愈创木内酯类倍半萜二聚体及其制备方法与应用的制作方法

专利名称：：愈创木内酯类倍半萜二聚体及其制备方法与应用的制作方法
技术领域：
：本发明涉及愈创木内酯类倍半萜二聚体及其制备方法与应用。
背景技术：
：很多植物中均含有具有抗癌活性的化合物，如从太平洋紫杉(短叶红豆杉，7^o^ev^//fl)树皮中提取出来的紫杉醇即是一种应用广泛的抗癌药物。同时很多植物中也含有具有抗炎活性的化合物。因此从植物提取物中寻找抗癌及抗炎药物是目前癌症及炎症治疗的研究热点。奇蒿Jrfem/Wafl"oma/aS.Moore，又名南刘寄奴、六月霜、野马兰头、苦婆菜等。《中国植物志》记载奇蒿为菊科春黄菊族蒿属植物，本系我国有l种及l变种。其全草入药，具有敛疮消肿、破瘀通经的功效。主治跌打损伤、金疮出血、风湿痹痛、烫伤等症。我国南方等地尚用其泡茶，用以治疗肠炎、痢疾、中暑等症。据报道，奇蒿主要含黄酮类、香豆素类、挥发油类、倍半萜类以及芳香类等成分(江苏新医学院编.中药大辞典.上海上海人民出版社，2006:1303;肖永庆等.药学学报,1984,19(12):卯9;肖永庆等.植物学报,1986，28(3):307;JakupovicJ.etal,Phytochemistry.1987;26(10):2777.)。
发明内容本发明的目的是提供愈创木内酯类倍半萜二聚体及其制备方法。本发明所提供的愈创木内酯类倍半萜二聚体，其结构如式(I)所示式(I)°其中，&为氢、卤素、甲基、乙基、羟基、垸氧基、巯基、氨基、羟代烷氧基、羧代烷氧基、酰氧基、羧基或苄氧羰甲氧基；R2为氢、卣素、甲基、乙基、羟基、烷氧基、巯基、氨基、羟代烷氧基、羧代烷氧基、酰氧基、羧基或苄氧羰甲氧基。所述Ri具体可为囱素、甲基、乙基、羟基、烷氧基、巯基、氨基、羟代垸氧基、羧代烷氧基、酰氧基、羧基或苄氧羰甲氧基；所述R2具体可为乙酰氧基。所述A、R2可同时为氢、卤素、甲基、乙基、羟基、烷氧基、巯基、氨基、羟代烷氧基、羧代烷氧基、酰氧基、羧基或苄氧羰甲氧基。所述&具体可为氢，所述R2具体可为氢、卤素、甲基、乙基、羟基、垸氧基、巯基、氨基、羟代烷氧基、羧代垸氧基、酰氧基、羧基或苄氧羰甲氧基。所述式(I)中，当Ri为羟基，R2为乙酰氧基时，其结构如式(II)所示<formula>formulaseeoriginaldocumentpage6</formula>式(II)所述的式(I)中，当A为羟基，R2为羟基时，其结构如式(III)所示:<formula>formulaseeoriginaldocumentpage6</formula>式(III)所述的式(I)中，当A为氢，R2为羟基时，其结构如式(IV)所示:<formula>formulaseeoriginaldocumentpage6</formula>式(IV)本发明所提供的制备式(II)、式(III)或式(IV)所示化合物的方法，包括以下步骤1)用乙醇提取奇蒿全草，然后除去乙醇，收集提取物；所述提取可以采用回流提取；2)将所述提取物悬浮于水中，依次用石油醚、乙酸乙酯进行萃取；3)将乙酸乙酯层进行硅胶柱层析，用氯仿和甲醇进行梯度洗脱，收集体禾只比为25:1的氯仿和甲醇混合液的洗脱组分；4)将所述步骤3)得到的组分进行硅胶柱层析，用石油醚和丙酮进行梯度f先脱，收集体积比为4:1的石油醚和丙酮混合液的洗脱组分；5)将所述步骤4)得到的组分用羟丙基葡聚糖凝胶进行纯化，以体积比为i:l的氯仿-甲醇混合液作为洗脱液，收集洗脱组分；6)将所述步骤5)得到的组分用半制备型HPLC进行纯化，仪器型号为Waters600半制备型高效液相色谱仪，W2487双波长检测器检测，所用半制备柱型号为WatersPrepNova-PakHRC187.8X300mm，进行HPLC纯化，收集保留时间为18.5min、19.6min及21min的洗脱峰，得到式(III)、式(IV)及式(II)所示化合物；所述HPLC纯化中所用的流动相为体积比为52:48的甲醇-水混合液，所述流动相的流速为2ml/min。制备式(I)所述化合物的方法，为下述1)至10)中的任一种方法1)制备Ri为氯，R2为乙酰氧基的式(I)所述化合物的方法，是将式(II)所述的化合物与二氯亚砜进行反应得到式(I)中P4为氯,R2为乙酰氧基的化合物；2)制备Ri为巯基,R2为乙酰氧基的式(I)所述化合物的方法，是将式(II)所述的化合物与三甲基氯硅烷进行反应，将得到的反应产物再与硫脲进行反应，得到式(I)中Ri为巯基,R2为乙酰氧基的化合物；3)制备R4和R2皆为乙酰氧基的式(I)所述化合物的方法，是将式(II)所述的化合物与乙酰氯进行反应，得到式(I)中^和R2皆为乙酰氧基的化合物；4)制备&为琥珀酰氧基，R2为乙酰氧基的式(I)所述化合物的方法，是将式(II)所述的化合物与琥珀酸酐进行反应，得到式(I)中Ri为琥珀酰氧基，R2为乙酰氧基的化合物；5)制备&为苄氧羰甲氧基，R2为乙酰氧基的式(I)所示化合物的方法，是将式(II)所述的化合物与溴乙酸苄酯进行反应，得到式(I)中I^为苄氧羰甲氧基，R2为乙酰氧基的化合物；6)制备R,和R2皆为氯的式(I)所述化合物的方法，是将式(III)所述的化合物与二氯亚砜进行反应得到式(I)中A和R2皆为氯的化合物；7)制备F^和R2皆为巯基的式(I)所述化合物的方法，是将式(III)所述的化合物与三甲基氯硅垸进行反应，将得到的反应产物再与硫脲进行反应，得到式(I)中Rt和R2皆为巯基的化合物；8)制备A为氨基，R2为乙酰氧基的式(I)所述化合物的方法，是将式(II)所述的化合物与二氯亚砜进行反应，将得到的反应产物再与氨的甲醇溶液进行反应，得到式(I)中R,为氨基，R2为乙酰氧基的化合物；9)制备A为氢,R2为氯的式(I)所述化合物的方法，是将式(IV)所述的化合物与二氯亚砜进行反应，得到式(I)中A为氢,R2为氯的化合物；10)制备Ri为氢,R2为乙酰氧基的式(I)所述化合物的方法，是将式(W)所述的化合物与乙酰氯进行反应，得到式(I)中R4为氢，R2为乙酰氧基的化合物。其中，式(II)、式(III)及式(IV)所述化合物的制备方法包括以下步骤-1)用乙醇提取奇蒿全草，然后除去乙醇，收集提取物；所述提取可以采用回流提取；2)将所述提取物悬浮于水中，依次用石油醚、乙酸乙酯进行萃取；3)将乙酸乙酯层进行硅胶柱层析，用氯仿和甲醇进行梯度洗脱，收集体积比为25:1的氯仿和甲醇混合液的洗脱组分；4)将所述步骤3)得到的组分进行硅胶柱层析，用石油醚和丙酮进行梯度洗脱，收集体积比为4:1的石油醚和丙酮混合液的洗脱组分；5)将所述步骤4)得到的组分用羟丙基葡聚糖凝胶进行纯化，以体积比为1:1的氯仿-甲醇混合液作为洗脱液，收集洗脱组分；6)将所述步骤5)得到的组分用半制备型HPLC进行纯化，仪器型号为Waters600半制备型高效液相色谱仪，W2487双波长检测器检测，所用半制备柱型号为WatersPrepNova-PakHRC187.8X300mm，进行HPLC纯化，收集保留时间为18.5min、19.6min及21min的洗脱峰，得到式(III)、式(IV)及式(II)所示化合物；所述HPLC纯化中所用的流动相为体积比为52:48的甲醇-水混合液，所述流动相的流速为2ml/min。本发明的另一个目的是提供式(I)所示的愈创木内酯类倍半萜二聚体的用途。8本发明所提供的愈创木内酯类倍半萜二聚体的用途是式(I)所示的化合物或其药学上可接受的盐在制备预防和/或治疗肿瘤药物及抗炎药物中的应用。