专利名称：：原种事件a2704-12以及用于鉴定生物样品中此事件的方法和试剂盒的制作方法原种事件A2704-12以及用于鉴定生物样品中此事件的方法和试剂盒发明领域本发明涉及用于鉴定生物学样品中存在包含特异性转化事件A2704-12的植物材料的方法和试剂盒，以及包含此事件的转基因大豆植物、植物材料和种子。本发明的大豆植物組合了除草剂耐受表型与农学性能、遗传稳定型以及对相当于在缺乏杂草压力下的非转化大豆品系的不同遗传背景的适应性。发明背景置两者决定。同时，转基因(在外源DNA中)存在于基因组中的不同位置会以不同方式影响植物的总体表型。在农业或工业上通过遗传^作成功地向植物中引入在商业上感兴趣的性状是一个依赖不同因素的复杂过程。遗传转化植物的实际转化和再生仅仅是一系列选择步骤的第一步，这一系列选择步骤包括广泛的遗传描述、培育和田地性状评估，最终选择出原种事件。鉴于在NovelFood/Feed,segregationofGMO和non國GMOproducts和theidentificationofproprietary材料中的讨论，对原种事件的明确鉴定正变得日益重要。理论上，此鉴定方法既快又简单，无需广泛的实验室组织。此外，方法应该提供允许在无专家判读的情况下0艮据需要，在专家审查时也有效)明确确定原种事件的结果。在通过用包含合成的/;W基因(编码对草铵膦(phosphinothricin)耐受)的质粒转化大豆来开发对除草剂Liberty⑧具有抗性的大豆(GlycinemaxL.)的过程中作为原种事件选择出A2704-12，并且其可以作为LibertyLink大豆商业购买。本文描述了用于鉴定生物学样品中原种事件A2704-12的简单且明确方法中的工具。发明简述本发明涉及用于鉴定生物学样品中原种事件A2704-12的方法，其中该方法基于特异性识别A2704-125，和/或3，侧翼序列的引物或探针。更加具体而言，本发明还涉及一种方法，其包括使用至少2个引物的聚合酶链式反应扩增生物学样品中存在的核酸序列，其中一个引物识别A2704-12的5，或3，侧翼区，而另一个引物识别外源DNA内的序列，以便优选得到100和500bp之间的DNA片段。引物可分别识别A2704-125，侧翼区(SEQIDNo.1中从位置1至位置209)或A2704-123'侧翼区(SEQIDNo2中从位置569至位置1000的互补序列)内的序列和外源DNA(SEQIDNo1中从位置210至位置720的互补序列或SEQIDNo2中从位置1至位置568)。识别5，侧翼区的引物可包含本文所述的核苷酸序列SEQIDNo.4,并且识别外源DNA内的序列的引物可包含本文所述的核苷^列SEQIDNo.8。本发明更加特别地涉及用于鉴定生物学样品中原种事件A2704-12的方法，其中方法包括使用分别具有核苷酸序列SEQIDNo.4和SEQIDNo.8的两个引物的聚合i^式反应扩增在生物学样品中存在的核酸序列，以得到约185bp的DNA片段。本发明还涉及本文所述的A2704-12的特异侧翼序列，其可以用于开发特异性鉴定生物学样品中A2704-12的方法。更加具体而言，本发明还涉及A2704-12的5，和/或3，侧翼区，其可用于开发如本文进一步描述的特异性引物和探针。本发明还进一步涉^L^于使用此类特异性引物或探针鉴定生物学样品中A2704-12存在的方法。由选自SEQIDNo1中从核苷酸1至核苷酸209的核苷酸序列或SEQIDNo2中从核普酸569至核苷酸1000的核苷酸序列的互补序列中的17至约200个连续核苷酸的核苷酸序列组成的引物与由选自SEQIDNo1中从核苷酸210至核苷酸720的核苷酸序列的互补序列或SEQIDNo2中从核苷酸1至核苷酸569的核苷酸序列中的17至约200个连续核苷酸的核苷*列的引物相组合。引物还可在其最3，末端包含这些核苷酸序列并且进一步包含无关序列或从所述核苷酸序列衍生但包含错配的序列。本发明还涉及用于鉴定生物学样品中原种事件A2704-12的试剂盒，所述试剂盒包含至少一个特异性识别A2704-125，或3'侧翼区的引物或探4h本发明的试剂盒除了包含特异性识别A2704-125，或3，侧翼区的引物外，还包含用于PCR鉴定方案的特异性识别A2704-12的外源DNA内序列的第二个引物。优选地，本发明的试剂盒包含两个特异性引物，其中一个识别A2704-12的5，侧翼区内的序列，并且另一个识别外源DNA内的序列。特别地，识别5，侧翼区的引物可包含核苷酸序列SEQIDNo.4并且识别转基因的引物可包含核苷g列SEQIDNo.8或本文所述的任何其它引物。本发明还涉及用于鉴定生物学样品中原种事件A2704-12的试剂盒，所述试剂盒包含用于本文所述A2704-12的PCR鉴定方案的具有核苷酸序列SEQIDNo.4和SEQIDNo.8的PCR引物。本发明还涉及用于鉴定生物学样品中原种事件A2704-12的试剂盒，其中试剂盒包含特异性探针，所述特异性探针具有的序列相当于(或互补于)与A2704-12特异性区域具有80%和100%间序列同一性的序列。优选地，探针的序列相当于包含A2704-12的部分5，或3，侧翼区的特异性区域。最优选地，特异性探针具有(或互补于)与SEQIDNo.1中核苦酸160和260间的序列或者SEQIDNo2中核苷酸520和620间的序列具有80%和100%间序列同一性的序列。本发明包含的方法和试剂盒可用于不同的目的，例如但不限于下列鉴定植物、植物材料或产品(例如但不限于包含植物材料或衍生自植物材料的食物或祠料产品(新鲜的或加工的))中A2704-12存在与否；额外地或备选地，本发明的方法和试剂盒可用于鉴定转基因植物材料以便分离转基因和非转基因材料；额外地或备选地，本发明的方法和试剂盒可用于确定包含A2704-12的植物材料的质量(即材料的纯度百分数)。本发明还涉及A2704-12的5，和/或3，侧翼区以及从A2704-125，和/或3，侧翼序列开发的特异性引物和探针。本发明还涉及包含原种事件A2704-12的大豆植物、其部分、细胞、种子和后代植物。此类植物、其部分、细胞、种子和后代植物可以使用本文所述的方法鉴定。发明详述重组DNA分子整合至植物基因组通常会源于细胞或组织的转化(或源于另一种遗传操作)。在特定位点的整合或者是"随机"整合或者是在预定位点整合(如果使用靶向整合方法的话)。因用重组DNA或"转化性DNA，，转化植物细胞或组织而引入到植物基因组中并且来源于此转化性DNA的DNA在下文称作包含一个或多个"转基因"的"外源DNA"。在本发明上下文中"植物DNA"指源自已转化植物的DNA。植物DNA通常将在相应野生型植物的同一遗传基因座中找到.外源DNA可通过重组DNA分子在植物基因组中整合位点的位置和构型表征。重組DNA所插入的植物基因组的位点也称作"插入位点"或"耙位点"。重组DNA向植物基因组内的插入可以伴随着植物DNA的删除，这称作"靼位点删除"。如本文所用的"侧翼区"或"侧翼序列"指位于外源DNA即刻上游并与^目连或者位于外源DNA即刻下游并与之相连的植物基因组中的至少20bp、优选地至少50bp并且至多5000bp的序列。导致外源DNA随机整合的转化方法将产生具有不同侧翼区(对于每一转化体其为特征性的和唯一的)的转化体。当重组DNA通过传统杂交引入植物中时，其在植物基因组中的插入位点或者其侧翼区通常没有改变。如本文所用的"插入区，，指对应于由包含植物基因組中外源DNA的上游和/或下游侧翼区的序列所包含的至少40bp、优选地至少100bp和至多10000bp的区域。考虑到由于物种内突变所产生的微小差异，当杂交^同一物种的植物中时，插入区会保留与包含源自最初转化的植物中外源DNA的上游和下游侧翼区的序列具有至少85%、优选地卯％、更优选地95%和最优选地100%序列同一性。事件被定义为源自遗传工程的(人造的)遗传基因座，其携带有包含至少一个拷贝目的基因的转基因。事件的典型等位基因状况为存在或缺乏外源DNA。事件的表型特征为转基因的表达。在遗传水平，事件是植物的遗传结构的一部分。在分子水平，事件可通过限制性酶镨(例如通过Southern印迹所确定)、通过转基因上游和/或下游侧翼序列、分子标记物的位置和/或转基因的分子构型来表征。通常，用包含至少一个目的基因的转化性DNA转化植物导致产生多个事件，而每一个事件都是唯一的。如本文所用，原种事件是基于转基因的表达和稳定性以及其与包含其的植物的最优农学特性相容性，而选自通过用相同的转化性DNA转化或者通过与此类转化所得的植物回交所得到的事件。