1.本发明涉及一种菌类生产技术，尤其是人工蛹虫草及制备方法。
背景技术：
2.蛹虫草，又称北冬虫夏草、北虫草，是昆虫的蛹感染虫草菌后形成的虫与真菌复合体，与天然冬虫夏草有相似的医疗和保健功效。目前市场上蛹虫草的生产技术少见。
技术实现要素：
3.本发明的目的是提供一种新型的人工蛹虫草及制备方法。它弥补了目前蛹虫草生产技术的空档，其制备方法包括以下流程：菌种制备
→
培养基配制
→
装瓶
→
灭菌
→
冷却
→
接种
→
发菌管理
→
转色管理
→
出草管理
→
采收
→
加工；第一条 菌种制备1.1 母种制作人工虫草母种制作的工艺流程为：培养基制备
→
人工虫草种源的选择和采集
→
组织分离（孢子分离）
→
提纯培养
→
母种。制备方法如下：1.1.1培养基配方：马铃薯150—250克，葡萄糖15-25克，磷酸二氢钾1-5克，硫酸镁1-2克，琼脂15-25克，vb1:4片，水800-1200毫升。
4.1.1.2 制备方法：（1）称量：按配方中各种物质的比例，准确称取各种物质。
5.（2）提取汁液：制作时要将这些物质放入水中煮沸，之后用文火维持15-20分钟；然后用纱布过滤，留下汁液。过滤后补足所失水分至800-1200毫升。
6.（3）溶入其它物质：在滤液中加入琼脂，加热使琼脂溶化，在溶化过程中要不断搅拌，待完全溶化后，加入其它营养物质使之溶解。
7.（4）分装：将制备好的培养基趁热分装试管；分装时，装入量以试管高度的1/5-1/4为宜；分装时不要使培养基粘在管口上，以免引起污染。
8.（5）塞棉塞和包捆培养基分装后，试管口塞上棉塞；塞好棉塞后，每7支试管扎成一捆，外面包一层牛皮纸扎紧。
9.（6）灭菌：母种培养基灭菌一般采取高压灭菌，持续25-35分钟；灭菌时将试管培养基竖直放在广口瓶或铁框中，再装入高压锅内进行灭菌，25-35分钟后自然冷却。
10.（7）冷却与摆斜面：灭菌后通过自然降压使压力归零时，便可打开高压锅，取出试管，趁热摆成斜面；斜面长度为试管的1/2-2/3；凝固后就是斜面培养基。
11.1.1.3菌种分离组织分离：（1）将经过表面消毒和无菌清洗后的蛹虫草子座在无菌条件下，切取一小块组织
0.1-0.2厘米的小段，用无菌接种针取组织块接在培养基中心位置。
12.（2）将已接种的培养基至于22℃，黑暗条件下培养。
13.（3）15天左右，当新菌丝延伸在培养基上时，选择无污染且生长健壮的菌丝保存于冰箱内，备用。
14.1.2 液体菌种的制作1.2.1 培养基配方：葡萄糖30克，蛋白胨20克，磷酸二氢钾0.5克，食盐2.5克，水1000毫升。
15.1.2.2 装瓶：将配置好的液体培养基分别装入广口瓶中，每瓶3500-4500毫升，管瓶内滴入几滴食用油，起到消泡作用，用聚丙烯薄膜封口并扎紧，进行灭菌。
16.1.2.3 灭菌：将装好液体培养基的广口瓶放进高压锅内进行灭菌35-45分钟。
17.1.2.4 接种：将灭菌后的培养基及母种和接种工具放在超净工作台上或接种箱内，然后对接种室、超净工作台或接种箱进行消毒；接种时，按无菌操作将母种接入液体培养基中，一瓶培养基内接入1-2块蛹虫草母种；每块母种大小为2乘以2厘米，即4平方厘米。
18.1.2.5 培养：在接种后放在黑暗环境下，静止培养2-3天，让菌丝恢复生长，后适当进行通氧进行震动培养；震动培养2-3天液体菌种制作完毕；制作完成的液体菌种保存在冰箱内，冰箱温度保持在2-5℃，以备使用，尽量在10-20天内使用完。
19.第二条 培养基准备与装瓶2.1 蚕蛹培养基蚕蛹的选择一定要选择优质蚕蛹，选择标准是无杂质，无霉变，无虫蛀，无异味，颜色正常，大小均匀，长2-4厘米，粗8-10毫米。鲜蚕蛹经过风干处理。
20.2.2 装瓶：装瓶量为400-600毫升广口瓶中，每瓶约装25-35克蚕蛹，瓶口包扎聚丙烯薄膜。
[0021] 扎扣的方法是：用橡皮筋在瓶口处扎两道，确保瓶口扎紧。
[0022]