式(I)所示的愈创木内酯类倍半萜二聚体或其药学上可接受的盐，特别适合于制备预防和/或治疗人结肠癌、肝癌、胃癌、肺癌和卵巢癌药物以及抗炎药物。所述预防和/或治疗肿瘤药物及抗炎药物可通过注射、喷射、滴鼻、滴眼、渗透、吸收、物理或化学介导的方法导入机体如肌肉、皮内、皮下、静脉、粘膜组织；或是被其他物质混合或包裹后导入机体。以式(I)所示的愈创木内酯类倍半萜二聚体或其药学上可接受的盐为活性成分的抗肿瘤药物及抗炎药物，需要的时候，在上述药物中还可以加入一种或多种药学上可接受的载体。所述载体包括药学领域常规的稀释剂、赋形剂、填充剂、粘合剂、湿润剂、崩解剂、吸收促进剂、表面活性剂、吸附载体、润滑剂等。用愈创木内酯类倍半萜二聚体或其药学上可接受的盐制备的预防和/或治疗肿瘤药物和抗炎药物可以制成口服、外用、注射剂等剂型，其中口服制剂包括片剂、胶囊剂、颗粒剂、合剂、酒剂、滴丸剂等；外用包括栓剂、搽剂、洗剂、膏剂、透皮帖剂；注射剂包括注射液、混悬液、冻干粉针等。上述各种剂型的药物均可以按照药学领域的常规方法制备。本发明从奇蒿植物中提取、分离出三种新的愈创木内酯类倍半萜二聚体类化合物(奇蒿二聚体A，结构如式(II)所示；奇蒿二聚体B，结构如式(III)所示；奇蒿二聚体C，结构如式(IV)所示)，并以此为基础制备出多种愈创木内酯类倍半萜二聚体类化合物。本发明通过实验证实愈创木内酯类倍半蔽二聚体类化合物具有对癌细胞的细胞毒活性，同时该类化合物对脂多糖(LPS)刺激的小鼠腹腔巨噬细胞COX-2活性有明显的抑制作用，可以作为抗癌及抗炎药物的活性成分。具体实施例方式实施例l、奇蒿二聚体A、奇蒿二聚体B及奇蒿二聚体C的提取将15kg的奇蒿全草粗粉，用95。/。乙醇回流提取3h，共提取3次。减压回收溶齐U，得到固体浸膏4.52kg;将所述固体浸膏4kg悬浮于水中，用石油醚进行萃取，收集水层，用乙酸乙酯萃取该水层，收集乙酸乙酯层。将乙酸乙酯萃取物经硅胶柱层析，用100200目硅胶装柱，柱床的长度为1250cm，柱的内径为25cm，按照40ml/min的流速用如下三个梯度的氯仿和甲醇混合液依次进行梯度洗脱氯仿和甲醇的体积比为100:1的混合液1、氯仿和甲醇的体积比为50:1的混合液2，氯仿和甲醇的体积比为25:1的混合液3。每个梯度洗脱量为三倍硅胶柱床体积。收集氯仿-甲醇体积比为25:1时的洗脱组分。将上述收集的洗脱组分再进行硅胶柱层析，用200300目硅胶装柱，柱床的长度为550cm，柱的内径为13cm，按照40ml/min的流速用如下三个梯度的石油醚和丙酮混合液依次进行梯度洗脱石油醚和丙酮的体积比为15:l的混合液i、石油醚和丙酮的体积比为8:i的混合液2，石油醚和丙酮的体积比为4:l的混合液3。每个梯度洗脱量为三倍硅胶柱体积。收集石油醚-丙酮体积比为4:l时的洗脱组分；将此组分6(TC真空减压浓縮，然后经羟丙基葡聚糖凝胶(sephadexLH-20)纯化，以氯仿-甲醇(体积比为1:l)作为洗脱液；将纯化后的浓縮液再经过半制备型HPLC分离纯化，仪器型号为Waters600半制备型高效液相色谱仪，W2487双波长检测器检测，所用半制备柱型号为WatersPrepNova-PakHRC187.8X300mm。以甲醇-水(体积比为52:48)作为流动相进行分离，流速为2ml/min。收集保留时间为18.5min、19.6min及21min的洗脱峰，得到式(in)、式(IV)及式(II)所示化合物，6(TC进行真空减压浓縮，得到492mg奇蒿二聚体A(式(II))、86mg奇蒿二聚体B(式(III))及58mg奇蒿二聚体C(式(IV))。奇蒿二聚体A(ArtanomalideA)，结构式如式II所示，为白色无定形粉末，其熔点为198°C202°C，所用仪器为X4型显微熔点测定仪(温度计未校正)。结构确证+(calcdforC32H3708:549.24692);UV(CHCL3);252nm;IR(KBr)vmax3437(OH),2923，1765(Y-内酯)，1691(环外双键)cm",1647,1617,1261,1240cm";iH-NMR(CDCl3,500MHz):S6.29(lH,d,J^5.5,H-2，)》6.19(lH，t,^1.0,H-3),S6.08(lH,d,J=3.0,H-13，),S5.81(lH，d,J=5.5，H-3，),55.36(lH,d,J=3.0,H-13，),S4.78(lH,dt,J=2.5;11.0;11.0,H-8),S4.06(lH,t，J=10.0，H-6，),54.02(lH,dt,J=10.0;11.0,H-6),S3.26(lH,d,J=10.0，H-5),52.86(lH,d，J=10.0,H-5，),S2.76(lH,m,H-7，),S2.68(lH,t,J=11.0;11.0，H-7),S2.52(lH,d，J=12.0,H-13),S2.47(m,dd,J=11.0;13.5,H-9),S2.39(3H，s,H-15),S2.33(3H,s,H-14),S2.31(lH,dd,J=5.0;13.5,H-9),52.04(lH,d，J=12.0,H-13),S2.01(3H,s,H-2，，)，S1.74(2H,q,J=7.0,H-9，)，S1.56(2H,q,H-8，)，51.48(3H，s,H-14，)，51.45(3H,s,H-15，)；13C-NMR(CDCl3,125MHz):S194.8(C-2),5178.7(C-12)，S170.2(C-4),S169.6(C-12，),S169.3(C-l"),S143.9(C-10),5140.1(C-ir),5138.5(C-2'),8136.1(C-3),5134.9(C-3，),3134.0(C-1),S119.2(C-13，),S80.1(C-6)，S78.0(C-6，),572.8(C隱10，),S68.0(C-8),S66.6(C-5，),S63.2(C-1，)，S61.9(C-11)，S59.4(C-7),S58.2(C-4，)，S52.0(C-5)，S44.4(C-9)，S43.3(C-7，),539.7(C-13),S37.0(C-9，)，S23.7(C-15，),S23.0(C-8，),S21.5(C匿2，，)，S20.5(C-15),S20.2(C-14),S17.O(C-14，)。奇蒿二聚体B(ArtanomalideB)，结构式如式III所示，为白色无定形粉末，其熔点为196°C20rC，所用仪器为X4型显微熔点测定仪(温度计未校正)。结构确证+(calcdforC30H35O7:507.23773);UV(CHCL3)、収251nm;IR(KBr)vmax3432(OH),2918,1762(y-内酯)，1684(环外双键)。