[0043] Zedoarondiol(3):为白色粉末；紫外254nm有暗斑，5%硫酸-香草醒显色显紫红 色。ESI-MS m/z 253.2[M+H]%可知化合物的分子量为252，结合IH-NMR和UC-NMR可知该化 合物的分子式为Ci5出4〇3。由iH-醒R分析可知该化合物中至少含有22个Η，有4个甲基信号[δ 山.83(3，13-(：出）、1.94(3，12-(：曲）、1.19(8，14-(：出）、1.21(3，15-(：出）]。由13(：-醒尺和06口1'谱 分析可知该化合物中含有15个碳信号，其中4个甲基信号[Sc22.9(C-14)、22.3(C-13)、22.0 (012)、20.8(015)];4个亚甲基信号[5。60.0((：-9)、39.9((：-3)、28.7((：-6)、23.0((：-2)];2 个次甲基信号阳56.2((：-1)、52.2((：-5)];5个季碳信号阳202.9((：-8)、142.2((：-11)、134.8 (C-7)、80.1(C-4)、72.9(C-10)]。由此可知，化合物3为愈创木烧型倍半祗类化合物。根据 1h-1h COSY可知，C-1、C-2、C-3相连，C-5与C-6相连。再根据HMQC'HMBC可知化合物的平面结 构，再根据N0ESY可知，H-1与H-14相关，H-5与H-15相关，所W可W确定化合物的相对构型。 W上数据与文献相一致，故化合物3为zedoarondiol。
[0044] 化oprocurcumenol (4):为无色针状晶体;紫外254皿有暗斑，5%硫酸-香草醒显色 显紫红色。ESI-MS m/z 235.2[M+H]%可知化合物的分子量为234,结合iH-NMR和"C-NMR分 子式为C础22〇2,计算不饱和度为5。根据iH-NMR显示有4个甲基信号[Sh1.90(s，C-13)，1.80 (s，C-12)，1.65(s，C-15)，1.13(s，C-14)]。根据"C-NMR和DEPT谱分析可知该化合物含有15 个碳信号，包含有 4 个甲基信号[Sc22.8(C-14)、21.9(C-12)、21.8(C-13)、21.5(C-15)];4 个 亚甲基信号[δc28.2(C-3)、27.8(C-2)、51.1(C-9)、39.1(C-6)];l个次甲基信号[δ巧4.1(C- 5)];6个季碳信号[δc204.2(C-8)、138.7(C-ll)、137.2(C-10)、135.3(C-7)、122.5(C-l)、 80.2(C-4)]。由此可知化合物4为愈创木烧型倍半祗类化合物。W上数据与文献一致，故化 合物4为化oprocur州menol。
[0045] Isozedoarondiol (5):为无色针状晶体；紫外254nm有暗斑，5%硫酸-香草醒显色 显紫红色。ESI-MS m/z 253.2[M+H]%可知化合物的分子量为252，结合1h-醒R和"C-NMR可 知化合物的分子式为Cl出24〇3，计算不饱和度为4。由iH-NMR分析可知，化合物中至少含有22 个Η信号，有4个甲基信号[δΗ 1.99(s，13-C出）、1.84(3，12-邸3)、1.40(3，14-邸3)、1.20(3， 15-C出）]。由1化-醒R和DEPT谱分析可知，化合物中含有15个碳信号，其中有4个甲基信号[δ 032.3(015)、25.0((：-14)、23.1((：-13)、22.3((：-12)];4个亚甲基信号[5巧0.4((：-9)、37.0 (06)、27.5((：-3)、25.2((：-2)];2个亚甲基信号[6巧3.3((：-1)、51.6((：-5)];5个季碳信号[6 c203.4(C-8)、144.1(011)、134.0(07)、82.5(C-4)、73.3(C-10)]。因此，可知化合物5愈创 木烧型倍半祗。根据1H-1h COSY可知，C-1、C2、C3相连，C5与C6相连。再根据HMQC、HMBC可知化 合物的平面结构，再根据N0ESY可知，H-1与H-5相关，H-14与H-15相关，所W可W确定化合物 的相对构型。W上数据与文献W]相一致，故化合物SIsozedoarondiol。
[0046] Phaeocaulisin E(6):为黄色油状物。紫外254nm有暗斑，5%硫酸-硫酸香草醒显 色显紫红色。ESI-MS m/z 253.2[M+H]%可知化合物的分子量为252，结合1h-醒R和"C-NMR 数据分析可知化合物的分子式为Cl出2地3。在紫外252nm下有最大吸收，表明化合物中含有一 个α，β-不饱和幾基结构。红外3422nm下有吸收，表明有径基存在。对比化合物64-醒R和1化 NMR数据和化合物2，3的数据可知，他们的结构相类似，具有相同的平面结构。根据N0ESY相 关判断可知，H-1和Me-14/Me-15相关，可知化合物的相对结构为13,45,55，105。^上数据与 文献相一致，故化合物6为F*haeocaulisin E。
[0047] 表2化合物3-6的1h NMR数据 [004引
[(Κ)加]表3化合物3-6的1化NMR数据
[0化1 ]
[0化2] 实施例2:药理活性实验
