Dr5抗体及其用途的制作方法

专利名称：：Dr5抗体及其用途的制作方法DR5抗体及其用途发明领域本发明主要涉及DR5抗体，包括激动性抗体，及使用此类DR5抗体的方法。发明背景本领域已经鉴定了属于肿瘤坏死因子(TNF)超家族的多种配体和受体。在这些配体中有肺瘤坏死因子-a("TNF-a，，)、肿瘤坏死因子-f3("TNF-f3，，或"'淋巴毒素-a")、淋巴毒素-卩("LT-p，，)、CD30配体、CD27配体、CD40配体、OX-40配体、4-1BB配体、LIGHT、Apo-l配体(也称作Fas配体或CD95配体)、Apo-2配体(也称作Apo2L或TRAIL)、Apo-3配体(也称作TWEAK)、APRIL、OPG配体(也称作RANK配体、ODF或TRANCE)和TALL-1(也称作BlyS、BAFF或THANKX参见例如Ashkenazi，NatureReview,2:420-430(2002);AshkenaziandDixit,Science,281:1305-1308(1998);AshkenaziandDixit,Curr.Opin.CellBiol"11:255-260(2000);Golstein,Curr.Biol"7:750-753(1997);Wallach,CytokineReference,AcademicPress,2000，pages377-411;Locksleyetal.,Cell,104:487-501(2001);GrussandDower,Blood,85:3378-3404(1995);Schmidetal.,Proc.Natl.Acad.Sci.,83:1881(1986);Dealtryetal.,Eur.J.Immunol.，17:689(1987);Pittietal.,J.Biol.Chem.,271:12687-12690(1996);Wileyetal"Immunity,3:673-682(1995);Browningetal"Cell,72:847-856(1993);Armitageetal"Nature,357:80-82(1992);WO97/01633，公开于1997年1月16日；WO97/25428，公开于1997年7月17日；Marstersetal.，Curr.Biol"8:525-528(1998);Chicheporticheetal.,Biol.Chem.,272:32401-32410(1997);Hahneetal"J.Exp.Med"188:1185-1190(1998);WO98/28426，公开于1998年7月2日；WO98/46751,公开于1998年10月22日；WO98/18921,公开于1998年5月7日；Mooreetal.,Science,285:260-263(1999);Shuetal.,J.LeukocyteBiol.,65:680(1999);Schneideretal"J.Exp.Med.,189:1747-1756(1999);Mukhopadhyayetal"J.Biol.Chem.,由这些TNF家族配体介导的多种细胞应答的诱发通常是通过它们与特定细胞受体结合而开始的。有些但非所有TNF家族配体结合细胞表面"死亡受体"，并由此诱发多种生物学活动以激活胱天蛋白酶或者执行细胞死亡或凋亡途径的酶(Salvesenetal.，Cell,91:443-446(1997))。在迄今为止已经鉴定的TNF受体超家族成员中包括TNFR1、TNFR2、TACI、GITR、CD27、OX-40、CD30、CD40、HVEM、Fas(也称作Apo-1或CD95)、DR4(也称作TRAIL-R1)、DR5(也称作Apo-2或TRAIL-R2)、DcRl、DcR2、护骨蛋白(OPG)、RANK和Apo-3(也称作DR3或TRAMP)(参见例如Ashkenazi,NatureReviews,2:420-430(2002);AshkenaziandDixit,Science,281:1305-1308(1998);AshkenaziandDixit,Curr.Opin.CellBiol"11:255-260(2000);Golstein,Curr.Biol"7:750-753(1997);Wallach,CytokineReference,AcademicPress,2000，pages377-411;Locksleyetal"Cell,104:487-501(2001);GrussandDower,Blood,85:3378-3404(1995);Hohmanetal"J.Biol.Chem.，264:14927-14934(1989);Brockhausetal"Proc.Natl.Acad.Sci"87:3127-3131(1990);EP417,563，乂〉开于1991年3月20日；Loetscheretal"Cell,61:351(1990);Schalletal.,Cell,61:361(1990);Smithetal"Science,248:1019-1023(1990);Lewisetal.，Proc.Natl.Acad.Sci"88:2830-2834(1991);Goodwinetal.,Mol.Cell.Biol"11:3020-3026(1991);Stamenkovicetal"EMBOJ.，8:1403-1410(1989);Mallettetal.,EMBOJ"9:1063-1068(1990);Andersonetal"Nature,390:175-179(1997);Chicheporticheetal.，J.Biol.Chem.,272:32401-32410(1997);Panetal.,Science,276:111-113(1997》Panetal.,Science,277:815-818(1997);Sheridanetal"Science,277:818-821(1997);Degli隱Espostietal.，J.Exp.Med.，186:1165-1170(1997);Marstersetal.,Curr,Biol"7:1003-1006(1997);Tsudaetal"BBRC,234:137-142(1997);Nocentinietal.,Proc.Natl.Acad.Sci"94:6216-6221(1997);vonBulowetal"Science,278:138-141(1997))。大多数这些TNF受体家族成员共享细胞表面受体的典型结构，包括胞外区、跨膜区和胞内区，而其它成员则天然发现是缺少跨膜和胞内结构域的可溶性蛋白质。典型TNFR的胞外部分包含从NH2-末端起始的多个富含半胱氨酸结构域(CRD)的重复氨基酸序列。数年前，将称作Apo2L或TRAIL的配体鉴定为TNF细胞因子家族的成员(参见例如Wileyetal.,Immunity,3:673-682(1995);Pittietal.,J.Biol.Chem.，271:12697-12690(1996);WO97/01633;WO97/25428;美国专利5,763,223,授权于1998年6月9日;美国专利6,284,236，授权于2001年9月4日)。全长天然序列人Apo2L/TRAIL多肽是281个氨基酸的II型跨膜蛋白质。有些细胞能通过酶促切割多肽的胞外区来生成天然的可溶形式多肽(Marianietal.,J.Cell.Biol.,137:221-229(1997))。对可溶形式Apo2L/TRAIL的晶体学研究揭示了与TNF和其它相关蛋白质结构类似的同三聚体结构(Hymowitzetal.，Molec.Cell,4:563-571(1999);Chaetal.,Immunity,11:253-261(1999);Mongkolsapayaetal.，NatureStructuralBiology,6:1048(1999);Hymowitzetal.,Biochemistry,39:633-644(2000))。但是，与其它TNF家族成员不同，发现Apo2L/TRAIL具有独特的结构特征，即三个半胱氨酸残基(同三聚体中各个亚基的第230位)一起与锌原子配位，而且锌结合对于三聚体稳定性和生物学活性来说是重要的(Hymowitzetal.,见上文；Bodmeretal.，J.Biol.Chem.,275:20632-20637(2000))。文献中已有报道，Apo2L/TRAIL可能在免疫系统的调节中起作用，包括自身免疫病，诸如类风湿性关节炎(参见例如Thomasetal.,J.Immunol.,161:2195-2200(1998);Johnsenetal.,Cytokine,11:664-672(1999);Griffithetal.,J.Exp.Med"189:1343-1353(1999);Songetal.，J.Exp.Med"191:1095-1103(2000))。还有报道，可溶形式的Apo2L/TRAIL在多种癌细胞中诱导凋亡，包括结肠、肺、乳房、前列腺、膀胱、肾、卵巢和脑肿瘤，以及黑素瘤、白血病和多发性骨髓瘤(参见例如Wileyetal.，见上文；Pittietal.,见上文；美国专利6,030,945,授权于2000年2月29日；美国专利6，746,668,授权于2004年6月8曰；Riegeretal.，FEBSLetters,427:124-128(1998);Ashkenazietal,，J.Clin.Invest"104:155-162(1999);Walczaketal"NatureMed.,5:157-163(1999);Keaneetal"CancerResearch,59:734-741(1999);Mizutanietal"Clin.CancerRes"5:2605-2612(1999);Gazitt,Leukemia,13:1817-1824(1999);Yuetal"CancerRes.，60:2384-2389(2000);Chinnaiyanetal,,Proc.Natl.Acad.Sci.，97:1754-1759(2000))。鼠肿瘤模型的体内研究还表明，单独使用Apo2L/TRAIL或者与化疗或放疗联合能发挥实质性的抗肿瘤作用(参见例如Ashkenazietal.,见上文；Walzcaketal"见上文；Gliniaketal"CancerRes,，59:6153-6158(1999);Chinnaiyanetal.，见上文；Rothetal.,Biochem.Biophys.Res.Comm.,265:1999(1999);PCT申请US/00/15512;PCT申请US/01/23691)。与许多类型的癌细胞相反，大多数正常人细胞类型表现出对某些重组形式Apo2L/TRAIL诱导的凋亡有抗性(Ashkenazietal.，见上文;Walzcaketal.，见上文)。Jo等人报道，多组氨酸标记的可溶形式Apo2L/TRAIL在体外在分离的正常人肝细胞中诱导凋亡，非人源的则不然(Joetal"NatureMed.,6:564-567(2000);Nagata,NatureMed.,6:502-503(2000))。认为，某些重组Apo2L/TRAIL制备物在生物化学特性和生物学活性方面对患病细胞和正常细胞可有所不同，这取决于例如标签分子的存在与否、锌含量和三聚体含量百分比(参见Lawrenceetal.,NatureMed.,LettertotheEditor,7:383-385(2001);Qinetal"NatureMed.，LettertotheEditor,7:385-386(2001))。已经发现Apo2L/TRAIL结合至少五种不同受体。至少两种结合Apo2L/TRAIL的受体包含功能性胞质死亡结构域。一种这样的受体称作"DR4"(或称作TR4或TRAIL-R1)(Panetal"Science,276:111-113(1997);WO98/32856，公开于1998年7月30日；WO99/37684,公开于1999年7月29日；WO00/73349，公开于2000年12月7日；US6,433,147,授权于2002年8月13日；US6,461,823,授权于2002年10月8日；US6,342,383,授权于2002年1月29日)。另一种这样的Apo2L/TRAIL受体称作DR5(或称作Apo-2、TRAIL-R或TRAIL-R2、TR6、Tango-63、hAP08、TRICK2、或KILLER)(参见例如Sheridanetal.，Science,277:818-821(1997);Panetal"Science,277:815-818(1997);WO98/51793,公开于1998年11月19日；WO98/41629,公开于1998年9月24日；Screatonetal"Curr.Biol"7:693-696(1997);Walczaketal"EMBOJ.,16:5386-5387(1997);Wuetal.，NatureGenetics,17:141-143(1997);WO98/35986，公开于1998年8月20日；EP870,827,公开于1998年10月14日；WO98/46643,公开于1998年10月22日；WO99/02653,公开于1999年1月21日；WO99/09165,公开于1999年2月25日；WO99/11791,公开于1999年3月11日；US2002/0072091，公开于2002年8月13日；US2002/0098550,公开于2001年12月7日；US6,313,269,授权于2001年12月6日；US2001/0010924,公开于2001年8月2日；US2003/01255540,公开于2003年7月3日；US2002/0160446,公开于2002年10月31日；US2002/0048785,公开于2002年4月25日；US6,342,369,授权于2002年2月；US6,569,642,授权于2003年5月27日；US6,072,047，授权于2000年6月6日；US6,642,358,授权于2003年11月4日；US6,743,625,授权于2004年6月1日)。像DR4—样，DR5据报道包含其胞外部分中的三个富含半胱氨酸结构域和单个胞质死亡结构域且能够通过配体结合(或者通过结合诸如模拟配体活性的激动性抗体等分子)发出凋亡信号。Apo-2L/TRAIL和DR5之间形成的复合物的晶体结构描述于Hymowitzetal.，MolecularCell，4:563-571(1999)。配体结合后，DR4和DR5都能经由称作FADD/Mortl的含死亡结构i或的衔接分子通过募集和活化凋亡起始物胱天蛋白酶-8而独立引发凋亡(Kischkeletal.,Immunity,12:611-620(2000);Spricketal"Immunity,12:599-609(2000);Bodmeretal.,NatureCellBiol"2:241-243(2000))。