111-1,1636,1622,1252，1241cm";iH-NMR(CDCl3,500固z):S6.24(lH,d,卜5.0,H-2，),S6.17(lH,t,hl.0,H-3),S6.12(lH,d,J=3.5,H-13，),S5.85(lH,d,J=5.0,H-3，),S5.32(lH,d,J=3.5,H-13，),S4.72(lH,dt,J=2.5;10.5;10.5,H-8),54.08(lH,t,J=10.0,H-6，),54.04(lH,dt,J=10.0;10.5,H-6),S3.23(lH,d,J=10.0,H-5),52.84(lH,d,J=10.0,H-5，),S2.73(lH,m，H-7，),S2.64(lH,t,J=10.5;11.0,H-7),S2.55(lH,d,J=12.0,H-13),52.45(lH,dd,J=11.0;13.0,H-9),S2.42(3H,s,H-15),S2.31(3H,s,H-14),52.28(lH,dd，J=5.0;13.0,H-9),S2.06(lH,d,J=12.0,H-13),S1.78(2H,q,J=7.0,H-9，)，S1.56(2H,q,H-8'):S1.46(3H,s,H-14，)，51.43(3H,s,H-15，)；13C-NMR(CDCl3,125MHz):5193.9(C-2),5177.2(C-12),S170.2(C-4),S168.9(C-12，),S143.9(C画10),5139.2(C-11，)，5138.7(C-2，),8135.6(C誦3),S134.9(C-3,),S134.2(C-1),S118.9(C-13，)，580.5(C-6),S78.2(C-6，),S72.6(C-10,),S67.6(C-8),S66.9(C-5，),S63.2(C-r),S61.9(C墨ll),S59.5(C陽7),S58,7(C陽4，),S52.0(C-5),S44.3(C-9),S43.1(C隱7，),S39.6(C-13),S37.3(C-9，)，S23.9(C-15，),S22.8(C-8，),S20.4(C-15),S20.2(C-14)，S16.8(C-14')。奇蒿二聚体C(ArtanomalideC)，结构式如式IV所示，为白色无定形粉末，其熔点为195°C198°C，所用仪器为X4型显微熔点测定仪(温度计未校正)。结构确证+(calcdforC3。H3506:491.24281);UV(CHCL3);ax252nm;IR(KBr)v薩3425(OH),2918,1762(^-内酯)，1696(环外双键》111-1,1643,1622,1258，1237cm";iH隱NMR(CDCl3,500MHz):S6.26(lH,d,^5.5,H-2,),S6.17(lH，t,J-1.0,H-3),S6.06(lH,d,J=3.0，H-13，)，55.83(lH,d,J=5.5,H-3，),S5.34(lH,d,J=3.0,H-13，)，54.04(lH，t,J=10.5,H-6，),S4.02(lH，dt,J=10,5;11.0,H-6),S3.24(lH,d,J=10.5，H-5),S2.83(lH,d,J=10.5，H-5，),52,72(lH,m,H-7，)，S2.64(lH,t，J=U.0;11.0，H-7),S2.55(lH,d，J=12.0,H-13),S2.36(3H,s,H-15),52.32(3H,s，H-14),S2.04(lH,d,J=12.0，H-13),S1.92(2H,m,H-9),51.74(2H,q,J=7.0,H隱9，),S1.56(2H,q,H-8，)，S1.52(1H,m,H-8),S1.24(lH,m,H誦8),S1.48(3H,s,H-14，),S1.45(3H,s,"C-NMR(CDCl3，125MHz):S194.8(C-2),S178.7(C-12),5170.2(C-4),5169.6(C-12，),S143.9(C-10)，S140.1(C-ir)，6138.5(C-2，),S136.1(C-3),5134.9(C-3，),S134.0(C-l),S119.2(C-13，),580.1(C-6),S78.0(C誦6，),S72.8(C-10，)，S66.6(C-5，),S63.2(C-1，),561.9(C-11),S59.4(C-7),S58.2(C國4,)，S52.0(C-5)，S43.3(C-7，)，539.7(C隱13),S37.0(C匿9，),S34.5(C-9),S26.5(C-8),S23.7(C-15，),S23.0(C-8，),跳5(C-15)，520.2(C-14),S17.0(C-14')。上述图谱结果表明所得化合物结构正确。实施例2、其他衍生物的制备以实施例1中得到的奇蒿二聚体A、B或C为反应物，进行各种衍生化反应，可以得到本发明的愈创木内酯类倍半萜二聚体化合物A的衍生物1、奇蒿二聚体A衍生化反应H-15，);衍生化2、奇蒿二聚体B衍生化反应衍生化<formula>formulaseeoriginaldocumentpage12</formula>3、奇蒿二聚体C衍生化反应具体如下:1、奇蒿二聚体氯代物l(式(I)中Ri为氯，R2为乙酰氧基)的制备将实施例1中10mg的奇蒿二聚体A溶于5ml吡啶中，冰浴条件下滴加入0.5ml二氯亚砜，反应1小时，减压除去溶剂，即得产物l。该氯代物l为白色粉末，其熔点为205t:208r;，所用仪器为X4型显微熔点测定仪(温度计未校正)。结构确证ESIMSm/z:567[M+H]+(C32H36C107).^-NMR(CDCl3,500廳z):S6.06(lH,t,J:1.5,H-3)，S3.14(lH,d,J-11.0,H-5),S4.13(1H,dt,J=l1.0;11.5，H-6),S2.82(lH,t,J=l1.5;11.5,H-7),4.96(lH,dt,J:2.5;11.5;11.5，H-8),S2.49(lH,dd,J=11.5;13.0，H-9),52.35(lH,dd，J=3.0;13.5,H-9),S2.46(lH,d,J=12.0，H-13),S2.12(lH,d,J=12.0，H-13)，S2.23(3H,s，H-14),S2.31(3H,s，H-15)，S6.21(lH,d,J=5.5,H-2，)，S5.75(lH，d,J^5.5,H-3,),52.76(lH,d，hl0.5,H-5，),54.02(lH,t,卜10.5,H-6，),S2.72(lH,m,H-7，),S1.52(2H,q,H-8，),S1.65(2H,q,J=7.0，H-9，),S6.04(lH,d,J=3.0,H-13，),S5.31(lH,d，J=3.0,H-13')，S1.42(3H,s，H國14'),51.40(3H,s,H-15，)，52.03(3H,s,H-2，，)；13C-NMR(CDCl3,125MHz):5132.5(C-l),5195.2(C-2),5134.2(C-3)，5172.1(C-4),550.8(C-5),S79.8(C-6),S57.6(C-7),49.5(C-8),542.1(C-9),5142.6(C-10),S60.8(C-11),13S178.2(C-12),S38.8(C-13),S19.8(C-14),S20.1(C-15),S62.9(C-1，)，S137.6(C-2，),S133.8(C-3，),S57.7(C-4，),S65.8(C-5，),S77.4(C-6，),S42.6(C-7，),S22.6(C-8，),S36.5(C-9，),S72.1(C-10，),S139.1(C-11，)，S169.2(C-12,),S118.6(C-13，),S16.8(C國14，),S23.3(C-15，)，5170.2(C隱l"),521.2(C-2");上述图谱结果表明所得化合物结构正确。