[0053] 植物病原真菌是农作物主要危害之一，是造成农业损失的主要原因之一。本发明 通过检测Wenyujinin 〇、（10,4a,5a,l〇a)-wenyujinins P、Zedoa;rondiol、 化oprocurcumenol JsozedoarondiolW及F*haeocaulisin E对植物病原真菌的抑制作用， 发现运一类化合物具有较好的抗植物病原真菌的抑制活性。
[0054] 试验方法:微量稀释法，该方法常用于测定致病菌对敏感性药物或新药对细菌的 抑制活性试验。一般使用96孔微量稀释板，其孔底呈U型，每孔容量0.20 -0.30mL本法操作 较方便，且培养基用量少，可用于大批量药敏试验。一般用MH培养基，将已配制好的药液在 试管中作二倍浓度递减稀释，分别装于96孔板内或者用微量加液器直接在板孔内作二倍稀 释，然后再接种稀释菌液，另外需留出一列孔作为药液对照，该孔列仅加培养基和菌液作为 菌对照，试验完毕后，用微量揽拌器震荡混匀，再将96孔板置于28或37°C培养箱中溫解18-4她，用酶标仪测630nm下吸光度。
[0055] 致病菌株的准备：
[0056] 将活化好的9株致病菌分别接种于W灭菌处理过的LB培养基中，再将其放置于恒 溫振荡器中28摄氏度震荡培养2地。
[0化7]化合物的初筛：
[005引将培养好的致病菌用培养液进行稀释，稀释度为1:500-1:1000;将稀释后的含菌 培养液分别定量加至96孔板的各个孔中；将样品配制成Img/mL，分别取定量加至各个孔中。 加完后置于恒溫培养箱中28°C恒溫培养4她，而后用酶标仪在630nm下测各孔吸光度。试验 结果表明Wenyujinin 0、（10,4a,5a,l0c[)-wenyujinins P、Zedoarondiol、 化oprocurcumenol、IsozedoarondiolW及F*haeocaulisin E对9株植物病原真菌（甘蓝黑 斑、烟草黑腔、辣椒炭痘、水稻胡麻叶、金枯沙皮、甘薦凤梨、玉米大斑、茶轮斑W及贡相链 格)都有抑制活性。
[0059] 最小抑菌浓度的测试：
[0060] 将培养好的致病菌用培养液进行稀释，稀释度为1:500-1:1000;将稀释后的含菌 培养液分别定量加至96孔板的第一排各孔中，让后一次向下成倍稀释;然后将各样品分别 加入至各列孔中。加完后置于恒溫培养箱中28°C恒溫培养4她，而后用酶标仪在630nm下测 各孔吸光度。其结果见表4。
[0061] 表4溫義术中倍半祗类化合物对9株致病菌的最小抑制浓度
[0062]
[0063]试验结果表明倍半祗化合物具有抗植物病原真菌的活性。化合物1-6都表现出广 谱的抗菌活性并且大部分都表现出与阳性对照(咪鲜胺)一致的活性。
【主权项】
1. 倍半萜类化合物在抗植物病原真菌中的应用，其特征在于，所述的倍半萜类化合物 结构式如下：其中， 为双键或单键； 当为单键时，办、r2、r3、r4、r5、r 6分别独立选自-OH或-CH3或-H， 当为双键时，Ri、R2、R3、R6分别独立选自-OH或-CH 3或-Η，R4和R5不存在。2. 根据权利要求1所述的应用，其特征在于，为单键，Ri为_0H，R2为-CH3，R3为-H，R4 为-Η，r5S-oh，R6为-CH3，所述的倍半萜类化合物结构式如下：3. 根据权利要求1所述的应用，其特征在于，为单键，Ri为_H，R2为-CH3，R3为-OH，R4 为-Η，r5S-oh，R6为-CH3，所述的倍半萜类化合物结构式如下：4. 根据权利要求1所述的应用，其特征在于，为单键，Ri为_H，R2为-CH3，R3为-OH，R4 为-Η，抱为-〇13，R6为-OH，所述的倍半萜类化合物结构式如下：5. 根据权利要求1所述的应用，其特征在于，=为双键，Ri为_H，R2为-〇H，R3为-CH 3，R6 为-ch3，所述的倍半萜类化合物结构式如下：6. 根据权利要求1所述的应用，其特征在于，=为单键，Ri为-H，R2为-OH，R3为-CH 3，R4 为-Η，抱为-〇13，R6为-OH，所述的倍半萜类化合物结构式如下：7. 根据权利要求1所述的应用，其特征在于，Ri为-H，R2为-OH，R3为-CH3，R4为-H，他为-CH3，R6为-OH，所述的倍半砲类化合物结构式如下：8. 根据权利要求1所述的应用，其特征在于，所述的植物病原真菌为甘蓝黑斑、烟草黑 胫、辣椒炭疽、水稻胡麻叶、金桔沙皮、甘蔗凤梨、玉米大斑、茶轮斑或贡柑链格。
【专利摘要】本发明公开了倍半萜类化合物在抗植物病原真菌中的应用，所述的倍半萜类化合物结构式如下：其中，为双键或单键；当为单键时，R1、R2、R3、R4、R5、R6分别独立选自-OH或-CH3或-H，当为双键时，R1、R2、R3、R6分别独立选自-OH或-CH3或-H，R4和R5不存在。本发明首次发现了倍半萜类化合物具有抗植物病原真菌的活性，可用于制备抗植物病原真菌的药物。
【IPC分类】A01N35/06, A01P3/00
【公开号】CN105454230
【申请号】CN201510470488
【发明人】陈光英, 韩长日, 周学明, 郑彩娟, 黄辉峰, 刘艳萍
【申请人】海南师范大学
【公开日】2016年4月6日
【申请日】2015年8月4日