乙二胺四乙酸二钠加入反应釜中，加热至温度为85 °C，搅拌 300rpm/min，慢慢加入AVC，得水相。
[0167] (2)取A-165、C16~18醇、山茶籽油放至反应釜中，加热至温度为85°C，搅拌为 300rpm/min，即得油相。
[0168] (3)将步骤⑵得到的油相加入步骤⑴得到的水相，均质（速度为500rpm/ min) 5min，搅拌、降温至45°C。
[0169] (4)取1，2-辛二醇、胶原蛋白和燕麦葡聚糖加至步骤（3)降温后的体系中，搅拌 (速度为500rpm/min)，降至室温，得到化妆品。
[0170] 实施例9
[0173] 2制备工艺
[0174] (1)取水、甘油和乙二胺四乙酸二钠加入反应釜中，加热至温度为85°C，搅拌 300rpm/min，慢慢加入AVC，得水相。
[0175] (2)取A-165、C16~18醇、山茶籽油放至反应釜中，加热至温度为85°C，搅拌为 300rpm/min，即得油相。
[0176] (3)将步骤⑵得到的油相加入步骤⑴得到的水相，均质（速度为500rpm/ min) 5min，搅拌、降温至45°C。
[0177] (4)取实施例4所得天然抗菌剂、胶原蛋白和燕麦葡聚糖加至步骤（3)降温后的体 系中，搅拌（速度为500rpm/min)，降至室温，得到化妆品。
[0178] 实施例10防腐挑战试验
[0179] 1.防腐挑战接种的方式和数量
[0180] 采用混合菌接种。待测样品中接入金黄色葡萄球菌、大肠杆菌和绿脓杆菌至接种 数量为1〇 5~10 6CFU/g或105~10 6CFU/mL;白色念珠球菌和黑曲霉菌接种数量为104CFU/ g或104CFU/mL，各三个平行，以生理盐水作为空白对照。
[0181] 2.防腐挑战分离检测
[0182] 接种后的样品在特定时间分离检测：0小时、48小时、7天、14天、21天和28天。 取样后，根据实验需要，用生理盐水稀释后取100yL涂布于TSB和SDB培养基平板，在 28°C± 1 °C或36°C± 1 °C培养后菌落计数。
[0183] 3?评判标准
[0184] 要求在第7天时，细菌降低99. 9 %，黑曲霉菌和白色念珠球菌各降低90 %，并且在 28天内持续下降，则通过防腐挑战试验。
[0185] 如果混合菌接种的三个平行试验中任何一个微生物数量的平均值，在第7天时下 降到 100CFU/g(CFU/mL)以下，在 28 天内全部降至 0CFU/g(CFU/mL)或< 10CFU/g(CFU/mL)， 那么视为防腐效果优秀。防腐挑战结果参见表2~7,表2~7依次为0小时、48小时、7 天、14天、21天和28天防腐挑战结果。
[0186] 在4个应用的实施例（实施例6~9)及应用的对比例（对比例4和5)样品的防 腐挑战实验中，4个应用的实施例对于金黄色葡萄球菌、大肠杆菌、绿脓杆菌、白色念珠菌和 黑曲霉在第7天时，菌浓度均小于10CFU/g，在第28天时菌浓度仍小于10CFU/g，表明该4 种样品对于金黄色葡萄球菌、大肠杆菌、绿脓杆菌、白色念珠球菌及黑曲霉菌的防腐挑战优 秀。
[0187] 表2 0小时防腐挑战结果
[0188]
[0189] 表3 48小时防腐挑战结果
[0190]
[0194] 表5 14天防腐挑战结果
[0195]
[0197] 表6 21天防腐挑战结果
[0198]
[0199] 表7 28天防腐挑战结果
[0200]
[0201]
[0202] 实施例11多次皮肤刺激性试验
[0203] 1.染毒方法：取普通级新西兰兔16只，分成4组，每组4只，雌雄各半。试验前将 实验动物背部脊柱两侧被毛剪掉，去毛范围左、右各约3cmX3cm。取受试物约0. 5g涂抹在 动物左侧皮肤上，涂抹面积约2. 5cmX2. 5cm，每天涂抹1次，连续涂抹14天，另一侧作空白 对照。从第二天开始，每次涂抹前剪毛，用纯净水清除残留受试物，对照区作同样处理。一 小时后观察结果。
[0204] 2.观察操作：在自然光下观察皮肤反应，按表8(皮肤刺激反应评分标准）给出的 评分标准对皮肤红斑和水肿进行评分，连续观察14天。
[0205] 3.结果判定：按下列公式计算每天每只动物平均积分，进行刺激强度评价。
[0206] 每天每只动物平均积分=(E红斑和水肿/受试动物）/14。
[0207] 表8皮肤刺激反应评分标准
[0208]
[0209]
[0210] 4.每组样品的试验结果分别见表9~12。
