本发明中，所述杀菌剂在防治烟草青枯病时，优选使用500倍液灌根，100ml/株，更优选移栽后1个月开始施用，连续施用2～3次，每次间隔7～10d。在本发明中，所述杀菌剂在防治烟草黑胫病时，优选使用500倍液淋茎灌根，100ml/株，更优选田间出现零星病株时开始施用，连续施用2～3次，每次间隔7～10d。下面将结合本发明中的实施例，对本发明中的技术方案进行清楚、完整地描述。显然，所描述的实施例仅仅是本发明一部分实施例，而不是全部的实施例。基于本发明中的实施例，本领域普通技术人员在没有做出创造性劳动前提下所获得的所有其他实施例，都属于本发明保护的范围。实施例1杀菌剂的制备方法：将聚醚磷酸酯5g、正丁醇2g、乙二醇3g、二丁基羟基甲苯1g和水69g混合制成水相，在高速剪切条件下，将水相加入20g含有香芹酚的植物源组合物中，剪切均化30min，得到杀菌剂。其中，组合物中香芹酚的质量为18g，野菊精油的质量为2g；乳化采用常规高速剪切乳化机乳化。实施例2杀菌剂的制备方法：将酚醚磷酸酯5g、十三烷醇2g、丙三醇3g、二丁基羟基甲苯1g和水69g混合制成水相，在高速剪切条件下，将水相加入20g含有香芹酚的植物源组合物中，剪切均化30min，得到杀菌剂。其中，组合物中香芹酚的质量为16g，野菊精油的质量为4g；乳化采用常规高速剪切乳化机乳化。对比例1香芹酚的抑菌活性测定材料与方法1.1供试菌株烟草青枯病病原菌(ralstoniasolanacearum)和烟草黑胫病菌(phytophthoranicotianae)。1.2香芹酚抑制青枯病菌活性最小抑菌浓度(mic)测定。96孔细胞培养板上测定香芹酚对青枯病菌抑菌活性。将在na斜面培养基上活化12h的青枯病菌用无菌水洗下，稀释至菌含量108cfu/ml，将青枯病菌190μl分别加入10μl含终浓度分别为50、100、150、180和200μl/l香芹酚的培养孔中，150r/min，30℃恒温振荡培养24h，最小抑菌浓度定义为青枯病菌不能生长的浓度。抑制中浓度的测定。在96孔细胞培养板上测定香芹酚对青枯病菌抑菌活性。将在na斜面培养基上活化12h的青枯病菌用无菌水洗下，稀释至菌含量约108cfu/ml，分别加入含终浓度分别为10、20、40、60、80、100和120μl/l香芹酚的培养孔中，150r/min，30℃恒温振荡培养24h，在600nm下测定菌液的吸光度值。以不加丁香酚的菌液为对照，每个处理3个重复。计算ec50值。1.3香芹酚抑制黑胫病菌活性采用菌丝生长速率法。香芹酚用dmso(0.5％,v/v)配成不同浓度的常规燕麦培养基(atabout45℃)平板，终浓度为20、25、30、35、40和45μl/l。接种烟草疫霉菌饼(5mm)到含有不同浓度香芹酚的常规燕麦培养基上，28℃培养5d，相同稀释比例的dmso为对照，十字交叉法测定菌落直径，计算菌丝生长抑制率和ec50值。结果与分析2.1香芹酚抑制烟草青枯病菌活性mic测定结果表明，香芹酚高于180μl/l浓度处理下，均未见青枯病菌生长，说明香芹酚对青枯病菌mic为180μl/l。如表1所示，香芹酚对烟草青枯病菌具有良好的抑制效果，毒力方程为y＝1.3483+2.4634x，r2＝0.9922，ec50值为30.667μl/l，95％置信区间为27.3280～33.7432μl/l。表1香芹酚对烟草青枯病菌抑菌效果测定2.2香芹酚抑制烟草黑胫病菌活性如表2所示，香芹酚对烟草黑胫病菌具有良好的抑菌效果，毒力方程为毒力回归方程为y＝8.8829x-8.0402(r2＝0.9862)，ec50＝29.38μl/l。表2香芹酚抑制烟草黑胫病菌测定结果实施例3本发明含有香芹酚的组合物对烟草青枯病病原菌(ralstoniasolanacearum)抑菌活性。材料与方法1.1供试菌株烟草青枯病病原菌(ralstoniasolanacearum)。1.2本发明组合物抑制青枯病菌活性香芹酚与野菊精油以体积比1～10:10～1的比例混合，在96孔细胞培养板上测定不同组合对青枯病菌抑菌活性。将在na斜面培养基上活化12h的青枯病菌用无菌水洗下，稀释至菌含量108cfu/ml，将青枯病菌190μl分别加入10μl含不同浓度的香芹酚和野菊精油复合物的培养孔中，150r/min，30℃恒温振荡培养24h，在600nm下测定菌液的吸光度值。以不加药剂的菌液为对照，每个处理3个重复。计算ec50值，采用孙云沛法计算两种药剂的共毒系数，确定增效配比。2.