一种田间侵染花生的方法
【技术领域】
[0001] 本发明涉及农业技术领域，尤其涉及一种田间侵染花生的方法。
【背景技术】
[0002] 花生是我国主要的油料作物和经济作物，我国花生单产、总产和出口量均居首位， 花生种植面积占世界种植总面积的19 %，居世界第二位，出口贸易占世界50 %，居世界主 要花生出口国之首，年均总产占世界总产的41%，我国是世界生产、出口花生最多的国家。
[0003] 黄曲霉，半知菌类，一种常见腐生真菌。多见于发霉的粮食、粮制品及其它霉腐的 有机物上。菌落生长较快，结构疏松，表面灰绿色，背面无色或略呈褐色。菌体有许多复杂 的分枝菌丝构成。营养菌丝具有分隔；气生菌丝的一部分形成长而粗糙的分生孢子梗，顶端 产生烧瓶形或近球形顶囊，表面产生许多小梗（一般为双层），小梗上着生成串的表面粗糙 的球形分生孢子。分生孢子梗、顶囊、小梗和分生孢子合成孢子头，可用于产生淀粉酶、蛋白 酶和磷酸二酯酶等，也是酿造工业中的常见菌种。
[0004] 黄曲霉毒素（AFT)是一类化学结构类似的化合物，均为二氢呋喃香豆素的衍生 物。黄曲霉毒素是主要由黄曲霉（aspergillus flavus)寄生曲霉（a. parasiticus)产生 的次生代谢产物，在湿热地区食品和饲料中出现黄曲霉毒素的机率最高。它们存在于土壤、 动植物、各种坚果中，特别是容易污染花生、玉米、稻米、大豆、小麦等粮油产品，是霉菌毒素 中毒性最大、对人类健康危害极为突出的一类霉菌毒素。
[0005] 花生黄曲霉毒素污染是比较复杂的问题，其中收获前干旱或连续阴雨、收获后干 燥时间长和脱壳损伤等是造成近年来黄淮海产区花生黄曲霉毒素污染的主要原因，但最关 键的原因是缺乏高抗乃至免疫黄曲霉侵染和铲毒的花生品种。随着针对黄曲霉毒素的研究 越来越深入，对田间侵染花生过程的研究与掌握是摸清该霉菌侵染的重要依据，据此探索 出一些较好的、比较适用的方法来控制和预防黄曲霉的侵染，据此探索出一些较好的、比较 适用的方法来控制和预防花生种子的黄曲霉侵染。
[0006] 因此，如何研究一种花生种子的高侵染率的田间侵染方法成为了亟待解决的重要 问题。
【发明内容】
[0007] 本发明提供一种花生种子的高侵染率的田间侵染方法，以便于后续探索出一些较 好的、比较适用的方法来控制和预防花生种子的黄曲霉侵染。
[0008] 为了解决上述技术问题，本发明采用的技术方案如下：一种田间侵染花生的方法， 其特征在于，包括如下步骤：
[0009] 1)将黄曲霉菌株进行培养，培养后配成浓度为0. 05-0. 5X 10s个/mL的孢子悬浮 液；
[0010] 2)将干燥健康的花生种子用质量浓度为0. 1 %的高锰酸钾溶液浸泡5-15分钟，浸 泡温度为35-45°C，用蒸馏水冲洗干净后，使种子含水量恢复至15-25% ;
[0011] 3)将花生种子以纵向间隔5-10cm、横向间隔20-30cm在土壤中进行种植；
[0012] 4)将步骤1)中制得的孢子悬浮液按照100-200g/m2喷洒于步骤3)种植的花生种 子上，每日3次，时间为3-15天。
[0013] 进一步地，步骤1)的具体操作为：将核桃粉碎至直径2-4mm的颗粒状，再将黄曲霉 菌株在察氏培养基25-30 °C培养5天后，用无菌水配成质量浓度为0. 05-0. 5 X 10smg/mL的 溶液，按照每lmL黄曲霉菌株溶液喷洒于2g核桃颗粒上的量喷洒于适量的核桃颗粒上，产 生黄曲霉菌孢子后配成浓度为0. 05-0. 5X 10s个/mL的孢子悬浮液。
[0014] 进一步地，步骤2)所述的浸泡时间为8分钟，浸泡温度为40°C。
[0015] 进一步地，步骤3)中所述的纵向间隔为10cm、横向间隔为25cm。