因此，原种事件选择标准为一个或多个，优选两个或多个，有利地是下列全部a)外源DNA的存在不损害植物的其它目的特征，例如与农学性能或商业价值有关的那些特性；b)事件通过能够稳定遗传并且对此可开发用于鉴定对照的适宜工具的明确分子构型表征；c)在携带事件的植物于正常农业用途中很可能暴露的环境条件下，目的基因表现出在事件的杂合(或半杂合)和纯合条件下均以商业可接受的水平正确、适当和稳定的空间和时间表型表达。优选外源DNA与允许容易地向目的商业遗传背景进行基因渗入的植物基因组中的位置关联。作为原种事件的事件的状况通过原种事件向不同相关遗传背景的基因渗入以;SJ见察是否遵从例如上面a)、b)和c)中的一个、两个或全部原则来证实。因此，"原种事件，，指符合上述原则的包含外源DNA的遗传基因座。植物、植物材料或后代，例如种子可在其基因组中包含一个或多个原种事件。开发鉴定原种事件或者包含原种事件的植物、植物材料或者包含含有原种事件的植物材料的产品的工具U于原种事件的特异性基因组特性，例如包含外源DNA的基因组区域的特异性限制性酶切图镨、分子标记物或外源DNA的侧翼区序列。一旦测出了外源DNA的一个或两个侧翼区的序列，可通过分子生物学技术开发出特异性识别样品的核酸(DNA或RNA)中该(这些)序列的引物和探针。例如，可开发PCR方法以鉴定生物学样品(例如植物、植物材料或包含植物材料的产品的样品)中的原种事件。此PCR基于至少两个特异性"引物"，一个引物识别原种事件5，或3，侧翼区内的序列，并且另一个识别外源DNA内的序列。引物优选具有在在最优化PCR条件下分别"特异性识别"原种事件5，或3，侧翼区和原种事件外源DNA内序列的15和35个核苷酸之间的序列，以致于从包含原种事件的核酸样品中扩增特异片段("整合片段"或辨别性扩增子)。这意味着在最优化PCR条件下仅仅所靶向的整合片段扩增而植物基因组或外源DNA中其它序列不扩增。适于本发明的PCR引物可以是下列引物-长度为17nt至约210nt的寡核苷酸，其在3，末端包含选自5，侧翼序列(SEQIDNo1中从核苷酸1至核苷酸209)中的至少17个连续核苷酸、优选20个连续核苷酸的核苷酸序列(引物识别5，侧翼序列)；或-长度为17nt至约450nt的寡核苷酸，其在3，末端包含选自3，侧翼序列(SEQIDNo2中从核苷酸569至核苷酸1000的互补序列)中的至少17个连续核苷酸、优选20个连续核苷酸的核苷酸序列(引物识别3，侧翼序列)；或-长度为17nt至约510nt的寡核苷酸，其在3，末端包含选自所插入的DNA序列(SEQIDNo1中从核苷酸210至核苷酸720的互补序列)中的至少17个连续核苷酸、优选20个核苷酸的核苷酸序列(引物识别外源DNA);或-长度为17nt至约570nt的寡核苷酸，其包^逸自所插入的DNA序列(SEQIDNo2中从核苦酸1至核苦酸569)中的至少17个连续核苷酸、优选20个核苷酸的核苷酸序列。当然，引物可长于所述的17个连续核苷酸并且可以是20、21、30、35、50、75、100、150、200nt或者更长。引物可以是完全由选自所述侧翼序列和外源DNA序列的核苷酸序列的核苦酸序列组成。然而，引物的5，末端核苷酸序列(即位于3，的17个连续核苷酸之夕卜)不是关键的。因此，引物的5，序列可以根据需要由选自侧翼序列或外源DNA的核苷酸序列组成，但是可包含几个(例如1、2、5、IO个)错配。引物的5，序列甚至可以完全由与侧翼序列或外源DNA无关的核苷酸序列组成，例如代表限制性酶识别位点的核苷酸序列。此类无关序列或具有错配的侧翼DNA序列应该优选地不长于IOO、更优选地不长于50或者甚至25个核苷酸。此外，适宜的引物可在其3，末端包含跨越植物DNA所衍生序列和外源DNA序列的序列(位于SEQIDNo1中的核苷酸209-210和SEQIDNo2中的核普酸568-569)或者其3，末端由跨越植物DNA所衍生序列和外源DNA序列的序列(位于SEQIDNo1中的核苷酸209-210和SEQIDNo2中的核苷酸568-569)组成，其前M所述的位于3，的17个连续核苷酸不是专有地衍生自SEQIDNo1或2中的外源DNA或植物所衍生序列。因此，适于本发明的PCR引物还可以是下列引物-长度为17nt至约210nt的寡核苷酸，其在3，末端包^逸自SEQIDNo1中从核普酸l至核苷酸215中的至少17个连续核苷酸、优选20个连续核苷酸的核苷酸序列；或誦长度为17nt至约450nt的寡核苷酸，其在3，末端包M自SEQIDNo2中从核苷酸554至核苷酸1000的互补序列中的至少17个连续核苷酸、优选20个连续核苷酸的核苷酸序列；或-长度为17nt至约510nt的寡核苷酸，其在3，末端包M自SEQIDNo1中从核苷酸195至核苷酸720的互补序列中的至少17个连续核苷酸、优选20个核苷酸的核苷酸序列；或-长度为17nt至约570nt的寡核普酸，其包含选自SEQIDNo2中从核苷酸1至核苷酸584中的至少17个连续核苷酸、优选20个核普酸的核苷酸序列。本领域技术人员马上会明白，正确选择的PCR引物对还不包含彼此互补的序列。为了本发明的目的，"SEQIDNo:X所示核苷酸序列的互补序列"是这样的核苷酸序列，即通过将核苷酸替换成基于Chargaff规则(AAT;G<C)的互补核苷酸并且以5，至3，方向(即所示核普酸序列的相反方向)读取而自所示核苷酸序列衍生的核苷酸序列。适宜引物的实例是寡核苷紗列SEQIDNo3、SEQIDNo4、SEQIDNo5(识别5，侧翼序列的引物)SEQIDNo6、SEQIDNo7、SEQIDNo8、SEQIDNo9、SEQIDNo10、SEQIDNo11(识别外源DNA的引物，与识别5，侧翼序列的引物一起4吏用)SEQIDNo12、SEQIDNo13、SEQIDNo14、SEQIDNol5(识别外源DNA的引物，与识别3，侧翼序列的引物一起使用)SEQIDNo16、SEQIDNo17、SEQIDNo18或SEQIDNo19(识别3，侧翼序列的引物)。适宜寡核苷酸引物的其它实例在其3'末端包含下列序列或者其3，末端由下列序列组成a.识别5，侧翼序列的引物-SEQIDNo1中从核苷酸23至核苷酸42的核苷酸序列-SEQIDNo1中从核普酸68至核苷酸87的核苷酸序列-SEQIDNo1中从核苷酸69至核苷酸87的核苷酸序列隱SEQIDNol中从核苷酸69至核苷酸88的核苷^列-SEQIDNo1中从核苷酸134至核苷酸153的核普酸序列-SEQIDNo1中从核苷酸22至核苷酸42的核苷酸序列-SEQIDNo1中从核苷酸30至核苷酸49的核苷酸序列-SEQIDNo1中从核苷酸67至核苷酸87的核苷酸序列-SEQIDNo1中从核苷酸70至核苷酸87的核苷酸序列-SEQIDNo1中从核苷酸70至核苷酸88的核苷酸序列-SEQIDNo1中从核苷酸76至核苷酸95的核苷酸序列-SEQIDNol中从核苷酸78至核苷酸97的核苷酸序列-SEQIDNo1中从核苷酸133至核苷酸152的核苷酸序列-SEQIDNol中从核苷酸21至核苷酸42的核苷酸序列-SEQIDNol中从核苷酸31至核苷酸49的核苷酸序列-SEQIDNo1中从核苷酸34至核苦酸63的核苷酸序列-SEQIDNo1中从核苷酸66至核苷酸87的核苷酸序列-SEQIDNol中从核苷酸68至核苷酸88的核苷酸序列-SEQIDNol中从核苷酸73至核苷酸92的核苷酸序列-SEQIDNol中从核苷酸75至核普酸95的核苷酸序列-SEQIDNo1中从核苷酸77至核苷酸97的核苷酸序列-SEQIDNol中从核苷酸77至核苦酸95的核苷酸序列-SEQIDNo1中从核苷酸134至核苷酸152的核苷酸序列-SEQIDNo1中从核苷酸154至核苷酸173的核苷酸序列-SEQIDNol中从核苷酸22至核苷酸43的核苷酸序列-SEQIDNo1中从核苷酸33至核苷酸53的核苷酸序列-SEQIDNol中从核苷酸35至核苷酸53的核苷酸序列-SEQIDNo1中从核苷酸67至核苷酸88的核苷酸序列-SEQIDNol中从核苷酸72至核苷酸92的核苷酸序列-SEQIDNol中从核苷酸74至核苷酸92的核苷酸序列-SEQIDNol中从核香酸76至核苷酸97的核苦酸序列-SEQIDNo1中从核香酸78至核苷酸95的核苷酸序列-SEQIDNo1中从核苷酸135至核苷酸152的核苷酸序列-SEQIDNo1中从核苷酸154至核苷酸171的核苷酸序列-SEQIDNol中从核苷酸32至核苷酸53的核苷酸序列-SEQIDNol中从核苷酸36至核苦酸57的核普酸序列-SEQIDNol中从核苷酸71至核普酸92的核苷酸序列-SEQIDNo1中从核苷酸74至核苷酸95的核苷酸序列-SEQIDNo1中从核苷酸75至核苷酸92的核普酸序列-SEQIDNo1中从核苷酸32至核苷酸51的核苷酸序列-SEQIDNo1中从核苦酸31至核苷酸51的核苷酸序列-SEQIDNo1中从核苷酸33至核苷酸51的核苷酸序列-SEQIDNo1中从核苷酸30至核苷酸51的核苷酸序列-SEQIDNo1中从核苷酸34至核苷酸51的核苦酸序列-SEQIDNo1中从核苦酸205至核苷酸226的核苷酸序列b.