具体而言，DR5通过"细胞外在(cellextrinsic)"途径发出凋亡信号，它不依赖p53肿瘤抑制基因(AshkenaziandDixit,Science281:1305-8(1998);Ashkenazi，NatRevCancer2:420-30(2002))。此途径的激活牵涉在活化的受体的胞质死亡结构域处迅速形成诱导死亡的信号复合物(DISC)。首先，衔接分子FADD通过嗜同性死亡结构域相互作用结合DR5(Kischkeletal.，supra;Spricketal.,supra;Bodmeretal,supra)。接着，FADD募集启动凋亡的蛋白酶，胱天蛋白酶-8和胱天蛋白酶-10，通过诱导接近(proximity)介导它们活化。胱天蛋白酶-9和胱天蛋白酶-10进行自我装配，将可溶性活性胱天蛋白酶亚基释放到胞质中，在此它们装配并切割效应物胱天蛋白酶，诸如胱天蛋白酶-3和胱天蛋白酶-7。切割导致效应物胱天蛋白酶的活化，它们执行凋亡(apoprotix)细胞程序(ThornberryandLazebnik,Science281:1312-6(1998))。Apo2L/TRAIL据才艮道还结合那些称作DcRl、DcR2和OPG的受体，认为这些受体发挥信号传递的抑制物而非转换器的功能(参见例如DCR1(也称作TRID、LIT或TRAIL-R3)(Panetal.,Science,276:111-113(1997);Sheridanetal"Science,277:818-821(1997);McFarlaneetal"J.Biol.Chem.，272:25417-25420(1997);Schneideretal"FEBSLetters,416:329-334(1997);Degli-Espostietal.,J.Exp.Med.，186:1165-1170(1997);Mongkolsapayaetal,,J.Immunol.,160:3-6(1998));DCR2(也称作TRUNDD或TRAIL-R4)(Marstersetal.,CumBiol"7:1003-1006(1997);Panetal.,FEBSLetters,424:41-45(1998);Degli-Espostietal"Immunity,7:813-820(1997));和OPG(Simonetetal.,见上文))。与DR4和DR5相反，DcRl和DcR2受体不发出凋亡信号。文献中已经报道了某些与DR4和/或DR5受体结合的抗体。例如，针对DR4受体且在某些哺乳动物细胞中具有激动或凋亡活性的抗DR4抗体描述于例如WO99/37684，公开于1999年7月29日；WO00/73349，公开于2000年7月12日；WO03/066661,公开于2003年8月14日。还可参见例如Gri伍thetal.，J.Immunol"162:2597-2605(1999);Chuntharapaietal"J.Immunol"166:4891-4898(2001);WO02/097033,公开于2002年12月2日；WO03/042367,公开于2003年5月22日；WO03/038043,公开于2003年5月8日；WO03/037913,公开于2003年5月8日。同样已经描述了某些抗DR5抗体，参见例如WO98/51793，公开于1998年11月8日;Griffithetal"J.Immunol"162:2597-2605(1999);Ichikawaetal"NatureMed.,7:954-960(2001);Hylanderetal.,"AnAntibodytoDR5(TRAIL-Receptor2)SuppressestheGrowthofPatientDerivedGastrointestinalTumorsGrowninSCIDmice",Abstract,2dInternationalCongressonMonoclonalAntibodiesinCancers,Aug.29-Sept.1,2002,Banff,Alberta,Canada;WO03/038043,公开于2003年5月8日；WO03/037913,公开于2003年5月8日。另外，已经描述了某些对DR4和DR5受体都具有交叉反应性的抗体(参见例如美国专利6，252，050，授权于2001年6月26日)。发明概述本发明提供了DR5抗体，其能够特异性结合人DR5和/或能够调控与DR5和/或其配体有关的生物学活性，特别是凋亡，因而可用于治疗多种疾病和病理学疾患，包^l舌癌症或免疫相关疾病。一方面，本发明关注抗DR5抗体或其片段，其包含全长抗体16E2的重链和/或轻链(分别是SEQIDNO:11和13)中的至少一处突变，其中所述抗体或抗体片段显示出至少与抗体16E2相同的对DR5的亲和力，和/或展现出至少与抗体16E2相同的生物学活性和/或潜能。在一个具体的实施方案中，所述抗体或抗体片段将与全长抗体16E2结合基本上相同的表位。在另一个实施方案中，所述抗DR5抗体将展现出比全长抗体16E2更高的对DR5的亲和力，和/或显示出相对于全长抗体16E2升高的生物学活性和/或升高的潜能。在还有一个实施方案中，本发明的抗DR5抗体和抗体片段显示出至少与WO98/51793中记载的单链Fc抗DR5抗体16E2相同的对DR5的亲和力和/或展现出至少与WO98/51793中记载的单链Fc抗DR5抗体16E2相同的生物学活性和/或潜能。在一个实施方案中，所述抗DR5抗体包含具有表1-7和9-12中任一所列至少一处替代的重链和/或轻链。在另一个实施方案中，所述抗DR5抗体包含16E2抗体重链可变区框架中的一处或多处突变。在还有一个实施方案中，所述DR5抗体包含选自下组的框架突变Q6E、V11L、E12V、R13Q和K105Q。在另一个实施方案中，所述抗DR5抗体包含如下所有框架突变Q6E、V11L、E12V、R13Q和K105Q。在还有一个实施方案中，所述抗DR5抗体或其片段包含全长抗体16E2重《连(SEQIDNO:ll)中的至少一处突变。在一个不同的实施方案中，所述抗DR5抗体或其片段包含选自下组的至少一处突变氨基酸序列SEQIDNO:11中的T28A、G33A、M34L、M34A、M34I、M34S、N53Q、N53Y和L102Y。在另一个实施方案中，所述抗DR5抗体或其片段包含氨基酸序列SEQIDNO:11中的G99A和R100A中的至少一处突变。在还有一个实施方案中，所述抗DR5抗体或其片段包含选自下组的一组突变氨基酸序列SEQIDNO:11中的(i)N53Q,L102Y;(ii)M34L，N53Q,L102Y;(iii)N53Y，L102Y;(iv)M34L，N53Y,L102Y;(v)G33A,N53Q,L102Y;(vi)M34L,N53Y,L102Y;(vii)G33A,N53Q，L102Y;(viii)G33A,N53Y，L102Y;(ix)T28A,N53Q，L102Y;及(x)T28A，N53Y,L102Y。在另一个实施方案中，所述抗DR5抗体或其片段包含全长16E2抗体轻链(SEQIDNO:13)中的至少一处突变。在一个具体的实施方案中，所述轻链是入链。在另一个具体的实施方案中，所述轻链突变在CDRL1中。在另一个实施方案中，所述轻链突变选自下组氨基酸序列SEQIDNO:13中的Q24A、Q24S、G25A、D26E、S27A、L28A、R29A、S30A、Y31A、Y31K、Y32H、A33G、S34A和S34Y。在还有一个实施方案中，所述轻链突变选自下组氨基酸序列SEQIDNO:13中的(i)Q24S,D26E,Y31K，S34Y;及(ii)D26E,Y31K。在一个不同的实施方案中，所述轻《连突变在CDRL2中。因而，例如，所述突变可选自下组氨基酸序列SEQIDNO:13中的G50A、G50K、G50S、K51D、N52A、N52S、N52L、N52Q、N53A、N53E、N53Q、N53S、P55A和S56A。在另一个实施方案中，所述抗体可包含选自下组的一组突变氨基酸序列SEQIDNO:13中的(i)G50K,K52S,N53E;(ii)G50S,K51D,N52S，N53E;(iii)N52S，N53E;及(iv)N52Q,N53S。在另一个实施方案中，所述轻链突变在CDRL3中。在还有一个实施方案中，所述抗体包含选自下组的至少一处突变氨基酸序列SEQIDNO:13中的N89A、N89L、N89Q、R91A、S93A、N95aA、N95aT、N95aQ、H95bA、N95bY、V96A、V97A。或者，所述抗DR5抗体可包含选自下组的一组突变氨基酸序列SEQIDNO:13中的(i)N89L,R91A,N95aT，H95bY;及(ii)N95aT,H95bY。在另一个实施方案中，所述抗DR5抗体包含选自下组的一组轻链突变氨基酸序列SEQIDNO:13中的(i)Q24S,G50K,K51D,H95bY;(ii)Q24S，K51A，D92S,S93Y;及(iii)Q24S,K51A,R91A,而且还可包含选自下组的一组重链突变氨基酸序列SEQIDNO:11中的(i)M34L,N53Q，L102Y;(ii)M34L，N53Y,L102Y;(iii)G33A,N53Q,L102Y;(iv)G33A，N53Y,L102Y;(v)M34L，N53Q，L102Y;(vi)M34L，N53Y,L103Y;(vii)G33A,N53Q,L102Y;(viii)G33A,N53Y，L102Y;及(ix)T28A，N53Q,L102Y，以及任选表5所列的一组框架突变。在一个具体的实施方案中，所述抗DR5抗体包含如下突变序列SEQIDNO:11中的G33A、N53Q、L102Y及序列SEQIDNO:13中的Q24S、K51A、R91A,而且还可包含至少一处框架突变，它可以是例如SEQIDNO:11中的残基6、11、12、13和105中的至少一个。在一个具体的实施方案中，所述抗DR5抗体选自下组ApomabU、2.1、3.1、4.1、5,1、6.1、7.1、8.1、9.1、1.2、2.2、3,2、4,2、5.2、6.2、7.2、8.2、9.2、1.3、2.3、3.3、4.3、5.3、6.3、7.3、8.3和9.3。在一个具体的实施方案中，所述抗DR5抗体选自下组Apomab5.2、5.3、6.2、6.3、7.2、73、8.3和25.3。在还有一个具体的实施方案中，所述抗DR5抗体是Apomab7.3或Apomab8.3,尤其是Apomab7.3。在还有一个实施方案中，所述抗DR5抗体是抗体片段，其可以选自下组Fab、Fab'、F(ab')2和Fv片段、双抗体、单链抗体分子和由抗体片l爻形成的多特异性抗体。在其它实施方案中，所述抗体可以是单链抗体。所述抗DR5抗体可以例如具有抗癌活性，t者如例如它们可具有在癌细胞中活化或刺激凋亡的能力。所述癌症包括例如癌、淋巴瘤、母细胞瘤、肉瘤和白血病。癌症的更具体例子包括鳞状细胞癌、小细胞肺癌、非小细胞肺癌(NSCLC)、非何杰金氏(non-Hodgkin，s)淋巴瘤、母细胞瘤、胃肠癌、肾癌(renalcancer)、卵巢癌、肝脏癌(livercancer)、胃癌、月旁胱癌、肝瘤(hepatoma)、乳腺癌、结肠癌、结肠直肠癌、胰腺癌、子宫内膜癌、唾液腺癌、肾癌(kidneycancer)、前列腺癌、外阴癌、曱状腺癌、肝癌(hepaticcarcinoma)、及头和颈癌。具体的癌症组包括肺癌，例如非小细胞肺癌(NSCLC);或腺癌，可以是例如结肠直肠癌、胰腺癌或转移性腺癌。还包括血液学癌症。嵌合的、人源化的或人的抗体在本文范围内，正如介导抗体依赖性细胞介导的细胞毒性(ADCC)的抗体。在一个优选的实施方案中，所述抗DR5抗体包括Apomab7.3或Apomab8.3，或其片段。所述抗体可以是二聚体的形式和/或例如与抗人IgGFc区交联的形式。在其它实施方案中，本文中的所述抗DR5抗体与表位标签序列融合。另一方面，本发明关注包含本文中的抗DR5抗体或抗体片l殳与异源氨基酸序列相融合的嵌合分子，其中所述异源氨基S交序列可以包括例如免疫球蛋白序列，诸如抗人IgGFc区。又一方面，本发明关注编码本文中的抗DR5抗体或抗体片段的分离的核酸分子，包含此类核酸分子的载体，包含此类核酸分子的宿主细胞，及生产本文中的抗体和抗体片段的方法。本发明还涉及组合物，其包含上文所定义的抗DR5抗体，及载体。所述载体可以是制药学可接受的载体，而且所述组合物还可包含另外的抗癌剂和/或另外的抗DR5抗体。又一方面，本发明关注诱导凋亡的方法，包括使哺乳动物癌细胞暴露于上文所定义的抗DR5抗体。又一方面，本发明关注治疗癌症的方法，包括对哺乳动物受试者施用有效量的上文所定义的抗DR5抗体。在所有方面，所述受试者可以是人类患者，而且所述癌症可以是任何癌症，包4舌上文所列的癌症。在另外一个方面，本发明关注制品，包括容器和装在所述容器中的组合物，其中所述组合物包含本发明的抗DR5抗体。所迷制品还可包括在体外或在体内使用抗DR5抗体的说明书。在一个优选的实施方案中，所述说明书有关癌症的治疗。附图简述图1显示了人Apo-2配体cDNA的核苷酸序列(SEQIDNO:2)及其衍生的氨基酸序列(SEQIDNO:1)。第447位核苷酸(SEQIDNO:2中)处的"N"用于表示该核苷酸碱基可以是"T"或"G"。图2A-2C显示了全长人DR4受体cDNA的核苷酸序列(SEQIDNO:4)及其衍生的氨基酸序列(SEQDDNO:3)。人DR4受体的核苷S吏序列和氨基酸序列还才艮道于Panetal.，Science,276:111(1997)。图3A-3C显示了人DR5受体的411个氨基酸的序列(SEQIDNO:5)及编码核苷酸序列(SEQIDNO:6),公开于1998年11月19日出版的WO98/51793。图4A-4C显示了人DR5的440个氨基酸的序列(SEQIDNO:7)及编码核苷酸序列(SEQIDNO:8)，还公开于1998年8月20日出版的WO98/35986。9)'图6显示了单链抗DR5抗体16E2(16E2scFv)的氨基酸序列(SEQIDNO:10)，其中显示了信号序列及重链和轻链CDR。图7显示了全长16E2抗体重链的氨基酸序列(SEQIDNO:11)。图8显示了全长16E2抗体重链的核苷酸序列(SEQIDNO:12)。图9显示了全长16E2抗体轻链的氨基酸序列(SEQIDNO:13)。图11A和B显示了用于表达免疫球蛋白轻链的质粒pDRl的序列(SEQIDNO:15，5391bp)。pDRl包含编码无关抗体，人源化抗CD3抗体的轻链，的序列(Shalabyetal.，J.Exp.Med.175:217-225(1992)),其起始和终止密码子以粗体和下划线标示。图12A和B显示了用于表达免疫球蛋白重链的质粒pDR2的序列(SEQIDNO:16)。pDR2包含编码无关抗体，人源化抗CD3抗体的重链，的序列(Shalabyetal.,supra)，其起始和终止密码子以4且体和下划线标示。图13显示了Apomab7.3重链核芬酸序列(SEQIDNO:17)。图14显示了Apomab7.3重链氨基酸序列(SEQIDNO:18)。图15显示了Apomab7.3轻链核苷酸序列(SEQIDNO:19)。