五倍子提取物用于制备植物源诱抗剂的应用及诱抗剂的制作方法

本发明属于植物及其应用领域，具体涉及五倍子提取物用于制备植物源诱抗剂的应用及诱抗剂。

背景技术：

植物在长期的进化中形成了多种免疫机制。能够诱导植物产生系统抗病性能(也称系统获得性抗性systemicacqqiredresistance,sar)的化学物质称为植物抗病激活剂(elicitor,orplantactivator)。植物中含有的次生代谢物对于保障植物在自然界中的正常生长至关重要。一些次生代谢物除了可以直接地抵御病原物、害虫甚至其他植物的入侵外，还可以参与植物体内免疫信号通路的激活，诱导植物抗病机制的产生，从而增强植物自身的抵抗力。利用植物源天然物质，诱导植物产生具有抗菌或抗病毒的产物来抑制病原物的侵染，从而减轻病害的发生，是一种环保、安全、高效的病虫害防治策略。

目前国内研究较多的免疫诱抗剂典型产品包括天然赤霉素、芸苔素内酯、氨基寡糖素、壳聚糖等。其中，氨基寡糖素登记产品54个，芸苔素内酯登记产品40个，逐步成为农药行业的登记热点。由中国工程院院士宋宝安团队研究的创新产品如毒氟磷、香草缩醛、海岛素，是当前较好的免疫诱抗剂，针对茶树、果树、水稻、中药、烟草等作物抗病、抗逆、增产和改善品质有较好的作用及应用前景。6％寡糖·链蛋白可湿性粉剂(“阿泰灵”)是由中国农业科学院植物保护研究所副所长邱德文研究员团队针自主创新研发并获得正式登记的植物免疫诱抗剂类蛋白质生物农药，能有效提高植物免疫力，控制病害发生，促进植物根系生长，安全环保无残留，增产增收效果显著。目前这些植物诱抗剂已经广泛应用到马铃薯、番茄、大豆、黄瓜、辣椒以及拟南芥菜等多种植物的多个品种防治多种病害，并取得良好防效。诱抗剂通过把焦点从病原物转移到植物本身，在促进植物健壮生长的同时，提高植物抵抗病毒病与其他多种病原体侵害的能力，避免农药使用造成的一系列危害，符合和谐植保的发展策略。植物诱抗剂正成为农药研究、开发中的热点。

五倍子(rhuschinensismill.)为同翅目绵瘿蚜科(pemphigidae)的一些蚜虫雌虫寄生于漆树科(anacardiacene)植物盐肤木(rhuschinensismill.)、青麸杨(rhuspotaniniimaxim.)、红麸扬(rhuspunjabensisvar.sinicarehd.etwils)及同属其他植物的嫩叶或叶柄，刺伤而生成一种囊状聚生物虫瘿，经烘倍干燥后所得。中国五倍子主要产地集中分布于秦岭、大巴山、武当山、巫山、武陵山、峨眉山、大娄山、大凉山等山区和丘陵地带。垂直分布为海拔250～1600米，以500～600米较为集中，资源丰富。商品五倍子有角倍类、肚倍类、倍花类。角倍类五倍子主产于贵州、四川、湖北湖南、云南和广西等地。肚倍类五倍子主产于湖北、陕西和江西等地。五倍子作为一种中药材，在医用领域方面的研究较多，具有抗菌消炎的作用。据报道，五倍子提取物具有抑制金黄色葡萄球菌(staphyloccocusaureus)、大肠杆菌(escherichiacoli.)、白色念珠菌(moniliaalbican)等活性。在农用领域，五倍子提取物对蓝莓灰霉病菌(botrytiscinerea)具有较好的抑制作用；我们首次发现，五倍子提取物可有效诱导植物抗病，在农业上具有进一步开发应用的价值。