识別外源DNA序列的引物，与识别5，侧翼序列的引物一起^f吏用-SEQIDNo1中从核苷酸201至核苷酸220的核苷酸序列的互补序列-SEQIDNo1中从核苷酸220至核苷酸239的核苷酸序列的互补序列-SEQIDNo1中从核苷酸361至核苷酸380的核苷酸序列的互补序列画SEQIDNo1中从核苷酸366至核苷酸385的核苷紗列的互补序列國SEQIDNo1中从核苷酸201至核苷酸219的核普絲列的互补序列画SEQIDNo1中从核苷酸220至核苷酸238的核苷紗列的互补序列画SEQIDNo1中从核普酸221至核苷酸239的核普絲列的互补序列-SEQIDNo1中从核苷酸358至核苷酸377的核苷酸序列的互补序列-SEQIDNo1中从核苷酸359至核苷酸378的核苷酸序列的互补序列-SEQIDNo1中从核苷酸361至核苷酸379的核普酸序列的互补序列國SEQIDNo1中从核苷酸366至核苷酸384的核苷,列的互补序列-SEQIDNo1中从核苷酸368至核苷酸387的核苷酸序列的互补序列國SEQIDNo1中从核苷酸496至核苷酸515的核苦紗列的互补序列-SEQIDNo1中从核苷酸656至核苷酸675的核苷酸序列的互补序列-SEQIDNo1中从核苷酸201至核苷酸218的核苦酸序列的互补序列-SEQIDNo1中从核苷酸220至核苷酸237的核苷酸序列的互补序列-SEQIDNo1中从核苷酸221至核苷酸238的核苷酸序列的互补序列-SEQIDNo1中从核苷酸220至核苷酸240的核苷酸序列的互补序列-SEQIDNo1中从核苷酸221至核苷酸240的核苷酸序列的互补序列-SEQIDNo1中从核苷酸251至核苷酸270的核苷酸序列的互补序列-SEQIDNo1中从核苷酸252至核苷酸271的核苷酸序列的互补序列-SEQIDNo1中从核苷酸253至核苷酸272的核苷酸序列的互补序列-SEQIDNo1中从核苷酸359至核苷酸377的核苷酸序列的互补序列-SEQIDNo1中从核苷酸361至核苷酸378的核苷酸序列的互补序列-SEQIDNo1中从核苷酸358至核普酸378的核苷酸序列的互补序列-SEQIDNo1中从核苷酸359至核苷酸379的核苷酸序列的互补序列-SEQIDNo1中从核香酸361至核苷酸382的核苦酸序列的互补序列-SEQIDNo1中从核苷酸366至核苷酸383的核苷酸序列的互补序列-SEQIDNo1中从核苷酸368至核苷酸386的核苷酸序列的互补序列-SEQIDNo1中从核苷酸366至核苷酸386的核普酸序列的互补序列-SEQIDNo1中从核苷酸375至核苷酸393的核苷酸序列的互补序列画SEQIDNo1中从核苷酸375至核苷酸394的核苷紗列的互补序列画SEQIDNo1中从核苷酸496至核苷酸514的核苷紗列的互补序列-SEQIDNo1中从核苷酸498至核苷酸515的核苷酸序列的互补序列-SEQIDNo1中从核苷酸562至核苷酸581的核苷酸序列的互补序列画SEQIDNo1中从核苷酸608至核苷酸627的核苷紗列的互补序列-SEQIDNo1中从核苷酸651至核苷酸670的核普酸序列的互补序列-SEQIDNo1中从核苷酸655至核苷酸674的核苷酸序列的互补序列-SEQIDNo1中从核苷酸656至核苷酸674的核苷酸序列的互补序列-SEQIDNo1中从核苷酸656至核苷酸676的核苷酸序列的互补序列-SEQIDNo1中从核苷酸669至核香酸678的核香酸序列的互补序列-SEQIDNo1中从核苷酸252至核苷酸270的核苷酸序列的互补序列-SEQIDNo1中从核苷酸253至核苷酸271的核苷酸序列的互补序列-SEQIDNo1中从核苷酸251至核苷酸271的核苷酸序列的互补序列-SEQIDNo1中从核苷酸252至核苷酸272的核苷酸序列的互补序列-SEQIDNo1中从核苷酸267至核苷酸286的核苷酸序列的互补序列誦SEQIDNo1中从核苷酸359至核苷酸376的核普酸序列的互补序列-SEQIDNo1中从核苷酸358至核苷酸379的核苷酸序列的互补序列-SEQIDNo1中从核苷酸362至核苷酸379的核苷酸序列的互补序列-SEQIDNo1中从核苷酸359至核苷酸380的核苷酸序列的互补序列-SEQIDNo1中从核苷酸368至核苷酸385的核苷酸序列的互补序列-SEQIDNo1中从核苷酸368至核苷酸388的核苷酸序列的互补序列-SEQIDNo1中从核苷酸375至核苷酸392的核苷酸序列的互补序列-SEQIDNo1中从核苷酸376至核苷酸393的核苷酸序列的互补序列-SEQIDNo1中从核苷酸376至核苷酸394的核苷酸序列的互补序列-SEQIDNo1中从核苷酸376至核苷酸395的核苷酸序列的互补序列-SEQIDNo1中从核苷酸440至核普酸459的核香酸序列的互补序列-SEQIDNo1中从核苷酸442至核苷酸461的核苷酸序列的互补序列画SEQIDNo1中从核苷酸496至核苷酸513的核苷,列的互补序列-SEQIDNo1中从核苷酸556至核普酸575的核香酸序列的互补序列-SEQIDNo1中从核苷酸558至核苷酸577的核苷酸序列的互补序列-SEQIDNo1中从核苷酸561至核苷酸580的核苦酸序列的互补序列國SEQIDNo1中从核苷酸563至核苷酸582的核苦紗列的互补序列-SEQIDNo1中从核苷酸562至核苷酸582的核苷酸序列的互补序列-SEQIDNo1中从核苷酸608至核苷酸628的核苦酸序列的互补序列-SEQIDNo1中从核苷酸637至核苷酸656的核苷酸序列的互补序列-SEQIDNo1中从核苷酸644至核苷酸663的核苦酸序列的互补序列-SEQIDNo1中从核苷酸651至核苷酸669的核普酸序列的互补序列-SEQIDNo1中从核苷酸651至核苷酸671的核苦酸序列的互补序列-SEQIDNo1中从核苷酸656至核苷酸673的核苦酸序列的互补序列-SEQIDNo1中从核苷酸655至核普酸675的核苷酸序列的互补序列-SEQIDNo1中从核苷酸659至核苷酸677的核苦酸序列的互补序列-SEQIDNo1中从核苷酸659至核苷酸679的核苷酸序列的互补序列-SEQIDNo1中从核苷酸201至核苷酸222的核苦酸序列的互补序列-SEQIDNo1中从核苷酸204至核苦酸225的核苷酸序列的互补序列誦SEQIDNo1中从核苦酸223至核苷酸240的核苦^^列的互补序列-SEQIDNo1中从核苷酸223至核苷酸241的核普酸序列的互补序列-SEQIDNo1中从核苷酸220至核普酸241的核普酸序列的互补序列-SEQIDNo1中从核苷酸221至核苷酸241的核苷酸序列的互补序列-SEQIDNo1中从核苷酸253至核苷酸270的核苷酸序列的互补序列隱SEQIDNo1中从核苷酸251至核苷酸272的核苷絲列的互补序列-SEQIDNo1中从核苷酸252至核苷酸273的核苷酸序列的互补序列-SEQIDNo1中从核苷酸253至核普酸274的核苷酸序列的互补序列-SEQIDNo1中从核苷酸268至核苷酸289的核苷酸序列的互补序列-SEQIDNo1中从核苷酸377至核苷酸394的核苷酸序列的互补序列-SEQIDNo1中从核苷酸375至核苷酸395的核苷酸序列的互补序列-SEQIDNo1中从核苷酸440至核苷酸458的核苷酸序列的互补序列-SEQIDNo1中从核苷酸442至核苷酸460的核苷酸序列的互补序列画SEQIDNo1中从核苷酸440至核苷酸460的核苷紗列的互补序列-SEQIDNo1中从核苷酸442至核普酸462的核苷酸序列的互补序列-SEQIDNo1中从核苷酸492至核苷酸513的核苷酸序列的互补序列画SEQIDNo1中从核苷酸503至核苷酸522的核苷紗列的互补序列-SEQIDNo1中从核苷酸556至核苷酸574的核苦酸序列的互补序列-SEQIDNo1中从核苷酸556至核普酸576的核苷酸序列的互补序列-SEQIDNo1中从核苷酸562至核苷酸579的核苷酸序列的互补序列-SEQIDNo1中从核苷酸563至核苷酸581的核苷酸序列的互补序列-SEQIDNo1中从核苷酸563至核苷酸583的核苷酸序列的互补序列-SEQIDNo1中从核苷酸562至核苷酸583的核苷酸序列的互补序列-SEQIDNo1中从核苦酸608至核苷酸625的核苷酸序列的互补序列國SEQIDNo1中从核苷酸608至核苷酸629的核苷絲列的互补序列-SEQIDNo1中从核苷酸644至核苷酸662的核苷酸序列的互补序列-SEQIDNo1中从核苷酸651