2、奇蒿二聚体巯化物2(式(I)中&为巯基，R2为乙酰氧基)的制备将实施例1中的100mg的奇蒿二聚体A溶于10ml吡啶中，室温下加入三甲基氯硅垸20mg，TLC监测反应至原料奇蒿二聚体A完全消失，待反应结束后，减压除去溶剂，收集残余物；将上述残余物溶于二甲基甲酰胺(DMF)中，加入硫脲，TLC监测反应至原料奇蒿二聚体A完全消失，反应结束后，加入NaOH溶液进行皂化反应，反应结束后重结晶得到产物2。该巯代物2为白色粉末，其熔点为185°C188°C，所用仪器为X4型显微熔点测定仪(温度计未校正)。结构确证ES歸m/z:565[M+H]+(C32H37S07).iH-NMR(CDCl3，500MHz):56.02(lH,t,卜1.5,H-3),S3.04(lH,d,^10.5,H-5),S4.05(1H，dt,J=10.5;11.5,H-6),52.74(lH,t,J=11.0;11.5,H-7),3.62(lH,dt,J=2.5;11.0;11.5,H-8),S2.58(lH,dd,J=11.5;13.0,H-9),52.32(lH,dd,J=3.0;13.5,H-9),S2.46(lH,d,J=12.0,H-13),S2.09(lH,d,J=12.0,H-13),52.21(3H,s,H-14),S2.26(3H，s,H-15),S6.17(lH,d,J=5.5,H-2，),S5.71(lH,d,J=5.5,H-3，),S2.71(lH,d,J=10.5,H-5，),53.92(lH,t,J=10.5，H-6，),52.69(lH,m,H-7，),Sl.48(2H,q,H-8，),S1.62(2H,q,;K7.0，H-9，)，S6.02(lH,d,J=3.0,H-13，)，S5.28(lH,cl,J=3.0，H-13，),51.36(3H,s，H-14，)，S1.34(3H,s,H-15，)，S2.03(3H,s，H-2，，)；13C-NMR(CDCl3,125MHz):S132.7(C-l),S195.1(C-2),5134.8(C-3),5171.6(C-4),S51.<formula>formulaseeoriginaldocumentpage15</formula>上述图谱结果表明所得化合物结构正确。3、奇蒿二聚体乙酰氧化物3(式(I)中R4为乙酰氧基，R2为乙酰氧基)的制备将实施例1中50mg的奇蒿二聚体A溶于5ml吡啶中，室温下滴加入1ml乙酰氯，TLC监测反应至原料完全消失，反应结束后，减压除去溶剂，加入少量二氯甲垸溶解，有机层以5ml饱和NaHC03洗涤三次，二氯甲烷层以无水硫酸钠干燥，过滤，减压浓缩至干，即得产物3。该乙酰氧化物3为白色粉末。结构确证ES歸m/z:591[M+H]+(C34H3909).LH-NMR(CDCl3,500薩z):S6.19(lH,t,J:1.5,H-3),S3.26(lH,d，J:10.5，H-5),S4.05(1H,dt,J=10.5;11.5，H-6),S2.74(lH，t，J=11.0;11.5,H-7),4.88(lH,dt，J=2.5;11.0;11.5,H-8),S2.48(lH,dd,J=11.5;13.0，H-9),52.29(lH,dd，J=3.0;13.5,H-9)，S2.59(lH,d,J=12.0,H-13),52.02(lH,d,J=12.0,H-13),52.31(3H,s，H-14),52.36(3H,s,H-15)，56.26(lH，d,J=5.5,H-2，),S5.56(lH，d，J=5.5,H-3，)，S2.62(lH,d,J=10.5,H-5，),S3.94(lH,t，J=10.5,H-6，),S2.62(lH,m,H-7，),51.62(2H,q,H-8，),S1.76(2H,q,J=7.0，H-9，),S6.02(lH，d,J=3.0,H-13,),S5.28(lH,d,J=3.0,H-13，),S1.32(3H,s,H-14，),S1.28(3H,s,H-15，),52.01(3H,s,H-2，，),S2.02(3H,s,H匿2，，，)；13C-NMR(CDCl3,125MHz):S134.2(C-l),5194.8(C-2),5135.8(C-3)，5170.2(C-4)，551.9(C-5)，580.3(C-6),S58.2(C-7)，70.2(C-8)，543.2(C-9),S143.2(C-10),S61.2(C-11),S176.2(C-12),540.3(C隱13),S20.2(C-14),S20.6(C-15),563.6(C-1，),5134.2(C-2,),5135.5(C-3，),S58.3(C-4，)，S66,4(C-5，)，S77.2(C-6，),S44.6(C-7，),523.6(C-8，),S38.2(C-9，),S72.4(C-10，),5138.6(C-ll，),S169.2(C-12，),S118.5(C-13，),S17.4(C-14，),S23.6(C-15，),S169.3(C-r，)，S22.5(C-2"),S169.1(C-1，，')，S22.2(C-2，，，)；上述图谱结果表明所得化合物结构正确。4、奇蒿二聚体琥珀酰氧化物4(式(I)中R,为琥珀酰氧基，R2为乙酰氧基)的制备将实施例l中100mg的奇蒿二聚体A溶于10ml四氢呋喃(THF)中，室温下加入25mg琥珀酸酐和5mg4-二甲氨基吡啶(DMAP)，TLC监测反应至原料奇蒿二聚体A完全消失，反应结束后，减压除去溶剂，柱层析分离(洗脱剂为体积比为100:3的二氯甲烷与甲醇的混合液)，即得产物4。该琥珀酰氧化物4为白色粉末。结构确证ES謹m/z:649[M+H]+(C36H410).iH-NMR(CDCL3，500顧z):S6.13(lH,t,》1.5,H陽3),S3.22(lH,d,河0.5，H-5),S4.02(1H,dt,J=l1.0;11.0,H-6)，52.82(lH,t，J=l1,0;11.0,H-7),4.94(lH,dt,J=2.5;11.0;11.5,H-8),S2.33(lH,dd,J=11.5;13.0,H-9),S2.24(lH,dd,J=3.0;13.5,H-9),52.46(lH,d,J=12.0,H-13),S2.06(lH,d，J=12.0,H-13),52.24(3H,s,H-14),S2.31(3H,s,H-15)，S6.21(lH，d,J=5.5,H-2，),S5.32(lH，d,J=5.5,H-3，)，S2.52(lH,d,J=10.5，H-5，),S3.82(lH，t,J=10.5,H-6，),32.54(lH，m,H-7，)，Sl.54(2H，q，H國8,),M.68(2H，q,卜7.0,H-9，)，S6.02(lH,d,卜3.0，H-13，),55.28(lH，d，J:3.0,H-13，),S1.32(3H,s,H匿14，),51.28(3H,s,H-15，),52.52(2H,m,H-2，，),52.62(2H,m,H陽3'，),S2.04(3H，16s,H-2，")；13C-NMR(CDCL3,125MHz):S134.2(C-l),S194.8(C-2)，5135.8(C-3)，S170.2(C-4),S519(C-5),S80.3(C-6)，857.6(C-7),68.5(C-8),S43.8(C-9),S143.2(C-10),561.2(C-11),S176.2(C國12),S40.3(C-13),S20.2(C-14),520.6(C匿15)，S63.6(C-1，),S134.2(C-2，),5135.5(C-3，)，S58.3(C-4，),S66.4(C-5，)，S77.2(C-6，),S44.6(C-7，),S23.6(C匿8，),S38.2(C-9，),S72.4(C-10，),S138.6(C陽ll，),S169.2(C-12，),S118.5(C-13，)，517.4(C-14，)，S23.6(C-15，),S172.8(C-r，),529.2(C-2"),S31.5(C-3"),S174.5(C-4"),S169.1(C陽1，")，S22.2(C-2"，)；上述图谱结果表明所得化合物结构正确。