图16显示了Apomab7.3轻链氨基酸序列(SEQIDNO:20)。图17A和B显示了16E2和Apomab7.3的重《连对比。图18显示了16E2和Apomab7.3的轻《连对比。图19是抗DR5抗体重链的同源性模型。图20是抗DR5抗体轻链的同源性模型。图21显示了与全长16E2(型式1)抗体相比，腹膜内(IP)单剂Apomab5.3、6.3和8.3在人结肠癌的Colo205异种移植无胸腺棵鼠模型中的抗癌活性。图22显示了与全长16E2(型式1)相比，IP单剂Apomabs5.2、6.2、5.3、7.2和7.3在人结肠癌的Colo205异种移植无胸腺棵鼠才莫型中的抗癌活性。图23显示了与全长16E2(型式1)相比，IP单剂Apomab5.2、7.3和8.3在人结肠癌的Colo205异种移植无胸腺棵鼠模型中的抗癌活性。图24显示了与Apomab7.3相比，IP单剂Apomab23.3和25.3在人结肠癌的Colo205异种移植无胸腺棵鼠模型中的抗癌活性。图25显示了衍生自稳定细胞系较之瞬时细胞系的Apomab7.3在人结肠癌的Colo205异种移植无胸腺棵鼠模型中的抗癌活性。图26显示了单独的和联合CPT-ll的Apomab7.3在肺癌的HCT15异种移植模型中的抗癌活性。图27显示了单独的和联合CPT-ll的Apomab7.3在人肉瘤的LS180异种移植;漠型中的抗癌活性。图28显示了单独的和联合RITUXAN⑧(rituximab)的Apomab7.3在非何杰金氏淋巴瘤的BJAB异种移植CB17ICRSCID小鼠模型中的抗癌活性。图29显示了单独的和l关合吉西他滨的Apomab7.3在人胰腙1，癌的BxPC3异种移植无胸腺棵鼠模型中的抗癌活性。图30显示了单独的及联合卡铂和泰素(taxol)的Apomab7.3在人肺癌的H460异种移植模型的抗癌活性。图31显示了单独的及if关合卡铂和泰素的Apomab7.3在人肺癌的H2122异种移植模型中抗癌活性。图32显示了Apomab7.3在人肺癌的H2122异种移植模型中的剂量-响应曲线。图33显示了与Apomab7.3相比，Apomab23.3和25.3在人结肠癌的Colo205异种移植模型中的抗癌活性。图34显示了单独的Apo2L.0、单独的Apomab7.3和多种组合对棵鼠中Colo205人结肠癌异种移;险物的中值肿瘤生长和Kaplan-Meier图。图35和36显示了单独的Apo2L.0、单独的Apomab7.3和多种组合对无胸腺棵鼠异种移植模型中的SKMES-l人非小细胞肺癌(NSCLC)细胞的中值肿瘤生长和Kaplan-Meier图。图37显示了单独的Apo2L.0、单独的Apomab7.3和多种组合在人Colo205结肠癌异种移植模型中的中值肿瘤生长和Kaplan-Meier图。优选实施方案的详述I.定义术语"Apo-2配体"、"Apo-2L"、"Apo2L"、"Apo-2配体/TRAIL，，和"TRAIL"在本文中可互换使用，指包含图1(SEQIDNO:1)所示氨基酸序列的氨基酸残基114-281(含)、残基95-281(含)、残基92-281(含)、残基91-281(含)、残基41-281(含)、残基39-281(含)、残基15-281(含)或残基1-281(含)的多肽序列，以及上述序列的生物学活性片段、删除、插入和/或替代变体。在一个实施方案中，多肽序列包含图1(SEQIDNO:1)的残基114-281。任选的是，多肽序列包含图l(SEQIDNO:1)的残基92-281或残基91-281。Apo-2L多肽可以由图1(SEQIDNO:2)所示天然核苷酸序列编码。任选的是，编码残基Pro119(图1;SEQIDNO:2)的密码子可以是"CCT"或"CCG"。任选的是，所述片段或变体具有生物学活性，且与任一上述序列具有至少约80%的氨基酸序列同一性，或至少约90%的序列同一性，或至少95%、96%、97%、98%或99%的序列同一性。该定义涵盖Apo2配体的替代变体，其中其至少一个天然氨基酸用另一种氨基酸诸如丙氨酸残基替代。该定义还涵盖从Apo-2配体来源分离的或者通过重组和/或合成方法制备的天然序列Apo-2配体。本发明的Apo-2配体包括1997年1月16曰公开的WO97/01633、1997年7月17日公开的WO97/25428、1999年7月22日公开的WO99/36535、2001年1月4日公开的WO01/00832、2002年2月7日/>开的WO02/09755、2000年12月14日/>开的WO00/75191和2000年2月29日公告的美国专利第6,030,945号中披露的称作Apo-2配体或TRAIL的多肽。这些术语通常用于指Apo-2配体的各种形式，包括多肽的单体、二聚体、三聚体、六聚体或更高寡聚体形式。除非另有说明，Apo-2L序列中提及的所有氨基酸残基编号采用依照图1(SEQIDNO:l)的编号。"Apo-2配体受体"包括本领域称作"DR4"和"DR5"的受体，其多核苷酸和多肽序列分别显示于图2A-2C(SEQIDNO:4和3)和3A-3C(SEQIDNO:6和5)。Pan等人描述了称作"DR4"的TNP受体家族成员(Panetal.,Science,276:111-113(1997);WO98/32856,公开于1998年7月30日；WO99/37684，公开于1999年7月29日；WO00/73349，公开于2000年12月7日;US6,433,147,授权于2002年8月13日；US6,461,823,授权于2002年10月8日；US6,342,383,授权于2002年1月29日)。Sheridan等人(Science,277:818-821(1997))和Pan等人(Science,277:815-818(1997))描述了Apo2L/TRAIL的另一种受体(还可参见WO98/51793,公开于1998年11月19日；WO98/41629,公开于1998年9月24日)。此受体称作DR5(该受体还可称作Apo-2、TRAIL-R、TR6、Tango-63、hAP08、TRICK2或KILLER;Screatonetal.,CumBiol"7:693-696(1997);Walczaketal.,EMBOJ.,16:5386-5387(1997);Wuetal.,NatureGenetics,17:141-143(1997);WO98/35986,公开于1998年8月20日；EP870,827,公开于1998年10月14日；WO98/46643,公开于1998年10月22日；WO99/02653,公开于1999年1月21日；WO99/09165,公开于1999年2月25日；WO99/11791,公开于1999年3月11日；US2002/0072091,公开于2002年8月13日；US2002/0098550，公开于2001年12月7日；US6,313,269,授权于2001年12月6日；US2001/0010924,公开于2001年8月2日；US2003/01255540，公开于2003年7月3日；US2002/0160446,公开于2002年10月31日；US2002/0048785,公开于2002年4月25日；US6,569,642，授权于2003年5月27日；US6,072,047，授权于2000年6月6日；US6,642,358，授权于2003年11月4日)。如上所述，Apo-2L的其它受体包括DcRl、DcR2和OPG(参见Sheridanetal.，见上文；Marstersetal"见上文；Simonetetal"见上文)。术语"Apo-2L受体"在用于本文时涵盖天然序列受体和受体变体。这些术语涵盖在多种哺乳动物包括人中表达的Apo-2L受体。Apo-2L受体可以是内源表达的，如在多种人组织语系中天然发生的，或者可以是通过重组或合成方法表达的。"天然序列Apo-2L受体"包括与衍生自自然界的Apo-2L受体具有相同氨基酸序列的多肽。因此，天然序列Apo-2L受体可以具有来自任何哺乳动物包括人的天然存在Apo-2L受体的氨基酸序列。此类天然序列Apo-2L受体可以从自然界分离，或者可以通过重组或合成手段生产。术语"天然序列Apo-2L受体，，明确涵盖天然存在的截短或分泌形式的受体(例如含有例如胞外域序列的可溶形式)、天然存在的变体形式(例如可变剪接形式)和天然存在的等位基因变体。受体变体可包括天然序列Apo-2L受体的片段或删除突变体。图3A-3C显示了1998年11月19日公开的WO98/51793中披露的411个氨基酸的人DR5序列。本领域知道人DR5的一种转录剪接变体。此DR5剪接变体编码图4A-4C所示440个氨基酸的人DR5序列，及其核苷S吏序列(SEQIDNO:7和8)，正如1998年8月20日公开的WO98/35986中所4皮露的。"死亡受体抗体"在用于本文时通常指针对肿瘤坏死因子受体超家族中包含能够发出凋亡信号的死亡结构域的受体的抗体，此类抗体包括DR5抗体和DR4抗体。"DR5受体抗体"、"DR5抗体，，或"抗DR5抗体，，以广义使用，指结合至少一种形式的DR5受体或其胞外域的抗体。任选的是，DR5抗体与异源序列或分子融合或连接。优选的是，异源序列容许或帮助抗体形成更高等级或寡聚复合物。任选的是,DR5抗体结合DR5受体但不与任何其它Apo-2L受体(例如DR4、DcRl或DcR2)结合或发生交叉反应。任选的是，该抗体是DR5信号活性的激动剂。术语"抗DR5抗体"及其语法等效物明确涵盖实施例中所描述的抗体，包括但不限于表11和12中所列出的"Apomab"抗体,例如Apomabl.l、2.1、3.1、4.1、5.1、6.1、7.1、8.1、9.1、1.2、2.2、3.2、4.2、5.2、6.2、7.2、8.2、9.2、1.3、2.3、3.3、4.3、5.3、6.3、7.3、8.3和9.3,优选Apomab7.3。任选的是，根据BIAcore结合测定法的测量，本发明的DR5抗体在约O.lnM到约20mM的浓度范围内结合DR5受体。任选的是，根据BIAcore结合测定法的测量，本发明的DR5抗体呈现出约0.6nM到约18mM的Ic50值。"DR4受体抗体"、"DR4抗体，，或"抗DR4抗体"以广义4吏用，指结合至少一种形式的DR4受体或其胞外域的抗体。任选的是，DR4抗体与异源序列或分子融合或连接。优选的是，异源序列允许或帮助抗体形成更高等级或寡聚复合物。任选的是，DR4抗体结合DR4受体但不与任何其它Apo-2L受体(例如DR5、DcRl或DcR2)结合或发生交叉反应。任选的是，该抗体是DR4信号活性的激动剂。任选的是，根据BIAcore结合测定法的测量，DR4抗体在约O.lnM到约20mM的浓度范围内结合DR4受体。任选的是，根据BIAcore结合测定法的测量，本发明的DR4抗体呈现出约0.6nM到约18mM的Ic50值。术语"激动剂"以最广义使用，包括在体外、原位、或在体内部分或完全增强、刺激、或激活Apo2L/TRAIL、DR4或DR5的一种或多种生物学活性的任何分子。Apo2L/TRAIL结合DR4或DR5的此类生物学活性的例子包括凋亡以及文献中进一步报道的那些。激动剂可以直接或间接方式发挥功能用。例如，激动剂可以在体外、原位、或在体内由于其直接结合DR4或DR5从而引起受体活化或信号转导的结果发挥功能而部分或完全增强、刺激、或激活DR4或DR5的一种或多种生物学活性。激动剂还可以在体外、原位、或在体内由于例如刺激另一种效应物分子继而引起DR4或DR5活化或信号转导的结果间接发挥功能而部分或完全增强、刺激、或激活DR4或DR5的一种或多种生物学活性。设想了激动剂可作为间接发挥功能来增强或提高DR4或DR5活化或活性的增强剂分子。例如，激动剂可增强哺乳动物中内源Apo-2L的活性。这可通过例如预复合(pre-complexing)DR4或DR5或者通过稳定各配体与DR4或DR5受体的复合物(诸如稳定Apo-2L与DR4或DR5之间形成的天然复合物)来实现。"胞外结构域"或"ECD"指配体或受体基本上不含跨膜结构域和胞质结构域的形式。通常，可溶性ECD将具有少于1%的此类跨膜结构域和胞质结构域，优选将具有少于0.5%的此类结构域。术语"表位标记的，，在用于本文时指包含蛋白质诸如Apo-2配体或DR5受体或其部分或者结合此类配体或受体的抗体且其与"标签多肽"融合的嵌合多肽。标签多肽具有足够残基以提供表位而可制备针对其的抗体，但又足够短使得其不干扰配体或受体的活性。标签多肽优选还是相当独特的，使得其抗体基本上不与其它表位发生交叉反应。合适的标签多肽通常具有至少6个氨基酸残基，通常在约8个和约50个氨基酸残基之间(优选在约10个和约20个残基之间)。"分离的"，在用于描述本文中所公开的各种蛋白质时，意指已经鉴定且与/由其天然环境的一种成分分开和/或回收的蛋白质。其天然环境的污染性成分指通常会干扰该蛋白质的诊断或治疗用途的物质，可包括酶、激素、和其它蛋白质性质或非蛋白质性质的溶质。在优选的实施方案中，将蛋白质纯化至(1)足以通过使用转杯式测序仪获得至少15个残基的N-末端或内部氨基酸序列的程度，或(2)根据使用考马斯蓝或优选银染色的非还原性或还原性条件下的SDS-PAGE，达到同质。既然Apo-2配体天然环境的至少一种成分不会存在，那么分离的蛋白质包括重组细胞内的原位蛋白质。然而，分离的蛋白质通常通过至少一个纯化步骤来制备。关于本文中所鉴定的序列的"百分比(％)氨基酸序列同一性"定义为对比序列并在必要时引入缺口以获取最大百分比序列同一性后，且不将任何保守替代视为序列同一性的一部分时，候选序列中与所比较配体、受体或抗体序列中的氨基酸残基相同的氨基酸残基的百分率。为测定百分比氨基酸序列同一性目的的对比可以本领域技术范围内的多种方式进行。本领域4支术人员可决定用于测量对比的适宜参数，包括评估对所比较全长序列获得最大对比所需的算法。为了本发明的目的，百分比氨基S臾序列同一性值可使用序列比较计算机程序ALIGN-2获得，其由Genentech公司编写，其源代码已经连同用户文档一起提交给美国版权局(USCopyrightO伍ce，WashingtonD.C.,20559),并以美国版权注册号TXU510087注册。7>众可通过Genentech公司(SouthSanFrancisco,CA)得到ALIGN-2程序。所有序列比较参数由ALIGN-2程序设定且不变。然后相对于较长序列计算百分比氨基酸序列同一性。因此，即使较短序列完全包含在较长序列中，序列同一性也将小于100%。术语"控制序列"指在特定宿主生物体中表达可操作连接的编码序列所必需的DNA序列。例如，适于原核生物的控制序列包括启动子、任选的操纵基因序列、和核糖体结合位点。已知真核细胞利用启动子、多腺苷酸化信号、和增强子。若一段核酸与另一段核酸序列处于功能性相互关系中，则它是"可操作连4妄"的。争H口，若前序列(presequence)或分)必前导(secretoryleader)的DNA表达成参与多肽分泌的前蛋白质(preprotein),则它与多肽的DNA可操作连接；若启动子或增强子影响编码序列的转录，则它与该序列可操作连接；或者，若核糖体结合位点的位置促进翻译，则它与编码序列可操作连接。