至核苷酸668的核苷酸序列的互补序列-SEQIDNo1中从核苷酸651至核苷酸672的核普酸序列的互补序列-SEQIDNo1中从核苷酸655至核苷酸676的核苷酸序列的互补序列-SEQIDNo1中从核苷酸655至核苷酸677的核苷酸序列的互补序列-SEQIDNo1中从核苷酸659至核苷酸680的核苷酸序列的互补序列-SEQIDNo1中从核苷酸657至核苷酸688的核苷酸序列的互补序列-SEQIDNo1中从核苷酸223至核苷酸242的核苷酸序列的互补序列-SEQIDNo1中从核苷酸267至核普酸288的核普酸序列的互补序列-SEQIDNo1中从核苷酸368至核苷酸389的核苷酸序列的互补序列-SEQIDNo1中从核苷酸375至核苷酸396的核苷酸序列的互补序列-SEQIDNo1中从核苷酸376至核苷酸397的核苦酸序列的互补序列-SEQIDNo1中从核苷酸440至核苷酸457的核苷酸序列的互补序列-SEQIDNo1中从核苷酸442至核苷酸459的核苷酸序列的互补序列-SEQIDNo1中从核苷酸442至核苷酸463的核苷酸序列的互补序列-SEQIDNo1中从核苷酸534至核苷酸553的核苷酸序列的互补序列-SEQIDNo1中从核苷酸558至核苷酸575的核苷酸序列的互补序列-SEQIDNo1中从核苷酸556至核苷酸577的核苷酸序列的互补序列-SEQIDNo1中从核苷酸563至核苷酸580的核苷酸序列的互补序列-SEQIDNo1中从核苷酸563至核苷酸584的核苷酸序列的互补序列-SEQIDNo1中从核苷酸644至核苷酸661的核苷酸序列的互补序列-SEQIDNo1中从核苷酸645至核苷酸662的核苷酸序列的互补序列-SEQIDNo1中从核苷酸644至核苷酸665的核苷酸序列的互补序列-SEQIDNo1中从核苷酸645至核苷酸666的核苷酸序列的互补序列-SEQIDNo1中从核普酸325至核苷酸342的核苷酸序列的互补序列-SEQIDNo1中从核苷酸503至核苷酸520的核苷酸序列的互补序列-SEQIDNo1中从核苷酸534至核苷酸554的核苷酸序列的互补序列-SEQIDNo1中从核苷酸221至核苷酸242的核苷酸序列的互补序列-SEQIDNo1中从核苷酸505至核苷酸522的核苷酸序列的互补序列-SEQIDNo1中从核苷酸534至核苷酸551的核苷酸序列的互补序列-SEQIDNo1中从核苷酸534至核苷酸555的核苷酸序列的互补序列-SEQIDNo1中从核苷酸536至核苷酸557的核普酸序列的互补序列-SEQIDNo1中从核苷酸551至核苷酸570的核苷酸序列的互补序列-SEQIDNo1中从核苷酸551至核苷酸571的核苷酸序列的互补序列-SEQIDNo1中从核苷酸551至核苷酸572的核苷酸序列的互补序列c.识别外源DNA序列的引物，与识别3，侧翼序列的引物一起4吏用-SEQIDNo2中从核苷酸955至核苷酸974的核苷酸序列的互补序列-SEQIDNo2中从核苷酸955至核苷酸973的核苷酸序列的互补序列-SEQIDNo2中从核苷酸955至核苷酸972的核苷酸序列的互补序列-SEQIDNo2中从核苷酸958至核苷酸975的核苷酸序列的互补序列画SEQIDNo2中从核苷酸958至核苷酸977的核苷断列的互补序列-SEQIDNo2中从核苷酸917至核苷酸934的核苷酸序列的互补序列-SEQIDNo2中从核苷酸947至核苷酸968的核苷酸序列的互补序列-SEQIDNo2中从核苷酸951至核苷酸968的核苷酸序列的互补序列-SEQIDNo2中从核苷酸951至核苷酸972的核苷酸序列的互补序列-SEQIDNo2中从核苷酸958至核苷酸976的核苷酸序列的互补序列-SEQIDNo2中从核苷酸955至核苷酸976的核苷絲列的互补序列-SEQIDNo2中从核苷酸958至核苷酸979的核苷酸序列的互补序列d.识别3，侧翼序列的引物-SEQIDNo2中从核苷酸151至核苷酸170的核苦酸序列-SEQIDNo2中从核苷酸152至核苷酸171的核苷酸序列-SEQIDNo2中从核苷酸6至核苦酸25的核苷酸序列-SEQIDNo2中从核苷酸148至核苷酸167的核苷酸序列-SEQIDNo2中从核苷酸151至核苷酸171的核苷酸序列-SEQIDNo2中从核苷酸152至核苷酸170的核普酸序列-SEQIDNo2中从核苷酸153至核苷酸171的核香酸序列-SEQIDNo2中从核苷酸5至核苷酸25的核苷酸序列-SEQIDNo2中从核苷酸7至核苷酸25的核普酸序列-SEQIDNo2中从核苷酸67至核苷酸86的核苷酸序列-SEQIDNo2中从核苷酸89至核普酸108的核苷酸序列-SEQIDNo2中从核苷酸134至核苷酸153的核苷酸序列-SEQIDNo2中从核苷酸147至核苷酸167的核苷酸序列-SEQIDNo2中从核苷酸150至核苷酸171的核苷酸序列-SEQIDNo2中从核苷酸153至核苷酸170的核苷酸序列-SEQIDNo2中从核苷酸154至核苷酸171的核苷酸序列-SEQIDNo2中从核苷酸168至核苷酸187的核苷酸序列-SEQIDNo2中从核苦酸169至核苷酸187的核苷酸序列-SEQIDNo2中从核苷酸171至核苷酸l卯的核苷酸序列-SEQIDNo2中从核苷酸197至核苷酸216的核普酸序列-SEQIDNo2中从核苷酸236至核苷酸255的核普酸序列-SEQIDNo2中从核苷酸280至核苷酸299的核苷酸序列-SEQIDNo2中从核苷酸4至核苷酸25的核苷酸序列-SEQIDNo2中从核苦酸8至核苷酸25的核苷酸序列-SEQIDNo2中从核苷酸63至核苷酸82的核苷酸序列-SEQIDNo2中从核苷酸66至核苷酸86的核苷酸序列-SEQIDNo2中从核苷酸68至核苷酸87的核苷酸序列-SEQIDNo2中从核苷酸90至核普酸108的核苷酸序列-SEQIDNo2中从核苷酸93至核苷酸112的核苷酸序列-SEQIDNo2中从核普酸94至核苷酸113的核苷酸序列-SEQIDNo2中从核苷酸96至核苷酸115的核苷酸序列-SEQIDNo2中从核苷酸101至核苷酸120的核苷酸序列-SEQIDNo2中从核苷酸134至核苷酸154的核苷酸序列-SEQIDNo2中从核苷酸146至核苷酸167的核普酸序列-SEQIDNo2中从核苷酸150至核苦酸167的核苷酸序列-SEQIDNo2中从核苷酸170至核苷酸190的核苷酸序列-SEQIDNo2中从核苷酸172至核普酸190的核苷酸序列-SEQIDNo2中从核苷酸186至核苷酸205的核苷酸序列-SEQIDNo2中从核苷酸189至核苷酸208的核苷酸序列-SEQIDNo2中从核苷酸l卯至核苷酸209的核苷酸序列-SEQIDNo2中从核苷酸191至核苷酸210的核苷酸序列-SEQIDNo2中从核苷酸195至核苷酸214的核香酸序列-SEQIDNo2中从核苷酸196至核苷酸216的核苷酸序列-SEQIDNo2中从核苷酸196至核苷酸214的核苷酸序列-SEQIDNo2中从核苷酸198至核苷酸216的核苷酸序列-SEQIDNo2中从核苷酸199至核苷酸216的核苷酸序列-SEQIDNo2中从核苷酸208至核苷酸227的核苷酸序列-SEQIDNo2中从核普酸234至核苷酸253的核苷酸序列-SEQIDNo2中从核苦酸235至核苷酸255的核普酸序列-SEQIDNo2中从核苷酸279至核苷酸299的核苷酸序列-SEQIDNo2中从核苷酸281至核苷酸299的核苷酸序列-SEQIDNo2中从核苷酸285至核苷酸304的核苷酸序列-SEQIDNo2中从核普酸296至核苷酸315的核苷酸序列-SEQIDNo2中从核苷酸396至核苷酸415的核苷酸序列-SEQIDNo2中从核普酸64至核苷酸82的核苷酸序列-SEQIDNo2中从核苷酸65至核苷酸86的核苷酸序列-SEQIDNo2中从核苷酸67至核苷酸87的核苷酸序列-SEQIDNo2中从核苷酸75至核苦酸92的核苷酸序列-SEQIDNo2中从核苷酸91至核苷酸108的核苷酸序列-SEQIDNo2中从核苷酸92至核苷酸112的核苷酸序列-SEQIDNo2中从核苷酸93至核苷酸113的核苷酸序列-SEQIDNo2中从核苷酸94至核苷酸112的核苷酸序列-SEQIDNo2中从核苷酸95至核苷酸115的核苷酸序列-SEQIDNo2中从核普酸95至核苷酸113的核苷酸序列-SEQIDNo2中从核苷酸97至核苷酸115的核普酸序列-SEQIDNo2中从核苷酸100至核苷酸120的核苷酸序列-SEQIDNo2中从核苷酸132至核苷酸153的核苷酸序列-SEQIDNo2中从核苷酸133至核苷酸154的核苷酸序列-SEQIDNo2中从核苷酸163至核苷酸182的核苷^列-SEQIDNo2中从核苷酸165