技术实现要素：

本发明的目的在于五倍子(rhuschinensismill.)提取物用于制备植物源诱导抗病激活剂的应用(以下简称诱抗剂)及诱抗剂。

为达到上述目的，本发明采取的技术方案包括：

五倍子提取物用于制备植物诱抗剂的应用。

可选的，所述的五倍子提取物为五倍子经有机溶剂浸提后得到的植物提取物浸膏。

可选的，五倍子提取物在所述的植物诱抗剂中的质量百分含量为10％～50％。

可选的，五倍子提取物的制备方法包括：

将五倍子粉碎为粒径为1～5mm的粉末，在室温下以1:10(w/v)的比例加入提取溶剂，提取溶剂为甲醇、乙醇、乙酸乙酯、氯仿和石油醚中的任意一种或两种以上的混合物；室温静置24小时，放入温度为40℃频率为100hz的超声清洗仪中提取60min；过滤后将残渣重复提取2次，合并三次滤液，滤液经减压浓缩后得到植物提取物浸膏。

一种诱抗剂，以五倍子提取物为有效成分，五倍子提取物在所述的诱抗剂中的质量百分含量为10％～50％。

可选的，所述的五倍子提取物为五倍子经有机溶剂浸提后得到的植物提取物浸膏。

可选的，五倍子提取物的制备方法包括：

将五倍子粉碎为粒径为1～5mm的粉末，在室温下以1:10(w/v)的比例加入提取溶剂，提取溶剂为甲醇、乙醇、乙酸乙酯、氯仿和石油醚中的任意一种或两种以上的混合物；室温静置24小时，放入温度为40℃频率为100hz的超声清洗仪中提取60min；过滤后将残渣重复提取2次，合并三次滤液，滤液经减压浓缩后得到植物提取物浸膏。

一种诱抗剂，所述的诱抗剂为五倍子提取物微乳剂，所述的微乳剂由以下原料按重量百分比配制：

五倍子提取物10％～50％，有机溶剂：10％～40％，表面活性剂：5％～25％，防冻剂：4％～8％，抗微生物剂：0.1％～1％，余量为水，原料的重量百分比之和为100％。

一种诱抗剂，所述的诱抗剂为五倍子提取物可溶液剂，所述的可溶液剂由以下原料按重量百分比配制：

五倍子提取物10％～50％，有机溶剂：10％～40％，表面活性剂：5％～30％，防冻剂：1％～5％，余量为乙醇，原料的重量百分比之和为100％。

一种诱抗剂，所述的诱抗剂为五倍子提取物粉剂，所述的粉剂由以下原料按重量百分比配制：

五倍子提取物10％～50％，填料：10％～50％，有机溶剂：10％～30％，分散剂：5％～10％，稳定剂：1％～5％，原料的重量百分比之和为100％。

本发明所制成的五倍子植物源诱抗剂具有以下优点：

五倍子植物抗病激活剂活性显著，可用于预防或减轻多种作物上的烟草花叶病毒(tobaccomosaicvirus,tmv)、猕猴桃溃疡(pseudomonassyringae)及油菜菌核病(sclerotiniasclerotiarum)等多种真菌、细菌和病毒病害；资源丰富、制备方法简单、成本低廉。

附图说明

附图是用来提供对本公开的进一步理解，并且构成说明书的一部分，与下面的具体实施方式一起用于解释本公开，但并不构成对本公开的限制。在附图中：

图1是烟草叶片喷施五倍子提取物诱抗剂后sod的活力变化；

图2是烟草叶片喷施五倍子提取物诱抗剂后pal的活力变化。

具体实施方式

以下结合附图对本公开的具体实施方式进行详细说明。应当理解的是，此处所描述的具体实施方式仅用于说明和解释本公开，并不用于限制本公开。

本发明提到的五倍子(rhuschinensismill.)为同翅目绵瘿蚜科(pemphigidae)的一些蚜虫雌虫寄生于漆树科(anacardiacene)植物盐肤木(rhuschinensismill.)、青麸杨(rhuspotaniniimaxim.)、红麸扬(rhuspunjabensisvar.sinicarehd.etwils)及同属其他植物的嫩叶或叶柄，刺伤而生成一种囊状聚生物虫瘿，经烘倍干燥后所得。中国五倍子主要产地集中分布于秦岭、大巴山、武当山、巫山、武陵山、峨眉山、大娄山、大凉山等山区和丘陵地带。垂直分布为海拔250～1600米，以500～600米较为集中，资源丰富。商品五倍子有角倍类、肚倍类、倍花类。角倍类五倍子主产于贵州、四川、湖北湖南、云南和广西等地。肚倍类五倍子主产于湖北、陕西和江西等地。

