一种金丝李的组培快繁方法
【技术领域】
[0001] 本发明属于组织培养生产技术领域，本发明涉及一种金丝李的组培快繁方法。
【背景技术】
[0002] 金丝李为常绿乔木，树高达30米，胸径可达1.5米以上;树皮灰褐色。圳对生，革质， 长椭圆形，长6-18厘米，宽2-6厘米，全缘，先端突尖或短渐尖，钝头，基部宽楔形，侧脉5-8 对，在下面明显凸起;叶柄长6-15毫米。花杂性同株;雄花成腋生和顶生的聚伞花序，萼片4， 近圆形，花瓣4,卵形，雄蕊多数，花丝短，合生成4裂的环，花药2室，纵裂，退化雌蕊近四棱 形，柱头盾状凸起;雌花通常单生于叶腋，比雄花大，柱头盾状，中间隆起，子房圆球形，直径 约2.5毫米，具1枚基生胚珠，退化雄蕊的花丝合成4束，短于子房，每束具退化花药6-8。浆果 椭圆形或卵状椭圆形，长3.5-5厘米，直径1-2.5厘米，顶端具宿存的半球形柱头，柄长5-8毫 米。主要分布于我国广西西南部，中心分布区为左、右江流域的龙州、凭祥、宁明、天等、崇 左、大新、靖西、那坡田阳等北热带地区，向东北可延伸至桂中峰丛石山区东缘的忻城，向北 可延伸至南亚热带范围的河池、东兰、凤山、田林、西林、巴马、都安、马山等县，不超过北炜 25° ;云南东南部麻栗坡一带也有分布。垂直分布多在海拔600米以下，最高可达海拔900米。 越南北部也有分布。金丝李渐危种，是国家二极保护植物。其分布区狭窄，零星生长，由于过 度采伐，大树已不多见。因生于石灰岩山上，种子不易发芽，天然更新不良，已逐渐陷入濒危 状态。金丝李是产区石灰岩山地的珍贵树种资源，经济价值很高。木材条纹金黄色，纹理通 直，结构密致，材质坚重，容重为0.96g/cm，干燥后有端裂，不变形，耐腐、耐磨、耐水湿性特 强且不受虫蛀，古建筑经历百年不朽，为广西著名的四大铁木之一，古代多用于建筑庙宇、 桥梁、舰船等，现代多为高级家具、室内装修、模具、器械用材等。根系发达，保持水土的效益 高，为石山区的重要造林树种。幼叶鲜红，也可做风景树。通常用种子繁殖，结实大小年现象 明显，间隔期为1~2年，开花结实期，各年不很定势，热量较高的地区，开花结实较多，结实 期也较长，通常一年开花结实2次，一次为5~8月开花，翌年4~7月果实成熟，另一次为3~4 月开花，当年9~11月果实成熟，以6~7月为主要果熟期。果实成熟后，易遭猴、狸等摘食，需 及时采集，但采收的果实，要求充分成熟，否则不易去掉果皮果肉，且发芽迟缓，甚至不能发 芽。采下的果实，可集中对怄，该草保湿，约经半月，果肉变软或变烂，装入框中置水搓擦冲 洗，漂淘去果皮等杂质，勿伤种皮。种子忌失水，防止日晒或裸露存放，已处理的种子，立刻 婚湿润沙贮藏。种子约有7~8个月的休眠期，少数种子的休眠期可达1年，不宜随采随播，6 ~7月采集的种子，沙藏至翌年3~4月播种。种子千粒重为4500g，含水量须保持30%~ 40%，用条播或点播法。经沙藏催芽的种子，一般播后半月左右发芽，发芽率约65%，另有少 数种粒，迟后陆续发芽。种子发芽现象较奇特，胚芽和胚根分别从子叶的两端抽搐，幼苗成 长后，子叶不腐烂脱落，变为苗木的基部或主侧根的基部。幼苗生长较缓慢，忌日灼霜冻，需 搭棚防护。一般需要培育2年生苗后，方宜出圃混交终止。用于风景绿化，需培育4~5年生大 苗，带土团出圃，一般10年生左右，生长较快速。
[0003] 由此可见金丝李通过直接使用种子播种的方法来繁殖后代，缺点是对种子的保藏 要求高，处理要求也很高，繁殖时间长，出苗率低。
【发明内容】