至核香酸184的核苷酸序列-SEQIDNo2中从核苷酸167至核苷酸187的核苷酸序列-SEQIDNo2中从核苷酸169至核香酸190的核苷酸序列-SEQIDNo2中从核苷酸173至核苷酸190的核苷酸序列-SEQIDNo2中从核苷酸187至核苷酸205的核苷酸序列-SEQIDNo2中从核苷酸189至核苷酸209的核苷酸序列-SEQIDNo2中从核苷酸190至核苦酸210的核苷酸序列-SEQIDNo2中从核苦酸l卯至核苷酸208的核苷酸序列-SEQIDNo2中从核苷酸191至核苷酸209的核苷酸序列-SEQIDNo2中从核苷酸192至核苷酸210的核苷酸序列-SEQIDNo2中从核苷酸194至核苷酸214的核苷酸序列-SEQIDNo2中从核苷酸197至核苷酸214的核苷酸序列-SEQIDNo2中从核苷酸233至核苷酸253的核苷酸序列-SEQIDNo2中从核苷酸234至核苷酸255的核苷酸序列-SEQIDNo2中从核苷酸235至核普酸253的核苷^列-SEQIDNo2中从核苷酸282至核苷酸299的核苷酸序列-SEQIDNo2中从核苷酸295至核苷酸315的核苷酸序列-SEQIDNo2中从核苷酸297至核苷酸315的核苷酸序列-SEQIDNo2中从核苷酸397至核苷酸415的核苷酸序列-SEQIDNo2中从核苷酸65至核苷酸82的核苷酸序列-SEQIDNo2中从核苷酸66至核苷酸87的核苷酸序列-SEQIDNo2中从核苷酸75至核苷酸96的核苷酸序列-SEQIDNo2中从核苷酸91至核普酸112的核苷酸序列-SEQIDNo2中从核苷酸92至核苷酸112的核苷酸序列-SEQIDNo2中从核苷酸94至核苷酸115的核苷酸序列-SEQIDNo2中从核苷酸95至核苦酸112的核普酸序列-SEQIDNo2中从核苷酸98至核苷酸115的核苷酸序列-SEQIDNo2中从核苷酸99至核苷酸120的核苷酸序列-SEQIDNo2中从核苷酸162至核苷酸182的核苷酸序列-SEQIDNo2中从核苷酸164至核苷酸182的核苷酸序列-SEQIDNo2中从核苷酸164至核苷酸184的核苷酸序列-SEQIDNo2中从核苷酸164至核苷酸184的核苷酸序列-SEQIDNo2中从核苷酸184至核苷酸205的核苦酸序列-SEQIDNo2中从核苷酸187至核苷酸208的核苷酸序列-SEQIDNo2中从核苷酸188至核苷酸205的核苷酸序列-SEQIDNo2中从核苷酸188至核苷酸209的核苷酸序列-SEQIDNo2中从核苷酸189至核苷酸210的核苷酸序列-SEQIDNo2中从核苷酸191至核普酸208的核苷酸序列-SEQIDNo2中从核苷酸192至核苷酸209的核苷酸序列-SEQIDNo2中从核苷酸193至核苷酸214的核苷酸序列-SEQIDNo2中从核苷酸205至核苷酸212的核苷酸序列-SEQIDNo2中从核苷酸232至核苷酸253的核苷酸序列-SEQIDNo2中从核苷酸236至核普酸253的核苷酸序列-SEQIDNo2中从核苷酸242至核苷酸261的核苷酸序列-SEQIDNo2中从核苷酸278至核苷酸299的核苷酸序列-SEQIDNo2中从核苷酸283至核苷酸304的核苷酸序列-SEQIDNo2中从核苷酸287至核苷酸304的核苷,列-SEQIDNo2中从核苷酸294至核苷酸315的核苷酸序列-SEQIDNo2中从核苷酸298至核苷酸315的核苷酸序列-SEQIDNo2中从核苷酸332至核苷酸349的核苷酸序列-SEQIDNo2中从核苷酸398至核苷酸415的核苷酸序列-SEQIDNo2中从核苷酸161至核苷酸182的核苷酸序列-SEQIDNo2中从核苷酸163至核苷酸184的核苷酸序列-SEQIDNo2中从核苷酸165至核苷酸182的核苷酸序列-SEQIDNo2中从核苦酸166至核苷酸187的核苷酸序列-SEQIDNo2中从核苷酸241至核普酸261的核苷酸序列-SEQIDNo2中从核苷酸243至核苷酸261的核苷酸序列-SEQIDNo2中从核苷酸244至核苷酸261的核香酸序列-SEQIDNo2中从核苷酸240至核苷酸261的核苷酸序列-SEQIDNo2中从核苷酸126至核苷酸145的核苷酸序列-SEQIDNo2中从核苷酸208至核普酸225的核苷酸序列-SEQIDNo2中从核苷酸124至核苷酸145的核苷酸序列-SEQIDNo2中从核苷酸75至核普酸94的核苷酸序列-SEQIDNo2中从核苷酸231至核苷酸250的核苷酸序列-SEQIDNo2中从核苷酸243至核苷酸262的核苦酸序列-SEQIDNo2中从核苷酸230至核普酸250的核苷酸序列-SEQIDNo2中从核苷酸232至核苷酸250的核苷酸序列-SEQIDNo2中从核苷酸242至核苷酸262的核苷酸序列-SEQIDNo2中从核苷酸244至核苷酸262的核苷酸序列-SEQIDNo2中从核苷酸229至核苷酸250的核苷酸序列-SEQIDNo2中从核苷酸241至核苷酸262的核苷酸序列-SEQIDNo2中从核苷酸245至核苷酸262的核苷酸序列-SEQIDNo2中从核普酸287至核苷酸306的核苷^列-SEQIDNo2中从核苷酸288至核苦酸306的核苷酸序列-SEQIDNo2中从核苷酸230至核苷酸247的核苷酸序列-SEQIDNo2中从核苷酸285至核苷酸306的核苷酸序列-SEQIDNo2中从核苷酸289至核苷酸306的核苷酸序列-SEQIDNo2中从核苷酸282至核苷酸303的核苷酸序列-SEQIDNo2中从核苷酸288至核苷酸307的核苷酸序列-SEQIDNo2中从核苷酸287至核苷酸307的核苷酸序列-SEQIDNo2中从核苷酸289至核苷酸307的核苷酸序列-SEQIDNo2中从核苷酸286至核苷酸307的核苷酸序列-SEQIDNo2中从核苷酸290至核普酸307的核苷酸序列-SEQIDNo2中从核苷酸229至核苷酸248的核苷酸序列-SEQIDNo2中从核苷酸230至核苷酸248的核苷酸序列-SEQIDNo2中从核苷酸227至核苷酸248的核苷酸序列-SEQIDNo2中从核苷酸231至核苷酸248的核苷酸序列。如本文所用，"核苷酸序列SEQIDNo.Z中从位置X至位置Y"指包括两个核苷酸端点的核苷酸序列。优选地，整合片段长度在50和500个核苦酸之间，最优选地在100和350个核苷酸之间。特异性引物可以具有分别与原种事件5，或3，侧翼区内的序列和原种事件外源DNA内的序列具有80和100%之间同一性的序列，其前提是错配允许在最优化PCR条件下使用这些引物仍可特异性鉴定原种事件。然而，可允许的错配范围可以通过经验容易地确定并且是本领域技术人员众所周知的。下表例证了使用所选择PCR引物对的预期扩增子(或整合片段)的大小。<table>tableseeoriginaldocumentpage26</column></row><table><table>tableseeoriginaldocumentpage27</column></row><table>整合片段的检测可以多种方式进行，例如通过凝胶分析后判断大小。整合片段还可以直接测序。用于检测扩增DNA片段的其它序列特异性方法也是本领域众所周知的。由于对于每一原种事件而言，引物的序列和其在基因组中的相对位置都是唯一的，因此整合片段的扩增仅在包含原种事件(核酸)的生物学样品中发生。优选地，当开展PCR来鉴定未知样品中A2704-12的存在时，要包括一组对照引物，使用对照引物可以扩增出具有事件的植物物种的"看家基因"内的片段。看家基因是在大多数细胞类型中表达并且与所有细胞所共有的基础代谢活动相关的基因。优选地，从看家基因扩增的片段是长于所扩增整合片段的片段。取决于待分析的样品，可包括其它对照。标准PCR方案在本领域中已有描述，例如在"PCRApplicationsManual"(RocheMolecularBiochemicals，第2版，1999)中。对于每一原种事件，最优化PCR条件(包括特异性引物的序列)在"PCR鉴定方案"中说明。然而应当理解，PCR鉴定方案中的许多参数需要调整至特异的实验室条件，并且可以稍稍修改以得到相似结果。例如，使用不同的DNA制备方法将需要调整例如所使用引物的数量、聚合酶和退火条件。相似地，选择其它引物将决定着使用用于PCR鉴定方案的其它最优化条件。然而，这些调整对于本领域技术人员而言是显而易见的，并且进一步描述于如上所引用的现行PCR扩增手册中。备选地，特异性引物可用于扩增用作鉴定生物学样品中A2704-12的"特异性探针"的整合片段。将生物学样品与探针在允许探针与核酸中的相应片段杂交的条件下相接触导致形成核^/探针杂合体。可以检测这种杂合体的形成(例如标记核酸或探针)，由此这种杂合体的形成指示着A2704-12的存在。