本发明的五倍子提取物诱抗剂，是以五倍子提取物为活性物质，加入一定比例助剂进行剂型加工，可以制得环保型制剂微乳剂、可溶液剂或粉剂。经发明人的试验证明，提前使用10％五倍子提取物微乳剂、50％五倍子提取物微乳剂、10％五倍子提取物可溶液剂、50％五倍子提取物可溶液剂、10％五倍子提取物粉剂和50％五倍子提取物粉剂对烟草花叶病毒(tmv)、猕猴桃溃疡(pseudomonassyringae)及油菜菌核病(sclerotiniasclerotiarum)具有良好的预防效果。

五倍子提取物的制备：

将五倍子粉碎为粒径为1～5mm的粉末，在室温下以1:10(w/v)的比例加入提取溶剂，提取溶剂为甲醇、乙醇、乙酸乙酯、氯仿和石油醚中的任意一种或几种。室温静置24小时，放入温度为40℃频率为100hz的超声清洗仪中提取60min。过滤后将残渣重复提取2次，合并三次滤液。滤液经减压浓缩后得到植物提取物浸膏，作为五倍子植物源诱抗剂的有效成分(在本发明中的实施例中选用的提取溶剂为乙醇)。

五倍子提取物用于制备植物诱抗剂的应用。

一种植物源诱抗剂，植物源诱抗剂以五倍子提取物为有效成分，五倍子提取物在所述诱抗剂中的质量百分含量为10％～50％。

一种植物源诱抗剂，植物源诱抗剂为五倍子提取物微乳剂，五倍子提取物可溶液剂和五倍子提取物粉剂，其中：

五倍子提取物微乳剂由以下原料按重量百分比配制：

五倍子提取物10％～50％，有机溶剂：10％～40％，表面活性剂：5％～25％，防冻剂：4％～8％，抗微生物剂：0.1％～1％，余量为水，原料的重量百分比之和为100％；；

五倍子提取物可溶液剂由以下原料按重量百分比配制：

五倍子提取物10％～50％，有机溶剂：10％～40％，表面活性剂：5％～30％，防冻剂：1％～5％，余量为乙醇，原料的重量百分比之和为100％；

五倍子提取物粉剂由以下原料按重量百分比配制：

五倍子提取物10％～50％，填料：10％～50％，有机溶剂：10％～30％，分散剂：5％～10％，稳定剂：1％～5％，原料的重量百分比之和为100％。

本发明的填料为硫酸钠、硫酸铵、凹凸棒土、高岭土、白炭土、陶土和轻质碳酸钙中的一种或两种以上的混合物；

本发明的有机溶剂为甲醇、乙醇、丙酮、乙酸乙酯、异丙醇和n,n～二甲基甲酰胺中的一种或两种以上的混合物；

本发明的表面活性剂为烷基苯磺酸盐类、羧酸盐类、硫酸酯盐类、烷基聚氧乙烯醚类、烷基酚聚氧乙烯醚类、多芳核基聚氧乙烯醚类和吐温中的一种或两种以上的混合物；

本发明的防冻剂为乙二醇、丙三醇、尿素和甘油中的一种；

本发明的抗微生物剂为2～羟基联苯、山梨酸和苯甲酸中的一种。

本发明的分散剂为烷基磺酸盐、烷基酚或脂肪醇环氧乙烷加成物磺酸盐和烷基酚或脂肪醇环氧乙烷加成物的磷酸酯中的一种或两种以上的混合物；

本发明的稳定剂为有机酸、脂肪醇、磷酸二苯酯、烷基磺酸盐、二异丙基磷酸酯和异丙基磷酸酯中的一种或两种以上的混合物；

上述的五倍子提取物微乳剂的制备方法是：

将五倍子提取物、有机溶剂、表面活性剂和抗微生物剂按比例充分溶解混合于混配釜中；将防冻剂和水按比例混合，缓慢加入混配釜中并搅拌溶解均匀；将混配釜中温度调节至50～60℃，搅拌30min，冷却后即得五倍子提取物微乳剂。