第三条 灭菌和接种3.1 灭菌：高压0.15兆帕保持1小时或常压100℃保持10小时；灭菌时将锅内水分加足，瓶子紧凑摆放，自然降压后出锅。
[0023]
灭菌后将料瓶直接放入接种室内冷却，冷却至常温即可。
[0024]
3.2 接种：3.2.1消毒：接种室（箱）要进行彻底消毒，用甲醛消毒，用量为每立方米空间用10毫升甲醛，5克高锰酸钾，之后关上门窗闷30分钟，同时打开紫外线灯照射消毒；使用时需要再次进行消毒，首先将已灭菌并冷却的培养基、接种工具、酒精灯、酒精棉球、打火机等放入接种室（箱）内，接种室开启紫外线灯照射消毒30分钟。
[0025]
3.2.2液体菌种处理：震荡培养的液体菌种，可直接用来接种；但对于菌球浓度较大（菌球浓度大于50%），菌种栽培生产用量又多的情况下，需要对液体菌种加水进行稀释；使菌球浓度达到50%左右可适用于生产接种。
[0026]
3.2.3接种：在无菌状态下将液体菌种直接接入固体培养基内；用喷洒的方式直接注射在固体
培养基表面。
[0027]
接种的操作过程在接种室（箱）内进行，接种后搬入培养室；接种后瓶子直立放置在黑暗的环境中培养，使菌丝萌发，定植后再上架培养；否则，菌液或营养液及培养基会倒向一侧，导致出草不齐；培养室在使用前要进行消毒灭菌，通风后使用。
[0028]
第四条 发菌期管理当菌丝萌发后便可摆上培养架进入发菌期管理；发菌期极易被杂菌污染，因此必须采取封闭培养。
[0029]
4．1温度：菌丝体培养温度，最低不能低于17℃，最高不能高于24℃；最好做到恒温培养。
[0030]
4.2 湿度：发菌期要求保持空气相对湿度为65%-70%，可适当在室内地面喷水或空气中喷雾来加湿。
[0031]
4.3 通风：菌丝生长阶段要对车间进行适当通风。
[0032]
如果培养室内用火炉加温，要注意及时排出煤气，即一氧化碳；因为一氧化碳对菌丝的生长有一定的抑制作用。
[0033]
4.4 光照：本阶段应避光培养。
[0034]
4.5 日常管理：4.5.1检查菌瓶：要经常检查菌瓶，发现菌丝生长缓慢，要及时查找原因，以便采取适当措施加以补救，有污染的要进行处理，使损失降到最低点。
[0035]
4.5.2恒温培养：菌丝培养阶段最好做到恒温培养，切忌温度忽高忽低。
[0036]
约15天左右即可转入下一阶段管理。
[0037]
第五条 转色期管理5.1 通风：室内要求每天通风一次，每次35-45分钟，保持空气清新。
[0038]
5.2 湿度：控制在75%左右。
[0039]
5.3 光照：每天需要12-14小时的散射光照射。
[0040]
5.4 温度：出草期温度控制在20℃-25℃之间。
[0041]
第六条 出草期管理6.1 温度：原基，即培养基表面长出的原型凸起，出现前温度控制在18℃-22℃；原基出现后可适当升高温度，温度不超过28℃。
[0042]
6.2 通风：原基出现后开始通风，室内要求每天通风一次，每次30-60分钟，保持空气清新；随着子实体分化和生长，增加室内通风换气时间至每天两到三次。
[0043]
6.3 湿度：保持空气相对湿度在80%-90%。
[0044]
6.4 光照：白天自然散射光照射12小时左右。
[0045]
通常按照上述管理条件，经过10-20天左右，子实体高度可达到7厘米以上，子座上部出现橘红色小点，即子囊壳时即可采收。
[0046]
第七条 采收管理7.1 采收时机当子座高达7至9厘米左右，上部有黄色突起物出现，以及顶端长出许多小刺，整个子座呈橘红色并且不再生长时，表明已经成熟，这时就可以采收了。
[0047]
采收过早，营养积累没有达到最高点，影响产量；采收过晚，子囊孢子已开始散发，
会消耗营养而降低有效成分。
[0048]
7.2 采收方法采收时，用无菌镊子将蛹虫草整体采下，然后将采收的虫草整齐的放在一起，最好直接放在洁净的烘干筛子上，以便及时烘干或晾干。
[0049]