[0211] 表9实施例6对新西兰兔多次皮肤刺激性试验结果
[0212]
[0213]
[0214] 表10实施例7对新西兰兔多次皮肤刺激性试验结果
[0215]
[0216]
[0217] 表11实施例8对新西兰兔多次皮肤刺激性试验结果
[0218]
[0219] 表12实施例9对新西兰兔多次皮肤刺激性试验结果
[0220]
[0221]
[0222] 从应用的4个实施例（实施例6~
9)的比较中，可以看出，酶解工艺下制取的天 然抗菌剂，其刺激性远远低于不酶解条件下制取的抗菌剂；说明酶解能够很好地降低抗菌 剂的刺激性。
[0223] 实施例12人体皮肤斑贴试验
[0224] 1.斑试方法：选用合格的斑试器，以封闭式斑贴试验方法，将受试物约0. 020g~ 0.025g涂于斑试器内，外用专用胶带贴敷于受试者前臂曲侧，24小时后去除受试物，于去 除受试物斑试器后30min，待压痕消失后观察皮肤反应，按《化妆品卫生规范》（2007年版） 中皮肤反应分组标准记录其结果。
[0225] 2.结果评价：按表13 (皮肤不良反应分组标准）给出的分组标准记录反应结果， 结果参见表14,表14为实施例6~9样品对人体皮肤斑贴试验结果。
[0226] 表13皮肤不良反应分组标准
[0227]
[0228] 表14实施例6~9样品对人体皮肤斑贴试验结果
[0229]
[0230] 表14各组的人体皮肤斑贴试验结果显示：在实施例6~8中30例受试者皮肤全 部呈阴性反应，而实施例9有5例为可疑反应，仅有微弱红斑（评分等级：0级）。依据《化 妆品卫生规范》(2007年版）人体皮肤斑贴试验判断标准，实施例6~8所得样品对人体无 皮肤不良反应，而实施例9所得样品为可疑反应，进一步说明本发明中酶解的意义。
【主权项】
1. 一种抗菌中药组合物，由包括紫苏子、广藿香和松萝的原料制得。2. 根据权利要求1所述的抗菌中药组合物，其特征在于，以重量份计，所述原料包括 60~80份的紫苏子、10~20份的广藿香和A份的松萝，O < A < 20。3. 根据权利要求2所述的抗菌中药组合物，其特征在于，以重量份计，所述原料包括60 份的紫苏子、20份的广藿香和20份的松萝。4. 根据权利要求2所述的抗菌中药组合物，其特征在于，以重量份计，所述原料包括80 份的紫苏子、10份的广藿香和10份的松萝。5. 根据权利要求2所述的抗菌中药组合物，其特征在于，以重量份计，所述原料包括70 份的紫苏子、15份的广藿香和15份的松萝。6. 权利要求1~5任一项所述的抗菌中药组合物的制备方法，包括以下步骤： 将紫苏子、广藿香和松萝混合后，采用乙醇渗漉法提取，得到抗菌中药组合物。7. 根据权利要求6所述的制备方法，其特征在于，在混合后进行提取前，还包括： 采用脂肪酶进行酶解。8. 根据权利要求6或7所述的制备方法，其特征在于，所述混合具体为： 将紫苏子、广藿香和松萝混合，加水碾磨至60~200目，调节pH值为4~7。9. 根据权利要求8所述的制备方法，其特征在于，所述提取的时间为24h~30h ; 在提取后还包括： 过滤，取滤液； 将所述滤液依次进行浓缩、定容和陈化，得到抗菌中药组合物。10. 权利要求1~5任一项所述的抗菌中药组合物或权利要求6~9任一项所述的制 备方法制得的抗菌中药组合物作为药物、化妆品或食品中防腐剂的用途。
【专利摘要】本发明提供了一种抗菌中药组合物及其制备方法、应用，所述抗菌中药组合物由包括紫苏子、广藿香和松萝的原料制得。本发明通过中药间合理的配伍应用及协同作用，使得提取的组合物具有广谱抗菌的作用，适合作为天然防腐剂使用。实验表明，针对金黄色葡萄球菌、大肠杆菌、绿脓杆菌、白色念珠菌和黑曲霉菌的每个菌单独来看，本发明配伍后的组合物的抑菌效果优于单味植物的抗菌效果，实现了1+1大于2的结果，体现了植物之间抗菌效果上的协同作用。此外，本发明提供的组合物具有气味小、颜色浅、温和、溶解性好、经济、用量小、稳定及适合工业化生产等特点。
【IPC分类】A01P3/00, A61K8/65, A61K8/97, A61K8/92, A01P1/00, A01N65/22, A61K8/73, A61Q19/00
【公开号】CN105076246
【申请号】CN201510540235
【发明人】邓文娟, 刘光荣
【申请人】无限极（中国）有限公司
【公开日】2015年11月25日
【申请日】2015年8月28日