一种灵芝融合培养方法
【技术领域】
[0001]本发明涉及食用菌的培养技术领域，具体地说涉及一种灵芝融合培养方法。
【背景技术】
[0002]灵芝为担子菌纲多孔菌科灵芝属真菌，其子实体则是进行深加工的主要原料之一。现在众多研究已经证实灵芝具有调节免疫、抗氧化、抗缺氧、抗放射、抗化疗、抗心肌缺血作用和抗衰老作用以及镇静作用、强心、调节血脂作用、降血糖、平喘、保肝等作用，广泛应用于临床对各种疾病的治疗之中。
[0003]目前，灵芝的栽培以人工栽培为主，将椴木装袋加套海绵双套环在高压或常压下灭菌，冷却后打开海绵上套环，在无菌环境下将菌种接在椴木上，发菌70?80天，然后将菌段上的塑料薄膜去掉，把菌段埋在地沟中，再覆土 2?3cm，15-20天长出原基，空气湿度80 %?90 %，培养45?50天，长出菌盖，空气湿度保持在85 %?95 %，菌盖变红，待灵芝开始释放孢子粉时，套上纸袋，收集灵芝孢子粉，待孢子粉收集完后再采摘灵芝。该方法在栽培过程中采收灵芝孢子粉再采摘灵芝，由于孢子粉释放大量灵芝营养成分，使得灵芝子实体营养成分明显降低。
【发明内容】
[0004]本发明的目的在于提供一种灵芝融合培养方法，以克服现有技术的栽培过程中灵芝同时产生孢子粉，灵芝营养成分降低的缺陷。
[0005]为了实现上述目的，本发明的技术方案是:
[0006]一种灵芝融合培养方法，包括如下步骤:
[0007](I)制作试管培养基:将PDA培养基或改良PDA培养基用分装器装入试管中，装量为试管长的1/5，塞上棉塞。置灭菌锅中，在0.15MPa(l.5kg/cm2)压力下灭菌15min，将试管趁热排放在斜面板上自然冷却；
[0008](2)制作母种:在无菌条件下切取灵芝菌蕾其内部菌柄尖端处直径2mm?3mm的组织块，接种到试管培养基上，在26°C?28°C条件下培养25d?35d，至菌丝长满斜面即进行菌丝纯化，制成母种；
[0009](3)扩制母种:在无菌条件下将母种以1:6进行转管，置26°C?28°C环境中培养，菌丝满管后，作扩制母种；
[0010](4)制作原种:
[0011]Al、制取培养基料:取木屑、麸皮、石膏、棉籽壳中的几种营养质成分配制成培基料；
[0012]B1、装料灭菌:
[0013]将培养基料装入原种瓶中，至瓶4/5处，上紧下松，料面压平压实，用生活饮用水洗净瓶身和瓶口，擦干瓶口后，用棉塞封口并包扎牛皮纸，进行灭菌处理；
[0014]Cl、接种:冷却至28°C以下，在无菌条件下接种，每支试管的扩制母种接5瓶?6瓶；
[0015]Dl:培养:将接种的原种瓶放置到培养室中培养39d?42d至菌丝长满瓶，制成原种；培养室内温度控制在26°C?28°C之间，空气相对湿度65%?70% ;
[0016](5)制作栽培种:
[0017]A2、制取培养基料:取木屑、麸皮、石膏、棉籽壳中的几种营养质成分配制成培基料；
[0018]B2、装料灭菌:将培养基料装入栽培种袋中，至袋3/5处，上紧下松，料面压平压实，用清水洗净袋身和袋口，擦干袋口后，套好颈圈用棉塞封口并包扎牛皮纸，进行灭菌处理；
[0019]C2、接种:冷却至28°C以下，在无菌条件下接种，每瓶原种接45袋?50袋；
[0020]D2:培养:将接种的栽培种袋放置到培养室中培养39d?42d至菌丝长满袋，制成栽培种；培养室内温度控制在26°C?28°C之间，空气相对湿度65%?70% ;
[0021](6)栽培:
[0022](F)菌椴制作:将椴木枝条截段捆扎放入栽培袋中，进行灭菌处理；
[0023](G)接种发菌:将经过灭菌处理的栽培袋移入经消毒处理的接种室，将栽培种接入栽培袋中接种培养2?3个月，至椴木外表面全部发满菌丝体；所述培养室温度控制在22°C?28°C之间，空气湿度控制在65?70%之间，光照控制在200?300勒克斯之间，二氧化碳浓度低于1%。;
[0024](H)覆土出芝:将发满菌丝体的椴木脱袋放置到大棚中的垄沟中，上面覆土 2cm?3cm,培养45?50天，得到子实体；大棚温度控制在25°C?28°C之间，空气湿度控制在80?95%之间，光照控制在2000-4000勒克斯之间，二氧化碳浓度低于1%。；
[0025](I)融接:取栽培种菌块，破碎，用保鲜薄膜包好成型，培养5?7天得到菌丝体，备用;
[0026]待子实体长至高为12cm?15cm时，将子实体顶端细嫩处切去，取菌丝体菌块2?3cm接种到子实体上，用塑料薄膜覆盖5?7天，待子实体与菌丝体全部融合，去掉塑料薄膜，空气湿度保持在85 %?95 %，再长40?50天，至灵芝菌盖直径达到15cm?20cm，菌盖厚度达到5cm?8cm，菌丝体全部覆盖整个子实体，孢子粉的营养成分全部留在子实体中，再培养30天左右，待菌盖变红，成熟即可采收；
[0027](7)烘干包装。
[0028]作为对上述技术方案的改进，所述PDA培养基，用马铃薯200克去皮切片，置容器内加水100mL,煮沸15min后过滤，加入17克?20克琼脂，补水至100mL,继续加热溶解；待琼脂溶解后，加入葡萄糖20克搅拌均匀后制成。