5、奇蒿二聚体苄氧羰甲氧基衍生物5(式(I)中&为苄氧羰甲氧基，仗2为乙酰氧基)的制备将实施例1中100mg的奇蒿二聚体A溶于10mlDMF中，0°〇下加入15mgNaH，反应15min之后，加入60mg溴乙酸节酯(BrCH2COOCH2C6H5)，升温至5(TC反应，TLC监测反应至原料奇蒿二聚体A完全消失，反应结束后，减压除去溶剂，即得产物5。该苄氧羰甲氧基衍生物5为白色粉末。结构确证ESIMSm/z:697[M+H]+(C41H45O10).^-画R(CDCL3,500MHz):S6.12(lH,t，片1.5,H匿3),53.35(lH,d,^10.5,H-5),54.02(1H,dt,J=10.5;11.0,H-6),52.74(lH，t，J=11.0;11.0,H-7)，4.24(lH,dt,J=2.5;11.0;11.0,H-8),52.2l(lH,dd,J=11.5;13.0,H-9),51.96(lH,dd，J=3.0;13.5,H-9),S2.62(lH,d,J=12.0,H-13),S2.14(lH,d，J=12.0,H-13),S2.29(3H,s,H-14),52.32(3H,s，H-15),S6.22(lH,d,J=5.5,H-2，),S5.53(lH,d,J=5.5,H-3，),S2.48(lH,d,J=10.5,H-5，),S3.82(lH,t,J=10.5,H-6，)，S2.62(lH,m，H-7，),Sl.64(2H,q，H-8，),S1.82(2H,q,J=7.0,H-9，)，S6.02(lH,d,J=3.0,H-13，),S5.34(lH,d,J=3.0,H-13,),S1.30(3H,s,H-14，),S1.25(3H,s，H-15，),S4.32(2H,d,J=13,0,H-l，，),55,32(2H,d,J=12.5,H-3，')，S7.35(5H,m,H-Ar)，S2.02(3H,s,H-2，")；13C-NMR(CDCL3,125MHz):5133.5(C-l),S194.2(C-2)，S135.2(C-3),S169.2(C-4),S524(C-5),S80.1(C-6),S57.2(C-7)，72.5(C-8),S42.3(C-9)，S142.8(C-10)，560.5(C-11),S175.4(C-12),539.4(C-13)，S20.5(C-14),S21.2(C-15),S62.9(C-1，),S133.7(C-2，)，S134.5(C-3，)，S57.6(C匿4，)，S65.4(C-5，),S75.2(C-6，)，S43.9(C國7，),S23.3(C-8，)，S36.2(C-9，),S73.4(C-10，),S136.2(C-ll，),S170.3(C-12，),S119.2(C-13，),518.6(C隱14'),S22.8(C-15，),S64.9(C-r，),S168.5(C-2"),S68.9(C-3，，)，S140.5(Ar-C-l),S126.6(Ar-C-2;6),S128.9(Ar-C-3;5),5127.4(Ar-C-4),S169.1(C-r，，),S22.6(C匿2，")；上述图谱结果表明所得化合物结构正确。6、奇蒿二聚体双氯代物6(式(I)中I^和R2皆为氯)的制备将实施例1中8mg的奇蒿二聚体B溶于5ml吡啶中，冰浴条件下滴加入0.5ml二氯亚砜，反应1小时，在减压除去溶剂，即得产物6。该双氯代物6为白色粉末，其熔点为207"21(TC，所用仪器为X4型显微熔点测定仪(温度计未校正)。结构确证ESIMSm/z:543[M+H]+(C30H33Cl2O5).iH-NMR(CDCl3,500顧z):S6.04(lH,t,J:1.5,H隱3),53.16(lH,d,卜11.0,H-5),S4.11(1H,dt，J=11.0;11.5,H-6),S2.81(lH,t,J=11.5;11.5，H-7),4.94(lH，dt,J=2.5;11.5;11.5,H-8),52.49(lH,dd,J=11.5;13.0,H-9)，S2.35(lH,dd，J=3.0;13.5,H-9),S2.42(lH,d,J=12.0,H-13),52.16(m,d,J=12.0,H-13),52.18(3H，s,H-14),S2.28(3H,s,H-15),S6.18(m,d,J=5.5,H-2,),S5.72(lH，d,J=5.5,H-3，),52.74(lH,d,J=10.5,H-5，),54.06(lH,t，J=10.5,H-6，)，52.76(lH，m,H-7，),Sl.50(2H，q,H-8,),51.64(2H,q,J:7.0,H-9，),S6.02(lH，d,J:3.0,H-13，),55.29(m,d,J:3.0,H-13，)，S1.42(3H,s,H-14，)，S1.37(3H,s,H隱15，)；13C-NMR(CDCl3,125MHz):S132.2(C-l),S194.9(C-2),5134.8(C-3),S172,2(C-4)，S50.189(C-5),S79.2(C-6),S57.4(C-7)，49.6(C-8),541.7(C-9),S141.5(C-10),S60.2(C-11),5178.4(C-12)，S38.6(C-13),S19.8(C-14),S20.4(C國15)，S62.7(C-l，),5137.8(C-2')，S133.6(C-3，),557.4(C-4，),S65.4(C-5，)，S77.2(C-6，),S42.7(C-7，),S22.9(C-8,),S39.2(C-9，),S58.4(C-10，),S138.7(C-11，)，S168.9(C-12，),S117.8(C-13，),S16.7(C-14，),523.2(C-15，)；上述图谱结果表明所得化合物结构正确。7、奇蒿二聚体双巯化物7(式(I)中Ri和R2皆为巯基)的制备将实施例1中的30mg的奇蒿二聚体B溶于10ml吡啶中，室温下加入三甲基氯硅垸15mg，TLC监测反应至原料奇蒿二聚体B完全消失，待反应结束后，减压除去溶剂，收集残余物；将上述残余物溶于二甲基甲酰胺(DMF)中，加入硫脲，TLC监测反应至原料奇蒿二聚体B完全消失，反应结束后，加入NaOH溶液进行皂化反应，反应结束后重结晶得到产物7。<image>imageseeoriginaldocumentpage19</image>该双巯代物7为白色粉末，其熔点为181°C184°C，所用仪器为X4型显微熔点测定仪(温度计未校正)。