上述的五倍子提取物可溶液剂的制备方法是：

将五倍子提取物、有机溶剂、表面活性剂、防冻剂和乙醇按比例混合于混配釜中，以转速60～80r/min充分搅拌30min，搅拌均匀后即得到五倍子提取物可溶性液剂。

上述的五倍子提取物粉剂的制备方法是：

将五倍子提取物溶解于有机溶剂之中；将填料、分散剂和稳定剂按比例均匀混合，过100目筛；将溶解好的五倍子溶液充分均匀喷洒到混合物上，混合均匀后得到五倍子提取物粉剂。

为了更好的理解发明的实质，下面用实施例来详细说明发明的技术内容，但发明并不局限于这些实施例。

实施例1：五倍子提取物诱导烟草抗tmv活性测定

选取心叶烟和普通烟(k326)两个品种进行诱导抗病活性验证。tmv侵染心叶烟可以形成病毒枯斑，侵染普通烟的症状是花叶，不同的症状用不同的方法统计抗病情况。将0.2、1和5mg/ml的五倍子提取物溶液分别喷洒到长势一致的6～7叶期的烟草下部三片叶片。在48h后接种tmv至未喷药的上部叶片。空白对照为清水处理，阳性对照为bth溶液。每株接种2～3个叶片，每个处理包括10株烟草，整个试验重复3次。3d后统计心叶烟枯斑数和普通烟的病情指数，计算抑制率公式如上，计算防治效果公式如下。

病情指数＝∑(病级数×病株数)/(最高病级×各处理总株数)×100

防治效果＝(对照病指—处理病指)/对照病指×100％

结果见表1。

表1：五倍子提取物对tmv的诱导抗病效果

注：数据为平均值±标准误，3种活性之间的显著性差异通过spss软件中duncan多重范围检验(dmrt)，不同的字母表示数据之间在0.05水平上存在显著差异性。

由表1可知，在2个品种的烟草上，在1mg/ml的浓度下，五倍子提取物展示了良好的诱导抵抗tmv的效果，优于对照药剂bth，说明局部使用五倍子提取物可以诱导烟草未施药部位产生抗病性，实现了对tmv的抗性。普通烟的抗病效果略好于心叶烟，可能是由于心叶烟本身就是抗性品种，所以五倍子提取物的诱导抗病性在普通烟上表现的更加明显。结果表明，五倍子提取物1mg/ml和5mg/ml浓度处理的防治效果无显著差异，而0.2mg/ml浓度处理下防治效果较弱，说明了五倍子提取物的防治效果在1mg/ml时可达到较好的防效。从节约资源和减少药害的角度出发，1mg/ml是一个合理的施药浓度。

实施例2：五倍子提取物引起烟草防御酶sod的活性变化

将0.2，1和5mg/ml的五倍子提取物溶液喷洒到叶片后分别在第1,3,5,7,9天取叶片，检测防御酶sod和pal的活性变化。

取烟草叶片0.5g置于预冷的研钵中，加入2.0ml预冷的pbs液(50mmol/l、ph8.8的磷酸缓冲液)在冰浴上研磨成浆，加缓冲液使终体积为5.0ml。于4℃下10,000r/min离心15min，取上清液测定其体积(vt)后作为sod粗提液备用。

2)活性测定：取10ml试管7支，3支为测定管，4支为对照管(3支为最大光还原管，1支为参比管)，按表1分别依次加入各溶液。

表1各试管中试剂加入次序和加入量

反应体系总体积3.0ml混匀后将1支对照管置于暗处，其他各管(另3支对照管作为最大光还原管)于4000lx日光下反应20min(要求各管受光情况一致，反应温度控制在25～35℃，视酶活高低可适当调整反应时间)。反应结束后，用黑色布盖上，终止反应。以不照光的对照管作参比，分别在560nm波长下测定其他各管的吸光度值。酶活性计算：