通常，"可操作连接"意味着相连的DNA序列是相邻的，而且在分泌前导的情况中意味着相邻且处于阅读状态。然而，增强子不必相邻。连接可以通过在方便的限制性位点处的连接反应来实现。如果没有此类位点，那么依照常规实践使用合成的寡核苷酸衔接头或接头。术语"多元醇(polyol)"在用于本文时泛指多羟基醇化合物。多元醇可以是例如任何水溶性聚(亚烷基氧化物)聚合物，而且可具有线性链或分支链。优选的多元醇包括那些在一个或多个羟基位置用化学基团诸如具有1至4个碳的烷基取代的多元醇。典型的是，多元醇是聚(亚烷基二醇)，优选聚(乙二醇)(PEG)。然而，本领域技术人员认识到，其它多元醇诸如聚(丙二醇)和聚乙烯-聚丙二醇共聚物可利用本文中关于PEG描述的偶联技术得以采用。多元醇包括本领域众所周知的那些类型以及可公开获得的那些类型，诸如从商业来源获》寻，it长口NektarCorporation。术语"偶联"(conjugate)在本文中依照其最广泛的定义使用，指接合或连接到一起。若分子像接合在一起时那样起作用或运作，则它们是"偶联"的。杂交反应的"严格性'，可以由本领域普通技术人员容易的确定，而且通常根据探针长度、洗涤温度和盐浓度凭经验计算。一般而言，较长的探针要求较高的温度以正确退火，而较短的探针需要较低的温度。杂交通常依赖于当互补链存在于低于其解链温度的环境中时变性DNA重新退火的能力。探针和可杂交序列之间的期望同一性程度越高，可使用的相对温度也越高。结果是，推断出较高相对温度将趋向于使反应条件更为严格，而较低温度也就较不严格。关于杂交反应严格性的其它细节和解释，参见Ausubd等人，《CurrentProtocolsinMolecularBiology》，WileyIntersciencePublishers,1995。"严格条件"或"高严格性条件"，如本文中所定义的，鉴定如下(1)采用低离子强度和高温进行清洗，例如0.015M氯化钠/0.0015M杵檬酸钠/0.1%十二烷基硫酸钠，于50°C;(2)在杂交过程中采用变性剂，诸如甲酰胺，例如50。/。(v/v)甲酰胺及0,1%牛血清白蛋白/0.1%Ficoll/0.1%聚乙烯。比咯烷酮/50mM磷酸钠緩沖液pH6.5及750mM氯化钠，75mM柠檬酸钠，于42。C;或(3)采用50%曱酰胺，5xSSC(0.75MNaCl，0.075M柠檬酸钠)，50mM磷酸钠(pH6.8),0.1%焦磷酸钠，5xDenhardt氏溶液，超声处理的鲑精DNA(50吗/ml)，0.1。/。SDS，和10%硫酸右旋糖苷，于42。C,及于42。C在0.2xSSC(氯化钠/柠檬酸钠)和50%曱酰胺中清洗，接着于55。C在含EDTA的O.lxSSC中进行高严才各性清洗。"中等严格条件，，可以如Sambrook等人，《MolecularCloning:ALaboratoryManual》，NewYork,ColdSpringHarborPress,1989中所述鉴定，包括使用比上文所述较不严格的清洗溶液和杂交条件(例如温度、离子强度和％SDS)。中等严格条件的一个例子是于37"在含20%甲酰胺，5xSSC(150mMNaCl，15mM柠檬酸三钠)，50mM磷酸钠(pH7.6),5xDenhardt氏溶液，10%硫酸右旋糖苷，和20mg/ml变性剪切的鲑精DNA的溶液中温育过夜，接着于约37-50。C在lxSSC中清洗滤膜。技术人员将认识到如何在必要时调整温度、离子强度等以适应诸如探针长度等因素。术语"氨基酸，，指所有天然存在的L-a-氨基酸。此定义意图包括正亮氨酸、鸟氨酸和高半胱氨酸。氨基酸通过单字母或三字母标示鉴别AspD天冬氨酸HeI异亮氨酸ThrT苏氨酸Leu亮氨酸SerS丝氨酸TyrY酪氨酸GluE谷氨酸PheF苯丙氨酸ProP脯氨酸HisH组氨酸GlyG甘氨酸LysK赖氨酸AlaA丙氨酸ArgR精氨酸CysC半胱氨酸TipW色氨酸ValV缬氨酸GinQ谷氨酰胺MetM曱硫氨酸AsnN天冬酰胺在附图中，可釆用某些其它单字母或三字母标示来指向和鉴定序列中给定位置处的两种或多种氨基酸或核苷酸。术语"抗体，，以最广义使用，明确覆盖单一抗DR5单克隆抗体(包括激动性、拮抗性、和中和性或阻断性抗体)及具有多表位特异性的抗DR5抗体组合物。"抗体"在用于本文时包括完整免疫球蛋白或抗体分子、多克隆抗体、多特异性抗体(例如由至少两种完整抗体形成的双特异性抗体)、及免疫球蛋白片段(诸如Fab、F(ab')2或Fv),只要它们展现出本文中所描述的如何期望的激动性或拮抗性特性。抗体典型的是展现出对特定抗原的结合特异性的蛋白质或多肽。天然抗体通常是由两条相同的轻链(L)和两条相同的重链(H)构成的异四聚体糖蛋白。典型的，每条轻链通过一个共价二硫键与重链相连，而二硫4定^:目在不同免疫球蛋白同种型的重链间有所变化。每条重链和轻链还具有间隔规律的链内二硫键。每条重链在一段具有一个可变区(VH),接着是多个恒定区。每条轻链在一端具有一个可变区(vo,另一端是一个恒定区。轻链恒定区与重链第一恒定区排列在一起，而轻链可变区与重链可变区排列在一起。认为特定的氨基酸残基在轻链和重链可变区之间形成界面(Chothiaetal.，J.Mol.Biol"186:651-663(1985);NovotnyandHaber,Proc.Natl.Acad.Sci.USA，82:4592-4596(1985))。根据其恒定区氨基酸序列，来自任何脊推动物物种的抗体轻链可归入两种截然不同类型中的一种，称作卡帕(k)和拉姆达(x)。根据其重链恒定区氨基S臾序列，免疫球蛋白可归入不同的类别。有五大类免疫球蛋白IgA、IgD、IgE、IgG和IgM,其中有些可进一步分为亚类(同种型)，例如IgGl、IgG2、IgG3和IgG4;IgAl和IgA2。对应于不同类免疫^求蛋白的重《连恒定区分别称作a、5、s、y和[i。"抗体片段"包含完整抗体的一部分，通常是完整抗体的抗原结合或可变区。抗体片段的例子包括Fab、Fab'、F(ab')2和Fv片段；双抗体；单链抗体分子；及由抗体片段形成的多特异性抗体。术语"可变的"在本文中用于描述可变区中的某些部分在抗体序列间有差异且用于每种特定抗体对其特定抗原的结合和特异性。然而，变异性通常不是均匀分布于抗体的整个可变区的。它典型的集中于轻链和重链可变区中称作互补决定区(CDR)或高变区的三个区段。可变区中更加高度保守的部分称作框架区(FR)。天然重链和轻链的可变区各自包含四个FR,它们大多采取(3-折叠片构象，通过形成环状连接且在有些情况中形成(3-折叠片结构一部分的三个CDR连接。每条链中的CDR通过FR非常接近的保持在一起，并与另一条链的CDR—起促成抗体的抗原结合位点的形成(参见Kabat，E.A.等人，《SequencesofProteinsofImmunologicalInterest》，NationalInstitutesofHealth,Bethesda，MD，1987)。恒定区不直接参与抗体与抗原的结合，但展现出多种效应物功能，诸如抗体依赖性细胞毒性中抗体的参与。术语"单克隆抗体"在用于本文时指从一群基本上同质的抗体获得的抗体，即构成群体的各个抗体相同，除了可能以极小量存在的可能的天然存在突变外。单克隆抗体是高度特异性的，针对单一抗原性位点。此外，与典型的包含针对不同决定簇(表位)的不同抗体的常规(多克隆)抗体制备物不同，每种单克隆抗体针对抗原上的单一决定簇。单克隆抗体在本文中包括通过抗DR5抗体的可变区(包括高变区)与恒定区(例如"人源化"抗体)、或者轻链与抗体、或者来自一个物种的一条链与来自另一物种的一条链的剪接而产生的嵌合的、杂合的和重组的抗体，或是与异源蛋白的融合物，不管物种起源或者免疫^^蛋白的类或亚类归属，以及抗体片段(例如Fab、F(ab')2和Fv)，只要它们展现出期望的生物学活性或特性。参见例如美国专利第4,816,567号及Mageetal.,在《MonoclonalAntibodyProductionTechniquesandApplications》中,pp.79-97,MarcelDefcker,Inc.:NewYork,1987。如此，修饰语"单克隆"指示抗体从基本上同质的抗体群获得的特征，不应解释为要求通过任何特定方法来生成抗体。例如，将依照本发明使用的单克隆抗体可通过最初由KohlerandMilstein,Nature256:495(1975)记载的杂交瘤方法来制备，或者可通过诸如美国专利第4，816，567号中描述的重组DNA方法来制备。"单克隆抗体，，还可从使用例如McCaffertyetal.，Nature,348:552-554(1990)中记载的技术产生的噬菌体抗体库分离。非人(例如鼠)抗体的"人源化，，形式指最低限度包含衍生自非人免疫球蛋白的序列的特定嵌合免疫球蛋白、免疫球蛋白链、或其片段(诸如Fv、Fab、Fab，、F(ab，)2或抗体的其它抗原结合子序列)。在极大程度上，人源化抗体指人免疫球蛋白(受体抗体)中的互补决定区(CDR)残基用具有期望特异性、亲和力和能力的非人物种(供体抗体)诸如小鼠、大鼠或兔的CDR残基替换的免疫球蛋白。在有些情况中，将人免疫球蛋白的Fv框架区(FR)残基用相应的非人残基替换。此外，人源化抗体可包含在受体抗体或输入CDR或框架序列中都没有找到的残基。进行这些修饰是为了进一步改进和优化抗体的性能。一般而言，人源化抗体将包含至少一个、通常两个基本上整个如下可变区，其中整个或基本上整个CDR对应于非人免疫球蛋白的高变环，且整个或基本上整个FR是人免疫球蛋白共有序列的FR。人源化抗体最好还将包含至少部分免疫球蛋白恒定区(Fc),通常是人免疫球蛋白的恒定区。"人抗体"指拥有与由人生成的抗体的氨基酸序列对应的氨基酸序列和体。人抗体的这种定义包括包含至少一条人重链多肽或至少一条人轻链多肽的抗体，例如包含鼠轻链和人重链多肽的抗体。人抗体可使用本领域已知的多种技术来生成。在一个实施方案中，人抗体是从噬菌体文库选择的，该噬菌体文库表达人抗体(Vaughanetal.，NatureBiotechnology,14:309-314(1996);Sheetsetal.，PNAS(USA)95:6157-6162(1998);HoogenboomandWinter,J,Mol.Biol..227:381(1991);Marksetal.,J.Mol.Biol"222:581(1991))。人抗体还可通过将人免疫球蛋白基因组导入内源免疫球蛋白基因已经部分或完全灭活的转基因动物例如小鼠来生成。在受到攻击时，观察到人抗体生成，它在所有方面与在人体中看到的极其相似，包括基因重排、装配和抗体全集。这种方法记载于例如美国专利5，545，807;5,545,806;5,569,825;5，625，126;5,633,425;5,661,016，及如下科学出版物Marksetal"Bio/Technology，10:779-783(1992);Lonbergetal.，Nature,368:856-859(1994);Morrison,Nature,368:812-13(1994);Fishwildetal.，NatureBiotechnology,14:845-51(1996);Neuberger,NatureBiotechnology,14:826(1996);LonbergandHuszar,Intern.Rev.Immunol.,13:65-93(1995)。或者，人抗体可通过生成针对耙抗原的抗体的人B淋巴细胞的永生化来制备(此类B淋巴细胞可从个体回收，或者可在体夕卜免疫)。参见例如Coleetal.，MonoclonalAntibodiesandCancerTherapy,AlanR.Liss,p.77(1985);Boemeretal.,J.Immunol.,147(1):86-95(1991);美国专利第5,750,373号。术语"Fc区"用于定义免疫球蛋白重链的C-末端区，它可以通过用木瓜蛋白酶消化完整抗体来产生。Fc区可以是天然序列Fc区或变异Fc区。尽管免疫球蛋白重链Fc区的边界可有所变化，然而人IgG重链Fc区通常定义为从Cys226位置附近或Pro230位置附近的氨基酸残基至Fc区的羧基末端的区段(本文中使用依照Kabatetal.，supra的编号系统)。免疫球蛋白的Fc区通常包含两个恒定区，CH2结构域和CH3结构域，任选包含CH4结构域。"Fc区链，，在本文中指Fc区的两条多肽链之一。人IgGFc区的"CH2结构域"(也称为"Cy2"结构域)通常自约第231位氨基酸残基延伸至约第340位氨基酸残基。CH2结构域的独特之处在于它没有与另一结构域紧密配对。而是，有两个N-连接的分支的碳水化合物链介于完整天然IgG分子的两个CH2结构域之间。推测碳水化合物可能提供结构域-结构域配对的替代且有助于稳定CH2结构域。Burton，Molec.Immunol.22:161-206(1985)。CH2结构域在本文中可以是天然序列CH2结构域或变异CH2结构域。"CH3结构域"包含Fc区中CH2结构域C-末端的一^l残基(即自IgG的约第341位氨基酸残基至约第447位氨基酸残基)。CH3区在本文中可以是天然序列CH3结构域或变异CH3结构域(例如在其一条链中具有引入的"隆起"(protroberance)而在其另一条链中具有相应引入的"空腔"(cavity)的CH3结构域；参见美国专利5，821，333)。此类变异CH3结构域可用于生成本文所述多特异性(例如双特异性)抗体。"铰链区"通常定义为自人IgGl的约Glu216或约Cys226至约Pro230的区段(Burton,Molec.Immunol.22:161-206(1985》。其它IgG同种型的铰链区可以通过将第一个和最后一个形成重链间S-S键的半胱氨酸残基置于相同位置而与IgGl序列对比。铰链区在本文中可以是天然序列铰链区或变异铰链区。变异铰链区的两条多肽链通常每条多肽链保留至少一个半胱氨酸残基，使得变异铰链区的两条多肽链可在两条链之间形成二硫键。本文中优选的铰链区是天然序列人铰链区，例如天然序列人IgGl铰链区。"功能性Fc区"拥有天然序列Fc区的至少一种"效应物功能"。例示性"效应物功能"包括Clq结合；补体依赖性细胞毒性(CDC);Fc受体结合；抗体依赖性细胞介导的细胞毒性(ADCC);吞噬作用；细胞表面受体(例如B细胞受体；BCR)下调；等。此类效应物功能通常要求Fc区与结合结构域(例如抗体可变区)联合，而且可使用本领域知道的用于评估此类抗体效应物功能的多种测定法来评估。"天然序列Fc区"包含与自然界中找到的Fc区的氨基酸序列相同的氨基酸序列。"变异Fc区"由于至少一处氨基酸修饰而包含与天然序列Fc区的氨基酸序列不同的氨基酸序列。优选的是，变异Fc区与天然序列Fc区或与亲本多肽的Fc区相比具有至少一处氨基酸替代，例如天然序列Fc区中或亲本多肽的Fc区中约一处至约十处氨基酸替代，优选约一处至约五处氨基酸替代。变异Fc区在本文中将优选与天然序列Fc区和/或与亲本多肽的Fc区拥有至少约80%序列同一性，最优选至少约90%序列同一性，更优选至少约95%序列同一性。"