[0004] 本发明针对上述存在的问题，提供一种金丝李的组培快繁方法，能降低繁殖的成 本，生长周期短、繁殖率高、方便管理、利于工业化生产和自动化监控大大的节约了人力、物 力和田间作物的土地。
[0005] 本发明的方案是通过这样实现的：
[0006] 为了实现上述目的，本发明采用的技术方案如下：
[0007] -种金丝李的组培快繁方法，包括如下步骤：
[0008] (1)外植体的消毒:采摘6-7月份的金丝李叶，使用20-40%乐果乳剂稀释400-600 倍液浸泡5-10min，取出后放入超净工作台使用4%维生素 C水溶液浸泡30min后再3%的次 氯酸进行消毒5-10min，然后用无菌水冲洗3-5次，最后使用灭菌滤纸吸干金丝李叶表面的 无菌水；
[0009] (2)愈伤组织培养:使用解剖刀沿着金丝李叶的茎干位置横切出长15-18cm，宽10-15cm的叶条片，将叶条片放入已经装入愈伤组织培养基的培养皿中，轻压叶条片，在29-31 °C下暗培养8-15天，而后转入26-28Γ下进行8-15天的暗培养，获得金丝李愈伤组织；
[0010] (3)愈伤组织分化芽:将上述得到的愈伤组织移置芽诱导培养基中，其中，芽诱导 培养基的配方为MS+6-8g/L琼脂+25-29g/L蔗糖+0 · 3-0 · 8mg/L 6-苄基嘌呤+0 · 8-1 · 5mg/L萘 乙酸，调节培养基的pH值为6.0-7.5，于25-28°C条件下，光暗培养30-45天后愈伤组织分化 出芽；
[0011] (4)芽生根:待步骤(3)中芽长至5-6cm时，将芽移置根诱导培养基中，其中，根诱导 培养基的配方为MS+6-8g/L琼脂+25-29g/L蔗糖+0 · 8-2 · 5mg/L吲哚乙酸+0 · 5-1 · 5mg/L激动 素+0 · 8-1 · 5mg/L活性炭+0 · 1-0 · 5mg/L瑞毒霜+0 · 5-1 · 5mg/L复硝酸钠+0 · 3-0 · 8mg/L维生素 D2+0.15-0.35mg/L微囊藻素，于25-28°C条件下，光暗培养20-30天，培养出幼苗，组培结束。
[0012] 在本发明中，作为进一步说明，所述每个培养皿放入3-5片的叶条片。
[0013]在本发明中，作为进一步说明，所述愈伤组织培养基的配方为MS+6-8g/L琼脂+25-29g/L蔗糖+0·3-0·8mg/L 6-苄基嘌呤+0·8-1 ·5mg/L萘乙酸，调节培养基的pH值为6·5-7·0; 将培养基放入高温灭菌锅，在121-130°(：、1.1-1.51^/〇112条件下进行灭菌30-501^11，然后取 出冷却至45°C后迅速在超净工作台中倾倒分装到已经经过高温灭菌锅灭菌的培养皿中。 [0014]在本发明中，作为进一步说明，所述培养皿的规格为90 X 15mm;所述装入培养皿中 的培养基为培养皿体积的1 /3-1 /2。
[0015] 在本发明中，作为进一步说明，所述步骤(3)和步骤(4)中的光暗培养周期为光培 养12h，暗培养4h。
[0016] 在本发明中，作为进一步说明，所述光培养的光照强度为1500-1700勒克斯。
[0017] 在本发明中，作为进一步说明，所述金丝李叶为颜色嫩绿、完整、无病虫害;金丝李 叶的采摘时间为晚上1 _2点。
[0018] 综上所述，由于采用了上述技术方案，本发明的有益效果是：
