一种金龟子绿僵菌菌株在制备杀蚜虫的药剂中的应用
【技术领域】
[0001] 本发明涉及一种金龟子绿僵菌菌株的新应用，具体涉及一种杀闽虫金龟子绿僵菌 制剂及其应用，属于生物农药领域。
【背景技术】
[0002] 菜闽是重要的蔬菜害虫，除直接取食危害外，还是多种植物病毒的主要传播媒介， 后者的危害常超过直接吸食。其中我国主要菜闽包括桃闽和萝h闽是广食性害虫，寄主主 要有梨、桃、李、梅、禮桃等醫薇科果树和白菜、甘蓝、萝K芥菜、芸苔、宪菁、甜椒、辣椒、玻 菜等多种作物。萝h闽可为害白菜、菜也、萝K芥蓝、青花菜、臺菜等十字花科蔬菜，常与桃 闽混合发生。目前，主要施用广谱性化学农药控制闽虫，不仅直接影响人体健康和水产养殖 业的安全，而且由于闽虫产生抗药性和化学农药大量杀伤闽虫天敌，破坏生态平衡，严重削 弱田间自然控制能力，容易导致闽虫的再猎獵、难W控制。采用安全的微生物制剂替代化学 农药成为闽虫控制的重要发展方向。
[0003] 昆虫病原真菌是最重要的杀虫微生物类群，具有安全、持续控制和昆虫不易产生 抗药性的优点。绿僵菌（Metarhizium)是最早用于防治害虫的昆虫病原真菌之一，能感染 全世界约有200多种昆虫。利用绿僵菌来防治害虫的研究与实践已愈百年，目前已分离筛 选到多个侵染闽虫的菌株，一些菌株制剂被登记用于控制闽虫，但未能大量广泛用。主要原 因是缺乏高毒力杀虫真菌菌株和相应制剂。
[0004] 金龟子绿僵菌CQMa421是一株从自然感染的稻纵卷叶頓僵虫上分离筛选出的一 株生产性状好、对稻纵卷叶頓具有高毒力杀虫真菌，已在中国专利CN102212483中公开，该 菌株于2011年02月25日在中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中也（CGMCC)保 藏，保藏编号；CGMCC N0.4609。该菌株及其制剂对闽虫的毒力与防治效果未见报道。可 湿性粉剂是一种最基本的农药剂型，可制成息浊液，进行喷雾。杀虫真菌可湿性粉剂是由 真菌抱子粉中加入一定量的表面活性剂和填充料，通过过筛制成。由于真菌抱子活性受润 湿剂的影响，制剂中往往减少表面活性剂的用量，导致湿润分散效果差，同时产品胆存期仍 较短，防效受紫外影响大。因此，筛选驯化高毒力菌株和研制湿润分散特性良好、防效稳定 的真菌杀虫剂可湿性粉剂，提高其其胆存稳定性，可促进闽虫的生物控制，减少化学农药用 量。
[0005]
【发明内容】
[0006] 本发明的第一目的在于提供一种金龟子绿僵菌菌株在杀闽虫中的应用。
[0007] 本发明第二目的在于提供一种金龟子绿僵菌制剂，该制剂耐紫外照射、保存期长、 防效好。
[0008] 本发明第H目的在于提供一种增强金龟子绿僵菌毒力的方法，该方法不影响其产 抱和耐热特性。
[0009] 本发明目的是通过如下技术方案实现的： 金龟子绿僵菌CQMa421菌株在制备预防或防治闽虫的药剂中的应用。
[0010] 优选地，金龟子绿僵菌CQMa421菌株在制备预防或防治桃闽或萝h闽的药剂中的 应用。该菌株对桃闽和萝h闽具有侵染作用，致死率可分别达到71. 5%和70. 8%。
[0011] 不同的绿僵菌菌株具有侵染不同虫害，如公开报道；金龟子绿僵菌FI-1045菌株 能侵染甘藏嘛曠（Anoplo地ora gl油ripennis)，金龟子绿僵菌A ESALQ818菌株能侵染埃 及斑蚊（Aedes aegypti)，金龟子绿僵菌EAMb 09/01-Su菌株能侵染地中海果实禍，金龟子 绿僵菌PD化526菌株能侵染萝h闽（Lipaphis erysimi)，金龟子绿僵菌M2菌株能侵染螺 旋粉風（Aleurodi州S dispersus Russell),金龟子绿僵菌ICIPE-30菌株能侵染冈比亚按 蚊（anopheles gambiae)，金龟子绿僵菌ESC 1菌株能侵染白蚁，金龟子绿僵菌ATCC62176 能侵染甜菜根姐（sugarbeet root maggot),金龟子绿僵菌M105菌株能侵染幢虫，金龟子 绿僵菌广谱菌株F-52能侵染嘛曠（Anoplo地ora gl油ripennis)、核桃象甲、光滑足距小蠢 (Xylosan化US germanus),金龟子绿僵菌广谱菌株549能侵染烟草天蛾（Manduca sexta)、 埃及斑蚊（Aedes aegypti)，罗伯茨绿僵菌广谱菌株ARSEF 23能侵染幢虫、鱗翅目幼虫、甲 虫等。