抗体依赖性细胞介导的细胞毒性"和"ADCC"指由细胞介导的反应，其中表达Fc受体(FcR)的非特异性细胞毒性细胞(例如天然杀伤(NK)细胞、嗜中性粒细胞和巨p笪细胞)识别耙细胞上结合的抗体，随后^1起耙细胞溶解。介导ADCC的主要细胞，NK纟田月包，只表达FcyRIII,而单核细胞表达FcyRI、FcyRII和FcyRin。RavetchandKinet，^朋仏Aev,/柳w腦o/.9:457-92(1991)第464页表3总结了造血细胞上的FcR表达。为了评估目的分子的ADCC活性，可进行体外ADCC测定法，诸如美国专利第5，500，362或5，821，337号中所记载的。可用于此类测定法的效应细胞包括外周血单核细胞(PBMC)和天然杀伤(NK)细胞。或者/另外，可在体内评估目的分子的ADCC活性，例如在动物模型中，诸如ClynesW"/.,/W」S95:652-656(1998)中所4皮露的。"人效应细胞"指表达一种或多种FcR并行使效应器功能的白细胞。优选的是，该细胞至少表达FcyRffl并行使ADCC效应器功能。介导ADCC的人白细胞的例子包括外周血单个核细胞(PBMC)、天然杀伤(NK)细胞、单核细月包、细胞毒性T细胞和嗜中性粒细胞，优选PBMC和NK细胞。效应细胞可以从其天然来源分离，例如血液或PBMC,如本文中所描述的。术语"Fc受体"和"FcR"用于描述结合抗体Fc区的受体。优选的FcR是天然序列人FcR。此外，优选的FcR是结合IgG抗体的FcR(y受体)，包括Fc丫RI、FcyRII和Fc丫RIII亚类的受体，包括这些受体的等位变体和可变剪接形式。FcyRH受体包括FcyRIIA("活化受体")和FcyRIIB("抑制受体")，它们具有相似的氨基S交序列，区别主要在于其胞质结构域。活化受体FqRIIA在其胞质结构域中包含免疫受体基于酪氨酸的活化基序(ITAM)。抑制受体FcyRIIB在其胞质结构域中包含免疫受体基于酪氨酸的抑制基序(ITIM)(参见综述DaSron，Wev./mm，o/.15:203-234(1997))。FcR的综述参见RavetchandKinet,勘肌iev.7w附柳o/.9:457-492(1991);Capelda/.，Immunomethods4:25-34(1994》deHaasda/,，/丄a6.C//.Med126:330-41(1995)。术语"FcR"在本文中涵盖其它FcR,包括那些未来将会鉴定的。该术语还包括新生儿受体，FcRn，它负责将母体IgG转移给胎儿(GuyereM/.，/薩圃/.117:587(1976)和Kim"a/.，J/固,/.24:249(1994))。"补体依赖性细胞毒性"和"CDC"指在存在补体时溶解靶物。补体激活途径是由补体系统第一组分(Clq)结合与关联抗原复合的分子(例如抗体)起始的。为了评估补体激活，可进行CDC测定法，例如如Gazzano-Santoroa/wwm朋/.M^/wdy202:163(1996)中所记载的。"亲和力成熟的"抗体指在其一个或多个CDR中具有导致抗体对抗原的亲和力与没有这些改变的亲本抗体相比有所改进的一处或多处改变的抗体。优选的亲和力成熟的抗体将具有纳摩尔或甚至皮摩尔水平的对靶抗原的亲和力。亲和力成熟的抗体可通过本领域已知流程生成。Marksa/.，&o/rec/wo/ogy10:779-783(1992)记载了通过VH和VL结构域改组的亲和力成熟。下列文献记载了CDR和/或框架残基的随机诱变Barbas"a/.,Waf.Jcad5W.t7S/491:3809-3813(1994);Schier"a/"169:147-155(1995);YeltonWa/.,J/www"o/.155:1994-2004(1995);Jackson"a/.，//麵薩/.154(7):3310-9(1995);Hawkins&a/.，■/Mo/.肠/.226:889-896(1992)。术语"免疫特异性"在用于例如"抗体的免疫特异性结合"时指在抗体的抗原结合位点和该抗体所识别的特定抗原之间发生的抗原特异性结合相互作用。为了本发明的目的，"生物学活性，，和"期望的生物学活性"指有能力在体内或离体的(exvivo)在至少一种类型的哺乳动物细胞中调控DR5活性或DR5活化，包括例如凋亡(或是激动性或刺激性方式或是拮抗性或阻断性方式)，结合Apo-2配体(TRAIL)，或调控胞内信号途径中一种或多种分子诸如胱天蛋白酶3、胱天蛋白酶8、胱天蛋白酶10或FADD的活化。用于测定此类胞内分子活化的测定法是本领域已知的，参见例如Boldinetal.,J.Biol.Chem.,270:7795-7798(1995);Peter,CellDeathDiffer"7:759-760(2000);Nagata，Cell,88:355-365(1998);Ashke應ietal.，Science,281:1305-1308(1999)。术语"激动剂"和"激动性"在用于本文时指向或描述能够直接或间接的实质性诱导、促进或增强DR5生物学活性或活化的分子。任选的是，"激动剂DR5抗体"指具有与DR5配体，称为Apo-2配体(TRAIL)，相当的活性，或者能够活化DR5受体从而导致一种或多种胞内信号途径激活的抗体，它可以包括胱天蛋白酶3、胱天蛋白酶8、胱天蛋白酶10或FADD的活化。术语"拮抗剂"和"拮抗性"在用于本文时指向或描述能够直接或间接的实质性抵消、降低或抑制DR5生物学活性或DR5活化的分子。任选的是，拮抗剂指中和源自DR5活化或DR5与其配体诸如Apo-2配体形成复合物的生物学活性的分子。术语"凋亡"和"凋亡活性，，以广义使用，指哺乳动物中有序或受控形式的细胞死亡，通常伴随着一种或多种特征性细胞变化，包括细胞质浓缩、质膜微绒毛丧失、细胞核节段化、染色体DNA降解或线粒体功能丧失。可以通过例如细胞生存力测定法、膜联蛋白V结合测定法、PARP测定法、FACS分析或DNA电泳来测定和测量这种活性，这些都是本领域已知的。任选的是，通过膜if关蛋白V或PARP测定法来测定凋亡活性。术语"癌症"、"癌性"和"恶性肺瘤"指向或描述哺乳动物中特征通常为细胞生长不受调节的生理疾患。癌症的例子包括但不限于癌，包括腺癌、淋巴瘤、母细胞瘤、黑素瘤、(神经)月交质瘤、肉瘤、骨髓瘤(诸如多发性骨髓瘤)和白血病。此类癌症的更具体例子包括鳞状细胞癌、小细胞肺癌、非小细胞肺癌、肺的腺癌、肺的鳞状细胞癌、胃肠癌、何杰金氏淋巴瘤和非何杰金氏淋巴瘤、胰腺癌、成胶质细胞瘤、宫颈癌、(神经)胶质瘤、卵巢癌、肝的癌(livercancer)i者嗦o肝癌(hepaticcarcinoma)和肝瘤(hepatoma)、月旁月先癌、乳腺癌、结肠癌、结肠直肠癌、子宫内膜或子宫癌、唾液腺癌、肾的癌(kidneycancer)诸如肾细胞癌(renalcellcarcinoma)和维尔姆斯氏月中瘤(Wilms'tumor)、基底细胞癌、黑素瘤、前列腺癌、外阴癌、曱状腺癌、睾丸癌、食道癌、及各种类型的头和颈癌。术语"免疫相关疾病"指哺乳动物中由哺乳动物免疫系统成分引起、介导、或以其它方式促成发病的疾病。还包括刺激或干预免疫应答对疾病发展具有改善作用的疾病。该术语包括自身免疫病、免疫介导的炎性疾病、非免疫介导的炎性疾病、传染病、和免疫缺陷病。可依照本发明治疗的免疫相关和炎性疾病的例子，其中有些是免疫或T细胞介导的，包括系统性红斑狼齊、类风湿性关节炎、幼年型慢性关节炎、脊推关节病、系统性硬化(硬皮病)、特发性炎性肌病(皮肌炎、多肌炎)、斯耶格伦氏(Sjogren)综合征、系统性血管炎、结节病、自身免疫性溶血性贫血(免疫性全血细胞减少症、阵发性夜间血红蛋白尿)、自身免疫性血小板减少症(特发性血小板减少性紫癜、免疫介导的血小板减少症)、曱状腺炎(格雷夫斯氏(Gmves)病、桥本氏(Hashimoto)曱状腺炎、幼年型淋巴细胞性曱状腺炎、萎缩性曱状腺炎)、糖尿病、免疫介导的肾病(肾小球肾炎、肾小管间质性肾炎)、中枢和周围神经系统的脱髓鞘病诸如多发性硬化、特发性脱髓鞘多神经病或格-巴二氏(Guillain-Barr幻综合征、和慢性炎性脱髓鞘多神经病、肝胆病诸如传染性肝炎(曱型、乙型、丙型、丁型、戊型和其它非嗜肝病毒肝炎)、自身免疫性慢性活动性肝炎、原发性胆汁性肝硬化、肉芽肿性肝炎、和硬化性胆管炎、炎性和纤维化肺病诸如炎性肠病(溃疡性结肠炎、克罗恩氏(Crohn)病)、麸胶敏感性肠病、和惠普尔氏(Whipple)病、自身免疫性或免疫介导的皮肤病包括大疱性皮肤病、多形红斑和接触性皮炎、4艮屑病、变应性疾病诸如哮喘、变应性鼻炎、特应性皮炎、食物超敏反应和荨麻疹、肺的免疫学疾病诸如嗜曙红细胞性肺炎、特发性肺纤维化和超敏感性肺炎、移植相关疾病包括移植物排斥和移植物抗宿主疾病。传染病包括AIDS(HIV感染)、曱型、乙型、丙型、丁型和戊型肝炎、细菌感染、真菌感染、原生动物感染和寄生虫感染。"自身免疫病"在本文中以广义、一般意义使用，指哺乳动物中因哺乳动物个体对其自身组织组分的体液或细胞免疫应答而石皮坏正常或健康组织的病症或疾患。例子包括但不限于红斑狼疮、曱状腺炎、类风湿性关节炎、银屑病、多发性硬化、自身免疫性糖尿病和炎性肠病(IBD)。"生长抑制剂"在用于本文时指在体外和/或在体内抑制细胞生长的化合物或组合物。如此，生长抑制剂可以是显著降低处于S期的细胞百分比的药剂。生长抑制剂的例子包括阻断细胞周期行进(处于S期以外的位置)的药剂，诸如诱导G1停滞和M期停滞的药剂。经典的M期阻断剂包括长春药类(vincas)(长春新石咸(vincristine)和长春石威(vinblastine))、TAXOL、和拓朴异构酶II抑制剂诸如多柔比星(doxorubicin)、表柔比星(epirubicin)、柔红霉素(daunorubicin)、依托泊普(etoposide)和博来霉素(bleomycin)。那些阻滞Gl的药剂也溢出进入S期停滞，例如DNA烷化剂类诸如他莫昔芬(tamoxifen)、泼尼松(prednisone)、达卡巴口秦(dacarbazine)、双氯乙基曱胺(mechlorethamine)、顺柏(cisplatin)、曱氨蝶呤(methotrexate)、5-氟尿嘧咬(5-fluorouracil)和ara-C。更多信息可参见《TheMolecularBasisofCancer》,Mendelsohn和Israel编,第1章，题为"Cellcycleregulation,oncogenes,andantineoplasticdrugs"，Murakami等人，WBSaunders,Philadelphia,1995，尤其是第13页。术语"前体药物，，在用于本申请时指与母药(parentdrug)相比对癌细胞的细胞毒性较小并能够酶促活化或转变为更具活性母药形式的药用活性物质的前体和书亍生物开j式。参见例^口Wilman，"ProdrugsinCancerChemotherapy",BiochemicalSocietyTransactions,14，pp.375-382,615thMeetingBelfast(1986)和Stellaetal.，"Prodrugs:AChemicalApproachtoTargetedDrugDelivery",DirectedDrugDelivery,Borchardtetal.,(ed.),pp.247-267，HumanaPress(1985)。本发明的前体药物包括但不限于含磷酸盐/酯前体药物、含石危代磷酸盐/酯前体药物、含硫酸盐/酯前体药物、含肽前体药物、D-氨基酸修饰前体药物、糖基化前体药物、含p-内酰胺前体药物、含任选取代苯氧基乙酰胺的前体药物或含任选取代苯乙酰胺的前体药物、可转化为更具活性而无细胞毒性的药物的5-氟胞嘧啶和其它5-氟尿苷前体药物。可衍生为本发明使用的前体药物形式的细胞毒性药物的例子包括但不限于下文描述的那些化疗剂。术语"细胞毒剂，，在用于本文时指抑制或阻止细胞的功能和/或引起细胞破坏的物质。该术语意图包括放射性同位素(例如At211、I131、I125、Yw、Re186、Re188、Sm153、Bi212、P"和Lu的放射性同位素)、化疗剂、和毒素诸如小分子毒素或者细菌、真菌、植物或动物起源的酶活毒素，包括其片段和/或变体。"化疗剂"指可用于治疗像癌症等疾患的化学化合物。化疗剂的例子包括烷化剂类(alkylatingagents),诸如塞替派(thiotepa)和环磷酰胺(cyclophosphamide)(CYTOXAN);磺酸烷基酯类(alkylsulfonates),诸如白消安(busulfan)、英丙舒凡(improsulfan)和哌泊舒凡(piposulfan);氮丙啶类(aziridines)，诸长口笨佐替^泉(benzodepa)、卡；皮酉昆(carboquone)、美妥替;泉(meturedepa)和乌瑞替派(uredepa);乙撑亚胺类(ethylenimines)和曱基蜜胺类(methylamelamines)，包括六曱蜜胺(altretamine)、三乙撑蜜胺(triethylenemelamine)、三乙4掌石粦酰胺(triethylenephosphoramide)、三乙4掌石克石舞酰胺(triethylenethiophosphoramide)和三羟曱蜜胺(trimethylolomelamine);番荔枝内酯类(acetogenin)(尤其是布拉他辛(bullatacin)和布拉他辛酮(bullatacinone));喜才对石咸(camptothecin)(包4舌合成类似物4乇泊康(topotecan));苔藓抑素(bryostatin);callystatin;CC-1065(包括其阿多来新(adozelesin)、卡折来新(carzelesin)和比折来新(bizelesin)合成类似物)；隐藻素类(cryptophycins)(特别是隐藻素1和隐藻素8);多拉司他汀(dolastatin);duocarmycin(包括合成类似物，KW-2189和CB1-TM1);艾榴塞洛素(eleutherobin);pancratistatin;sarcodictyin;海纟帛抑素(spongistatin);氮芥类(nitrogenmustards),诸如笨丁酸氮芥(chlorambucil)、茶氮芥(chlornaphazine)、胆磷酰胺(cholophosphamide)、雌莫司汀(estramustine)、异环石粦酰胺(ifosfamide)、双氯乙基曱胺(mechlorethamine)、盐酸氧氮芥(mechlorethamineoxidehydrochloride)、美法仑(melphalan)、新氮芥(novembichin)、苯界月旦甾醇(phenesterine)、)发尼莫司汀(prednimustine)、曲石粦胺(trofosfamide)、尿口密口定氮芥(uracilmustard);亚；肖脲类(nitrosoureas)，诸3口卡莫司汀(carmustine)、氯脲菌素(chlorozotocin)、福莫司汀(fotemustine)、洛莫司汀(lomustine)、尼莫司汀(nimustine)、雷莫司汀(ranimustine);抗生素类，诸如烯二炔类抗生素(enediyne)(例如加利车霉素(calicheamicin)，尤其是加利车霉素y卩和加利车霉素A(参见例如Agnew,C/ze/w.