[0016] 进一步地，步骤4)中制得的孢子悬浮液按照150-170g/m2喷洒于步骤3)种植的 花生种子上，每日3次，时间为5-10天。
[0017] 再进一步地，步骤4)中制得的孢子悬浮液按照160g/m2喷洒于步骤3)种植的花 生种子上，每日3次，时间为9天。
[0018] 再进一步地，本发明使用的黄曲霉菌株为As 33. 2890(中国科学院微生物研究 所），使用的花生品种为黄淮海地区广泛种植的鲁花6号。
[0019] 本发明的有益效果：
[0020] 本发明的发明人经大量创造性劳动得到了一种花生种子的高侵染率的黄曲霉田 间侵染的方法，能够便于后续探索出一些较好的、比较适用的方法来控制和预防花生种子 的黄曲霉侵染，可减少花生种子的黄曲霉侵染，有利于提高经济作物的收益率。
【具体实施方式】
[0021] 下面结合实施例对本发明作进一步说明。实施例旨在对本发明进行举例描述，而 非以任何形式对本发明进行限制。
[0022] 实施例1 :
[0023] 步骤1):将核桃粉碎至直径2-4_的颗粒状，再将黄曲霉菌株在察氏培养基30°C 培养5天后，用无菌水配成质量浓度为0. 25X 10smg/mL的溶液，按照每lmL黄曲霉菌株溶 液喷洒于2g核桃颗粒上的量喷洒于适量的核桃颗粒上，产生黄曲霉菌孢子后配成浓度为 0. 5 X 10s个/mL的孢子悬浮液；
[0024] 步骤2):将干燥健康的花生种子用质量浓度为0. 1 %的高锰酸钾溶液浸泡5分钟， 浸泡温度为35 °C，用蒸馏水冲洗干净后，使种子含水量恢复至20-25 % ;
[0025] 步骤3):将花生种子以纵向间隔5cm、横向间隔20cm在土壤中进行种植；
[0026] 步骤4):将步骤1)中制得的孢子悬浮液按照100g/m2喷洒于步骤3)种植的花生 种子上，每日3次，时间为3天。
[0027] 实施例2 :
[0028] 步骤1):将核桃粉碎至直径2-4mm的颗粒状，再将黄曲霉菌株在察氏培养基30°C 培养5天后，用无菌水配成质量浓度为0. 25X 10smg/mL的溶液，按照每lmL黄曲霉菌株溶 液喷洒于2g核桃颗粒上的量喷洒于适量的核桃颗粒上，产生黄曲霉菌孢子后配成浓度为 0. 5 X 10s个/mL的孢子悬浮液；
[0029] 步骤2):将干燥健康的花生种子用质量浓度为0. 1 %的高锰酸钾溶液浸泡15分 钟，浸泡温度为45 °C，用蒸馏水冲洗干净后，使种子含水量恢复至20-25% ;
[0030] 步骤3):将花生种子以纵向间隔10cm、横向间隔30cm在土壤中进行种植；
[0031] 步骤4):将步骤1)中制得的孢子悬浮液按照200g/m2喷洒于步骤3)种植的花生 种子上，每日3次，时间为15天。
[0032] 实施例3 :
[0033] 步骤1):将核桃粉碎至直径2-4_的颗粒状，再将黄曲霉菌株在察氏培养基30°C 培养5天后，用无菌水配成质量浓度为0. 25X 10smg/mL的溶液，按照每lmL黄曲霉菌株溶 液喷洒于2g核桃颗粒上的量喷洒于适量的核桃颗粒上，产生黄曲霉菌孢子后配成浓度为 0. 5 X 10s个/mL的孢子悬浮液；
[0034] 步骤2):将干燥健康的花生种子用质量浓度为0. 1 %的高锰酸钾溶液浸泡8分钟， 浸泡温度为40 °C，用蒸馏水冲洗干净后，使种子含水量恢复至20-25% ;
[0035] 步骤3):将花生种子以纵向间隔10cm、横向间隔25cm在土壤中进行种植；
[0036] 步骤4):将步骤1)中制得的孢子悬浮液按照160g/m2喷洒于步骤3)种植的花生 种子上，每日3次，时间为9天。
[0037] 对比例1 :
[0038] 步骤1):将核桃粉碎至直径8-10_的颗粒状，再将黄曲霉菌株在察氏培养基30°C 培养5天后，用无菌水配成质量浓度为0. 25X 10smg/mL的溶液，按照每lmL黄曲霉菌株溶 液喷洒于2g核桃颗粒上的量喷洒于适量的核桃颗粒上，产生黄曲霉菌孢子后配成浓度为 0. 5 X 10s个/mL的孢子悬浮液；