注意：千万不要在太阳光下暴晒，以防子实体褪色。
[0050]
7.3 干制加工真空冷冻干燥是利用速冻并在真空环境下，使产品中的水分直接由固体冰升华成水蒸气，而被真空泵抽走的原理进行干燥，复水后基本能恢复到干燥前的状态。
[0051]
经过干制的人工虫草子座其重量为鲜重的1/6，颜色要比鲜品深些，呈橘黄色。
[0052]
第八条 包装及储藏8.1 包装要求（1）包装材料要具有良好的抗压性、防潮性和密封性；包装箱内应采取必要的防潮措施，以防潮气侵入。
[0053]
（2）包装材料应符合卫生要求，不得导致虫草的变性、变质、变色、变味。
[0054]
（3）包装袋上应注明虫草登记、数量、加工日期及“防潮、防雨”的标志。
[0055]
8.2 包装方法短时间内储存一般用聚乙烯或聚丙烯塑料薄膜制成小袋，装袋后封口，然后每10袋装成一个纸盒。
[0056]
需要储存时间较长时，可用涂料玻璃纸袋和复合薄膜包装袋；符合薄膜袋中的铝箔具有不透光、不透氧、不透湿的特点，使人工虫草干品在缺氧条件下保存，进一步提高储藏效果。
[0057]
8.3 储藏（1）低温储藏在低温条件下，生物酶的活性降低，病原菌的活动受到抑制，因此，人工虫草应在低温下保存，在0℃-4℃冷藏条件下保存，既可延长保藏期又可防止陈化。
[0058]
（2）通风储藏保存在空气流动性好的通风储藏库里或置于通风阴凉处，保持相对较小的空气湿度，能延长储藏时限；可在密闭的储藏容器内，放入一些干燥除湿剂，可防止霉变的发生。
具体实施方式
[0059]
本发明的制备方法包括以下流程：菌种制备
→
培养基配制
→
装瓶
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灭菌
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冷却
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接种
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发菌管理
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转色管理
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出草管理
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采收
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加工；第一条 菌种制备1.1 母种制作人工虫草母种制作的工艺流程为：培养基制备
→
人工虫草种源的选择和采集
→
组织分离（孢子分离）
→
提纯培养
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母种。制备方法如下：1.1.1培养基配方：马铃薯150—250克，葡萄糖15-25克，磷酸二氢钾1-5克，硫酸镁1-2克，琼脂15-25克，vb1:4片，水800-1200毫升。
[0060]
1.1.2 制备方法：（1）称量：按配方中各种物质的比例，准确称取各种物质。
[0061]
（2）提取汁液：制作时要将这些物质放入水中煮沸，之后用文火维持15-20分钟；然后用纱布过滤，留下汁液。过滤后补足所失水分至800-1200毫升。
[0062]
（3）溶入其它物质：在滤液中加入琼脂，加热使琼脂溶化，在溶化过程中要不断搅拌，待完全溶化后，加入其它营养物质使之溶解。
[0063]
（4）分装：将制备好的培养基趁热分装试管；分装时，装入量以试管高度的1/5-1/4为宜；分装时不要使培养基粘在管口上，以免引起污染。
[0064]
（5）塞棉塞和包捆培养基分装后，试管口塞上棉塞；塞好棉塞后，每7支试管扎成一捆，外面包一层牛皮纸扎紧。