结果与分析2.1本发明组合物抑制青枯病菌活性由表3结果可以看出，香芹酚与野菊精油体积比为1～10:10～1均具有增效作用，尤其在体积比为9:1～7:3时，增效作用明显，最高共毒系数为199.79。表3香芹酚与野菊精油组合物对烟草青枯病菌的联合毒力测定结果药剂ec50ttiatictc香芹酚(a)29.38100.00野菊精油(b)190.265620.42a:b9:124.517152.0479.95190.18a:b8:231.326204.08102.15199.79a:b7:346.884256.13152.88167.53a:b6:459.297308.17193.36159.38a:b5:572.314360.21235.80152.76a:b4:679.811412.25260.25158.41a:b3:795.243464.30310.57149.50a:b2:8119.114516.34388.41132.94a:b1:9123.285568.38402.01141.38实施例4本发明含有香芹酚的组合物对烟草黑胫病菌(phytophthoranicotianae)。材料与方法1.1供试菌株烟草黑胫病菌(phytophthoranicotianae)。1.2本发明组合物抑制抑制黑胫病菌活性采用菌丝生长速率法。香芹酚与野菊精油以体积比1～10:10～1的比例混合，用dmso(0.5％,v/v)配成不同浓度的常规燕麦培养基(atabout45℃)平板，接种烟草疫霉菌饼(5mm)到含有不同浓度常规燕麦培养基培养基上，28℃培养5d，相同稀释比例的dmso为对照，十字交叉法测定菌落直径，计算菌丝生长抑制率和ec50值。计算ec50值，采用孙云沛法计算两种药剂的共毒系数，确定增效配比。2.结果与分析2.1香芹酚与野菊精油复配抑制黑胫病菌活性由表4结果可以看出，香芹酚与野菊精油体积比为1～10:10～1均具有增效作用，尤其在体积比为9:1～7:3时，增效作用明显，最高共毒系数为199.79。表4香芹酚与野菊精油组合物对烟草黑胫病菌的联合毒力测定结果药剂ec50ttiatictc香芹酚(a)29.38100.00野菊精油(b)48.4531158.00a:b9:120.662106.4970.33151.42a:b8:221.537112.9873.30154.13a:b7:322.056119.4875.07159.15a:b6:426.329125.9789.62140.56a:b5:528.913132.4698.41134.60a:b4:630.824138.95104.91132.44a:b3:732.731145.44111.41130.55a:b2:834.579151.93117.70129.09a:b1:935.057158.43119.32132.77实施例5将实施例1所制备的杀菌剂在福建省南平市烟田进行防治烟草青枯病的药效实验，对照药剂为20％噻菌铜悬浮剂，试验结果见表5。各供试药剂稀释500倍液灌根，每株100ml。试验设三次重复，三行区，每行15株，每个小区45株烟。烟草团棵期(移栽后1个月)施药1次，间隔10天再连续施药2次，共施药3次。如表5所示，实施例1的杀菌剂对烟草青枯病具有一定的防治效果，施药后10天均达到50％以上的防效，与对照药剂20％噻菌铜悬浮剂的防效相当。表5实施例1杀菌剂防治烟草青枯病的田间药效试验结果(福建南平)药剂用量(ml/亩)平均防治效果(％)香芹酚10051.3实施例110055.720％噻菌铜悬浮剂10050.8实施例6将实施例2所制备的杀菌剂在福建省南平市烟田进行防治烟草青枯病的药效实验，对照药剂为20％噻菌铜悬浮剂，试验结果见表6。各供试药剂稀释500倍液灌根，每株100ml。试验设三次重复，三行区，每行15株，每个小区45株烟。烟草团棵期(移栽后1个月)施药1次，间隔10天再连续施药2次，共施药3次。如表6所示，实施例2的杀菌剂对烟草青枯病具有一定的防治效果，施药后10天均达到50％以上的防效，与对照药剂20％噻菌铜悬浮剂的防效相当。表6实施例2杀菌剂防治烟草青枯病的田间药效试验结果(福建南平)药剂用量(ml/亩)平均防治效果(％)香芹酚10051.3实施例210053.220％噻菌铜悬浮剂10050.8实施例7每1kg土壤与2～3g黑胫病菌菌谷混匀装盆，挑选生长一致的烟苗进行移栽，每盆加入50ml配好的实施例1杀菌剂的稀释液(500倍稀释液，用5％dmso稀释溶解)进行灌根处理，每处理3盆，重复3次。