倍半萜类化合物在抗植物病原真菌中的应用
【技术领域】
[0001] 本发明设及植物化学技术领域，具体设及一种从溫義术提取挥发油后所剩药渣中 提取分离的倍半祗类化合物在抗植物病原真菌中的应用。
【背景技术】
[0002] 溫義术（Curcuma wenyuj in Y . Η. Chen et C . Ling)，又名溫郁金，是姜科 (Zingiberaceae)姜黄属（Curcuma L)植物。是我国的民间用药，是"浙八味"之一，该药味 辛、苦，性寒，具有行气化疲、清屯、解郁、利胆退黄之功效，主要用于治疗经闭痛经、胸腹胀 痛、刺痛、热病神昏、癒病发狂和黄痘尿赤等症。从溫義术植物中分离得到的倍半祗类化合 物已有报道，但未见它们有抗植物病原真菌活性的报道。
【发明内容】
[0003] 本发明所要解决的技术问题是提供一种从溫義术提取挥发油后所剩药渣中提取 分离的倍半祗类化合物在抗植物病原真菌中的应用。
[0004] 为解决上述技术问题，本发明采用的技术方案如下：
[0005] 倍半祗类化合物在抗植物病原真菌中的应用，所述的倍半祗类化合物结构式如 下：
[0006]
[0007]其中，
[000引 双键或单键；
[0009] 当立^为单键时，Ri、R2、R3、R4、R日、R6分别独立选自-OH或-C也或-H，
[0010] 当rrrrr为双键时，町、1?2、1?3、1?6分别独立选自-(^或-师或寸，1?4和1?5不存在。
[0011] 优选的结构式之一是，为单键，町为-OH，R2为-C也，R3为-H，R4为-H，Rs为-OH，Re 为-CH3，所述的倍半祗类化合物结构式如下：
[0012]
[0013] 优选的结构式之二是，:^;;为单键，1?1为寸，1?2为-邸3，1?3为-(^，1?4为寸，1?5为-(^，尺6 为-CH3，所述的倍半祗类化合物结构式如下：
[0014]
[001引优选的结构式之Ξ是，为单键，Ri为-H，R2为-C出，R3为-OH，R4为-H，Rs为-C出，R6 为-OH，所述的倍半祗类化合物结构式如下：
[0016]
[0017] 优选的结构式之四是，立^为双键，R功-H，R2为-OH，R3为-C出，R6为-C出，所述的倍 半祗类化合物结构式如下：
[001 引
[0019] 优选的结构式之五是，^为单键，R功-H，R2为-OH，R3为-C出，R4为-H，Rs为-C出，R6 为-OH，所述的倍半祗类化合物结构式如下：
[0020]
[002。 优选的结构式之六是，为单键，Ri为-H，R2为-OH，R3为-C出，R4为-H，Rs为-C出，R6 为-OH，所述的倍半祗类化合物结构式如下：
[0022]
[0023] 其中，所述的植物病原真菌为甘蓝黑斑、烟草黑腔、辣椒炭痘、水稻胡麻叶、金枯沙 皮、甘薦凤梨、玉米大斑、茶轮斑或贡相链格。
[0024] 上述倍半祗类化合物的制备方法如下：
[0025] 1、制备溫義术提取物
[0026] 将溫義术药渣按常规用30~95%v/v的乙醇冷浸或者是热提，得到提取液，减压浓 缩成膏状，即为溫義术提取物。
[0027] 2、分离纯化
[0028] 将上述提取物用水稀释制成悬浮液后，依次用石油酸、乙酸乙醋进行萃取，将乙酸 乙醋萃取液浓缩成浸膏并W硅胶拌样，W石油酸-乙酸乙醋混和溶剂（100:0-0:100，V/V) 及乙酸乙醋-甲醇（100:0-0:100，v/v)按极性递增进行硅胶柱层析，并按每次约500血收集 馈分再经各种柱层析、薄层层析析分离得到6个倍半祗类化合物为:Wenyu jinin 0( 1)、（ 10， 4α ,5α , l〇a)-wenyujinins Ρ(2)、Zedoarondiol(3)、Neoprocurcumenol(4)、 IsozedoarondioKS) W及F*haeocaulisin E(6)，其中 1和2为新化合物。
[0029]
[0030] 其中，柱层析的条件为：用200~300目硅胶上柱，乙酸乙醋体积百分数为15%的乙 酸乙醋-石油酸混合溶剂为洗脱剂。
[0031] 其中，薄层层析条件为：W乙酸乙醋体积百分数为20%的乙酸乙醋-石油酸混合溶 剂为展开剂。
[0032] 其中，分子筛层析条件为:分子筛为S邱hadex LH-20，W氯仿体积百分数为50%的 氯仿-甲醇混合溶剂为洗脱剂。
[0033] 有益效果:本发明首次发现了倍半祗化合物具有抗植物病原真菌的活性，可用于 制备抗植物病原真菌的药物。
【具体实施方式】
[0034] 根据下述实施例，可W更好地理解本发明。然而，本领域的技术人员容易理解，实 施例所描述的内容仅用于说明本发明，而不应当也不会限制权利要求书中所详细描述的本 发明。
[0035] 实施例1:倍半祗类化合物的制备