式中v1为测定时样品用量ml。

sod活性的测定结果见图1。图1说明了不同浓度的五倍子提取物处理烟草后，可以引起烟草体内sod活性的明显增加。其中，在高浓度处理下，sod的活性增加显著。在5mg/ml的五倍子提取物处理下，24小时后sod的活性达到对照组的2.31倍。结果表明五倍子提取物可以激活烟草体内防御酶sod的活性，增加烟草的抗病性。

实施例3：五倍子提取物引起烟草防御酶pal的活性变化

1)酶液提取:取烟草叶片1.25g，加入预冷的5ml酶提取液(0.1mol/lph8.8tris～h2so4缓冲液)和0.5g聚乙烯吡咯烷(pvp)(用以除去酚类物质毒害，防止颜色的干扰)，用研钵或者组织捣碎机匀浆。4层纱布过滤，滤液在4℃低温下10,000r/min离心30min，取上清液测量体积并记录。

2)酶的活性测定:取1ml0.2mol/l苯丙氨酸溶液和2ml0.1mol/ltris～h2so4缓冲液(ph8.8)(对照管不加底物苯丙氨酸，直接取3ml的缓冲液)置试管中，用30℃水浴保温3min。在各只试管中加入0.5ml待测酶液，空白管不加酶液，摇匀后立即在209nm波长下测定起始值，用空白管调零.并精确计时。将各支试管放到30℃水浴保温反应30min，再次测定a209。

3)酶活性计算：以每小时在290nm处光密度增加0.01所需酶量为1单位(u)，以植物鲜重作为单位。

式中δa为前后2次测定的吸光度差值；w为样品鲜重(g)；t为反应时间(30min)。

pal活性的测定结果见图2。图2说明了不同浓度的五倍子提取物处理烟草后，可以引起烟草体内pal活性的明显增加。在处理后48小时之内，酶的活性快速增加；第48小时，酶的活性达到最大值；48小时之后，酶的活性快速降低。其中，在5mg/ml的五倍子提取物处理下，48小时后pal的活性达到对照组的4.88倍。结果表明五倍子提取物可以激活烟草体内防御酶pal的活性，增加烟草的抗病性

实施例4：10％五倍子提取物微乳剂的配制

称取五倍子提取浓缩物1kg，溶解于1kg乙酸乙酯中，再加入1kg十二烷基苯磺酸钙，0.5kg苯乙烯酸聚氧乙烯醚，0.1kg苯甲酸，混配釜在40℃左右温度下以60～80r/min充分搅拌30min；将0.1kg尿素和6.3kg去离子水混合至充分溶解，缓慢加入混配釜中并开始搅拌；将混配釜温度调至50～60℃，搅拌30min，冷却后制得10％五倍子微乳剂10kg。制剂的稳定性、外观等符合商品制剂的要求。

实施例5：50％五倍子提取物微乳剂的配制

称取五倍子提取浓缩物5kg，溶解于3kg乙酸乙酯中，再加入1kg十二烷基苯磺酸钙，0.5kg苯乙烯酸聚氧乙烯醚，0.1kg苯甲酸，混配釜在40℃左右温度下以60～80r/min充分搅拌30min；将0.1kg尿素和0.3kg去离子水混合至充分溶解，缓慢加入混配釜中并开始搅拌；将混配釜温度调至50～70℃，搅拌30min，冷却后制得50％五倍子微乳剂10kg。制剂的稳定性、外观等符合商品制剂的要求。

实施例6：10％五倍子提取物可溶液剂的配制

称取五倍子提取浓缩物1kg，溶解于1kg乙酸乙酯中，再加入0.5kg烷基酚聚氧乙烯醚，1kg十二烷基苯磺酸钙，0.5kg乙二醇，乙醇补齐至10kg，混合均匀后，以搅拌速度60～80r/min充分搅拌30min，搅拌均匀后即可制得10％五倍子可溶液剂10kg。制剂的稳定性、外观等符合商品制剂的要求。