￡d33:183-186(1994));dynemicin包括dynemicinA;》矣斯波霉素(esperamicin);以及新制癌素(neocarzinostatin)发色团和相关色蛋白烯二炔类抗生素发色团)、阿克拉霉素(aclacinomycin)、放线菌素(actinomycin)、氨茴霉素(authramycin)、偶氮丝氨酸(azaserine)、博来霉素(bleomycin)、放线菌素C(cactinomycin)、carabicin、洋红霉素(carminomycin)、嗜癌霉素(carzinophilin)、色霉素(chromomycin)、放线菌素D(dactinomycin)、柔红霉素(daunorubicin)、地托比星(detorubicin)、6-二氮-5-氧-L-正亮氨酸、多柔比星(doxorubicin)(包括吗啉代多柔比星、氰基吗啉代多柔比星、2-吡咯代多柔比星和脱氧多柔比星)、表柔比星(epirubicin)、依索比星(esorubicin)、伊达比星(idarubicin)、麻西罗霉素(marcellomycin)、丝裂霉素类(mitomycins),霉酚酸(mycophenolicacid)、诺拉霉素(nogalamycin)、撒榄霉素(olivomycin)、培洛霉素(peplomycin)、potfiromycin、嘌呤霉素(puromycin)、三4失阿霉素(quelamycin)、罗多比星(rodorubicin)、链黑菌素(streptonigrin)、链佐星(streptozocin)、杀结核菌素(tubercidin)、乌苯美司(ubenimex)、净司4也丁(zinostatin)、佐柔比星(zorubicin);抗^Ci射物类，卞者如曱氨喋呤(methotrexate)和5-氟尿嘧啶(5-FU);叶酸类似物，诸如二曱叶酸(denopterin)、曱氨喋卩令(methotrexate)、虫莱酰三谷氨酸(pteropterin)、三曱曲沙(trimetrexate);嘌口令类似物，t者如氟达滨(fludarabine)、6-巯基噤-令(mercaptopurine)、石克咪噤呤(thiamiprine)、石克鸟嘌呤(thioguanine);嘧口定类似物，诸如安西他滨(ancitabine)、阿扎胞苷(azacitidine)、6-氮尿苷、卡莫氟(carmofur)、阿糖月包苷(cytarabine)、双脱氧尿芬(dideoxyuridine)、去氧氟尿苷(doxifluridine)、依i若他滨(enocitabine)、氟尿香(floxuridine)、5-FU;i食激素类，诸々口卡鲁華酉同(calusterone)、丙酉臾屈j也力,酉同(dromostanolonepropionate)、表碌^醇(印itiostano1)、美力食烷(mepitiostane)、睾内酉旨(testolactone);抗肾上腺类，诸如氨鲁米特(aminogutethimide)、米托坦(mitotane)、曲洛司坦(trilostane);叶酸补充剂，诸如亚叶酸(folinicacid);醋葡醛内酯(aceglatone);醛石粦酰胺jf唐香(aldophosphamideglycoside);氨基乙酰丙酉交(aminolevulinicacid);安口丫口定(amsacrine);bestrabucil;t匕生群(bisantrene);依达曲沙、(edatraxate);地磷酰胺(defosfamide);地美可辛(demecolcine);地吖醌(diaziquone);elfornithine;依利醋铵(elliptini謹acetate);埃坡霉素(epothilone);依托格鲁(etoglucid);硝酸镓；羟脲(hydroxyurea);香菇多糖(lentinan);氯尼达明(lonidamine);美登木素生物石威类(maytansinoids),i者如美登素(maytansine)和安丝菌素(ansamitocin);米4乇脈月宗(mitoguazone);米4乇蒽酉昆(mitoxantrone);莫咪达醇(mopidamol);二胺硝吖咬(nitracrine);喷司他丁(pentostatin);蛋氨氮芥(phenamet);p比柔比星(pirarubicin);鬼臼酉臾(podophyllinicacid);2-乙基酰肼(ethylhydrazide);丙卡巴肼(procarbazine);PSK;雷佐生(razoxane);才艮審素(rhizoxin);西索菲兰(sizofiran);螺力走4者(spirogermanium);细交链孑包菌酮酸(tenuazonicacid);三亚胺S昆(triaziquone);2,2',2"-三氯三乙胺；单端孑包菌素类(trichothecenes)(尤其是T-2毒素、疣孢菌素(verrucarin)A、杆孢菌素(roridin)A和蛇4亍菌素(anguidin));乌拉坦(urethan);长春地辛(vindesine);达卡巴。秦(dacarbazine);甘露醇氮芥(mannomustine);二溴甘露醇(mitobronitol);二溴卫矛醇(mitolactol);旅泊溴烷(pipobroman);gacytosine;阿糖胞苷(arabinoside)("Ara-C，，)；环磷酰胺(cyclophosphamide);塞替派(thiot印a);类紫杉醇类(taxoids)，例如紫杉醇(paclitaxel)(TAXOL,Bristol-MyersSquibbOncology,Princeton,NJ)和多西他塞(doxetaxel)(TAXOTERE,Rh6ne-PouencRorer，Antony,France);苯丁酸氮芥(chlorambucil);吉西他滨(gemcitabine);6-石危鸟噤呤(thioguanine);巯基噤口令(mercaptopurine);曱氨p某p令(methotrexate);柏类似物，"i者如顺柏(cisplatin)和卡4白(carboplatin);长春石威(vinblastine);4白；依4乇泊香(etoposide)(VP-16);异环磷酰胺(ifosfamide);丝裂霉素(mitomycin)C;米托蒽醌(mitoxantrone);长春新石威(vincristine);长春瑞滨(vinorelbine);诺维本(navelbine);能灭瘤(novantrone);替尼泊芬(teniposide);道诺霉素(daunomycin);氨基蝶呤(aminopterin);希罗达(xeloda);伊本膦酸盐(ibandronate);CPT-11;拓朴异构酶抑制剂RFS2000;二氟甲基鸟氨酸(DMFO);视黄酸(retinoicacid);卡培他滨(capecitabine);及任何上述物质的药学可接受盐、酸或衍生物。此定义还包括作用为调节或抑制激素对肿瘤作用的抗激素剂，诸如抗雌激素类，包括例如他莫昔芬(tamoxifen)、雷洛昔芬(raloxifene)、抑制芳香酶的4(5)-咪唑、4-羟基他莫昔芬、曲沃昔芬(trioxifene)、那洛昔芬(keoxifene)、LY117018、奥那司酮(onapristone)和4乇瑞米芬(toremifene)(Fareston);及抗雄激素类，诸如氟他米特(flutamide)、尼鲁米特(nilutamide)、比卡米特(bicalutamide)、亮丙瑞林(leuprolide)和戈舍瑞林(goserelin);及任何上述物质的药学可接受盐、酸或书亍生物。术语"细胞因子，，是由一种细胞群释放，作为细胞间介质作用于另一细胞的蛋白质的通称。此类细胞因子的例子有淋巴因子、单核因子和传统的多肽激素。细胞因子中包括生长激素，诸如人生长激素、N-曱硫氨酰人生长激素和牛生长激素；曱状旁腺素；曱状腺素；胰岛素；胰岛素原；松驰素；松驰素原；糖蛋白激素类，诸如促卵泡激素(FSH)、促曱状腺激素(TSH)和促黄体激素(LH);肝生长因子；成纤维细胞生长因子；促乳素；胎盘催乳激素；肿瘤坏死因子-a和-p;穆勒氏(Mullerian)抑制性物质；小鼠促性腺激素相关肽；抑制素；激活素；血管内皮生长因子；整联蛋白；血小板生成素(TPO);神经生长因子，诸如NGF-a;血小板衍生生长因子；转化生长因子(TGF)，诸如TGF-a和TGF-(3;胰岛素样生长因子-I和-II;红细胞生成素(EPO);骨诱导因子(osteoinductivefactor);干扰素，诸如干扰素-a、-(3和-y;集落刺激因子(CSF)，诸如巨噬细胞CSF(M-CSF)、粒细胞-巨噬细胞CSF(GM-CSF)和粒细胞CSF(G-CSF);白介素(IL)，诸如IL-1、IL隱lot、IL國2、IL-3、IL-4、IL-5、IL-6、IL-7、IL-8、IL-9、IL-IO、IL-ll、IL-12;肺瘤坏死因子，诸如TNF-a或TNF-P;及其它多肽因子，包括LIF和kit配体(KL)。在用于本文时，术语细胞因子包括来自天然来源或来自重组细胞培养物的蛋白质及天然序列细胞因子的生物学活性等效物。术语"处理"、"治疗"和"疗法"在用f本文时指治疗性处理、预防性处理、和防范性处理。术语"治疗有效量"指在哺乳动物中有效治疗疾病或紊乱的药物量。在癌症的情况中，药物的治疗有效量可减少癌细胞的数目；缩小肿瘤的尺寸；抑制(即在一定程度上减緩和优选阻止)癌细胞浸润到周围器官中；抑制(即在一定程度上减緩和优选阻止)肿瘤转移；在一定程度上抑制肿瘤生长；和/或在一定程度上减轻一种或多种与病症有关的症状。在药物可阻止生长和/或杀死现有癌细胞的程度上，它可以是抑制细胞的和/或细胞毒性的。对于癌症疗法，可通过例如评估肿瘤负荷或体积、疾病进展时间(TTP)和/或测定响应速率(RR)来测量体内功效。术语"哺乳动物"在用于本文时指归入哺乳类的任何哺乳动物，包括人，高等灵长类、牛、马、犬和猫。在本发明的一个优选实施方案中，哺乳动物指人。术语"客观响应，，(objectiveresponse)定义为受试者对治疗的完全或部分响应，4吏用实体瘤响应评估标准(ResponseEvaluationCriteriainSolidTumors,RECIST)(J.Nat.Cancerhist.92(3):205-216(2000))。术语"响应的持续时间"(durationofresponse)在本文中用于指自最初的响应或部分响应至疾病发展或死亡时的时间。术语"无进展存活，，在本文中用于指自治疗第一天至疾病发展或死亡(两者中先发生者)的时间。术语"完全消退(CR)"用于表明连续三次测量的肿瘤体积S13.5mm3。术语"部分消退(PR)"表明连续三次测量的肿瘤体积S其第一天体积的50%且这些测量中的一次或多次^13.5mm3。II.本发明的组合物和方法A.DR5抗体在本发明的一个实施方案中，提供了DR5抗体。例示性抗体包括多克隆的、单克隆的、人源化的、双特异性的和异源偶联的抗体。这些抗体可以是激动剂、拮抗剂或阻断性抗体。1.多克隆抗体本发明的抗体可包括多克隆抗体。用于制备多克隆抗体的方法是本领域技术人员已知的。多克隆抗体可在哺乳动物中生成，例如通过一次或多次注射免疫剂和根据需要的佐剂。通常，免疫剂和/或佐剂将通过多次皮下或腹膜内注射而注射到哺乳动物中。免疫剂可包括DR5多肽(或DR5ECD)或其融合蛋白。将免疫剂与已知在所免疫哺乳动物中有免疫原性的蛋白质偶联可能是有用的。此类免疫原性蛋白质的例子包括但不限于匙孔i戚血蓝蛋白、血清白蛋白、牛甲状腺球蛋白和大豆胰蛋白酶抑制剂。可采用的佐剂的例子包括弗氏完全佐剂和MPL-TDM佐剂(单磷酰基脂质A、合成的海藻糖dicorynomycolate)。免疫方案可以由本领域技术人员无需过多实验做出选择。然后可以对哺乳动物采血，并对血清测定DR5抗体滴度。根据需要，可对哺乳动物进行加强免疫，直到滴度升高或达到稳定的高浓度(plateau)。2.单克隆抗体或者，本发明的抗体可以是单克隆抗体。单克隆抗体可使用杂交瘤法制备，诸如KohlerandMilstein,Nature256:495(1975)所述。在杂交瘤法中，小特异性结合免疫剂的抗体的淋巴细胞。或者，可以在体外免疫淋巴细胞。免疫剂将通常包括DR5多肽(或DR5ECD)或其融合蛋白，诸如DR5ECD-IgG融合蛋白。或者，免疫剂可包括DR5的片段或部分，其中有一个或多个氨基酸参与Apo-2L与DR5的结合。在一个优选的实施方案中，免疫剂包含与IgG序列融合的DR5胞外结构域序列。通常，若希望为人起源的细胞，则使用外周血淋巴细胞("PBL，，)，，或者，若希望为非人哺乳动物来源的细胞，则使用脾细胞或淋巴结细胞。然后，使用合适的融合剂，诸如聚乙二醇，将淋巴细胞与永生化细胞系融合以形成杂交瘤纟田月包(Goding,MonoclonalAntibodies:PrinciplesandPractice,AcademicPress(1986),pp.59-103)。永生化细胞系通常是转化的哺乳动物细胞，特别是啮齿类、牛和人起源的骨髓瘤细胞。通常，采用大鼠或小鼠骨髓瘤细胞系。杂交瘤细胞可在合适的培养基中培养，所述培养基优选含有抑制未融合的永生化细胞生长或存活的一种或多种物质。例如，如果亲本细^^缺乏次黄噤呤鸟。票呤磷酸核糖转移酶(HGPRT或HPRT)，那么用于杂交瘤的培养基通常将含有次黄噤呤、氨基喋呤和胸苷("HAT培养基")，这些物质阻止HGPRT缺陷细胞生长。优选的永生化细胞系是那些高效融合、支持选定的抗体生成细胞稳定地高水平地表达抗体、并对诸如HAT培养基等培养基敏感的细胞系。更优选的永生化细胞系是鼠源骨髓瘤系，可从例如索尔克研究所细胞分配中心(SalkInstituteCellDistributionCenter,SanDiege,California,USA)和美国典型培养物保藏中心(AmericanTypeCultureCollection,Manassas,Virginia,USA)获得。此类鼠骨髓瘤细胞系的一个例子是P3X63Ag8U.1(ATCCCRL1580)。用于生成人单克隆抗体的人骨髓瘤和小鼠-人异源骨髓瘤细胞系也已有描述(Kozbor,J.Immunol.133:3001(1984);Brodeuretal.,MonoclonalAntibodyProductionTechniquesandApplications,MarcelDekker,Inc.,NewYork(1987)pp.51-63)。然后可对杂交瘤细胞在其中培养的培养基测定针对DR5的单克隆抗体的存在。优选的是，通过免疫沉淀或通过体外结合测定法，诸如放射免疫测定法(RIA)或酶联免疫吸附测定法(ELISA),测定由杂交瘤细胞生成的单克隆抗体的结合特异性。此类技术和测定法是本领域已知的。单克隆抗体的结合亲和力可通过例^口MunsonandPollard,Anal.Biochem.107:220(1980)的Scatchard分析来测定。