基于使用特异性探针(在固相载体或者溶液中)的杂交的此类鉴定方法在本发明中已有描述。特异性探针优选地是在优化条件下与原种事件5，或3，侧翼区内的并且还优选包含与"M目连的部分外源DNA(以下称作"特异性区域")的区域杂交的序列。优选地，特异性探针包含50和500bp间、优选100至350bp的与特异性区域核苷酸序列至少80%、优选地在80和85%之间、更优选地在85和卯％之间、特别优选地在卯和95°/。之间、最优选地在95%和100%之间相同(或互补)的序列。优选地，特异性揮:针将包含约15至约100个与原种事件的特异性区域相同(或互补)的连续核苷酸。如本文所用的"试剂盒"指用于开展本发明方法，更加具体而言是鉴定生物学样品中的原种事件A2704-12的一组试剂。更加具体而言，本发明试剂盒的优选实施方案包含如上所述的至少一个或两个特异性引物。任选地，试剂盒还可包含用于PCR鉴定方案的本文所述的任何其它试剂。备选地，根据本发明的另一个实施方案，试剂盒可包含如上所述的特异性探针，该特异性探针与生物学样品中的核酸杂交以鉴定其中A2704-12的存在。任选地,试剂盒还可包含用于使用特异性探针鉴定生物学样品中A2704-12的任何其它试剂(例如但不限于杂交緩冲液、标记物)。为了质量控制(例如种子批的纯度)、检测植物材料或包含或衍生自植物材料的材料(例如但不限于食品或饲料产品)中的原种事件，可使用本发明的试剂盒，并且其成分可以特别调整。如本文所用，关于核苷酸序列(DNA或RNA)的"序列同一性"指具有相同核苷酸的位置数目除以两个序列中较短序列的核苷酸数目。两个核苷酸序列的比对通过Wilbur和Lipmann算法(Wilbur和Lipmann,1983，Proc.Nat.Acad.Sci.USA80:726)使用如下参数开展窗口大小20个核苷酸；字长4个核苷酸以及开口罚分4。计算机辅助分析以及序列数据的解释(包括上述的序列比对)可以例如使用IntelligeneticsTMSuite(IntelligeneticsInc.，CA)或GeneticsComputerGroup的序列分冲斤软件包(GCG,UniversityofWisconsinBiotechnologycenter)程序常规开展。当此类序列具有至少约75%、特别地至少约80%、更加特别地至少约85%、十分特别地约90%、尤其约95%、更加尤其约100%的序列同一性时，指示着序列是"基;M目似的"。很明显，当说RNA序列与DNA序列基;M目似或者RNA序列与DNA序列具有一定程度的序列同一性时，认为DNA序列中的胸苷(T)等于RNA序列中的尿苷(U)。如本文所用的术语"引物"包含能够在模板依赖的过程(例如PCR)中引发新生核酸合成的任何核酸。一般地，引物是10至30个核苷酸的寡核苷酸，但是可以采用更长的序列。引物可以以双链形式提供，但优选单链形式。探针可用作引物，但是探针被设计成结合至靶DNA或RNA，并且不需要用于扩增过程。如本文所用的术语"识别，，当指特异性51物时是指在方法中所述条件下(例如PCR鉴定方案的条件)下特异性引物特异性杂交至原种事件中的核酸序列的事实，由此通过存在阳性和阴性对照来确定特异性。如本文所用的术语"杂交，，当指特异性探针是时指在标准严格条件下探针结合至原种事件核酸序列的特异性区域的事实。如本文所用的标准严格条件指用于本文所述杂交的条件或者指如Sambrooketal.，1989(MolecularCloning:ALaboratoryManual,SecondEdition,ColdSpringHarbourLaboratoryPress,NY)所述的常规杂交条件，其例如包含下列步骤1)将植物基因组DNA片段固定于滤器上；2)将滤器在50%甲酰胺，5xSSPE，2xDenhardt试剂和0.1%SDS中于42。C预杂交1至2小时，或者在6xSSC，2xDenhardt试剂和0.1%SDS中于68°C预杂交1至2小时；3)加入已经标记的杂交探针；4)孵育16至24小时；5)在lxSSC，0.1%SDS中室温洗涤滤器20分钟；6)在0.2xSSC，0.1%SDS中于68。C洗涤滤器三次，每次20分钟；和7)将滤器在增感屏中于-70。C将X-光胶片曝光24至48小时。如本文所用，生物学样品是植物、植物材料或包含植物材料的产品样品。术语"植物"旨在包括任何成熟阶段的大豆植物组织，以及从此组织取出或衍生的任何细胞、组织或器官，包括但不限于任何种子、叶、茎、花、拫、单细胞、结合体、细胞培养物、组织培养物或原生质体。如本文所用的"植物材料"指M物得到或衍生的材料。包含植物材料的产品涉及使用植物材料产生或掺有植物材料的食品、饲料或其它产品。在本发明上下文中应当理解，测试了此类生物学样品中A2704-12特异性核酸的存在，暗示着样品中存在核酸。因此，在本文中提到用于鉴定生物学样品中原种事件A2704-12的方法指鉴定生物学样品中包含原种事件的核酸。如本文所用的"包含"解释为存在所指的确定特征、整数、步骤、试剂或成分，但不排除存在或加入一个或多个特征、整数、步骤或成分或其组。因此，例如包含核苷酸或M酸序列的核酸或蛋白质可以包含比实际所引用的核苷酸或氨基酸更多的核苷酸或氨基酸，即包含更大的核酸或蛋白质。包含功能或结构明确的DNA序列的嵌合基因可以包含额外的DNA序列，等等。本发明还涉及在大豆中发生原种事件A2704-12，涉及包含该事件的植物、从这些植物得到的后代，以及涉及从该事件衍生的植物细胞或植物材料。包含原种事件A2704-12的植物如实施例1所述得到。包含A2704-12的大豆植物或植物材料可以根据在实施例2中对于A2704-12描述的PCR鉴定方案鉴定。简言之，通过使用特异性识别A2704-125，或3'侧翼序列内的序列的引物(例如具有SEQIDNO:4序列的引物)和识别外源DNA内序列的引物(例如具有SEQIDNO:8序列的引物)的PCR扩增生物学样品中存在的大豆基因组DNA。扩增部分内源大豆序列的DNA引物用作PCR扩增的阳性对照。如果在扩增时从材料中获得了预期大小的片段，则材料包含来自带有原种事件A2704-12的大豆植物的植物材料。带有A2704-12的植物通过其对草铵膦的耐受而^^征，其在本发明上下文中包括耐受除草剂LibertyTM的植物。对LibertyTM的耐受可以以不同方式测试。当需要辨别抗性植物和敏感植物而又不杀死敏感植物时，如本文所述的涂叶法是最有用的。备选地，可以通过Liberty喷雾施用测试耐受。喷雾处理应该在V3和V4叶阶段间进行以便取得最佳结果。耐受植物通过如下事实表征，即用至少200克活性成分/公项(g.a丄/ha)、优选400g.a丄/ha和可能最多1600g.a丄/ha(4x正常的田间比率)向植物喷雾而不杀死植物。播,用应当以28-34ozLiberty的比率进行。最好使用扁扇型喷嘴以每英亩20加仑水的体积施用，同时注意不要向植物的轮生体内直接喷雾施用以避免表面活性剂灼伤叶子。除草剂的影响将在48小时内出现，并且在5-7天明显可见。带有A2704-12的植物可进一步通过其细胞中草铵膦乙酰转移酶的存在来表征，草铵膦乙酰转移酶的存在如通过PAT分析法(DeBlock等，1987)所确定。带有A2704-12的植物还可以通过在缺乏杂草压力和使用LibertyTM(用于杂草控制)的情况下具有与在美国可商业获得的大豆变体中的农学特性可比的农学特性来表征。已经观察到，如本文所述在大豆植物基因组的插入区域内存在外源DNA赋予包含该事件的植物特别感兴趣的表型和分子特性。更加具体而言，在这些植物的该特定基因组区域内存在外源DNA导致产生目的基因稳定表型表达的植物，而植物的任何方面的期望农学特性没有受到明显损害。下列实施例描述了对用于鉴定生物学样品中原种事件A2704-12的工具进行的鉴定。除非另外指出，所有重组DNA技术按照如Sambrook等，(1989)MolecularCloning:ALaboratoryManual,第2版，ColdSpringHarbourLaboratoryPress,NY以及Ausubel等，(1994)CurrentProtocolsinMolecularBiology,CurrentProtocols,USA,第1和2巻中所述的标准方案进行。用于植物分子操作的标准材料和方法描述于PlantMolecularBiologyLabfax(1993)，R.D.D.Croy编，BIOSScientificPublicationsLtd(UK)和BlackwellScientificPublications出版，UK。