以58％甲霜灵锰锌为对照。接种后每第10天，在晴天中午以后以株为单位对各处理黑胫病发病情况进行调查，计算病情指数和相对防治效果。如表7所示，实施例1的杀菌剂对烟草黑胫病具有较好的防治效果，施药后10天均达到70％以上的防效，与对照药剂58％甲霜灵锰锌的防治效果相近。表7实施例1杀菌剂防治烟草黑胫病的盆栽试验结果药剂用量平均防治效果(％)香芹酚500倍液72.3实施例1500倍液78.158％甲霜灵锰锌可湿性粉剂500倍液82.5实施例8每1kg土壤与2～3g黑胫病菌菌谷混匀装盆，挑选生长一致的烟苗进行移栽，每盆加入50ml配好的实施例2杀菌剂的稀释液(500倍稀释液，用5％dmso稀释溶解)进行灌根处理，每处理3盆，重复3次。以58％甲霜灵锰锌为对照。接种后每第10天，在晴天中午以后以株为单位对各处理黑胫病发病情况进行调查，计算病情指数和相对防治效果。如表8所示，实施例2的杀菌剂对烟草黑胫病具有较好的防治效果，施药后10天均达到70％以上的防效，与对照药剂58％甲霜灵锰锌的防治效果相近。表8实施例2杀菌剂防治烟草黑胫病的盆栽试验结果药剂用量平均防治效果(％)香芹酚500倍液72.3实施例2500倍液73.958％甲霜灵锰锌可湿性粉剂500倍液82.5实施例9试验在山东省即墨中国农业科学院烟草研究所烟草黑胫病病圃进行。烟草品种为感病品种小黄金1025，试验共设6个处理(表7)，每个处理设3个重复。每个试验小区45株烟，3行区，每行15株烟，随机区组排列。移栽时施药1次，在田间出现病株时每隔7～10天施药1次，连续施药2次。施药方法为茎基部灌根，每株100ml药液。最后一次施药后10天调查病情指数，病级调查以株为单位，0级：全株无病；1级：茎部病斑不超过茎围的1/3，或1/3以下叶片凋萎；3级：茎部病斑环绕茎围1/3～1/2，或1/3～1/2叶片轻度凋萎，或下部少数叶片出现病斑；5级：茎部病斑超过茎围的1/2，但未全部环绕茎围，或1/2～2/3叶片凋萎；7级：茎部病斑全部环绕茎围，或2/3以上叶片凋萎；9级：病株基本枯死。病情指数＝病情指数＝100×∑(各级病株数×各级代表值)/(调查总株数×9)；相对防治效果(％)＝(对照病情指数—处理病情指数)/对照病情指数×100。结果如表9所示，实施例1的杀菌剂对烟草黑胫病具有较好的防治效果，最后一次施药后10天均达到65％以上的防效，与对照药剂58％甲霜灵锰锌相当。表9实施例1的杀菌剂防治烟草黑胫病的田间试验结果(青岛即墨)药剂用量平均防治效果(％)香芹酚500倍液65.5实施例1500倍液68.358％甲霜灵锰锌可湿性粉剂500倍液70.7实施例10试验在山东省即墨中国农业科学院烟草研究所烟草黑胫病病圃进行。烟草品种为感病品种小黄金1025，试验共设6个处理(表7)，每个处理设3个重复。每个试验小区45株烟，3行区，每行15株烟，随机区组排列。移栽时施药1次，在田间出现病株时每隔7～10天施药1次，连续施药2次。施药方法为茎基部灌根，每株100ml药液。最后一次施药后10天调查病情指数，病级调查以株为单位，0级：全株无病；1级：茎部病斑不超过茎围的1/3，或1/3以下叶片凋萎；3级：茎部病斑环绕茎围1/3～1/2，或1/3～1/2叶片轻度凋萎，或下部少数叶片出现病斑；5级：茎部病斑超过茎围的1/2，但未全部环绕茎围，或1/2～2/3叶片凋萎；7级：茎部病斑全部环绕茎围，或2/3以上叶片凋萎；9级：病株基本枯死。病情指数＝病情指数＝100×∑(各级病株数×各级代表值)/(调查总株数×9)；相对防治效果(％)＝(对照病情指数—处理病情指数)/对照病情指数×100。结果如表10所示，实施例2的杀菌剂对烟草黑胫病具有较好的防治效果，最后一次施药后10天均达到65％以上的防效，与对照药剂58％甲霜灵锰锌相当。表10实施例2杀菌剂防治烟草黑胫病的田间试验结果(青岛即墨)药剂用量平均防治效果(％)香芹酚500倍液65.5实施例2500倍液66.458％甲霜灵锰锌可湿性粉剂500倍液70.7由以上实施例可知，本发明提供的植物源组合物对烟草青枯病和黑胫病均具有良好的防治效果。利用本发明的组合物制备的杀菌剂对烟草青枯病的防效达50％以上，对烟草黑胫病的防效达65％以上。以上所述仅是本发明的优选实施方式，应当指出，对于本
技术领域：
的普通技术人员来说，在不脱离本发明原理的前提下，还可以做出若干改进和润饰，这些改进和润饰也应视为本发明的保护范围。当前第1页12