实施例7：50％五倍子提取物可溶液剂的配制

称取五倍子提取浓缩物5kg，溶解于2.5kg乙酸乙酯中，再加入0.5kg烷基酚聚氧乙烯醚，1kg十二烷基苯磺酸钙，0.5kg乙二醇，乙醇补齐至10kg，混合均匀后，以搅拌速度60～80r/min充分搅拌30min，搅拌均匀后即可制得50％五倍子可溶液剂10kg。制剂的稳定性、外观等符合商品制剂的要求。

实施例8：10％五倍子提取物粉剂的配制

称取五倍子提取浓缩物1kg，溶解于2.5kg乙酸乙酯中；将5kg硫酸钠和1.5kg十二烷基苯磺酸钙均匀混合，过100目筛；将溶解好的五倍子溶液充分均匀喷洒到混合物上，混合均匀后即可制得10％五倍子粉剂10kg。制剂的稳定性、外观等符合商品制剂的要求。

实施例9：50％五倍子粉剂的配制

称取五倍子提取浓缩物5kg，溶解于3.5kg乙酸乙酯中；将1kg硫酸钠和0.5kg十二烷基苯磺酸钙均匀混合，过100目筛；将溶解好的五倍子溶液充分均匀喷洒到混合物上，混合均匀后即可制得50％五倍子粉剂10kg。制剂的稳定性、外观等符合商品制剂的要求。

实施例10：五倍子诱抗剂对烟草花叶病毒病的田间防效

小区试验为随机排列，重复3次，小区面积等于60m²，试验地选择要求肥力均匀、作物种植和管理水平一致，各处理间及试验区周围要设保护行。用10％和50％的五倍子诱抗剂100倍和500倍液分别进行叶面常量喷雾，以50％的苯并噻二唑水分散粒剂(bth)5000倍液为对照药剂进行叶面常量喷雾，并设清水对照；所有供试药剂必须进行二次稀释。自普通烟烟苗4～5叶期喷药，后每隔4d喷1次，共3次。最后一次喷药2d后整叶摩擦接种tmv，每株接种3叶，每处理10株，重复三次，接病毒10d后调查各处理病情指数，计算防效。

病害分级标准按照中华人民共和国烟草行业标准—烟草普通花叶病严重度分级调查方法(yc/t39—1996)：

0级：全株无病；

1级：心叶脉明或轻微花叶，或者上部1/3叶片花叶但不变形，植株无明显矮化；

2级：1/3至1/2叶片花叶，或者少数叶片变形；或者主脉变黑，植株矮化正常株高的2/3以上；

3级：1/2至2/3花时，或者变形或主侧脉变黑，植株矮化为正常株高1/2至2/3；

4级：全株叶片花叶，严重畸形或坏死，病株矮化为正常植株高度l/3至1/2。为细化调查结果，在以上严重度的分级基础上，对分级标准进行细化，在1、2级之间增加l+级，在2、3级之间加2+级，在3、4加之间增加3+级，级别记为1.5、2.5、3.5：

1+级：心叶脉明或轻微花叶，或上部1/3叶片花叶至轻微皱缩，植株无明显矮缩化；

2+级：l/3至1/2叶片花叶、叶片变形，或主脉变黑，植株矮化为正常植株的2/3以上；

3+级：1/2至2/3叶片花叶、或变形或主侧脉坏死，或植株矮化为正常株高的1/2。

根据严重度计算病情指数，以防治效果为衡量不同处理的效果。

病情指数＝∑[(感病植株数×严重度分级代表值)/(总调查株数×严重度最高级代表值)]×100

防效％＝((对照平均病情指数-处理平均病情指数)/对照平均病情指数)×100％

结果见表3；

表3：3种五倍子诱抗剂预防烟草病毒病田间小区药效试验

从上表可知，10％和50％的五倍子诱抗剂对烟草花叶病毒具有良好的预防效果，50％五倍子粉剂在稀释500倍下对烟草花叶病毒的抑制率最高达到66.78％，优于对照药剂苯并噻二唑的防效58.86％。

