一种用于柑橘黄龙病防控的复配药剂及其制备方法
【专利摘要】本发明公开了一种用于柑橘黄龙病防控的复配药剂及其制备方法，其根据黄龙病防控的客观需要，以中生菌素、盐酸土霉素作为杀菌农药，水杨酸作为抗病调节剂，α?萘乙酸作为生根促进剂，通过合理混配，并采用树干输液的方法进行施药，使制剂优势互补，具备高效、低毒、安全、经济、多功能的特性，可更好的防控黄龙病。
【专利说明】
一种用于柑橘黄龙病防控的复配药剂及其制备方法
技术领域
[0001] 本发明属于植物病害防治技术领域，具体涉及一种用于柑橘黄龙病防控的复配药 剂及其制备方法。
【背景技术】
[0002] 柑橘是世界上最重要的商品水果之一，我国是柑橘的主产国，柑橘产业在我国农 村社会和经济中具有重要的地位和作用。目前，我国多数柑橘主产区都受到了柑橘黄龙病 的严重威胁，该病已在我国广东、广西、福建、海南和台湾的柑橘产区广泛蔓延，并在浙江、 贵州、湖南相继发生，我国有柑橘栽培的19个省、区已有11个遭受危害，受害面积占柑橘总 栽培面积的80%以上，产量占总产量的85%左右。其中广东省24万公顷橘园严重感染该病，年 损失上百亿，严重制约着柑橘产业的发展。
[0003] 目前尚无任何可用的黄龙病抗病柑橘品种。因此，防控柑橘黄龙病主要依靠：1.加 强苗木检疫，选用无病苗木和接穗;2.挖除田间病树，防止病原扩散。但是无病苗木对柑橘 黄龙病并无抗性，因此一段时间后依然会受到柑橘黄龙病侵染;挖除或砍除病树虽然可限 制病害传播，但直接阻碍了柑橘生产，难以被果农接受。目前研究发现，柑橘黄龙病病原为 革兰氏阴性细菌Candidatus Liberibacter asiaticus，因此，积极筛选抗生素进行对症治 疗是一种防控柑橘黄龙病积极可行的方法。
【发明内容】
[0004] 本发明的目的在于提供一种用于柑橘黄龙病防控的复配药剂及其制备方法，其通 过合理混配，以中生菌素、盐酸土霉素作为杀菌农药，水杨酸作为抗病调节剂，萘乙酸作 为生根促进剂，并采用树干输液的方法进行施药，使制剂优势互补，具备高效、低毒、安全、 经济、多功能的特性，可更好的防控黄龙病。
[0005] 为实现上述目的，本发明采用如下技术方案： 一种用于黄龙病防控的复配药剂中含有中生菌素、盐酸土霉素、水杨酸、a_萘乙酸。 [0006] 具体地，每1000mL药剂中含中生菌素5_20g，盐酸土霉素5_20g，水杨酸50_200mg， a-萘乙酸100-300 mg，防冻剂0-10mL，助渗剂0-10 mL，分散剂0-10g，乳化剂0-10g，助溶剂 0-10 mL，余量用去离子水补足。
[0007] 其中，所述防冻剂为乙二醇;所述助渗剂为氮酮;所述分散剂为木质素磺酸钠;所 述乳化剂为十二烷基苯磺酸钠;所述助溶剂为DMS0。
[0008] 所述用于柑橘黄龙病防控的复配药剂的制备方法，是将中生菌素、盐酸土霉素、分 散剂、乳化剂一起加入到锥型混合机中混合2-6小时，将混合后的物料加入到气流粉碎机中 粉碎后，再加入到锥型混合机中混合2小时，使用60目的标准筛进行筛分后，加入部分去离 子水充分搅拌溶解，然后加入防冻剂、助渗剂、助溶剂，水杨酸、萘乙酸，充分搅拌溶解后， 12000g离心30分钟，取上清液加入剩余去离子水调配即得。
[0009] 所述用于黄龙病防控的复配药剂采用树干输液的方法进行施药。