[0029]作为对上述技术方案的改进，所述改良PDA培养基，用马铃薯200克去皮切片，置容器内加水100mL,煮沸15min后过滤，加入17克?20克琼脂、3克KH2P04、1.5克MgS04.7H20，补水至100mL,继续加热溶解；待琼脂溶解后，加入20克葡萄糖搅拌均匀后制成。
[0030]作为对上述技术方案的改进，所述的培养基料由69?72重量份数的木屑、25?30重量份数的麸皮、3重量份数的石膏混合，按料水比1:1.1加入水后制成，调pH值为5?5.5o
[0031]作为对上述技术方案的改进，所述的培养基料由78重量份数的棉籽壳、21重量份数的木屑、I重量份数的麸皮混合，按料水比1:1.1加入水后制成，调pH值为5?5.5。
[0032]作为对上述技术方案的改进，所述灭菌处理，是指常压灭菌或高压灭菌处理；
[0033]所述常压灭菌在灭菌锅中进行，温度为100°C，保持6h?8h，停止加热，待温度降到70?80°C时出锅；
[0034]所述高压灭菌在高压锅中进行，加热升温至高压锅中压力为0.12?0.15Mpa，保持2?3h，然后停止加热，焖6?8h。
[0035]本发明的有益效果在于:与现有技术相比，用本发明的方法在培养灵芝过程中，不会产生孢子粉，能够有效的保证灵芝营养成分。
【具体实施方式】
[0036]下面结合具体的实施例对本发明作进一步地详细说明，但应当说明的是本发明的实施方式不限于此。
[0037]实施例1:
[0038](I)用马铃薯200克去皮切片，置容器内加水100mL,煮沸15min后过滤，加入17克?20克琼脂，补水至100mL,继续加热溶解；待琼脂溶解后，加入葡萄糖20克搅拌均匀后制成PDA培养基；
[0039]将PDA培养基用分装器装入试管中，装量为试管长的1/5，塞上棉塞。置灭菌锅中，在0.15MPa(l.5kg/cm2)压力下灭菌15min，将试管趁热排放在斜面板上自然冷却；
[0040](2)制作母种:在无菌条件下切取灵芝菌蕾其内部菌柄尖端处直径2_?3_的组织块，接种到试管培养基上，在26°C?28°C条件下培养25d?35d，至菌丝长满斜面即进行菌丝纯化，制成母种；
[0041](3)扩制母种:在无菌条件下将母种以1:6进行转管，置26°C?28°C环境中培养，菌丝满管后，作扩制母种；
[0042](4)制作原种:
[0043]Al、制取培养基料:取69?72重量份数的木屑、25?30重量份数的麸皮、3重量份数的石膏混合，按料水比1:1.1加入水，调pH值为5?5.5制成培养基料；
[0044]B1、装料灭菌:将培养基料装入原种瓶中，至瓶4/5处，上紧下松，料面压平压实，用生活饮用水洗净瓶身和瓶口，擦干瓶口后，用棉塞封口并包扎牛皮纸，进行灭菌处理；
[0045]Cl、接种:冷却至28°C以下，在无菌条件下接种，每支试管的扩制母种接5瓶?6瓶；
[0046]Dl:培养:将接种的原种瓶放置到培养室中培养39d?42d至菌丝长满瓶，制成原种；培养室内温度控制在26°C?28°C之间，空气相对湿度65%?70% ;
[0047](5)制作栽培种:
[0048]A2、取培养基料:取69?72重量份数的木屑、25?30重量份数的麸皮、3重量份数的石膏混合，按料水比1:1.1加入水，调pH值为5?5.5制成培养基料；
[0049]B2、装料灭菌:将培养基料装入栽培种袋中，至袋3/5处，上紧下松，
[0050]料面压平压实，用清水洗净袋身和袋口，擦干袋口后，套好颈圈用棉塞封口并包扎牛皮纸，进行灭菌处理
[0051]C2、接种:冷却至28°C以下，在无菌条件下接种，每瓶原种接45袋?50袋；
[0052]D2:培养:将接种的栽培种袋放置到培养室中培养39d?42d至菌丝长满袋，制成栽培种；培养室内温度控制在26°C?28°C之间，空气相对湿度65%?70% ;
[0053](6)栽培:
[0054](F)菌椴制作:将椴木枝条截段捆扎放入栽培袋中，进行灭菌处理；
[0055](G)接种发菌:将经过灭菌处理的栽培袋移入经消毒处理的接种室，将栽培种接入栽培袋中接种培养2?3个月，至椴木外表面全部发满菌丝体；所述培养室温度控制在22°C?28°C之间，空气湿度控制在65?70%之间，光照控制在200?300勒克斯之间，二氧化碳浓度低于1%。;
[0056](H)覆土出芝:将发满菌丝体的椴木脱袋放置到大棚中的垄沟中，上面覆土 2cm?3cm,培养45?50天，得到子实体；大棚温度控制在25°C?28°C之间，空气湿度控制在80?95%之间，光照控制在2000-4000勒克斯之间，二氧化碳浓度低于1%。；
[0057](I)融接:取栽培种菌块，破碎，用保鲜薄膜包好成型，培养5?7天得到菌丝体，备用;
[0058]待子实体长至高为12cm?15cm时，将子实体顶端细嫩处切去，取菌丝