加入3000g 95wt%的乙醇溶液，进行渗漉法提取；
[0101] (2)渗漉提取24h，过滤，取滤液；
[0102] (3)低温减压浓缩除去溶剂，置换成辛酸癸酸甘油酯，定容至200g;
[0103] (4)在-10°C陈化12h，分层后过滤，取上清液，即得天然防腐剂提取物（抗菌中药 组合物）。
[0104] 实施例5抑菌试验
[0105]1试验菌株
[0106] 金黄色葡萄球菌（ATCC8739)，大肠杆菌（ATCC6538)，绿脓杆菌（ATCC9027)，白 色念珠球菌（ATCC10231)，黑曲霉菌（ATCC16404)。
[0107] 2培养基
[0108]TSB固体培养基：蛋白胨10g/L，NaCl10g/L，K2HP04 2. 5g/L，酵母提取物3g/L，琼 脂15g/L，采用蒸馏水溶解，调节pH值为7. 2±0. 2,在115°C高压灭菌20min;TSB液体培养 基：蛋白胨l〇g/L，NaCl10g/L，K2HP04 2. 5g/L，酵母提取物3g/L，采用蒸馏水溶解，调节pH 值为7. 2±0. 2,在115°C高压灭菌20min;
[0109] SDB固体培养基：蛋白胨10g/L，葡萄糖20g/L，K2HP04 3g/L，酵母提取物5g/L，琼 脂15g/L，采用蒸馏水溶解，在115°C高压灭菌20min;SDB液体培养基：蛋白胨10g/L，葡萄 糖20g/L，K2HP04 3g/L，酵母提取物5g/L，采用蒸馏水溶解，在115°C高压灭菌20min。
[0110] 3菌悬液制备及接种
[0111] 取甘油保藏的金黄色葡萄球菌、大肠杆菌、绿脓杆菌1〇〇yL涂布于TSB固体培养 基上，在37°C培养2d，用生理盐水重悬，得到菌悬液，并用平板培养法计数，将测试菌浓度 调整为 105~10 6CFU/mL。
[0112] 取白色念珠球菌和黑曲霉菌100yL涂布于SDB固体培养基上，在30°C培养2d，用 生理盐水重悬，得到菌悬液，并用平板培养法计数，将测试菌浓度调整为1〇5~10 6CFU/mL。
[0113] 4样品抑菌作用的测定
[0114] 4.1杯碟法
[0115] 在培养皿中倒入TSB或SDB固体培养基，待凝固后，在此培养基上均匀涂布测试菌 100yL。在培养基上等距离放2个无菌牛津杯[内径（6. 0±0.l)mm，外径（8. 0±0.l)mm， 高（10. 0±0.l)mm]，在杯内分别注入200yL待测样品，用生理盐水或含50yLDMS0(二甲 基亚砜）的生理盐水作为对照。在37°C或30°C恒温箱中培养2d后，用直尺测量各种药品 的抑菌圈直径，取其平均值。
[0116] 4. 2微孔板法
[0117] 在微孔中加入100yL待测样品（初始浓度），再加入含测试菌浓度为1X105CFU/ mL的2XTSB或2XSDB液体培养基100yL，混匀，即待测样品的测试浓度为初始浓度的 50wt%。在30°C或37°C恒温箱中培养2d后，观察有无菌生长。结果判断的前提是生长对 照良好，空白对照无菌生长清晰。
[0118] 5最低抑菌浓度（MIC值）的测定
[0119] ①最低抑制金黄色葡萄球菌浓度（MIC)、最低抑制大肠杆菌浓度（MIC)、最低抑制 绿脓杆菌浓度（MIC)、最低抑制白色念珠球菌浓度（MIC)的测定方法如下：
[0120] (1)药液制备将待测样品用生理盐水稀释成实验浓度。
[0121] (2)菌液制备用2XTSB或2XSDB液体培养基稀释菌悬液，使其最终菌浓度为 105CFU/mL〇
[0122] (3)培养及结果判读在微孔中加入菌液100yL和药液100yL，同时设不加菌的阴 性对照和不加药液的正常生长对照，每种药做3个平行，取平均值。置于37°C或30°C湿盒 孵育，48h后观察结果，采用直接法读取数据。结果判断的前提是生长对照良好，空白对照无 菌生长清晰，其它孔随药物浓度梯度升高而菌的生长受到抑制。
[0123] ②最低抑制黑曲霉浓度（MIC)测定
[0124] 采用杯碟法，在培养皿中倒入SDB固体培养基，待凝固后，在此培养基上加入 黑曲霉菌（105CFU/mL)100yL，均匀涂布。在培养基上等距离放3个无菌牛津杯[内径 (6. 0±0. 1)_，外径（8. 0±0. 1)_，高（10. 0±0.l)mm]，在杯内分别注入200yL不同浓度 的样品（用生理盐水稀释）。同时设不加测试样品的正常生长对照和生理盐水对照。结果 判断的前提是生长对照和生理盐水对照生长良好，其它随药物浓度梯度升高而菌的生长受 到抑制。