[0019] 1.本发明通过在金丝李生根阶段添加了组合配方提供金丝李生根壮苗所需的因 子，能够提供金丝李的良好生根条件，经过研究发现采用本发明的生根配方，能够快速促进 金丝李种子细胞的分裂，加快出芽时间，且能保证芽苗健康成长，无病害，颜色油绿，芽肉厚 度饱满，出芽率达到100%。其中分裂素需要在生长素存在的情况下才嫩给发挥作用，复配 上的为激动素分裂素、吲哚乙酸为生长素相互作用，保证激动素在有生长素的情况下充分 发挥其作用，吲哚乙酸能够调控植物维管组织的分化、育性，还可以与其他激素相互作用； 微囊藻素中富含有活性氧，植物中低浓度的活性氧作为第二信使能在植物细胞信号转导途 径中介导多种应答反应，但是高浓度的活性氧则引起生物大分子的氧化损伤甚至细胞死 亡，经过试验研究在配方中添加微囊藻素0.15-0.35mg/L，保证能够提供给植物低浓度的活 性氧，不会损伤细胞，起到第二信使的作用，促进赤霉素流向植物系统，促进生长素流向植 物系统，使得根向地性更好，促进直根系生长;复配上的维生素 D2具有能够，能诱导形成不 定根，调节生长、促进生根，但是其的渗透力较差，需要借助外力将其带动流向植物全身，使 其能够快速发挥作用；复硝酚钠能够与植物接触后能迅速渗透到植物体内，促进细胞的原 生质流动，提高细胞活力，维生素 D2在复硝酚钠的带动下也能迅速的渗透至植物体内；在组 培过程中往往会出现黄化现象，一般两个原因，细胞活性不足死亡和病菌感染死亡，瑞毒霜 的复配添加能够有效的抑制病原真菌菌丝体的正常生长或直接杀死病菌，又能促进植物生 长;并具有促进作物根系生长发育、生根壮苗，提且其渗透率极高，两个小时就能移动到茎 部，保证了金丝李在第一时间上拥有健康的培养环境，提高金丝李的成活率。
[0020] 2.本发明利用深夜的金丝李叶进行组培，为金丝李叶进行愈伤组织培养提供良好 的条件，能够快速使金丝李叶形成金丝李叶愈伤组织，进而减少了组培的时间。
[0021] 3.本发明形成金丝李叶愈伤组织后发芽、生根都进行光暗培养，不仅仅通过光培 养促进金丝李叶愈伤组织形成叶绿素，进行光合作用合成能源提供生长所需能量，而且通 过暗培养促进其进行呼吸作用，物质转换，促进生长。
[0022] 4.本发明光培养使用的是较弱的光照强度，不仅提高了金丝李组培的增殖倍数， 缩短周期培养的时间，且采用弱光的光培养能够减少日光灯补光时产生的电耗和产生的热 量，减少降温所需的费用，因此采用此方法可提高生产效率，降低生产成本，有利产业的发 展，通过本发明的方法金丝李的发芽率达到70 %以上。
[0023] 5.本发明的方法有利于工业化生产和自动化监控，大大的节约了人力、物力和田 间作物的土地;在金丝李苗栽培生产领域中具有极大的推广价值。 【【具体实施方式】】
[0024] 实施例1:
[0025] -种金丝李的组培快繁方法，包括如下步骤：
[0026] (1)外植体的消毒:在6月份晚上1点采摘颜色嫩绿、完整、无病虫害的金丝李叶，使 用20 %乐果乳剂稀释400倍液浸泡5min，取出后放入超净工作台使用4 %维生素 C水溶液浸 泡30min后再3%的次氯酸进行消毒5min，然后用无菌水冲洗3次，最后使用灭菌滤纸吸干金 丝李叶表面的无菌水；
[0027] (2)愈伤组织培养:使用解剖刀沿着金丝李叶的茎干位置横切出长15cm，宽IOcm的 叶条片，将3片叶条片放入已经装入是培养皿1/3体积的愈伤组织培养基的培养皿中，轻压 叶条片，在29 °C下暗培养8天，而后转入26 °C下进行8天的暗培养，获得金丝李愈伤组织；其 中，愈伤组织培养基的配方为MS+6g/L琼脂+25g/L蔗糖+0 · 3mg/L 6-苄基嘌呤+0 · 8mg/L萘乙 酸，调节培养基的pH值为6.5;将培养基放入高温灭菌锅，在121°C、I. lkg/cm2条件下进行灭 菌30min，然后取出冷却至45°C后迅速在超净工作台中倾倒分装到已经经过高温灭菌锅灭 菌的培养皿中；