在鉴定得到期望的杂交瘤细胞后，该克隆可通过有限稀释流程进行亚克隆，并通过标准方法进行培养(Goding,见上文)。适于这一目的的培养基包括例如Dulbecco氏改良的Eagle氏培养基或RPMI-1640培养基。或者，杂交瘤细J包可在哺乳动物中作为腹水进4亍体内培养。可通过常规免疫球蛋白纯化流程，诸如例如蛋白A-Sepharose、羟磷灰石层析、凝胶电泳、透析或亲和层析，将亚克隆分泌的单克隆抗体与培养基或腹水分开或纯化。单克隆抗体还可通过重组DNA^支术来生成，诸如美国专利4,816,567中所述。编码单克隆抗体的DNA易于使用常规流程分离和测序(例如4吏用能够特异性结合编码单克隆抗体重链和轻链的基因的寡核苷酸探针)。杂交瘤细胞是此类DNA的优选来源。一旦分离，可将DNA置于表达载体中，然后将该表达载体转染到不另外产生免疫球蛋白蛋白质的宿主细胞中，诸如大肠杆菌细胞、猿猴COS细胞、中国仓鼠卵巢(CHO)细胞或骨髓瘤细胞，以在重组宿主细胞中获得单克隆抗体的合成。还可以修饰DNA，例如通过替代，即用人重《连和轻链恒定区的编码序列代替同源鼠源序列(Morrisonetai.,Proc.Nat.Acad.Sci.81:6851(1984))，或者通过共伯4妄合免疫J求蛋白编码序列和非免疫球蛋白多肽的整个或部分编码序列。可以以该方式制备具有本文中抗DR5单克隆抗体的结合特异性的"嵌合"或"杂合"抗体。通常用此类非免疫球蛋白多肽替代本发明抗体的恒定区，或者用它们替代本发明抗体的一个抗原结合位点的可变区以产生嵌合二价抗体，其包含对DR5具有特异性的一个抗原结合位点和对不同抗原具有特异性的另一抗原结合位点。嵌合或杂合抗体也可在体外使用合成蛋白质化学的已知方法来制备，包括那些涉及交联剂的方法。例如，可使用二硫键交换反应或通过形成硫醚键来构建免疫毒素。适于此目的的试剂的例子包括亚氨基疏醇酯/盐(iminothiolate)和4-巯基丁酰亚胺酸曱酯(methyl-4-mercaptobutyrimidate)。也可以生成单链Fv片段，诸如Iliadesetal"FEBSLetters,409:437-441(1997)中所述。此类单链片段使用各种接头的偶联记载于Korttetal.,ProteinEngineering,10:423-433(1997)。本领域知道用于重组生产和操作抗体的多种技术。下文更为详细的描述了熟练技术人员通常使用的此类技术的例示性例子。(i)人源化抗体通常，人源化抗体中引入了一个或多个来自非人来源的氨基酸残基。这些非人氨基酸残基常常称作"输入"残基，它们通常取自"输入，，可变区。人源化可基本上遵循Winter及其同事的方法进行(Jonesetal.,Nature321:522-525(1986);Riechmannetal"Nature332:323-327(1988);Verhoeyenetal.，Science239:1534-1536(1988》，即用啮齿类CDR或CDR序列替代人抗体的相应序列。因此，此类"人源化"抗体是嵌合抗体，其中基本上少于整个人可变区用来自非人物种的相应序列替代。在实践中，人源化抗体通常是其中一些CDR残基和可能的一些FR残基用来自啮齿类抗体中类似位点的残基替代的人抗体。重要的是，抗体在人源化后保持对抗原的高亲和力及其它有利的生物学目标，依照一种优选的方法，通过4吏用亲本和人源化序列的三维模型分析亲本序列和各种概念性人源化产物的方法来制备人源化抗体。三维免疫球蛋白模型通常是可获得的，且为本领域技术人员所熟悉。可获得图解和显示所选候选免疫球蛋白序列的可能三维构象结构的计算机程序。检查这些显示图像容许分析残基在候选免疫球蛋白序列行使功能中的可能作用，即分析影响候选免疫球蛋白结合其抗原的能力的残基。这样，可从共有和输入序列中选出FR残基并进行组合，从而获得期望抗体特征，诸如对靶抗原的亲和力提高。一般而言，CDR残基直接且最实质的涉及对抗原结合的影响。人抗体人单克隆抗体可通过杂交瘤方法生成。用于生成人单克隆抗体的人骨髓瘤和小鼠-人异源骨髓瘤细胞系已有描述，例如Kozbor，J.Immunol.133:3001(1984);Brodeuretal.,MonoclonalAntibodyProductionTechniquesandApplications,pp.51-63,MarcelDekker,Inc.,NewYork(1987)。现在有可能生成在缺乏内源免疫球蛋白生成的情况下能够在免疫时生成人抗体完整全集的转基因动物(例如小鼠)。例如，已经记载了嵌合和种系突变小鼠中抗体重链连接区(Jh)基因的纯合删除导致内源抗体生成的完全抑制。在此类种系突变小鼠中转移大量人种系免疫球蛋白基因将导致在抗原攻击时生成人抗体。参见例如Jakobovitswa/.，Prac.A^f/.爿cat/.5W.90:2551-255(1993);Jakobovitsa/.，淑腾362:255-258(1993)。Mendez等人(NatureGenetics15:146-156(1997))进一步改进了技术，生成了称为"XenomouseII"(异种移植物小鼠)的转基因小鼠品系，它在受到抗原攻击时生成高亲和力的完全人的抗体。这是如上所述通过将数百万A成基的人重链和轻链基因座种系整合到内源JH区段有删除的小鼠中而实现的。XenomouseII携带1,020kb的人重链基因座，包含大约66种Vh基因、完整的Dh和Jh区、及三种不同的恒定区(p、5和)c)，还携带800kb人K基因座，包含32种vk基因、Jk区段和Ck基因。这些小鼠中生成的抗体在所有方面与在人体中看到的极其相似，包括基因重排、装配和全集。由于内源Jh区段的删除防止了鼠基因座的基因重排，因此人抗体较之内源抗体优先表达。可用于在体外从来自未免疫供体的免疫球蛋白可变区(v)基因全集生成人抗体和抗体片段。依照这种技术，将抗体V结构域基因以符合读码框的方式克隆到丝状噬菌体诸如M13或fd的主要或次要外壳蛋白基因中，并在噬菌体颗粒表面上展示为功能性抗体片段。因为丝状噬菌体颗粒包含噬菌体基因组的单链DNA拷贝，以抗体的功能特性为基础进行的选择也导致编码展示那些特性的抗体的基因的选择。如此，噬菌体模拟B细胞的一些特性。噬菌体展示可以多种形式进行；有关综述参见例如Johnson,KevinS.andChiswdl,DavidJ.,CWre"/O;/"/o"5^wc/Mra/B/o/ogy3:564-571(1993)。V基因区,殳的数种来源可用于p蓝菌体展示。Clackson"a/.,A^we352:624-628(1991)从衍生自经免疫小鼠脾的小型V基因随机组合文库中分离得到大量不同的抗口恶唾酮抗体。可本质上遵循Marks"a/.,JMo/.所o/.222:581-597(1991)或Gri伍thda/.,/12:725-734(1993)所述^支术，由未免疫人供体构建V基因全集和分离针对大量不同抗原(包括自身抗原)的抗体。在天然免疫应答中，抗体基因以高比率积累突变(体细胞高变)。导入的有些变化将赋予更高亲和力，展示高亲和力表面免疫球蛋白的B细胞在随后的抗原攻击过程中优先复制和分化。这种天然过程可通过采用称为"链改组"的技术来模拟(Marksetal"Bio/Technol.10:779-783(1992))。在这种方法中，通过喧菌体展示得到的"初始"人抗体的亲和力可通过用从未免疫供体得到的V结构域基因天然存在的变体(全集)相继替换重链和轻链V区基因而提高。此技术得以生成亲和力在nM范围中的抗体和抗体片段。Waterhouseetal.,Nucl.AcidsRes.21:2265-2266(1993)记载了用于构建非常大的噬菌体全集(也称为"所有文库的母库"(themother-of-alllibraries))的策略。基因改组也可用于从啮齿类抗体衍生人抗体，其中人抗体具有与起始啮齿类抗体相似的亲和力和特异性。依照此方法，它也称为"表位印记"(epitopeimprinting),通过噬菌体展示技术得到的啮齿类抗体的重链或轻链V结构域基因用人V结构域基因全集替换，产生啮齿类-人嵌合物。对抗原进行的选择导致能够恢复功能性抗原结合位点的人可变区的分离，即表位决定(印记，imprint)配偶体的选择。在重复该过程以替换剩余啮齿类V结构域时，得到人抗体(参见PCT专利申请WO93/06213，公开于1993年4月1日)。与传统的通过CDR移植进行的啮齿类抗体的人源化不同，此技术提供完全人的抗体，它们不含啮齿类起源的框架或CDR残基。正如下文详细讨论的，本发明的抗体可任选包括抗体单体、抗体二聚体、以及抗体的多价形式。本领域技术人员可通过本领域已知技术并使用本文中的DR5抗体来构建此类二聚体或多价形式。用于制备单价抗体的方法也是本领域众所周知的。例如，一种方法涉及免疫球蛋白轻《连和经修饰重链的重组表达。重链通常在Fc区中的任意点截短以防止重链交联。或者，相关半胱氨酸残基用另一种氨基酸残基替代或删除以防止交联。双特异性抗体双特异性抗体指对至少两种不同抗原具有结合特异性的单克隆，优选人或人源化抗体。在本案中，一种结合特异性是对DR5受体，另一种是对任何其它抗原，优选对另一种受体或受体亚基。例如，特异性结合DR5受体和另一种凋亡/信号受体的双特异性抗体在本发明的范围内。用于生成双特异性抗体的方法是本领域已知的。传统上，双特异性抗体的重组生成基于两对免疫球蛋白重链-轻链的共表达，其中两种重链具有不同的特异性(MillsteinandCuello，Nature305:537-539(1983))。由于免疫球蛋白重链和轻链的随才几分配，这些杂交瘤(四源杂交瘤(quadroma))生成十种不同抗体分子的潜在混合物，其中只有一种具有正确的双特异性结构。通常通过亲和层析步骤进行的正确分子的纯化相当麻烦且产物产率低。1993年5月13日公开的WO93/08829及Trauneckeretal.,EMBO10:3655-3659(1991)中披露了类似的流程。依照一种不同的且更优选的方法，将具有期望结合特异性(抗体-抗原结合位点)的抗体可变区与免疫球蛋白恒定区序列融合。融合优选使用包含至少部分铰链、CH2和CH3区的免疫球蛋白重链恒定区。优选在至少一种融合物中存在包含轻链结合所必需的位点的第一重链恒定区(CH1)。将编码免疫球蛋白重链融合物及，如果需要，免疫球蛋白轻链的DNA插入分开的表达载体，并共转染到合适的宿主生物体中。在用于构建的三种多肽链比例不等时提供最佳产量的实施方案中，这为调整三种多肽片段的相互比例提供了极大的灵活性。然而，在至少两种多肽链以相同比率表达导致高产量时或在该比率没有特别意义时，有可能将两种或所有三种多肽链的编码序列插入同一个表达载体。在该方法的一个优选实施方案中，双特异性抗体由一个臂上具有第一结合特异性的杂合免疫球蛋白重链，和另一个臂上的杂合免疫球蛋白重链-轻链对(提供第二结合特异性)构成。由于免疫球蛋白轻链仅在半个双特异性分子中的存在提供了分离的便利途径，因此发现这种不对称结构便于将期望的双特异性复合物与不想要的免疫球蛋白链组合分开。该方法披露于1994年3月3日公开的PCR申请WO94/04690。关于生成双特异性抗体的进一步详情参见例如Suresh""/.，iWeAoA121:210(1986)。异源偶联抗体异源偶联抗体也在本发明的范围之内。异源偶联抗体由两种共价连接的抗体构成。此类抗体建议例如用于将免疫系统细胞靶向不想要的细胞(美国专利4,676,980)及用于治疗HIV感染(PCT申请WO91/00360和WO92/200373;EP03089)。异源偶联抗体可使用任何方便的交联方法来生成。合适的交联剂是本领域众所周知的，连同许多交联技术一起披露于美国专利4,676,980。(v)抗体片段在某些实施方案中，抗DR5抗体(包括鼠的、人的和人源化的抗体，及抗体变体)是抗体片段。已经开发了用于生成抗体片段的多种技术。传统上，通过蛋白水解消化完整抗体来衍生这些片段(参见例如Morimoto"a/.，J.肠A缀肠;一.逾/70A24:107-117(1992);B固画Wa/.，229:81(1985))。然而，现在可直接由重组宿主细胞生成这些片,殳。例如，可直接从大肠杆菌回收Fab'-SH片段并化学偶联以形成F(ab')2片段(Carter"a/.,5/o/7^/wo/《gy10:163-167(1992))。在另一个实施方案中，F(ab')2片段是使用亮氨酸拉链GCN4形成的，以促进F(ab')2分子的装配。依照另一种方法，可直接从重组宿主细胞培养物分离Fv、Fab或F(ab')2片^:。用于生成抗体片段的多种技术对熟练从业人员将是显而易见的。例如，可使用木瓜蛋白酶进行消化。木瓜蛋白酶消化的例子记载于94年12月22日>开的WO94/29348和美国专利4,342,566。用木瓜蛋白酶消化抗体产生两个相同的抗原结合片段，称作Fab片段，各自具有一个抗原结合位点，及一个残余Fc片段。胃蛋白酶处理产生一个F(ab')2片段，它具有两个抗原结合位点且仍能够交联抗原。抗体消化中产生的Fab片段还包含轻链的恒定区和重链的第一恒定区(CH^。Fab'片段与Fab片段的不同之处在于重链结构域的羧基末端增加了少数残基，包括来自抗体铰链区的一个或多个半胱氨酸。Fab'-SH是本文中对其中恒定区半胱氨酸残基携带游离硫醇基的Fab'的称谓。F(ab')2抗体片段最初是作为在Fab'片段之间有铰链半胱氨酸的成对Fab'片段生成的。还知道抗体片段的其它化学偶联。(Vy戎#^扇差#錄/;/^#抗DR5抗体的氨基S臾序列变体通过将适宜的核苷酸变化引入抗DR5抗体DNA或者通过肽合成来制备。此类变体包括例如本文实施例中抗DR5抗体氨基酸序列内的残基删除和/或插入和/或替代。只要最终的构建物具有期望特性，可进行删除、插入和替代的任意组合以获得最终的构建物。氨基酸变化还可改变人源化或变异抗DR5抗体的翻i奪后加工，诸如改变4唐基化位点的数目或位置。可用于鉴定抗DR5抗体中作为优选诱变位置的某些残基或区域的一种方法称、作"丙氨酸扫描i秀变"，如Cunninghamand1Wells，>SWewce244:1081-1085(1989)所述。这里，鉴定了一个残基或一组靶残基(例如带电荷的残基，诸如精氨酸、天冬氨酸、组氨酸、赖氨酸和谷氨酸)，并用中性或带负电荷的氨基酸(最优选丙氨酸或聚丙氨酸)替代，以影响氨基酸与DR5抗原的相互作用。然后通过在或对替代位点引入更多或其它变体，推敲出那些对替代展现出功能敏感性的氨基酸位置。如此，虽然引入氨基酸序列变异的位点是预先决定的，但是突变本身的性质不需要预先决定。例如，为了分析在给定位点处的突变的后果，在靶密码子或区域进行丙氨酸扫描或随机诱变，并对所表达的抗DR5抗体变体筛选期望活性。氨基酸序列插入包括氨基和/或羧基末端的融合，长度范围从一个残基至包含上百个或更多残基的多肽，以及单个或多个氨基酸残基的序列内插入。末端插入的例子包括具有N-末端曱硫氨酰残基的抗DR5抗体或与表位标签融合的抗体。抗DR5抗体分子的其它插入变体包括在抗DR5抗体的N-或C-末端融合的酶或提高抗体血清半衰期的多肽或多元醇。另一类变体是氨基酸替代变体。