单方或复方壳寡糖制剂及其在防治番茄病毒病中的应用
【专利说明】
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技术领域
[0002] 本发明设及农业技术领域，具体设及一种单方或复方壳寡糖制剂及其在防治番茄 病毒病中的应用。
[0003]
【背景技术】 植物病毒病在植物病害中所占比例仅次于真菌病害，随着设施农业的发展，病毒病在 经济作物上的危害愈来愈重。番茄病毒病一般发病率10%-30%，严重的50%-70%，产量损失 大，对番茄生产造成了严重威胁。番茄病毒病是由烟草花叶病毒、黄瓜花叶病毒、首猜花叶 病毒或其他病毒侵染引起，是番茄的重要病害之一，其病害症状主要表现为花叶型、藤叶 型、条纹型、丛生型、卷叶型和黄顶型。近年来由于反季节蔬菜栽培面积扩大，加上种子带菌 传染和气候条件适宜，W花叶病毒为主病毒引起的番茄病毒病上升迅速，危害严重。目前生 产上防治病毒病的药剂难W有效控制病毒病的危害。因此，为保证我国现代化农业可持续 发展、保障居民健康安全W及生态环境的保护，发展新型安全高效的生物农药产业具有重 要意义。
[0004] 壳寡糖是水溶性的壳聚糖降解产物，壳聚糖(cMtosan)是由甲壳素衍生而来的。 甲壳素（cMtin)又叫甲壳质或者几下质，它广泛存在于微生物、酵母、磨茹的细胞壁中，昆 虫的表皮中，乌贼、贝壳等软体动物的骨骼内。尤其是邮、膀蟹等甲壳类的水生动物的甲壳 中含有丰富的甲壳素。甲壳素在自然界的合成量仅次于纤维素，是地球上第二大再生资源。 [000引壳寡糖(oligocMtosan)是由2-10个氨基葡萄糖Κβ-1，4-糖巧键连接而成，它对 植物的调控作用不同于传统的生物农药和化学农药，不但可W促进作物的生长，提高作物 的品质，壳寡糖可诱导植物的抗病性，对多种真菌、细菌和病毒产生免疫和杀灭作用。
[0006] 且壳寡糖在农业上应用具有微量(PPM级）、高效、低成本、无公害等特点，对我国农 业可持续性发展具有重要意义。
[0007]
【发明内容】
[0008] 本发明的目的就是为了克服现有技术不足，提供了一种单方或复方壳寡糖制剂及 其在防治番茄病毒病中的应用，现有番茄病毒病防治所用化学农药带有的病毒防治率低， 病情会反复，有农药残留的问题。
[0009 ]为了解决上述技术问题，本发明通过下述技术方案得W解决： 一种壳寡糖制剂，所述壳寡糖是经壳聚糖酶酶解制得，该壳寡糖的聚合度为3~30，平均 分子量为3kDa。
[0010]所述壳寡糖的制备方法如下： 1)壳聚糖酶解溶液的制备： 采用生产壳聚糖酶菌种JT-KI，通过菌体富集方法获得壳聚糖酶解溶液;该生产壳聚糖 酶菌种JT-K1，购于华中农业大学。
[0011] 培养条件:2.5%葡萄糖、1%蛋白腺、0.15%憐酸氨二钟、0.05%憐酸二氨钟、0.3%屯水 合硫酸儀，180转数/分、发酵溫度30°C，进行40 L发酵罐的高细胞密度发酵，发酵液离屯、取 上清液，即为壳聚糖酶解溶液。
[0012] 2)3%壳聚糖胶体溶液的制备： 称取壳聚糖粉末15g，加入150 mL蒸馈水，溶胀30 min,加入1 mol/L的HAc 135mL，持 续揽拌2 h，使壳聚糖粉末充分溶解，用1 mol/L的化Ac缓慢调pH为5.0，用相同PH的0.2 mol/L的HAc/NaAc缓冲液定容至500 mL。
[001引3)壳聚糖酶解： 3%壳聚糖胶体加酶量为7 u/g，55 °C水浴12 h，待酶解完全后沸水浴10 min来灭酶活， 冷却后加化0H调抑为8,除去大分子的壳聚糖，6000转/分离屯、15 min,取上清液抽滤后，浓 缩得到高浓度的壳寡糖，再用3kDa孔径的滤膜过滤得到分子量为3kD的壳寡糖。