[0010] 中生菌素为N-糖苷类抗生素，是一种高效低毒的农用抗生素，对多种革兰氏阳性、 阴性细菌均有很好的抗菌活性。盐酸土霉素为四环素类农药，同样对多种革兰氏阳性、阴性 细菌均有很好的抑制作用。如果施用单一种类的杀菌剂虽然可以有效降低黄龙病菌浓度， 但长期大量使用单一抗生素可能会使黄龙病菌产生抗药性，从而大大减弱杀菌剂的药效。 因此本发明选用两种不同类型的杀菌剂混配使用，可更好的防控黄龙病。
[0011] 水杨酸是一种极为重要的植物抗病信号调节分子，其可诱导植物积累病程相关蛋 白，增加植物局部抗病性;还可把抗病信号长距离传导至未受侵害的部位，使植物未受侵染 的部位在较长时期内也能激发出较强的系统抗性。但黄龙病菌侵染柑橘后，可通过其自身 编码的一个水杨酸羟化酶，把寄主的水杨酸转化成邻苯二酚，从而使寄主的一部分水杨酸 失活，削弱寄主的抗病反应。针对这种情况，本发明配方中加入了水杨酸，以抵御黄龙病对 寄主抗病反应的破坏，有利于增强病树抗性。
[0012] 黄龙病对柑橘的根系也有很大的破坏作用，柑橘感染该病后出现须根减少，新根 生长受抑制，侧根腐烂等症状，根系大大退化，用手轻拉极易脱落断裂，露出木质部，大大影 响了柑橘树势。为改善这些症状，本发明配方中加入了 a-萘乙酸，该药剂对促进柑橘根系的 形成和发育作用明显，而且药效温和，不易产生药害，有利于病树的新根萌发和根系更新， 最终达到增强树势，提高树体抗病能力的目的。
[0013] 传统的农药外施法，简单易行，但是柑橘黄龙病菌是一种比较特殊的病原菌，其寄 生于柑橘的韧皮部，因此传统的杀菌农药外施后，较难穿透柑橘外表皮，因此药效较差。本 发明采用树干输液的方法施药，可使药剂直接进入树体，到达病菌寄生的部位，大大提高了 药剂的有效性，并使所需的用药量更少，且药液封闭在树体内，因此洒漏在外界环境中的药 量更少，减少了与人体接触的机会，具备安全、低污染的特性，可更好的防控黄龙病。
[0014] 本发明根据黄龙病防控的客观需要，利用中生菌素、盐酸土霉素作为杀菌农药，水 杨酸作为抗病调节剂，萘乙酸作为生根促进剂混配加工，并采用树干输液的方法进行施 药，使制剂优势互补，具备高效、低毒、安全、经济、多功能的特性，可更好的防控黄龙病。根 据检索，相关的研究及专利文献未见有采用中生菌素、盐酸土霉素、水杨酸抗病调节剂和a_ 萘乙酸生根促进剂混配加工成树干注射剂用于防控黄龙病的报道。
【具体实施方式】
[0015] 一种用于黄龙病防控的复配药剂，每1000mL药剂中含中生菌素5-20g，盐酸土霉素 5-20g，水杨酸50-200mg，a-萘乙酸100-300 mg，防冻剂0-10mL，助渗剂0-10 mL，分散剂0-l〇g，乳化剂〇-l〇g，助溶剂0-10 mL，余量用去离子水补足。
[0016] 其中，所述防冻剂为乙二醇;所述助渗剂为氮酮;所述分散剂为木质素磺酸钠;所 述乳化剂为十二烷基苯磺酸钠;所述助溶剂为DMS0。
[0017]所述复配药剂的制备方法为:将中生菌素、盐酸土霉素、分散剂、乳化剂一起加入 到锥型混合机中混合2-6小时，将混合后的物料加入到气流粉碎机中粉碎后，再加入到锥型 混合机中混合2小时，使用60目的标准筛进行筛分后，加入部分去离子水充分搅拌溶解，然 后加入防冻剂、助渗剂、助溶剂，水杨酸、a-萘乙酸，充分搅拌溶解后，12000g离心30分钟，取 上清液加入剩余去离子水调配即得。
[0018]所述用于黄龙病防控的复配药剂采用树干输液的方法进行施药。
[0019] 为了使本发明所述的内容更加便于理解，下面结合【具体实施方式】对本发明所述的 技术方案做进一步的说明，但是本发明不仅限于此。