[0065]
（6）灭菌：母种培养基灭菌一般采取高压灭菌，持续25-35分钟；灭菌时将试管培养基竖直放在广口瓶或铁框中，再装入高压锅内进行灭菌，25-35分钟后自然冷却。
[0066]
（7）冷却与摆斜面：灭菌后通过自然降压使压力归零时，便可打开高压锅，取出试管，趁热摆成斜面；斜面长度为试管的1/2-2/3；凝固后就是斜面培养基。
[0067]
1.1.3菌种分离组织分离：（1）将经过表面消毒和无菌清洗后的蛹虫草子座在无菌条件下，切取一小块组织0.1-0.2厘米的小段，用无菌接种针取组织块接在培养基中心位置。
[0068]
（2）将已接种的培养基至于22℃，黑暗条件下培养。
[0069]
（3）15天左右，当新菌丝延伸在培养基上时，选择无污染且生长健壮的菌丝保存于冰箱内，备用。
[0070]
1.2 液体菌种的制作1.2.1 培养基配方：葡萄糖30克，蛋白胨20克，磷酸二氢钾0.5克，食盐2.5克，水1000毫升。
[0071]
1.2.2 装瓶：将配置好的液体培养基分别装入广口瓶中，每瓶3500-4500毫升，管瓶内滴入几滴食用油，起到消泡作用，用聚丙烯薄膜封口并扎紧，进行灭菌。
[0072]
1.2.3 灭菌：将装好液体培养基的广口瓶放进高压锅内进行灭菌35-45分钟。
[0073]
1.2.4 接种：将灭菌后的培养基及母种和接种工具放在超净工作台上或接种箱内，然后对接种室、超净工作台或接种箱进行消毒；接种时，按无菌操作将母种接入液体培养基中，一瓶培养基内接入1-2块蛹虫草母种；每块母种大小为2乘以2厘米，即4平方厘米。
[0074]
1.2.5 培养：在接种后放在黑暗环境下，静止培养2-3天，让菌丝恢复生长，后适当进行通氧进行震动培养；震动培养2-3天液体菌种制作完毕；制作完成的液体菌种保存在冰箱内，冰箱温度保持在2-5℃，以备使用，尽量在10-20天内使用完。
[0075]
第二条 培养基准备与装瓶2.1 蚕蛹培养基蚕蛹的选择一定要选择优质蚕蛹，选择标准是无杂质，无霉变，无虫蛀，无异味，颜色正常，大小均匀，长2-4厘米，粗8-10毫米。鲜蚕蛹经过风干处理。
[0076]
2.2 装瓶：装瓶量为400-600毫升广口瓶中，每瓶约装25-35克蚕蛹，瓶口包扎聚丙
烯薄膜。
[0077] 扎扣的方法是：用橡皮筋在瓶口处扎两道，确保瓶口扎紧。
[0078]
第三条 灭菌和接种3.1 灭菌：高压0.15兆帕保持1小时或常压100℃保持10小时；灭菌时将锅内水分加足，瓶子紧凑摆放，自然降压后出锅。
[0079]
灭菌后将料瓶直接放入接种室内冷却，冷却至常温即可。
[0080]
3.2 接种：3.2.1消毒：接种室（箱）要进行彻底消毒，用甲醛消毒，用量为每立方米空间用10毫升甲醛，5克高锰酸钾，之后关上门窗闷30分钟，同时打开紫外线灯照射消毒；使用时需要再次进行消毒，首先将已灭菌并冷却的培养基、接种工具、酒精灯、酒精棉球、打火机等放入接种室（箱）内，接种室开启紫外线灯照射消毒30分钟。
[0081]
3.2.2液体菌种处理：震荡培养的液体菌种，可直接用来接种；但对于菌球浓度较大（菌球浓度大于50%），菌种栽培生产用量又多的情况下，需要对液体菌种加水进行稀释；使菌球浓度达到50%左右可适用于生产接种。
[0082]
3.2.3接种：在无菌状态下将液体菌种直接接入固体培养基内；用喷洒的方式直接注射在固体培养基表面。
[0083]
接种的操作过程在接种室（箱）内进行，接种后搬入培养室；接种后瓶子直立放置在黑暗的环境中培养，使菌丝萌发，定植后再上架培养；否则，菌液或营养液及培养基会倒向一侧，导致出草不齐；培养室在使用前要进行消毒灭菌，通风后使用。
[0084]
第四条 发菌期管理当菌丝萌发后便可摆上培养架进入发菌期管理；发菌期极易被杂菌污染，因此必须采取封闭培养。
[0085]