结构确证ESIMSm/z:539[M+H]+(C30H35S2O5).iH-NMR(CDCl3,500顧z):S6.11(lH，t,J:1.5,H-3),S3.08(lH,d,卜10.5，H-5),S4.02(1H,dt,J=10.5;11.0,H-6),S2.68(lH,t,J=11.0;11.0,H-7),3.60(lH，dt,J=2.5;11.0;11.5,H-8),52.48(lH，dd,J=11.5;13.0，H-9)，S2.35(lH,dd,J=3.0;13.5,H-9),S2.42(lH,d,J=12.0,H-13),S2.02(lH,d,J=12.0,H-13),52.16(3H,s，H-14),S2.24(3H，s,H-15),56.13(lH,d,J=5.5,H-2'),S5.68(lH,d,h5.5,H-3，),52.67(lH，d,^10.5,H-5,),S3.87(lH,t,卜10.5,H-6，),S2.62(lH,m,H-7，),S1.49(2H,q,H-8，),51.74(2H,q,J=7.0，H-9，)，S6.01(lH,d,J=3.5,H-13，),55.24(lH,d,J=3.5,H-13，),S1.32(3H,s，H-14，)，51.30(3H,s，H-15，)；13C-NMR(CDCl3,125MHz):S132.2(C-l),S194.6(C-2),5132,7(C-3)，S170.4(C-4),551.2(C-5)，S79.6(C-6),S59.8(C-7)，35.3(C-8),S42.5(C-9),S140.6(C-10),S60.2(C-11),5175.8(C-12),S38.7(C-13),S17.6(C-14),521.2(C-15),S64.1(C-1，),S132.8(C-2，),S132.6(C-3，),S56.3(C-4，),564.6(C-5，),576.2(C-6，),545.8(C-7，),S22.8(C-8，),536.5(C-9，)，S50.2(C-10，),S135.6(C-11'),S168.4(C-12，),S115.6(C-13，),516.6(C-14，),S24.2(C國15，)；上述图谱结果表明所得化合物结构正确。8、奇蒿二聚体氨化物8(式(I)中Ri为氨基，R2为乙酰氧基)的制备将实施例1中8mg的奇蒿二聚体A溶于5ml吡啶中，冰浴条件下滴加入0.5ml二氯亚砜，反应1小时，减压除去溶剂，所得粗产品溶于无水二氯甲垸(DCM)中，加入lml氨的甲醇溶液(lM)，室温搅拌TLC监测反应至氯代物消失，减压浓縮即得产物8。该氨代物8为白色粉末。结构确证ESIMSm/z:548[M+H]+(C32H38N07).iH-NMR(CDCl3,500丽z):S6.14(lH,t,J:1.5,H-3),S3.12(lH,d,卜11.0,H-5),S4.06(1H,dt,J=l1.0;11.0，H-6),52.32(lH,t,J=l1,0;11.0，H-7),2.73(lH,dt,J=2.0;11.0;11.5,H-8),S2.34(lH，dd，J=11.5;13.5,H-9),S2.12(lH,dd,J=3.0;13.5,H-9)，S2.45(lH,d,J=12.0,H-13)，82.06(lH,d，J=12.0,H-13)，52.12(3H,s,H-14)，S2.28(3H，s,H-15)，S6.17(lH,d,J=5.5,H-2，),S5.62(lH，d,J=5.5,H-3，),S2.62(lH,d，J=10.5，H-5，),S3.81(lH,t,J=10.5,H-6，),S2.62(lH,m,H-7，),Sl.52(2H,q,H-8，),51.70(2H,q,J=7.0,H-9，)，S6.01(lH,d,J=3.5,H-13，),S5.22(lH,d,J=3.5，H-13，),S1.36(3H,s,H-14')，S1.28(3H,s,H-15');13C-NMR(CDCl3,125MHz):5131.2(C-l),S194.8(C-2),5132.4(C-3),5170,5(C-4),S51.4(C-5)，S78.2(C-6)，S42.3(C-7),46.2(C-8),S40.1(C-9),S143.6(C-10),S56.2(C-11),5176.2(C-12),S32.7(C-13),S17.4(C-14),S21.5(C扁15),S64.2(C-1，),5133.4(C-2，)，S132.6(C-3，),S56.6(C-4，),564.2(C-5，),S76.2(C扁6，),545.6(C-7，),S22.4(C-8，),S36.6(C-9，),S50.1(C-10，)，S135.2(C誦11，),5168.2(C誦12，),5115.4(C-13，),S16.7(C-14，),524.4(C-15，)；20上述图谱结果表明所得化合物结构正确。9、奇蒿二聚体氯代物9(式(I)中R,为氢，R2为氯)的制备将实施例1中8mg的奇蒿二聚体C溶于5ml吡啶中，冰浴条件下滴加入0.5ml二氯亚砜，反应1小时，减压除去溶剂，即得产物9。该氯代物9为白色粉末，其熔点为198°C202°C，所用仪器为X4型显微熔点测定仪(温度计未校正)。结构确证ESIMSm/z:509[M+H]+(C30H34ClO5).iH-NMR(CDCl3，500画z):S6.18(lH,d，J^5.5，H-2，),S6.12(lH,t，M.0,H扁3),S6.02(lH,d，J=3.0,H-13，)，55.81(lH,d,J=5.5，H-3，),S5.31(lH,d，J=3.0,H-13，)，53.98(lH,t,J=11.0，H-6，),S3.95(lH，dt,J=11.0;11.0,H-6),S3.21(lH,d,J=10.5，H-5),S2.80(lH,d,J=10.5,H-5，),52.69(lH,m，H-7，),S2.62(lH,t,J=11.0;11.0,H-7),S2.51(lH,d,J=12.0,H-13),S2.32(3H,s,H-15)，S2.27(3H，s,H-14),52.02(lH,d,J=12.0，H-13),S1.89(2H，m,H-9),S1.68(2H,q，J=7.0,H-9，)，S1.52(2H,q，H-8,),S1.48(1H，m,H-8),S1.20(lH，m,H國8),S1.46(3H，s，H-14，),S1.65(3H,s:H-15，)；13C-NMR(CDCl3,125MHz):5194.2(C-2),S178.6(C-12),S170.3(C-4),S169.2(C-12，),S143.2(C-10),S140.3(C-ir),S138.2(C-2，),S135.8(C-3),S133.7(C-3，)，S133.8(C-l)，S119.2(C-13,),S80.5(C-6)，577.2(C-6，)，S66.3(C-5，),563.2(C-1，),S61.9(C-11)，S60.8(C-10，),359.4(C-7),S58.2(C匿4，),S52.0(C-5),543.3(C隱7，),S39.7(C-13),S39.6(C-9，),534.5(C隱9),527.2(C-15，),526.5(C-8),523.0(C-8，),S20.3(C-15),S20.2(C-14),517.2(C-14，)。