在说明书和实施例中，提到了下列序列SEQIDNo.1:包含A2704-125，侧翼区的核香酸序列SEQIDNo.2:包含A2704-123，侧翼区的核苦酸序列SEQIDNo.3:引物HCA148SEQIDNo.4:引物DPA021SEQIDNo.5:引物KVM176SEQIDNo.6:引物KVM174SEQIDNo.7:引物KVM177SEQIDNo.8:引物DPA024SEQIDNo.9:引物MDB390SEQIDNo.10引物HCA023SE(3IDNo.11引物DPA007SEQIDNo.12引物YTP007SEQIDNo.13引物MDB452SEQIDNo.14引物HCA014SEQIDNo.15引物MDB402SEQIDNo.16引物HCA074SEQIDNo.17引物SM0017SEQIDNo.18引物SM0027SEQIDNo.19引物SM0033SEQIDNo.20用于扩增对照片段的引物lSEQIDNo.21.用于扩增对照片段的引物2附图简述下面的实施例不旨在将本发明限制于所述的特定实施方案，可以结合附图(在本文中整合作为参考)来理解下列的实施例。在附图中图l:所引用核苷^列和引物之间关系的框图。黑条外源DNA;亮条植物来源的DNA;条下的数字代表核苷酸位置；(c)指所指出核苷^列的的互补序列。图2:开发用于A2704-12的PCR鉴定方案。胶的上样顺序泳道l:来自包含转基因事件A2704-12的大豆植物的DNA样品；泳道2:来自不包含原种事件A2704-12的转基因大豆植物的DNA样品；泳道3:来自野生型大豆植物的对照DNA;泳道4:无模板对照；泳道5:分子量标准。实施例1.鉴定原种事件A2704-12的侧翼区通过用包含/W基因编码序列的载体转化大豆开发出除草剂抗性大豆，其中/w,基因编码草铵膦乙酰转移酶并且处于花椰菜花叶病毒组成型35S启动子的控制之下。基于大量的选择过程选择出原种事件A2704-12,这些选择过程基于除草剂抗性基因的良好表达和稳定性以及其与最优化农学特性的相容性。使用Liu等(1995,PlantJ.8(3):457-463)所述的热不对称交错(TAIL-)PCR方法确定A2704-12事件中外源DNA侧翼区序列。该方法在连续的反应中使用3个巢式引物以及更短的任意简并引物，从而通过热来控制特异和非特异产物的相对扩增效率。选择用于与外源DNA边界退火的特异性引物，并且基于它们的退火条件来选择。少量(5jil)的未纯化(第二和第三)PCR产物在1%琼脂糖皿上分析。第三PCR产物用于制备型扩增，纯化后在自动序列仪上用DyeDeoxyTerminator循环试剂盒测序。1.1.右(5，)侧翼区通过TAIL-PCR方法获得的经鉴定包含5'侧翼区的片段被完全测序(SEQIDNo.1)。核苷酸1和209间的的序列相当于植物DNA，而核苷酸210和720间的序列相当于外源DNA。1.2.左(3，)侧翼区通过TAIL-PCR方法获得的经鉴定包含3，侧翼区的片段被完全测序(SEQIDNo.2)。核苷酸1和568间的序列相当于外源DNA，而核苷酸569和1000间的序列相当于植物DNA。2.开发聚合酶链式反应鉴定方案2.1.引物开发了识别原种事件内序列的特异性引物。更加具体而言，开发了识别A2704-125，侧翼区内序列的引物。然后在外源DNA的序列内选择第二个引物，使两个引物跨越约183个核苷酸的序列。发现下列引物在对A2704-12DNA进行的PCR反应中能得到特别清楚和可重复性的结果DPA021:5，-ggC.gTT.CgT.AgT.gAC.TgA.gg-3，(SEQIDNo.:4)(耙植物DNA)DPA024:5，-gTT.TTA.CAA.CgT.gAC.Tgg-3，(SEQIDNo.:8)(乾插入的DNA)靶向内源序列的引物优选地包括在PCR混合物中。这些引物用作未知样品中的内部对照和DNA阳性对照。使用内源性引物对出现阳性结果表明，对于待产生的PCR产物而言，基因组DNA制备物中存在足够质量的充足DNA。选择识别大豆看家基因的内源引物SOY01:5，誦gTCAgC.CAC.ACA.gTg.CCT.AT-3，(SEQIDNo.:20)(位于大豆肌动蛋白1基因中(登录号J01298))SOY02:5，-gTT.ACC.gTA.CAg.gTC.TTT.CC-3，(SEQIDNo.:21)(位于大豆肌动蛋白1基因中(登录号J01298))2.2.扩增的片段在PCR反应中预期扩增片段为对于引物对SOY01-SOY02:413bp(内源性对照)对于引物对DPA021-DPA024:185bp(A2704-12原种事件)2.3.模板DNA根据Edwards等(NucleicAcidResearch,19，p1349，1991)从用打孔器得到的叶子制备模板DNA。当使用用其它方法制备的DNA时，应该使用不同量的模板开展试验。通常50ng的基因组模板DNA会得到最佳结果。2.4.指定的阳性和阴性对照为避免假阳性或假阴性，决定在PCR反应中加入下列阳性对照和阴性对照-MasterMix对照(DNA阴性对照)这是在反应中不加入DNA的PCR。当观察到预期结果，即无PCR产物时表明PCR混合物没有污染耙DNA。-DNA阳性对照(已知包含转基因序列的基因组DNA样品)该阳性对照得到成功扩增表明PCR在允许耙序列扩增的条件下运行。-野生型DNA对照这是所提供的模板DNA为从非转基因植物制备的基因组DNA的PCR。当观察到预期结果，即无转基因PCR产物扩增但有内源PCR产物扩增时表明在基因组DNA样品中没有可检测的转基因背景扩增。2.5.PCR条件最优化结果在下列条件下得到-对于25^U反应，PCR混合物包含2.5nl模板DNA2.5pi10x扩增緩冲液(Taq聚合酶提供)0.5|il10mMdNTP，s0.5piDPA021(lOpmo,0.5piDPA024(10pmol/|il)0.25fxlSOY01(10pmol/|xl)0.25jilSOY02(lOpmol/juI)0.1(ilTaqDNA聚合酶(5单位/pl)水补至25|il-对于最佳结果热循环参数如下95。C4分钟然后95。C1分钟57°C1分钟72°C2分钟5个循环然后92°C30秒57。C30秒72。C1分钟25个循环然后72°C5分4中2.6.琼脂糖凝胶分析为了最佳观察PCR结果，决定将10和20jal间的PCR样品以及适当的分子量标准(例如lOObpladderPHARMACIA)上样于1.5%琼脂糖^^上(Tris-硼酸緩冲液)。2.7.结果验证决定不接受在一次PCR运行和一次PCR混合物中从转基因植物DNA样品中得到的数据，除非1)DNA阳性对照出现预期PCR产物(转基因和内源片段)，2)DNA阴性对照没有出现PCR扩增(无片段)和3)野生型DNA对照出现预期结果(内源片段扩增)。当遵照如上所述的用于A2704-12的PCR鉴定方案时，在泳道中出现了可见量的预期大小的转基因PCR产物和内源PCR产物，表明用于制备基因组模板DNA的相应植物具有可遗传的A2704-12原种事件。泳道中显示没有可见量转基因PCR产物但有可见量内源PCR产物，表明用于制备基因组模板DNA的相应植物不包含原种事件。泳道中没有出现可见量内源PCR产物和转基因PCR产物，表明基因组DAN的质量和/或数量不允许产生PCR产物。这些植物不可用。应当重复制名、基因组DNA并用适当对照开展PCR。2.8.使用鉴别性PCR方案鉴定A2704-12在筛选未知样品之前，必须开展带有适宜对照的试验。所开发的方案需要对因实验室不同而不同的成分(模板DNA制备、TaqDNA聚合酶、引物质量、dNTPs、热循环仪等)进行优化。内源序列的扩增在方案中起到至关重要的作用。人们必须获得扩增已知转基因基因组DNA模板内的等摩尔量内源序列和转基因序列的PCR和热循环条件。只要靶向内源片段没有扩增或者只要靼向的扩增没有达到同样的溴化乙锭染色强度(如通过琼脂糖凝胶电泳所判断)，则需要对PCR条件进行优化。根据上述方案测试了大量大豆植物的叶材料，在其中一些植物包含A2704-12。来自原种事件A2704-12和野生型大豆样品分别用作阳性和阴性对照。图2阐明了用对于A2704-12的原种事件PCR鉴定方案对诸多大豆植物样品(泳道l-4)进行PCR的结果。由于在泳道1中检测到了185bp的条带，所以泳道l中的样品包含原种事件，而泳道2、3和4中的样品不包含A2704-12。泳道2包含另一大豆原种事件；泳道3代表非转基因大豆对照；泳道4代表阴性对照(7jc)样品；泳道5代表分子量标准(IOObp)。3.使用特异性整合片段作为探针用于检测包含A2704-12的材料A2704-12的特异性整合片段通过使用特异性引物DPA021(SEQIDNo.4)和DPA024(SEQIDNo.8)的PCR扩增得到，或者通过化学合成得到，并标记。