[0020] 实施例1. 2014年4月在广东省大丰柑橘场随机选取20棵患黄龙病的柑橘树，遵循随机选取原则， 将其中10株作为处理组，采用树干输液法，输入药剂（中生菌素5g，盐酸土霉素20g，水杨酸 50mg，a-萘乙酸200 mg，乙二醇5mL，氮酮5 mL，木质素磺酸钠5g，十二烷基苯磺酸钠5g，DMS0 5 mL，去离子水补足1000mL)，另外10株输入清水做对照，从4月8日开始施药，每月施药一 次，每次施药300mL，共计输液4次。每次施药前分别采集两组植株不同部位的叶片样品各20 片进行DNA提取，并采用实时荧光定量PCR测定植株黄龙病菌Ct值数量的变动情况，结果见 表1和表2。
[0021] 实时荧光定量PCR实验参照文献Wenbin Li et al.，2006。20此的反应体系，引物 终浓度250 nM，探针终浓度150 nM，缓冲液参照takara探针法实时荧光定量PCR试剂盒说明 书。PCR反应程序:95°C预变性20s，然后95°C 5 s，58°C 40 s，40个循环。实验结束后，记录 荧光定量PCR反应的Ct值。
[0022]表1柑橘中黄龙病菌Ct值随时间的变化
表2黄龙病菌浓度(病原菌个数X 105/每克柑橘病样)随时间的变化
结果发现，处理组与对照组的黄龙病菌Ct值与黄龙病菌浓度在处理前无显著差异(P> 0.05)，而两组的Ct值在处理30天、60天、90天和120天后差异显著增大(P〈0.05)，即处理组 病原浓度显著降低，处理组的黄龙病菌浓度降低到对照组的12.69%-2.49%(P〈0.05)。表明 本发明复配药剂对抑制柑橘病树的黄龙病菌有较好的作用。
[0023] 实施例2. 2014年3月在广东省广州市白云区钟落潭柑橘场随机选取20棵患黄龙病的柑橘树，遵 循随机选取原则，将其中10株作为处理组，采用树干输液法，输入药剂（中生菌素20g，盐酸 土霉素5g，水杨酸100mg，a-萘乙酸1〇〇 mg，乙二醇2mL，氮酮2 mL，木质素磺酸钠2g，十二烧 基苯磺酸钠2g，DMS0 2 mL，去离子水补足1000mL)，另外10株输入清水做对照，从3月1日开 始施药，每月施药一次，每次施药300mL，共计输液3次。每次施药前分别采集两组植株不同 部位的叶片样品各20片进行DNA提取，并采用实时荧光定量PCR测定植株黄龙病菌Ct值数量 的变动情况，结果见表3和表4。
[0024] 实时荧光定量PCR实验参照文献Wenbin Li et al.，2006。20此的反应体系，引物 终浓度250 nM，探针终浓度150 nM，缓冲液参照takara探针法实时荧光定量PCR试剂盒说明 书。PCR反应程序:95°C预变性20s，然后95°C 5 s，58°C 40 s，40个循环。实验结束后，记录 荧光定量PCR反应的Ct值。
[0025]表3柑橘中黄龙病菌CT值随时间的变化
表4黄龙病菌浓度(病原菌个数X 105/每克柑橘病样)随时间的变化
结果发现，处理组与对照组的黄龙病菌Ct值与黄龙病菌浓度在处理前无显著差异(P> 0.05)，而两组的Ct值在处理30天、60天、90天和120天后差异显著增大(P〈0.05)，即处理组 病原浓度显著降低，处理组的黄龙病菌浓度降低到对照组的45.79%-9.21%(P〈0.05)。表明 本发明复配药剂对抑制柑橘病树的黄龙病菌有较好的作用。