[0012] 优选地，上述防治闽虫的药剂由绿僵菌CQMa421干抱子粉35-52%、娃藻± 40-50%、 纳米氧化铅1-2%、駿甲基纤维素轴3-5%、0P-10 2-4%和肥心40 2-4%组成，均W重量百分 比。
[0013] 一种金龟子绿僵菌制剂，其特征在于：它是由娃藻± 40-50%、纳米氧化铅1-2%、駿 甲基纤维素轴3-5%、0P-10 2-4%、肥心40 2-4%和绿僵菌CQMa421干抱子粉35-52%组成， 均W重量百分比。
[0014] 上述各组分均为本领域明确的组分，0P-10为烷基酷聚氧己帰離，肥心40为氨化 當麻油与环氧己焼缩合物，绿僵菌CQMa421在中国专利CN102212483中公开、该菌株于2011 年02月25日在中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中也（CGMCC)保藏、保藏编号： CGMCC NO. 4609 ;纳米氧化铅为粒径为纳米级的氧化铅。
[0015] 上述0P-10和肥心40优选纯度>95%的0P-10和肥心40 ;上述駿甲基纤维素轴 (CMC)优选纯度大于95% ;上述娃藻±优选为白色至浅褐色疏松粉末，纯度大于85%，含水量 小于1% ;上述纳米氧化铅优选为粒径小于40nm。上述绿僵菌CQMa421干抱子粉为纯抱子 粉，含抱量> 150亿抱子/克，含水量《5% 上均W质量百分含量计。
[0016] 上述金龟子绿僵菌制剂中纳米氧化铅能够附着在真菌抱子表面，有效阻隔了制剂 中高浓度（2-4wt%)0P-10和肥心40的不良影响，有效保证了抱子的生物活性。
[0017] 进一步优选地，本发明金龟子绿僵菌制剂，其特征在于：它是由娃藻± 40-45%、纳 米氧化铅1. 3-1. 7%、駿甲基纤维素轴3-5%、0P-10 2-4%、肥心40 2-4%和绿僵菌CQMa421 干抱子粉40-50%组成，均W重量百分比。
[0018] 上述绿僵菌CQMa421干抱子粉优选采用强毒力金龟子绿僵菌CQMa421抱子粉，所 述强毒力金龟子绿僵菌CQMa421抱子粉由W下方法得到；在28C、湿度50-70%环境中，将 金龟子绿僵菌CQMa421接种于桃闽幼虫后饲养，将最先感病死亡的桃闽幼虫放入28C培养 箱中保湿培养3-5天，使其昆虫表面生长出新鲜抱子；收集新鲜抱子，再接种萝h闽幼虫， 同上获得昆虫表面生长出的新鲜抱子，如上所述循环接种桃闽和萝h闽15次得到驯化后 的金龟子绿僵菌CQMa421新鲜抱子；在无菌条件下，用接种环挑取驯化后新鲜抱子在含有 100微克/毫升氨予青霉素的1/4SDA培养基平板上划线；将划线好的培养皿翻转放置于 28C恒温箱中培养；3- 4日后挑选长出的典型而无杂菌的菌落，在菌落边缘用移菌针挑取 带有菌丝的培养基一小块，转入试管斜面培养基中央，28C恒温培养10-15天得到强毒力 的金龟子绿僵菌CQMa421母种，将CQMa421菌株母种接种在1/4SDA平板上，28°C培养15天， 收集成熟分生抱子制得绿僵菌CQMa421干抱子粉。
[0019] 上述金龟子绿僵菌制剂的制备方法，是先将绿僵菌CQMa421干抱子粉和纳米氧化 铅在混合机中混匀，再依次加入娃藻±、駿甲基纤维素轴、0P-10 2-4%和肥心40 2-4%，边 加入边揽拌，直至各组分完全混合均匀制得。
[0020] -种增强金龟子绿僵菌毒力的方法，其特征在于庙28C、湿度50-70%环境中，将 金龟子绿僵菌CQMa421接种于桃闽幼虫后饲养，选择最先感病死亡的桃闽幼虫，放入28C 培养箱中保湿培养3-5天，使其昆虫表面生长出新鲜抱子；收集新鲜抱子，再接种萝h闽幼 虫，同上获得昆虫表面生长出的新鲜抱子，如上所述循环接种15次得到驯化后的金龟子绿 僵菌CQMa421新鲜抱子。在无菌条件下，用接种环挑取驯化后新鲜抱子在含有100微克/ 毫升氨予青霉素的1/4SDA培养基平板上划线，将划线好的培养皿翻转放置于28C恒温箱 中培养；3 - 4日后挑选长出的典型而无杂菌的菌落，在菌落边缘用移菌针挑取带有菌丝的 培养基一小块，转入试管斜面培养基中央，28C恒温培养10-15天得到强毒力的金龟子绿 僵菌CQMa421母种。<