专利名称：艾滋病病毒o型株的一个免疫学表位及其应用的制作方法
技术领域：
本发明涉及艾滋病病毒O型株的一个免疫学表位及其应用。
最近国外抗艾滋病药物临床研究结果证明，在被动免疫治疗中，组合使用针对HIV-1膜蛋白gp160(膜蛋白gp120及跨膜蛋白gp41的前体蛋白)上的几个特定中和表位的中和抗体(其中包括ELDKWA表位特异性的单克隆抗体2F5)，能抑制HIV-1病毒的粘膜传染以及母婴传播，并能清除血液中的HIV-1病毒(Nature Medicine 1999，5204；Nature Medicine 2000，6200；Nature Medicine 1999，5211)；人免疫缺陷病毒(HIV-1)跨膜蛋白gp41上的主要中和表位ELDKWA的表位特异性单克隆抗体能够体外抑制多种HIV-1病毒株感染靶细胞(J.Virology 1993，676642；AIDS Res.HumanRetroviruses 1994，101651；AIDS 1996，10587)。研究证明，HIV-1能够通过中和表位的限制性变异逃脱中和抗体的中和作用(Immunity 10，431-438，1999)。ELDKWA是公认的重要的HIV-1中和表位，该表位的保守性很强，但在D或K位点的某些限制性变异，能够使病毒逃脱单抗的中和作用。
艾滋病病毒O型株的一个免疫学表位，包括氮末端为天门冬氨酸，碳末端为谷氨酸的两个相邻氨基酸残基。
所述免疫学表位的氮端通常连接的氨基酸残基为亮氨酸；碳端通常连接的氨基酸残基为色氨酸，这时该免疫学表位的氨基酸残基序列为LDEW。在该序列的基础上，通常氮端连接的氨基酸残基为谷氨酸，碳端连接的氨基酸残基为丙氨酸，这时该免疫学表位的氨基酸残基序列为ELDEWA。
发明人通过对HIV数据库(http//hiv-web.lanl.gov)的检索发现，所有HIV-1病毒O型株的跨膜蛋白gp41均带有ELDEWA表位(如表1所示)，而其它HIV-1病毒亚型不带有此表位，进一步证实ELDEWA是HIV-1病毒O型株的特有表位，可用于HIV-1病毒O型株鉴别和诊断的靶位点，也可以作为治疗药物的靶位点。
表1HIV-1病毒O型株带有特征性的ELDEWA表位
本发明的第二个目的是提供能够与本发明艾滋病病毒O型株的免疫学表位专一结合的单克隆抗体。
利用杂交瘤技术，发明人研制出了一株能稳定分泌ELDEWA表位特异性单克隆抗体的小鼠杂交瘤细胞系14D9(鼠单克隆抗体14D9亚型IgG1)。
小鼠杂交瘤细胞系14D9已于2002年06月27日保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心(简称CGMCC)，保藏号为CGMCC №0753。
小鼠杂交瘤细胞系14D9产生的单克隆抗体14D9能够特异性识别HIV-1病毒O型株跨膜蛋白gp41特有的ELDEWA-表位，而不识别其它HIV-1病毒亚型所携带ELDKWA-、ELDKWA-、ELNKWA-和ELEKWA-表位。
下面结合具体实施例对本发明做进一步说明。
实施例2、本发明抗体对HIV-1病毒O型株ELDEWA-表位的特异性识别将杂交瘤细胞系14D9分泌的单克隆抗体与带有不同表位的重组、可溶性gp41融合蛋白进行温浴反应，结果如
图1所示，从图中的结果可以看出，杂交瘤细胞系14D9分泌的单克隆抗体对HIV-1病毒O型株ELDEWA-表位具有特异性识别，图中，A分子量蛋白；B本发明单克隆抗体识别带有ELDEWA表位的rsgp41(GST-rsgp41ELDEWA)〔42KD〕；C本发明单克隆抗体不识别带有ELDKWA表位的rsgp41(GST-rsgp41ELDKWA)；D本发明单克隆抗体不识别GST；E本发明单克隆抗体识别含有ELDEWA表位的GST-ELDEWA(26KD)。
权利要求
1.艾滋病病毒O型株的一个免疫学表位，包括氮末端为天门冬氨酸，碳末端为谷氨酸的两个相邻氨基酸残基。
2.根据权利要求1所述的艾滋病病毒O型株的一个免疫学表位，其特征在于所述免疫学表位的氨基酸残基序列为LDEW。
3.根据权利要求2所述的艾滋病病毒O型株的一个免疫学表位，其特征在于所述免疫学表位的氨基酸残基序列为ELDEWA。
4.与权利要求1-3中任意一项所述艾滋病病毒O型株的免疫学表位专一结合的单克隆抗体。
5.由保藏号为CGMCC №0753的杂交瘤细胞系14D9产生的与艾滋病病毒O型株抗原专一结合的单克隆抗体。
6.鼠类来源的杂交瘤细胞系14D9，CGMCC №0753。
7.权利要求1-3中任意一项所述的免疫学表位在鉴别、诊断HIV-1病毒O型株中的应用。
8.权利要求1-3中任意一项所述的免疫学表位作为治疗药物靶位点的应用。
全文摘要
本发明公开了艾滋病病毒O型株的一个免疫学表位及其应用。本发明的目的是提供艾滋病病毒O型株的一个新的免疫学表位，它包括氮末端为天门冬氨酸，碳末端为谷氨酸的两个相邻氨基酸残基。该两个氨基酸残基组成的表位的氮端通常连接的氨基酸残基为亮氨酸；碳端通常连接的氨基酸残基为色氨酸，这时该免疫学表位的氨基酸残基序列为LDEW。在该序列的基础上，通常氮端连接的氨基酸残基为谷氨酸，碳端连接的氨基酸残基为丙氨酸，这时该免疫学表位的氨基酸残基序列为ELDEWA。该表位可用于HIV－1病毒O型株鉴别和诊断的靶位点，也可以作为治疗药物的靶位点。
文档编号C12P21/08GK1472314SQ0212537
公开日2004年2月4日 申请日期2002年7月29日 优先权日2002年7月29日
发明者陈应华, 董哓楠, 肖翌 申请人:清华大学, 北京清大英华生物技术有限公司