上述图谱结果表明所得化合物结构正确。10、奇蒿二聚体乙酰氧化物IO(式(I)中R!为氢，R2为乙酰氧基)的制备将实施例1中35mg的奇蒿二聚体C溶于5ml吡啶中，室温下滴加入1ml乙酰氯，TLC监测反应至原料完全消失，反应结束后，减压除去溶剂，加入少量二氯甲烷溶解，有机层以5ml饱和NaHC03洗涤三次，二氯甲烷层以无水硫酸钠干燥，过滤，减压浓縮至干，即得产物IO。该乙酰氧化物IO为白色粉末。结构确证ESIMSm/z:533[M+H〗+(C32H3707).^-画R(CDCl3,500固z):56.22(lH,d，片5.5,H扁2，),56.14(lH,t,J^1.0,H-3),S6.03(lH,d,J=3.5，H-13，)，S5.76(lH,d,J=5.5,H-3，),55.33(lH,d,J=3.5，H-13,)，53.95(lH,t,J=11.0,H-6，),S3.92(lH,dt，J=11.0;11.0,H-6),S3.18(lH,d，J=10.5,H-5),S2.82(lH,d,J=10.5,H-5，),S2.72(lH，m，H-7，),S2.64(lH,t,J=11.0;11.0,H-7),S2.52(lH,d,J=12.0,H-13),S2.32(3H,s,H-15),S2.25(3H,s,H國14),S2.06(lH,d,J-12.0,H-13),S2.05(3H,s,H-2，，),S1.88(2H,m,H-9),S1.70(2H,q,J=7.0,H-9，)，S1.52(2H,q,H-8，)，S1.46(1H，m,H画8),S1.18(lH,m,H-8),S1.48(3H,s,H隱14,),S1.65(3H,s，H-15，)；13C-NMR(CDCl3,125MHz):5194.2(C-2),S178.6(C-12),5170.3(C-4),5169.2(C-12，),S169.0(C-r，),S143.2(C-10),5140.3(C-ir)，S138.2(C-2，),5135.8(C-3),S133.7(C-3，),S133.8(C-1),5119,2(C-13，),S81.2(C-10，),580.5(C-6),S77,2(C-6，),S66.3(C-5，),S61.9(C-11),S60.89),S26.5(C-8),S23.0(C-8，),S21.5(C國2"),S20.3(C-15),S20.2(C-14)，S20.2(C國15，),517.2(C-14，)。上述图谱结果表明所得化合物结构正确。实施例3、愈创木内酯类倍半萜二聚体化合物抗癌活性1、实验细胞人结肠癌细胞株HCT-8，人肝癌细胞株Bd7402，人胃癌细胞株BGQ23，人肺癌细胞株A549，人卵巢癌细胞株A2780。将上述细胞株分别培养于添加10%灭活新生小牛血清的RPMI1640完全培养液22中。培养液中添加100IU/mL青霉素和100吗/mL链霉素及10mMHEPES，并置于37°C，5%(^02培养箱中培养。实验用细胞均处于对数生长期。2、实验药物实施例1-2中制备的8种愈创木内酯类倍半萜二聚体化合物奇蒿二聚体A、奇蒿二聚体B、奇蒿二聚体氯代物l、奇蒿二聚体巯化物2、奇蒿二聚体乙酰氧化物3、奇蒿二聚体琥珀酰氧化物4、奇蒿二聚体苄氧羰甲氧基衍生物5、奇蒿二聚体双巯化物7;并以紫杉醇(北京协和药厂，生产批号060103)作为阳性对照药物。以培养基配制浓度为10nM-lOOpM的药物溶液。3、细胞抗癌细胞活性测定采用MTT法进行测定取对数生长期细胞，用胰蛋白酶-EDTA消化液消化后，配制成单细胞悬液，将细胞悬液接种于96孔板，每孔加100pl，HCT-8、Bel濯、BGC823、A549和A2780的接种密度分别为6X104/ml、6X104/ml、5X104/ml、1X105/ml、7X104/ml和5X104/ml，培养24小时后，按组距l:IO用培养液(即含l0%胎牛血清的1640培养基)稀释8种愈创木内酯类倍半萜二聚体化合物和阳性对照药物紫杉醇的药物溶液，使每种药物的浓度分别为100nM、10|iM、lpM、O.lpM、0.01^M，继续培养72小时。然后，每孔加5(HilMTT，37。C孵育4小时后，弃培养基和MTT，每孔立即加200(ilDMSO溶解MTT甲簪颗粒，微型振荡器振荡混匀后，用酶标仪测定光密度(OD)值，参考波长为450nm，检测波长为570nm，最后，根据下述公式计算药物对肿瘤细胞的抑制率，并按照中效方程计算IC5o值抑制率(％)=(对照组平均OD值-给药组平均OD值)/对照组平均OD值x100%(其中OD对照、OD实验为已经扣除OD空自的实验数值)。4、实验结果实验测得的各种药物对5种癌细胞的ICso值如表1所示表1愈创木内酯类倍半萜二聚体化合物的细胞毒性试验结果<table>tableseeoriginaldocumentpage23</column></row><table>奇蒿二聚体B4,36.2>10>103.2奇蒿二聚体氯代物131.24.20.4奇蒿二聚体巯化物27.41.8〉10>103.4奇蒿二聚体乙酰氧化物32.52.44.2>104.6奇蒿二聚体琥珀酰氧化物49.5>106.21.20.5奇蒿二聚体苄氧羰甲氧基衍生物51.26.4〉103.8〉10奇蒿二聚体双巯化物7>104.6〉10>106.2表1数据表明，本发明8种愈创木内酯类倍半萜二聚体化合物均具有不同程度的抗癌细胞的细胞毒活性，其中奇蒿二聚体A对结肠癌、肝癌及卵巢癌活性较好；奇蒿二聚体B对结肠癌及卵巢癌活性较好；奇蒿二聚体氯代物1对五种癌细胞抑制率都较好；奇蒿二聚体巯化物2对肝癌及卵巢癌活性较好；奇蒿二聚体乙酰氧化物3对除肺癌外其余四种癌细胞抑制率较好；奇蒿二聚体琥珀酰氧化物4对肺癌和卵巢癌活性较好而奇蒿二聚体苄氧羰甲氧基衍生物5对结肠和肺癌细胞抑制率较好；奇蒿二聚体双巯化物7对肝癌及卵巢癌活性较好。由此可以得出结论即本发明8种愈创木内酯类倍半萜二聚体化合物均具有不同程度的抗癌细胞的细胞毒活性，可以用于癌症的治疗。24实施例4、愈创木内酯类倍半萜二聚体化合物抗炎活性1.试剂与仪器实验动物Cs7BL/6J小鼠，雄性，1618g，购于中国医学科学院实验动物中心。试剂东亚放免研究所PGE2检测试剂盒(中国人民解放军总医院)；4%巯基乙醇酸钠培养基；5%新生牛血清RPMI1640培养基；D-Hank's生理缓冲液。仪器离心机、细胞培养箱。2.实验样品及配制方法实施例1-2中制备的4种愈创木内酯类倍半萜二聚体化合物奇蒿二聚体A、奇蒿二聚体B、奇蒿二聚体氯代物1、奇蒿二聚体巯化物2;以塞来昔布(Celecoxib)作为阳性对照药物，用DMSO配成0.1mol/L的储备液，实验时用PBS稀释成10—5mol/L。3、细胞抗炎细胞活性测定每只C57BL/6J小鼠腹腔注射4%巯基乙醇酸钠培养基lml，注射后第4天将小鼠断头处死，腹腔注射D-Hank，s生理缓冲液68ml，充分按摩后缓缓吸出腹腔中液体，再重复冲洗腹腔一次，合并细胞悬液。1000rpm离心5min，小心倾去上清，细胞用RPMI1640培养基重悬，将细胞浓度调整为lxl(^个/ml，接种于48孔(0.5ml/孔)细胞板中。37°C，5。/。C02贴壁培养2h。倾去培养基，用D-Hank，s生理缓冲液洗两次，除去未贴壁细胞，每孔加入含有5%新生牛血清的RPMI1640培养基待用。