实施例11：五倍子诱抗剂对猕猴桃溃疡的田间防效

小区试验为随机排列，重复3次，小区面积等于60m²，试验地选择要求肥力均匀、作物种植和管理水平一致，各处理间及试验区周围要设保护行。用10％和50％五倍子诱抗剂100倍和500倍液分别进行叶面常量喷雾，以50％的苯并噻二唑水分散粒剂5000倍液为对照药剂进行叶面常量喷雾，并设清水对照；所有供试药剂必须进行二次稀释。猕猴桃树新梢冒出后挑选大小一致新叶喷药，后每隔4d喷1次，共3次。最后一次喷药2d后石英砂摩擦损伤后喷洒菌悬液，每处理10叶，重复三次，接菌10d后调查病斑抑制率和病斑扩展抑制率，计算防效。

抑制率(％)＝(对照枯斑数-处理枯斑数)/对照枯斑数×100

病斑扩展抑制率(％)＝(对照病斑面积-处理病斑面积)/对照病斑面积×100

结果见表4；

表4：五倍子诱抗剂对猕猴桃溃疡的田间防效

从上表可知，五倍子诱抗剂对猕猴桃溃疡具有良好的预防效果。50％五倍子微乳剂在稀释500倍的情况下对病斑的抑制率最高达到51.70％，病斑扩展抑制率达到46.43％，优于对照药剂苯并噻二唑的抑制率51.09％和病斑扩展抑制率43.98％。

实施例12：五倍子诱抗剂对油菜菌核病的田间防效

油菜品种为秦油10号。小区试验为随机排列，重复3次，小区面积等于60m²，试验地选择要求肥力均匀、作物种植和管理水平一致，各处理间及试验区周围要设保护行。用10％和50％五倍子诱抗剂100倍和500倍液分别进行叶面常量喷雾，以50％的苯并噻二唑水分散粒剂5000倍液为对照药剂进行叶面常量喷雾，并设清水对照；所有供试药剂必须进行二次稀释。将油菜菌核病菌接种于pda平板中，25℃培养3d用于病菌接种。在油菜幼苗6～8叶期，选择晴天，采用工农16型手动喷雾器进行茎叶面喷雾,施药间隔7d，喷施2次，用液量为10kg/60m²。最后一次喷药2d后接种油菜菌核病菌。病菌具体接种方法如下：将直径6cm的油菜菌核病菌菌饼20℃进行保湿培养，将菌丝面朝下接种于叶片中间叶脉基部，喷洒苯并噻二唑和清水并接种病菌菌丝块的植株为对照。每处理10株，1个菌丝块1叶，3个叶片1株，共30个接种点，试验重复3次，接菌5d后调查发病情况，计算防效。

叶部病害严重度分级标准：

0级：无病

1级：轻度发病，病斑面积占主茎表面积的11～30％；

2级：中度发病，病斑面积占全叶面积的31～50％；

3级：高度发病，病斑面积占全叶面积的31～50％；

4级：严重发病，病斑面积占全叶面积的50％以上。

病指及防效计算公式如下:

病情指数＝∑(各级病叶数×相应级数)/(调查总株数×4)×100；

防效＝(1-药剂处理病指)/空白对照病指×100％。

表5：五倍子诱抗剂对油菜菌核病的田间防效

从上表5可知，五倍子诱抗剂对油菜菌核病具有良好的预防效果，50％五倍子微乳剂在稀释500倍的浓度下防效最高可达63.91％，优于对照药剂苯并噻二唑防效60.82％。

虽然，上文中已经用一般性说明及具体实施方案对本发明作了详尽的描述，但在本发明基础上，可以对之作一些修改或改进，这对本领域技术人员而言是显而易见的。因此，在不偏离本发明精神的基础上所做的这些修改或改进，均属于本发明要求保护的范围。

以上结合附图详细描述了本公开的优选实施方式，但是，本公开并不限于上述实施方式中的具体细节，在本公开的技术构思范围内，可以对本公开的技术方案进行多种简单变型，这些简单变型均属于本公开的保护范围。

另外需要说明的是，在上述具体实施方式中所描述的各个具体技术特征，在不矛盾的情况下，可以通过任何合适的方式进行组合，为了避免不必要的重复，本公开对各种可能的组合方式不再另行说明。

此外，本公开的各种不同的实施方式之间也可以进行任意组合，只要其不违背本公开的思想，其同样应当视为本公开所公开的内容。