[0039] 步骤2):将干燥健康的花生种子用质量浓度为0. 1 %的高锰酸钾溶液浸泡15分 钟，浸泡温度为40 °C，用蒸馏水冲洗干净后，使种子含水量恢复至20-25% ;
[0040] 步骤3):将花生种子以纵向间隔25cm、横向间隔40cm在土壤中进行种植；
[0041] 步骤4):将步骤1)中制得的孢子悬浮液按照160g/m2喷洒于步骤3)种植的花生 种子上，每日3次，时间为10天。
[0042] 实施例4 :
[0043] 实施例1-3与对比例1得到的花生种子侵染率测定数据对比试验：
[0044] 将花生种子取出用无菌水清洗并干燥，打碎，过20目筛，使用ELISA试剂盒进行检 测，试验结果如下表：
[0045] 表1花生种子侵染率
[0047] 由上表结果能够看出，本发明通过大量创造性的劳动得到了高侵染率的花生种子 田间侵染方法及其具体参数，能够方便高效的得到侵染黄曲霉菌的花生种子，能够为后续 科学研究、鉴定提供便利，降低科研成本，减少科研人员的不必要的劳动，有利于
[0048] 上述实施例只是为了说明本发明的技术构思及特点，其目的是在于让本领域内的 普通技术人员能够了解本发明的内容并据以实施，并不能以此限制本发明的保护范围。凡 是根据本
【发明内容】
的实质所作出的等效的变化或修饰，都应涵盖在本发明的保护范围内。
【主权项】
1. 一种田间侵染花生的方法，其特征在于，包括如下步骤： 1) 将黄曲霉菌株进行培养，培养后配成浓度为0. 05-0. 5X IO8个/mL的孢子悬浮液； 2) 将干燥健康的花生种子用质量浓度为0. 1 %的高锰酸钾溶液浸泡5-15分钟，浸泡温 度为35-45 °C，用蒸馏水冲洗干净后，使种子含水量恢复至20-25% ; 3) 将花生种子以纵向间隔5-10cm、横向间隔20-30cm在土壤中进行种植； 4) 将步骤1)中制得的孢子悬浮液按照100_200g/m2喷洒于步骤3)种植的花生种子上， 每日3次，时间为3-15天。2. 如权利要求1所述的方法，其特征在于，步骤1)的具体操作为：将核桃粉碎至直径 2-4mm的颗粒状，再将黄曲霉菌株在察氏培养基25-30°C培养5天后，用无菌水配成质量浓 度为0. 05-0. 5X 10smg/mL的溶液，按照每ImL黄曲霉菌株溶液喷洒于2g核桃颗粒上的量 喷洒于适量的核桃颗粒上，产生黄曲霉菌孢子后配成浓度为〇. 05-0. 5 X IO8个/mL的孢子 悬浮液。3. 如权利要求1所述的方法，其特征在于，步骤2)所述的浸泡时间为8分钟，浸泡温度 为 40°C。4. 如权利要求1所述的方法，其特征在于，步骤3)中所述的纵向间隔为10cm、横向间 隔为25cm。5. 如权利要求1所述的方法，其特征在于，步骤4)中制得的孢子悬浮液按照 150-170g/m2喷洒于步骤3)种植的花生种子上，每日3次，时间为5-10天。6. 如权利要求5所述的方法，其特征在于，步骤4)中制得的孢子悬浮液按照160g/m2 喷洒于步骤3)种植的花生种子上，每日3次，时间为9天。
【专利摘要】本发明公开了一种田间侵染花生的方法。本发明将黄曲霉菌接种产生黄曲霉菌孢子，并使其侵染花生。本发明与现有技术相比，十分接近于田间花生生长环境，能够真实的模拟花生种子在田间被黄曲霉侵染的环境，利于后续进行科学鉴定等研究工作，能够提高鉴定结果的准确程度及其稳定性，对环境无污染。
【IPC分类】A01G7/06
【公开号】CN105230376
【申请号】CN201510771948
【发明人】不公告发明人
【申请人】青岛友诚高新技术有限公司
【公开日】2016年1月13日
【申请日】2015年11月12日