[0026] 实施例3. 2014年4月在广东省阳江市潭水镇柑橘场随机选取20棵患黄龙病的柑橘树，遵循随机 选取原则，将其中10株作为处理组，采用树干输液法，输入药剂（中生菌素l〇g，盐酸土霉素 10g，水杨酸200mg，a-萘乙酸300 mg，氮酮5 mL，木质素磺酸钠5g，DMS0 5 mL，去离子水补足 1000mL)，另外10株输入清水做对照，从4月5日开始施药，每月施药一次，每次施药300mL，共 计输液4次。每次施药前分别采集两组植株不同部位的叶片样品各20片进行DNA提取，并采 用实时荧光定量PCR测定植株黄龙病菌Ct值数量的变动情况，结果见表5和表6。
[0027] 实时荧光定量PCR实验参照文献Wenbin Li et al.，2006。20此的反应体系，引物 终浓度250 nM，探针终浓度150 nM，缓冲液参照takara探针法实时荧光定量PCR试剂盒说明 书。PCR反应程序:95°C预变性20s，然后95°C 5 s，58°C 40 s，40个循环。实验结束后，记录 荧光定量PCR反应的Ct值。
[0028]表5柑橘中黄龙病菌Ct值随时间的变化
表6黄龙病菌浓度(病原菌个数X 105/每克柑橘病样)随时间的变化
结果发现，处理组与对照组的黄龙病菌ct值与黄龙病菌浓度在处理前无显著差异(P> 0.05)，而两组的Ct值在处理30天、60天、90天和120天后差异显著增大(P〈0.05)，即处理组 病原浓度显著降低，处理组的黄龙病菌浓度降低到对照组的12.48%-0.88%(P〈0.05)。表明 本发明复配药剂对抑制柑橘病树的黄龙病菌有较好的作用。
[0029]以上所述仅为本发明的较佳实施例，凡依本发明申请专利范围所做的均等变化与 修饰，皆应属本发明的涵盖范围。
【主权项】
1. 一种用于柑橘黄龙病防控的复配药剂，其特征在于:所述复配药剂中含有中生菌素、 盐酸土霉素、水杨酸、α-萘乙酸。2. 根据权利要求1所述用于柑橘黄龙病防控的复配药剂，其特征在于:每lOOOmL药剂 中含中生菌素5_20g，盐酸土霉素5_20g，水杨酸50-200mg，a-萘乙酸100-300 mg，防冻剂0-10mL，助渗剂0-10 mL，分散剂0-10g，乳化剂0-10g，助溶剂0-10 mL，余量用去离子水补足。3. 根据权利要求2所述用于柑橘黄龙病防控的复配药剂，其特征在于:所述防冻剂为乙 二醇； 所述助渗剂为氮酮； 所述分散剂为木质素磺酸钠； 所述乳化剂为十二烷基苯磺酸钠； 所述助溶剂为DMS0。4. 一种如权利要求1所述用于柑橘黄龙病防控的复配药剂的制备方法，其特征在于:将 中生菌素、盐酸土霉素、分散剂、乳化剂一起加入到锥型混合机中混合2-6小时，将混合后的 物料加入到气流粉碎机中粉碎后，再加入到锥型混合机中混合2小时，使用60目的标准筛进 行筛分后，加入部分去离子水充分搅拌溶解，然后加入防冻剂、助渗剂、助溶剂，水杨酸、a-萘乙酸，充分搅拌溶解后，12000g离心30分钟，取上清液加入剩余去离子水调配即得。5. -种如权利要求1所述用于柑橘黄龙病防控的复配药剂的应用方法，其特征在于:采 用树干输液的方法进行施药。
【文档编号】A01P1/00GK105851029SQ201610215621
【公开日】2016年8月17日
【申请日】2016年4月8日
【发明人】程保平, 彭埃天, 宋晓兵, 赵弘巍, 凌金锋, 陈霞, 周娟
【申请人】广东省农业科学院植物保护研究所