[0014] 所述壳寡糖制剂是壳寡糖水溶液，浓度为0.014%~0.1%，优选0.02%~0.03%。
[0015] 所述壳寡糖制剂还包括生防菌、润湿剂和填料。
[0016] 壳寡糖的含量为壳寡糖制剂总重量的3%~5%;所述生防菌为多粘芽抱杆菌、侧抱芽 抱杆菌、解淀粉芽抱杆菌中一种或多种;所述润湿剂为月桂醇聚氧乙締酸或十二烷基苯横 酸钢;所述填料为高岭±或娃藻±。
[0017] 壳寡糖制剂还包括有机肥、无机肥、无机复合肥中一种或多种。
[0018] 所述壳寡糖的添加量为壳寡糖制剂总重量的0.1%~0.3%。
[0019] 所述壳寡糖制剂为固体制剂，优选可湿性粉剂。
[0020] 本发明还提供了一种壳寡糖制剂在预防或治疗番茄病毒病中的应用。
[0021] 所述的番茄病毒为烟草花叶病毒、黄瓜花叶病毒、首猜花叶病毒。
[0022] 本发明与现有技术相比，带来的意料不到的技术效果如下： 1、常用的是化学农药植病灵、病毒A、病毒速杀、杀毒抓等溶液，病毒防治率低，病情会 反复，有农药残留;壳寡糖来源丰富，且在农业上应用具有微量(PPM级）、高效、低成本、无公 害等特点，它对植物的调控作用不同于传统的生物农药和化学农药，不但可W促进作物的 生长，提高作物的品质，壳寡糖可诱导植物的抗病性，对多种真菌、细菌和病毒产生免疫和 杀灭作用。
[0023] 2、壳寡糖组合物菌剂加入不同的生防菌内，既能防治病毒病，又能根据生防菌的 不同功能使所得兼有其它作用。
【具体实施方式】
[0024] 本领域技术人员可W借鉴本文内容，适当改进工艺参数实现。特别需要指出的是， 所有类似的替换和改动对本领域技术人员来说是显而易见的，它们都被视为包括在本发 明。
[0025] 下述实施例中的实验方法，如无特殊说明，均为常规方法。壳聚糖:脱乙酷度为 92%，粉末状，购于国药集团。壳寡糖标样[(GlcN)2-(GlcN)6 ]:大连中科格莱克生物科技有 限公司 为了进一步理解本发明，下面结合实施例对本发明进行详细说明。
[0026] -种壳寡糖制剂，所述壳寡糖是经壳聚糖酶酶解制得，该壳寡糖的聚合度为 3~30，平均分子量为3kDa。
[0027] 该壳寡糖的制备方法如下： 1)壳聚糖酶解溶液的制备： 采用生产壳聚糖酶菌种JT-K1，通过菌体富集方法获得壳聚糖酶解溶液;该 生产壳聚糖酶菌种JT-K1，购于华中农业大学。
[002引培养条件:2.5%葡萄糖、1%蛋白腺、0.15%憐酸氨二钟、0.05%憐酸二氨钟、0.3%屯水 合硫酸儀，180转/分、发酵溫度30°C，进行40 L发酵罐的高细胞密度发酵，发酵液离屯、取上 清液，即为壳聚糖酶解溶液，4 °C冷藏备用。
[0029] 2)3%壳聚糖胶体溶液的制备： 称取壳聚糖粉末15g，加入150 mL蒸馈水，溶胀30 min,加入1 mol/L的HAc 135mL，持 续揽拌2 h，使壳聚糖粉末充分溶解，用1 mol/L的化Ac缓慢调pH为5.0，用相同PH的0.2 mol/L的HAc/NaAc缓冲液定容至500 mL，4 °C冷藏备用。
[0030] 3)壳聚糖酶解： 3%壳聚糖胶体加酶量为7 u/g，55 °C水浴12 h，待酶解完全后沸水浴10 min来灭酶活， 冷却后加 NaOH调抑为8，除去大分子的壳聚糖，6000转/分离屯、15 min，取上清液用砂忍漏斗 抽滤后，用旋转蒸发仪浓缩得到高浓度的壳寡糖，再用3W)a孔径的滤膜过滤得到分子量为 3kD的壳寡糖，收集壳寡糖放入真空冷冻干燥机制备成固体状，于4 °C冰箱储存备用。
[0031] 壳寡糖作为活性成分能制备如下制剂:具体为： 1、壳寡糖水溶液，室溫配置成浓度为0.03%。