4．1温度：菌丝体培养温度，最低不能低于17℃，最高不能高于24℃；最好做到恒温培养。
[0086]
4.2 湿度：发菌期要求保持空气相对湿度为65%-70%，可适当在室内地面喷水或空气中喷雾来加湿。
[0087]
4.3 通风：菌丝生长阶段要对车间进行适当通风。
[0088]
如果培养室内用火炉加温，要注意及时排出煤气，即一氧化碳；因为一氧化碳对菌丝的生长有一定的抑制作用。
[0089]
4.4 光照：本阶段应避光培养。
[0090]
4.5 日常管理：4.5.1检查菌瓶：要经常检查菌瓶，发现菌丝生长缓慢，要及时查找原因，以便采取适当措施加以补救，有污染的要进行处理，使损失降到最低点。
[0091]
4.5.2恒温培养：菌丝培养阶段最好做到恒温培养，切忌温度忽高忽低。
[0092]
约15天左右即可转入下一阶段管理。
[0093]
第五条 转色期管理
5.1 通风：室内要求每天通风一次，每次35-45分钟，保持空气清新。
[0094]
5.2 湿度：控制在75%左右。
[0095]
5.3 光照：每天需要12-14小时的散射光照射。
[0096]
5.4 温度：出草期温度控制在20℃-25℃之间。
[0097]
第六条 出草期管理6.1 温度：原基，即培养基表面长出的原型凸起，出现前温度控制在18℃-22℃；原基出现后可适当升高温度，温度不超过28℃。
[0098]
6.2 通风：原基出现后开始通风，室内要求每天通风一次，每次30-60分钟，保持空气清新；随着子实体分化和生长，增加室内通风换气时间至每天两到三次。
[0099]
6.3 湿度：保持空气相对湿度在80%-90%。
[0100]
6.4 光照：白天自然散射光照射12小时左右。
[0101]
通常按照上述管理条件，经过10-20天左右，子实体高度可达到7厘米以上，子座上部出现橘红色小点，即子囊壳时即可采收。
[0102]
第七条 采收管理7.1 采收时机当子座高达7至9厘米左右，上部有黄色突起物出现，以及顶端长出许多小刺，整个子座呈橘红色并且不再生长时，表明已经成熟，这时就可以采收了。
[0103]
采收过早，营养积累没有达到最高点，影响产量；采收过晚，子囊孢子已开始散发，会消耗营养而降低有效成分。
[0104]
7.2 采收方法采收时，用无菌镊子将蛹虫草整体采下，然后将采收的虫草整齐的放在一起，最好直接放在洁净的烘干筛子上，以便及时烘干或晾干。
[0105]
注意：千万不要在太阳光下暴晒，以防子实体褪色。
[0106]
7.3 干制加工真空冷冻干燥是利用速冻并在真空环境下，使产品中的水分直接由固体冰升华成水蒸气，而被真空泵抽走的原理进行干燥，复水后基本能恢复到干燥前的状态。
[0107]
经过干制的人工虫草子座其重量为鲜重的1/6，颜色要比鲜品深些，呈橘黄色。
[0108]
第八条 包装及储藏8.1 包装要求（1）包装材料要具有良好的抗压性、防潮性和密封性；包装箱内应采取必要的防潮措施，以防潮气侵入。
[0109]
（2）包装材料应符合卫生要求，不得导致虫草的变性、变质、变色、变味。
[0110]
（3）包装袋上应注明虫草登记、数量、加工日期及“防潮、防雨”的标志。
[0111]
8.2 包装方法短时间内储存一般用聚乙烯或聚丙烯塑料薄膜制成小袋，装袋后封口，然后每10袋装成一个纸盒。
[0112]
需要储存时间较长时，可用涂料玻璃纸袋和复合薄膜包装袋；符合薄膜袋中的铝箔具有不透光、不透氧、不透湿的特点，使人工虫草干品在缺氧条件下保存，进一步提高储藏效果。
[0113]
8.3 储藏（1）低温储藏在低温条件下，生物酶的活性降低，病原菌的活动受到抑制，因此，人工虫草应在低温下保存，在0℃-4℃冷藏条件下保存，既可延长保藏期又可防止陈化。
[0114]
（2）通风储藏保存在空气流动性好的通风储藏库里或置于通风阴凉处，保持相对较小的空气湿度，能延长储藏时限；可在密闭的储藏容器内，放入一些干燥除湿剂，可防止霉变的发生。