[0125] 本发明与单味中药相比，产品抑菌结果如表1所示，表1为实施例1~4和对比例 1~3的MIC值。
[0126] 表1实施例1~4和对比例1~3的MIC值
[0127]
[0128] 由表1可知，在100yL/mL以内，紫苏子对白色念珠菌无抗菌效果，对绿脓杆菌抗 菌效果较弱，对金黄色葡萄球菌抗菌效果一般；在100yL/mL以内，广藿香对大肠杆菌、绿 脓杆菌和白色念珠菌无抗菌效果；在100yL/mL以内，松萝对大肠杆菌、绿脓杆菌和黑曲霉 无抗菌效果，对金黄色葡萄球菌抗菌效果一般，对白色念珠菌抗菌效果较弱。
[0129] 由此可见，一、本发明通过植物之间的合理配伍，起到广谱抗菌的效果；二、针对每 个菌单独来看，配伍后的组合物的抑菌效果优于单味植物的抗菌效果，实现了 1+1大于2的 结果，体现了植物之间抗菌效果上的协同作用。
[0130] 本发明的组合物配方抑菌功效显著，具有广谱的抗菌功效，其抑菌效果要好于单 味药的效果，克服了单味药对某些菌株的局限性，适合作为天然防腐剂使用。同时，本发明 的三种中药的比例可以最大限度的抑制细菌的增长。另外，本发明的工艺方案保持了组合 物的广谱抑菌功效，并大幅减弱了产品的颜色，产品稳定，适合添加到化妆品中作为防腐剂 使用。
[0131] 实施例6
[0132] 1 配方
[0133]
[0134] 2制备工艺
[0135] (1)取水、甘油和乙二胺四乙酸二钠加入反应釜中，加热至温度为85 °C，搅拌 300rpm/min，慢慢加入AVC，得水相。
[0136] (2)取A-165、C16~18醇、山茶籽油放至反应釜中，加热至温度为85°C，搅拌为 300rpm/min，即得油相。
[0137] (3)将步骤⑵得到的油相加入步骤⑴得到的水相，均质（速度为500rpm/ min) 5min，搅拌、降温至45°C。
[0138] (4)取实施例1所得天然抗菌剂、胶原蛋白和燕麦葡聚糖加至步骤（3)降温后的体 系中，搅拌（速度为500rpm/min)，降至室温，得到化妆品。
[0139] 实施例7
[0140] 1 配方
[0141]
[0142] 2制备工艺
[0143] (1)取水、甘油和乙二胺四乙酸二钠加入反应釜中，加热至温度为85°C，搅拌 300rpm/min，慢慢加入AVC，得水相。
[0144] (2)取A-165、C16~18醇、山茶籽油放至反应釜中，加热至温度为85°C，搅拌为 300rpm/min，即得油相。
[0145] (3)将步骤⑵得到的油相加入步骤⑴得到的水相，均质（速度为500rpm/ min) 5min，搅拌、降温至45°C。
[0146] (4)取实施例2所得天然抗菌剂、胶原蛋白和燕麦葡聚糖加至步骤（3)降温后的体 系中，搅拌（速度为500rpm/min)，降至室温，得到化妆品。
[0147] 实施例8
[0148] 1配方
[0151] 2制备工艺
[0152] (1)取水、甘油和乙二胺四乙酸二钠加入反应釜中，加热至温度为85°C，搅拌 300rpm/min，慢慢加入AVC，得水相。
[0153] (2)取A-165、C16~18醇、山茶籽油放至反应釜中，加热至温度为85°C，搅拌为 300rpm/min，即得油相。
[0154] (3)将步骤⑵得到的油相加入步骤⑴得到的水相，均质（速度为500rpm/ min) 5min，搅拌、降温至45°C。
[0155] (4)取实施例1所得天然抗菌剂、1，2-辛二醇、胶原蛋白和燕麦葡聚糖加至步骤 (3)降温后的体系中，搅拌（速度为500rpm/min)，降至室温，得到化妆品。
[0156] 对比例4
[0157]
[0158] 2制备工艺
[0159] (1)取水、甘油和乙二胺四乙酸二钠加入反应釜中，加热至温度为85°C，搅拌 300rpm/min，慢慢加入AVC，得水相。
[0160] (2)取A-165、C16~18醇、山茶籽油放至反应釜中，加热至温度为85°C，搅拌为 300rpm/min，即得油相。
[0161] (3)将步骤⑵得到的油相加入步骤⑴得到的水相，均质（速度为500rpm/ min) 5min，搅拌、降温至45°C。
[0162] (4)取对比例1所得天然抗菌剂、胶原蛋白和燕麦葡聚糖加至步骤（3)降温后的体 系中，搅拌（速度为500rpm/min)，降至室温，得到化妆品。
[0163] 对比例5
[0164]
[0165] 2制备工艺
[0166] (1)取水、甘油和