[0036] 溫義术药渣5Kg按常规用70%v/v的乙醇浸提3次每次7天，得到提取液，将提取液 减压浓缩成膏状，得到溫義术提取物lOOOg。将提取物用水稀释成悬浮液，依次用石油酸、乙 酸乙醋萃取，将乙酸乙醋萃取液浓缩成浸膏，进行硅胶柱层析，W石油酸-乙酸乙醋混和溶 剂（100:0-0:100，￥八)及乙酸乙醋-甲醇（100:0-0:100，￥八)按极性递增进行硅胶柱层 析，并按每次约500mL收集馈分。通过化C检测合并相似流分，分成9个组分，目阳r. 1 - 9。化.2 进行分子筛柱层析，再分别用高效液相制备，洗脱剂为甲醇和水其体积配比为4: 3,得到 Wenyujinin 0(22mg)、（1β,4α，5α，l〇a)-wenyujinins Ρ(19mg)、Zedoarondiol(30mg)、 Neoprocurcumenol(27mg)、Isozedoarondiol(15mg似及Phaeocaulisin E(42mg)。
[0037] 6个化合物的结构鉴定结果如下：
[0038] Wenyujinin 0(1):为淡黄色油状物。紫外254皿有暗斑，5%硫酸-香草醒显色显紫 红色。旋光度为[?^+109.8(。= 0.28，、1亡0}化1取斗51-18 111八275.1620^+胞]+，分子量 为252，结合iH-NMR和"C NMR可知分子式为C础24〇3，计算不饱和度为4。根据iH-NMR和DEPT可 知化合物中含有4个甲基信号[Sh2.09(s，13-C出）、1.91(3，13-邸3)、1.17(3，15-邸3)]，其中 1个连在次甲基上邮1.0((1，2.814-邸3)];根据1化-醒巧邮6口1'可知化合物中4个亚甲基信号 听23.6(〇2)、27.6((：-3)、28.8((：-6)、50.7((：-9)];2个次甲基信号[5巧8.8((：-1)、45.1((：- 4) ]; 5个季碳:包括1个幾基碳信号[.8(C-8) ]、2个締季碳信号[Sd49.9(C-7)，129.4 (C-ll)]、2个连径基碳信号[6。81.7((：-5)，74.3((：-10)]。因此，可知化合物1为愈创木烧型 倍半祗。根据 HMBC 可知：H-12/H-13 与 C-5/C-11/C-7/C-8/C-9/C-12/C-13 相关，因此，从 C-11-C-12-C-13-C-7-C-8-C-9 相连组成一个 α，β-不饱和幾基片段；H-15 与 C-1/C-8/C-9/C-10 相关，表明C-15-C-10-C-1-C-9相连在一起组成一个片段;Η-14与C-3/C-4/C-5相关，表明C-14-C-4-C-3-C-5相连组成一个片段;再根据1η-1η COSY可知，Η-1与Η-2与Η-3与Η-4相关，表 明C-1-C-2-C-3-C-4相连组成一个片段。由此可知化合物的平面结构。化合物的相对构型是 通过N0ESY确定的，H-14、H-15、H-1相关，表明H-UC-14和C-15为α-取向，化合物1为 wenyujinin 0。化合物1的IH-NMR和"C-NIR数据见表1。
[0039] (lf3,4a，5a，l〇a)-wenyujinins P(2):为淡黄色油状物。紫外254nm有暗斑，5%硫 酸-香草醒显色显紫红色。旋光度为杉松+ 109.8 (C = ().2;8, McOH)，HR-ESI-MS m/ z275.1618 [M+化]%分子量为252，结合iH-NMR和"C-NMR谱可知分子式为Ci5此4〇3，不饱和度 为4。根据iH-MlR可知，化合物中含有4个甲基信号[Sh1.86(s，13-C曲）、1.80(3，13-邸3)、 1.08 (S，14-C曲）、1.14(S，15-C出）]。根据"C-NIR和DEPT可知:化合物含有15个碳信号:其中 4个甲基信号[Sc22.6(C-14)、22.6(C-12)、21.9(C-13)、20.4(C-15)];4个亚甲基信号[δ 。22.8(02)、40.1(03)、29.1((：-6)、60.9((：-9)];2个次甲基信号[5巧6.7((：-1)，52.5((：- 5) ];5个季碳包括1个幾基信号[5。03.1((：-8)]，2个締碳信号[5。140.0((：-11)、136.3((：- 7)]，2个连径基碳信号[5。9.6((：-4)、72.3((：-10)]。因此，可知化合物2为愈创木烧型倍半 祗。根据 HMBC 可知：H-12/H-13 与 C-11/C-7/C-8/C-12/C-13 相关，因此，从 C-11-C-12-C-13-C-7-C-8相连组成一个α，β-不饱和基团片段;H-15与C-1/C-9/C-10相关，表明C-15-C-10-C-9相连在一起组成一个片段;Η-14与C-3/C-4/C-5相关，表明C-14-C-4-C-3-C-5相连组成一 个片段;再根据1η-1η COSY可知，Η-1与Η-2与Η-3相关，表明C-1-C-2-C-3相连组成一个片段； H-5与H-6相关，表明C-5-C-6相连在一块。由此可知化合物的平面结构。化合物的相对构型 为是通过N0ESY确定的，H-14、H-15、H-5相关，表明H-5、C-14和C-15为α-取向，因此，H-1为β 取向。故化合物2的相对构型为（10，4日，5日，1〇日）-巧61171^1111113?。化合物2的1护醒巧日13(：-NMR数据见表1。
[0040] 表1化合物1，2的iH-NMR和"C-NMR数据
[0041]