用台盼蓝拒染法测定细胞活性，Giemsa染色法检査所得细胞中巨噬细胞百分率应大于95%。将不同药物加到上述48孔板中的小鼠腹腔巨噬细胞中，37°C，5。/。C02培养箱中培养细胞60min，再加入终浓度lmg/L脂多糖(LPS)，继续培养细胞12h。培养结束，收集细胞上清液，使用东亚放免研究所PGE2检测试剂盒测定细胞培养上清液中前列腺素E2(PGE2)的含量，用下列公式计算化合物对COX-2活性的抑制作用。其中Alps，At和Ae分别表示LPS组，待测化合物组和空白对照组细胞培养上清中PGE2的浓度，IRM表示抑制率。IR(%)=(Alps—At)/(Alps—Ac)x100%4、实验结果实验测得的各种药物对小鼠腹腔巨噬细胞COX-2活性的影响如表2所示表2愈创木内酯类倍半萜二聚体化合物对小鼠腹腔巨噬细胞COX-2活性的影响组别剂量PGE2浓度(ng/105cell)抑制率(％)空白0.10±0.06LPS1fig/ml22.89士18.69奇嵩~■聚体Al(T5mol/L0.22±0.1099.5奇蒿一聚体B10-5mol/L0.48±0.1398.4奇蒿二聚体氯代物l10-5mol/L0.51±0.3198.2奇蒿二聚体巯代物2l(T5mol/L0.32±0.1496.4表2数据表明，本发明的4种愈创木内酯类倍半萜二聚体化合物在10—5mol/L浓度时，对LPS刺激的小鼠腹腔巨噬细胞COX-2活性均有明显的抑制作用，因此该类化合物具有不同程度的抗炎活性。2权利要求1、结构如式(I)所示的化合物式(1)其中，R1为氢、卤素、甲基、乙基、羟基、烷氧基、巯基、氨基、羟代烷氧基、羧代烷氧基、酰氧基、羧基或苄氧羰甲氧基；R2为氢、卤素、甲基、乙基、羟基、烷氧基、巯基、氨基、羟代烷氧基、羧代烷氧基、酰氧基、羧基、苄氧羰甲氧基。2、根据权利要求1所述的化合物，其特征在于所述R,为羟基，所述R2为乙酰氧基。3、根据权利要求1所述的化合物，其特征在于所述&和R2皆为羟基。4、根据权利要求1所述的化合物，其特征在于所述Ri为氢，所述R2为羟基。5、一种制备权利要求2、3或4所述化合物的方法，包括以下步骤1)用乙醇提取奇蒿全草，然后除去乙醇，收集提取物；2)将所述提取物悬浮于水中，依次用石油醚、乙酸乙酯进行萃取；3)将乙酸乙酯层进行硅胶柱层析，用氯仿和甲醇进行梯度洗脱，收集体积比为25:1的氯仿和甲醇混合液的洗脱组分；4)将所述步骤3)得到的组分进行硅胶柱层析，用石油醚和丙酮进行梯度洗脱，收集体积比为4:1的石油醚和丙酮混合液的洗脱组分；5)将所述步骤4)得到的组分用羟丙基葡聚糖凝胶进行纯化，以体积比为1:1的氯仿-甲醇混合液作为洗脱液，收集洗脱组分；6)将所述步骤5)得到的组分用半制备型HPLC进行纯化，得到权利要求2所述的化合物或权利要求3所述的化合物或权利要求4所述的化合物；所述HPLC纯化中所用的流动相为体积比为52:48的甲醇-水混合液。6、制备权利要求1所述化合物的方法，为下述l)至IO)中的任一种方法1)制备Ri为氯,R2为乙酰氧基的权利要求l所述化合物的方法，是将权利要求2所述的化合物与二氯亚砜进行反应得到权利要求1中R4为氯，R2为乙酰氧基的化合物1;2)制备&为巯基，R2为乙酰氧基的权利要求l所述化合物的方法，是将权利要求2所述的化合物与三甲基氯硅烷进行反应，将得到的反应产物再与硫脲进行反应，得到权利要求1中&为巯基,R2为乙酰氧基的化合物2;3)制备R!为乙酰氧基，R2为乙酰氧基的权利要求l所述化合物的方法，是将权利要求2所述的化合物与乙酰氯进行反应，得到权利要求1中&为乙酰氧基，R2为乙酰氧基的化合物3;4)制备&为琥珀酰氧基，R2为乙酰氧基的权利要求l所述化合物的方法，是将权利要求2所述的化合物与琥珀酸酐进行反应，得到权利要求1中R,为琥珀酰氧基，R2为乙酰氧基的化合物4;5)制备R,为苄氧羰甲氧基，R2为乙酰氧基的权利要求l所述化合物的方法，是将权利要求2所述的化合物与溴乙酸苄酯进行反应，得到权利要求1中&为苄氧羰甲氧基，R2为乙酰氧基的化合物5;6)制备R^和R2皆为氯的的权利要求1所述化合物的方法，是将权利要求3所述的化合物与二氯亚砜进行反应，得到权利要求1中&和R2皆为氯的化合物6;7)制备&和R2皆为巯基的的权利要求1所述化合物的方法，是将权利要求3所述的化合物与三甲基氯硅烷进行反应，将得到的反应产物再与硫脲进行反应，得到权利要求1中R,和R2皆为巯基的化合物7;8)制备Ri为氨基，R2为乙酰氧基的权利要求l所述化合物的方法，是将权利要求2所述的化合物与二氯亚砜进行反应，将得到的反应产物再与氨的甲醇溶液进行反应，得到权利要求1中Ri为氨基,R2为乙酰氧基的化合物8;9)制备R,为氢,R2为氯的权利要求1所述化合物的方法，是将权利要求4所述的化合物与二氯亚砜进行反应，得到权利要求l中A为氢，R2为氯的化合物9;10)制备R^为氢,R2为乙酰氧基的权利要求1所述化合物的方法，是将权利要求4所述的化合物与乙酰氯进行反应，得到权利要求1中&为氢,R2为乙酰氧基的化合物10。7、根据权利要求6所述的方法，其特征在于所述的权利要求2或权利要求3或权利要求4所述化合物的制备方法包括以下步骤-1)用乙醇提取奇蒿全草，然后除去乙醇，收集提取物；2)将所述提取物悬浮于水中，依次用石油醚、乙酸乙酯进行萃取；3)将乙酸乙酯层进行硅胶柱层析，用氯仿和甲醇进行梯度洗脱，收集体积比为25:1的氯仿和甲醇混合液的洗脱组分；4)将所述步骤3)得到的组分进行硅胶柱层析，用石油醚和丙酮进行梯度洗脱，收集体积比为4:1的石油醚和丙酮混合液的洗脱组分；5)将所述步骤4)得到的组分用羟丙基葡聚糖凝胶进行纯化，以体积比为i:i的氯仿-甲醇混合液作为洗脱液，收集洗脱组分；6)将所述步骤5)得到的组分用半制备型HPLC进行纯化，得到权利要求2或权利要求3或权利要求4所述的化合物；所述HPLC纯化中所用的流动相为体积比为52:48的甲醇-水混合液。8、式(I)所示的化合物或其药学上可接受的盐在制备预防和/或治疗肿瘤药物和/或抗炎药物中的应用，<formula>formulaseeoriginaldocumentpage4</formula>式(I)其中，R,为氢、卤素、甲基、乙基、羟基、垸氧基、巯基、氨基、羟代垸氧基、羧代垸氧基、酰氧基、羧基、苄氧羰甲氧基；R2为氢、卤素、甲基、乙基、羟基、烷氧基、巯基、氨基、羟代垸氧基、羧代烷氧基、酰氧基、羧基、苄氧羰甲氧基。9、一种预防和/或治疗肿瘤和/或抗炎的药物，它的有效成分为式(I)所示的化合物或其药学上可接受的盐。10、根据权利要求8所述的应用或根据权利要求9所述的药物，其特征在于所述肿瘤为人结肠癌、人肝癌、人胃癌、人肺癌和人卵巢癌中的任一种。全文摘要本发明公开了愈创木内酯类倍半萜二聚体及其制备方法与应用。该愈创木内酯类倍半萜二聚体，结构如式(I)所示。本发明用乙醇提取奇蒿全草，然后除去乙醇，收集提取物，经分离纯化，分别得到式(I)中R₁为羟基、R₂为乙酰氧基的化合物，R₁为氢、R₂为羟基的化合物，以及R₁和R₂皆为羟基的化合物。并在羟基化合物的基础上进行一系列取代反应得到了多种愈创木内酯类倍半萜二聚体。体外抗癌及抗炎活性结果表明愈创木内酯类倍半萜二聚体具有良好的抗癌及抗炎活性。文档编号C07D493/00GK101585841SQ20081011237公开日2009年11月25日申请日期2008年5月22日优先权日2008年5月22日发明者周思祥,勇姜,屠鹏飞,晶温申请人:北京大学