该整合片段用作检测生物学样品中A2704-12的特异性探针。根据标准步骤从样品提取核酸。然后将核酸与特异性探针在经优化允许杂合体形成的杂交条件下接触。然后检测杂合体的形成，表明样品中存在A2704-12核酸。任选地，在样品中的核酸与特异性^:针接触之前，将核酸用特异性引物扩增。备选地，在与特异性探针接触之前，将核酸标ii，而不是将整合片段标记。任选地，在与样品接触之前，将特异性探针附着于固体载体上(例如但不限于滤器、试条(strip)或珠)。权利要求1.用于鉴定生物学样品中原种事件A2704-12的方法，其中方法包括用特异性识别A2704-125’或3’侧翼区的特异性引物或探针检测A2704-12特异性区域。2.权利要求l所述的方法，所述方法包括使用至少2个引物的聚合酶链式反应从所述生物学样品所存在的核酸中扩增100和500bp之间的DNA片段，所述引物之一识别A2704-12的5，侧翼区或A2704-12的3，侧翼区，所述5，侧翼区具有SEQIDNo1中从核苷酸1至核苷酸209的核苷酸序列，所述3，侧翼区具有SEQIDNo2中从核苷酸569至核苷酸1000的互补序列的核苷^列，所述引物中的另一个识别外源DNA内的序列，所述外源DNA具有SEQIDNo.1中从核苷酸210至核苷酸720的互补序列的核苷酸序列或SEQIDNo2中从核苷酸569至核苷酸1000的核苷^列。3.权利要求2所述的方法，其中所述的识别A2704-125，侧翼区的引物由选自SEQIDNo1中从核苷酸l至核普酸209的核苷酸序列中的17至200个连续核苷酸的核苷酸序列组成，或所述的识别A2704-123，侧翼区苷酸序列中的17至200个连续核苷酸的核苷酸序列组成，并且所述的识别外源DNA内序列的引物由选自SEQIDNo.1中从核苷酸210至核苷酸720的互补序列的核苷酸序列或SEQIDNo2中从核苷酸569至核苷酸1000的核苷酸序列中的17至200个连续核苷酸组成。4.权利要求2所述的方法，其中所述的识别A2704-125，侧翼区的引物在其最3，末端包含选自SEQIDNo1中从核苷酸1至核普酸209的核苷酸序列中的至少17个连续核苷酸的核香酸序列，或所述的识别A2704-123，侧翼区的引物在其最3，末端包含选自SEQIDNo2中从核苷酸569至核苷酸1000的互补序列的核苷酸序列中的至少17个连续核苷酸的核苷酸序列，并且所述的识別外源DNA内序列的引物在其3，末端包含选自SEQIDNo. 1中从核苷酸210至核苷酸720的互补序列的核苷酸序列或SEQIDNo2中从核苷酸569至核苷酸1000的核苷酸序列中的至少17个连续核苷酸。5.权利要求4所述的方法，其中所述引物分别包含SEQIDNo.4和SEQIDNo.8的序列。6.权利要求5所述的方法，其中方法包括使用A2704-12鉴定方案扩增约185bp的片段。7.用于鉴定生物学样品中原种事件A2704-12的试剂盒，所述试剂盒包含识别A2704-125，侧翼区的一个引物或者识别A2704-123，侧翼区的一个引物和一个识别外源DNA内序列的引物，所述5，侧翼区具有SEQIDNo1中从核普酸1至核苷酸209的核苷酸序列，所述3，侧翼区具有SEQIDNo2中>^核香酸569至核苷酸1000的互补序列的核苷酸序列，所述外源DNA具有SEQIDNo.1中从核苷酸210至核苷酸720的互补序列的核苷酸序列或SEQIDNo2中从核苷酸569至核苷酸1000的核苷酸序列。8.权利要求7所述的试剂盒，其中所述的识别A2704-125，侧翼区的引物由选自SEQIDNol中从核苷酸1至核苷酸209的核苷酸序列中的17至200个连续核苷酸的核苷酸序列组成，或所述的识别A2704-123，侧翼区的引物由选自SEQIDNo2中从核苷酸569至核苷酸1000的互补序列的核苷酸序列中的17至200个连续核苷酸的核苷酸序列组成，并且所述的识别外源DNA内序列的引物由选自SEQIDNo.1中从核苷酸210至核苷酸720的互补序列的核苷酸序列或SEQIDNo2中从核苷酸569至核苷酸1000的核香酸序列中的17至200个连续核苷酸组成。9.权利要求7所述的试剂盒，其中所述的识别A2704-125，侧翼区的引物在其最3，末端包含选自SEQIDNol中从核苷酸1至核苷酸209的核苷酸序列中的至少17个连续核苷酸的核苷酸序列，或所述的识别A2704-123，侧翼区的引物在其最3，末端包含选自SEQIDNo2中从核苷酸569至核苷酸1000的互补序列的核苷酸序列中的至少17个连续核苷酸的核苷^列，并且所述的识别外源DNA内序列的引物在其3，末端包含选自SEQIDNo.1中从核苷酸210至核苷酸720的互补序列的核苷酸序列或SEQIDNo 2中从核苷酸569至核苷酸1000的核苷酸序列中的至少17个连续核苷酸。10.权利要求7所述的试剂盒，包含由SEQIDNo.4的序列组成的引物和由SEQIDNo.8的序列组成的引物。11.用于A2704-12PCR鉴定方案的引物，具有在最优化PCR条件下特异性识别A2704-125，或3，侧翼区内序列的序列，所述5，侧翼区具有SEQIDNo1中从核苷酸1至核苷酸209的核苷酸序列并且所述3，侧翼区具有SEQIDNo2中从核苷酸569至核苷酸1000的互补序列的核苷酸序列。12.权利要求ll所述的引物，其中所述引物由选自SEQIDNo1中从核苷酸1至核苷酸209的核苷酸序列中的17至200个连续核苷酸的核苷酸序列组成，或由选自SEQIDNo2中从核苷酸569至核普酸1000的互补序列的核苷酸序列中的17至200个连续核苷酸的核苷酸序列组成。13.权利要求11所述的引物，其中所述引物在其最3，末端包含选自SEQIDNo1中从核苷酸1至核苷酸209的核苷酸序列中的至少17个连续核苷酸的核苷酸序列，或选自SEQIDNo2中从核香酸569至核苷酸1000的互补序列的核苷酸序列中的至少17个连续核苷酸的核苷酸序列。14.在其最3，末端包含SEQIDNo.4的序列的引物。15.在其最3，末端包含SEQIDNo.8的序列的引物。16.权利要求l所述的方法，其中方法包括用A2704-12特异性探针与生物学样品的核酸杂交。17.权利要求16所述的方法，其中所述特异性探针的序列与包含A2704-12的部分5，侧翼序列或3，侧翼序列以及与^M目连的外源DNA序列的序列具有至少80%序列同一性。18.权利要求17所述的方法，其中所述特异性^针的序列与SEQIDNo.1中从核苷酸160至260或SEQIDNo.2中从核苷酸520至620或所述序列的互补序列具有至少80%序列同一性。19.用于鉴定生物学样品中原种事件A2704-12的试剂盒，所述试剂盒包含能够与A2704-12特异性区域特异性杂交的特异性探针。20.权利要求19所述的试剂盒，其中所述特异性探针的序列与包含A2704-12的部分5，侧翼序列或3'侧翼序列以及与4^目连的外源DNA序列的序列具有至少80%序列同一性。21.权利要求20所述的试剂盒，其中所述特异性探针的序列与SEQIDNo.1中从核苷酸160至260或SEQIDNo.2中从核苦酸520至620或所述序列的互补序列具有至少80%序列同一性。22.用于鉴定生物学样品中原种事件A2704-12的特异性探针。23.权利要求22所述的揮:针，其与包含A2704-12的部分5'侧翼序列或3，侧翼序列以及与^目连的外源DNA序列的序列或者其互补序列具有至少80%序列同一性。24.权利要求23所述的探针，其与SEQIDNo.1中从核苷酸160至260或SEQIDNo.2中从核苷酸520至620或所述序列的互补序列具有至少80%序列同一性。25.用于鉴定生物学样品中原种事件A2704-12的特异性探针，其序列与SEQIDNo.1中从核苷酸160至260或SEQIDNo.2中从核苷酸520至620或所述序列的互补序列基本相似。26.用于证实种子纯度的方法，所述方法包括用特异性识别A2704-125，或3，侧翼区的特异性引物或探针在种子样品中检测A2704-12特异性区域。27.用于筛选存在A2704-12的种子的方法，所述方法包括用特异性识别A2704-125，或3，侧翼区的特异性引物或探针在种子批样品中检测A2704-12特异性区域。28.在其基因组中包含原种事件A2704-12的大豆植物或其细胞、部分、种子或后代。全文摘要提供了快速且明确鉴定生物学样品中原种事件A2704-12的工具。文档编号C12N15/82GK101151373SQ200680010143公开日2008年3月26日申请日期2006年4月4日优先权日2005年4月8日发明者M·德博克勒尔申请人:拜尔生物科学公司