这些变体在抗DR5抗体分子中有至少一个氨基酸残基去除并在它的位置插入不同残基。最感兴趣进行替代诱变的位点包括高变区，但也设想了FR改变。保守替代在表l中显示在标题"优选替代"下。如果此类替代导致生物学活性的改变，那么可以引入表l中称为"例示替代"的更实质性改变，或如下文中关于氨基酸种类的进一步描述，并筛选产物。表1<table>tableseeoriginaldocumentpage46</column></row><table>对抗体生物学特性的实质性修饰通过选择在保持以下方面的效果上显著不同的替代来完成(a)替代区域的多肽主链的结构，例如作为折叠片或螺旋构象，(b)靶位点处分子的电荷或疏水性，或(c)侧链的体积。基于共同的侧链特性，可将天然存在残基如下分组(1)疏水性的正亮氨酸、Met、Ala、Val、Leu、He;(2)中性、亲水性的Cys、Ser、Thr;(3)酸性的Asp、Glu;(4)石威'性的Asn、Gln、His、Lys、Arg;(5)影响链取向的残基Gly、Pro;及(6)芳香力矣的Trp、Tyr、Phe。非保守替代将需要用这些类别之一中的一个成员替换另一个类别的。任何不涉及保持人源化或变异抗DR5抗体正确构象的半胱氨酸残基也可替代，通常用丝氨酸，以改进分子的氧化稳定性和防止异常交联。相反，可向抗体中添加半胱氨酸键以改善其稳定性(特别是当抗体是抗体片段诸如Fv片段时)。特别优选的一类替代变体涉及替代亲本抗体(例如人源化或人抗体)的一个或多个高变区残基。通常，选择用于进一步开发的所得变体相对于产生它们的亲本抗体将具有改进的生物学特性。产生此类替代变体的一种便利方法是使用噬菌体展示的亲和力成熟。简单的说，将数个高变区位点(例如6-7个位点)突变，在每个位点产生所有可能的氨基酸替代。如此产生的抗体变体以单价形式展示在丝状噬菌体颗粒上，作为与每个颗粒内包装的M13基因III产物的融合物。然后如本文所公开的根据其生物学活性(例如结合亲和力)对噬菌体展示的变体进行筛选。为了鉴定用于修饰的候选高变区位点，可进行丙氨酸扫描诱变以鉴定对抗原结合具有重要贡献的高变区残基。或者/另外，分析抗原-抗体复合物的晶体结构，以鉴定抗体和人DR5之间的接触的候选位点。一旦产生此类变体，如本文所述对该组变体进行筛选，可选择(vii)抗体的糖基化变体抗体在其恒定区中的保守位置发生糖基化(JefferisandLund，Chem.Immunol.65:111-128(1997);WrightandMorrison,TibTECH15:26-32(1997))。免疫球蛋白的寡糖侧链影响蛋白质的功能(Boydetal.,Mol.Immunol.32:1311-1318(1996);WittweandHoward,Biochem.29:4175-4180(1990))，及糖蛋白各部分间的分子内相互作用，它可影响冲唐蛋白的构象和所呈现的三维表面(HefferisandLund,supra;WyssandWagner,CurrentOpin.Biotech.7:409-416(1996))。寡糖还可用来使给定糖蛋白靶向基于特定识别结构的某些分子。例如，已有报道，在无半乳糖基化IgG中，寡糖模块从CH2之间的空间伸出，末端N-乙酰葡糖胺残基得以结合甘露糖结合蛋白(Malhotraetal.，NatureMed.1:237-243(1995))。用糖肽酶除去中国仓鼠卯巢(CHO)细胞中所生成的CAMPATH-1H(—种识别人淋巴细胞CDw52抗原的重组人源化鼠单克隆IgGl抗体)上的寡糖导致补体介导的细胞溶解(CMCL)完全降低(Boydetal.，Mol.Immunol.32:1311-1318(1996)),而用神经氨酸酶选4奪性消除唾液酸残基不导致DMCL的丧失。还有才艮道，抗体的糖基化影响抗体依赖性细胞的细胞毒性(ADCC)。具体而言，有报道说，其中(3(1^)-N-乙酰葡糖胺转移酶III(GnTin)(催化等分GlcNAc形成的糖基转移酶)的表达受四环素调控的CHO细胞具有改良的ADCC活性(Umanaetal.,MatureBiotech.17:176-180(1999))。抗体的糖基化变体指其中抗体的糖基化样式发生改变的变体。改变意味着删除抗体中发现的一个或多个碳水化合物模块，向抗体中添加一个或多个碳水化合物模块，改变糖基化(糖基化样式)的组成、糖基化的程度、等。糖基化变体可以通过例如在编码抗体的核酸序列中消除、改变和/或添加一个或多个糖基化位点来制备。抗体的糖基化典型的或是N-连接的或是O-连接的。N-连接指碳水化合物模块附着于天冬酰胺残基的侧链。三肽序列天冬酰胺-X-丝氨酸和天冬酰胺-X-苏氨酸(其中X是除脯氨酸外的任何氨基酸)是将碳水化合物模块酶促附着于天冬酰胺侧链的识别序列。如此，多肽中这两种三肽序列任一的存在产生了潜在的糖基化位点。O-连接的糖基化指将糖类N-乙酰半乳糖胺、半乳糖或木糖之一附着于羟基氨基酸，最常见的是丝氨酸或苏氨酸，但也可使用5-羟脯氨酸或5-羟赖氨酸。向抗体中添加糖基化位点可通过改变氨基酸序列使其包含一个或多个上述三肽序列而便利的完成(用于N-连接的糖基化位点)。所述改变还可通过向初始抗体的序列中添加或替代一个或多个丝氨酸或苏氨酸残基来进行(用于O-连接的糖基化位点)。编码抗DR5抗体氨基酸序列变体的核酸分子可通过本领域知道的多种方法制备。这些方法包括但不限于从天然来源分离(在天然存在氨基酸序列变体的情况中)，或者通过对早期制备的变体或非变体型式的抗DR5抗体进行寡核芬酸介导的(或定点)诱变、PCR诱变和盒式诱变来制备。还可以在不改变潜在核苷S交序列的前提下改变抗体的糖基化(包括糖基化样式)。糖基化很大程度上取决于用于表达抗体的宿主细胞。由于用于表达作为潜在治疗剂的重组糖蛋白例如抗体的细胞类型很少是天然细胞，因此可预期抗体的糖基化样式将有显著变异(参见例如Hseetal.，J.Biol.Chem.272:9062-9070(1997))。在宿主细胞的选择之外，在抗体的重组生成过程中影响糖基化的因素包括生长模式、培养基配方、培养密度、氧合作用(oxygenation)、pH、纯化方案、诸如此类。已经提出多种方法用于改变在特定宿主生物体中实现的糖基化样式，包括导入或过表达涉及寡糖生成的某些酶(美国专利5，047，335;5,510,261和5.278,299)。糖基化或某些类型的糖基化可从糖蛋白中酶促清除，例如使用内切糖芬酶H(EndoH)。另外，可对重组宿主细胞进行遗传工程改组，例如使其在加工某些类型的多糖方面缺陷。这些和类似的技术是本领域众所周知的。抗体的糖基化结构可通过碳水化合物分析的常规技术容易的分析，包括凝集素层析、NMR、质谱、HPLC、GPC、单糖成分分析、序贯酶促消化和HPAEC-PAD,它利用高pH阴离子交换层析根据电荷来分离寡糖。为分析目的释放寡糖的方法也是知道的，包括但不限于酶促处理(常常使用肽-N-糖苷酶F/内切-P-半乳糖苷酶进行)、使用强碱环境的消除以释放主要是O-连接结构、及使用无水肼的化学方法以释放N-和O-连接寡糖二者。(viii)例示性抗体本文中公开的发明有许多例示性实施方案。下文描述了本发明的多个典型实施方案。提供下面的实施方案只是出于例示目的，并非意图以任何方式限制本发明的范围。如下文实施例中所述，已经鉴定了许多抗DR5抗体。在一个实施方案中，本发明的DR5抗体将具有与本文中明确公开的任何抗DR5抗体相同的生物学特征。术语"生物学特征"用于指单克隆抗体的体外和/或体内活性或特性，诸如特异性结合DR5或者阻断、诱导或增强DR5活化(或DR5相关活性)的能力。DR5抗体的特性和活性在下文实施例中有进一步描述。任选的是，本发明的单克隆抗体将具有与抗体16E2或表11-13中所列任何抗体相同的生物学特征，和/或与抗体16E2或表11-13中所列任何抗体，特别是Apomab7.3或Apomab8.3结合相同表位。这可通过进行多种测定法来测定，诸如本文和实施例中所述。例如，为了测定某单克隆抗体是否具有与本文中明确提到的DR5抗体相同的特异性，可在竟争性结合测定法或凋亡诱导测定法中比较其活性，诸如下文实施例中所述的测定法。另外，特定抗DR5抗体所结合的表位可通过DR5和所讨论抗体间复合物的结晶学研究来测定。如此，Apomab7.3的Fab片段和DR5的胞外结构域间复合物的X射线结晶学研究显示出Apomab7.3结合与DR5受体上Apo2L/TRAIL的结合位点交叠但不同的DR5表位。人的、嵌合的、杂合的或重组的抗DR5抗体(以及例如本文所述双抗体或三抗体)可包括具有全长重链和轻链的抗体，或其片段，诸如Fab、Fab'、F(ab'》或Fv片段、所述轻链或重链的单体或二聚体、其中所述重链或轻链通过接头分子相连的单链Fv、或者所述轻链或重链的可变区(或高变区)与其它类型的抗体结构域联合的单链Fv。如本文所述，DR5抗体将任选具有一项或多项期望的生物学活性或特性。此类DR5抗体可包括但不限于嵌合的、人源化的、人的和亲和力成熟的抗体。如上所述，DR5抗体可使用多种技术构建或改组以实现这些期望活性或特性。在一个实施方案中，DR5抗体将具有至少10SM"的DR5受体结合亲和力，优选至少在106M"至107M"的范围内，更优选至少在108M"至10"M"的范围内，甚至更优选至少在1(^M"至10^M-'的范围内。无需过多实—验，DR5抗体的结合亲和力可依照本领域已知的技术通过测试DR5抗体来测定，包4舌Scatchard分析(参见Munsonetal"supra)。在另一个实施方案中，本发明的DR5可结合DR5上与Apo-2L所结合的表位相同的表位，或者结合DR5上与Apo-2L所结合的表位重合或交叠的表位，像例如称为Apomab7.3的抗体。DR5抗体还可以这样一种方式相互作用，以致于产生防止Apo-2配体结合DR5的空间构象。如上所述，本发明DR5抗体的表位结合特性可使用本领域已知技术来测定。例如，可在体外测定法中测试DR5抗体，诸如竟争性抑制测定法，以测定DR5抗体阻断或抑制Apo-2L结合DR5的能力。任选的是，可在竟争性抑制测定法中测试DR5抗体以测定DR5抗体抑制Apo-2L多肽结合DR5-IgG构建物或表达DR5的细胞的能力。任选的是，DR5抗体将能够将Apo-2L与DR5的结合阻断或抑制至少50%，优选至少75%，甚至更优选至少90%,这可例如在使用可溶形式Apo-2配体(TRAIL)(诸如Pittietal.,J.Biol.Chem.，supra中i己载的月包夕卜结构域序列第114-281位，也称为Apo2L.0)和DR5ECD-IgG的体外竟争性抑制测定法中测定。DR5抗体的表位结合特性还可使用测试DR5抗体阻断Apo-2L诱导的凋亡的能力的体外测定法或通过结晶学研究来测定。在又一个实施方案中，DR5抗体将包括具有与Apo-2配体(TRAIL)相当的活性的激动性抗体。优选的是，此类激动性DR5抗体将在至少一种类型的癌或肿瘤细胞系或者原发性肿瘤中诱导凋亡。激动性DR5抗体的凋亡活性可使用已知的体外或体内测定法来测定。多种此类体外和体内测定法的例子是本领域众所周知的。在体外，凋亡活性可使用已知技术来测定，诸如膜联蛋白V结合。在体内，凋亡活性可通过例如测量肺瘤负荷或体积的缩小来测定。如上所述，本文中所公开的抗体具有许多特性，包括调控某些生理学相互作用和/或过程的能力。如下文实施例所示，本文中所公开的抗体能够诱导DR5介导的凋亡，而且在癌症的多种鼠异种移植物模型中显示出有力的抗肿瘤特性。在本发明的一个具体实施方案中，抗体的激动性活性通过将抗体与抗人IgGFc交联而得到增强。在本发明的一个优选实施方案中，这种增强的凋亡与Apo-2L的凋亡活性相当。本发明的其它实施方案包括这样的本文中所公开的抗DR5受体抗体，它与选自下组的一种或多种非蛋白质性质的聚合物相连聚乙二醇、聚丙二醇和聚氧化烯(polyoxyalkylene)。在一个备选的实施方案中，本文中所公开的抗DR5受体抗体与细胞毒剂或酶相连。在还有一个实施方案中，本文中所公开的抗DR5受体抗体与放射性同位素、荧光化合物或化学发光化合物相连。任选的是，本文中所公开的抗DR5受体抗体是糖基化的或者未糖基化的。如下文详细讨论的，本发明的抗体可用于调控生理学过程的多种方法。本发明的一个这样的实施方案包括在哺乳动物细胞中诱导凋亡的方法，包括使表达DR5受体的哺乳动物细胞暴露于治疗有效量的分离的抗DR5受体单克隆抗体，包括结合图3A-3C(411个氨基酸)或图4A-4C(440个氨基酸)所示DR5受体尤其是其胞外结构域的抗体。在此类方法中，所述哺乳动物细胞通常是癌细胞。在优选的实施方案中，这些方法中所使用的抗DR5受体抗体是下文实施例中所描述的Apomab抗体，i者如Apomab7.3或Apomab8.3抗体。本发明的还有一个实施方案是在哺乳动物细胞中诱导凋亡的方法，包括使表达DR5受体的哺乳动物细胞暴露于治疗有效量的分离的抗DR5受体单克隆抗体，包括结合如上定义的DR5受体或其胞外结构域的抗体。3.三链抗体三链抗体(triabody)也在本发明的范围内。此类抗体记载于例如Iliadesetal.，supra和Korttetal,，supra。4.其它》务饰本文中设想了DR5抗体的其它修饰。本发明的抗体可通过将抗体与细胞毒剂(像毒素分子)或前体药物活化酶偶联来修饰，所述前体药物活化酶将前体药物(例如肽基化疗剂，参见WO81/01145)转变为活性抗癌药。参见例如WO88/07378和美国专利第4,975,278号。这种4支术也称为"依赖抗体的酶介导的前体药物疗法"(ADEPT)。可用于ADEPT的免疫偶联物的酶组分包括能够以这样一种方式作用于前体药物从而将其转变为更有活性的细胞毒性形式的任何酶。可用于本发明方法的酶包括但不限于可将含磷酸盐/酯的前体药物转变为游离药物的碱性磷酸酶；可将含硫酸盐/酯的前体药物转变为游离药物的芳基硫酸酯酶；可将无毒5-氟胞嘧啶转变为抗癌药5-氟尿嘧啶的胞嘧啶脱氨酶；可将含肽的前体药物转变为游离药物的蛋白酶，诸如沙雷氏菌蛋白酶、嗜热菌蛋白酶、枯草杆菌蛋白酶、羧肽酶和组织蛋白酶(诸如组织蛋白酶B和L);胱天蛋白酶，诸如胱天蛋白酶-3;可转化含D-氨基酸替代的前体药物的D-丙氨酰羧肽酶；可将糖基化前体药物转变为游离药物的碳水化合物切割酶，诸如|3-半乳糖苷酶和神经氨酸酶；可将用(3-内酰胺书于生的药物转变为游离药物的(3-内酰胺酶；及可将在其氨基氮处分别用苯氧乙酰基或苯乙酰基衍生的药物转变成游离药物的青霉素酰胺酶，诸如青霉素V酰胺酶或青霉素G酰胺酶。或者，可使用具有酶活性的抗体，本领域也称作"抗体酶(abzymes)"，将本发明的前体药物转变为游离活性药物(参见例如Massey,Nature328:457-458(1987))。可如本文所述制备抗体-酶偶联物，用于将抗体酶投递至肿瘤细胞群。可通过本领域众所周知的技术将酶与抗体共价结合，诸如使用异双功能交联剂。或者，可使用本领域众所周知的重组DNA技术构建包含与本发明见例如Neubergeretal"Nature312:604-608(1984))。设想了更多的抗体修饰。例如，可将抗体与多种非蛋白质性质聚合物中的一种连接，例如聚乙二醇、聚丙二醇、聚氧化烯、或聚乙二醇和聚丙二醇的共聚物。还可将抗体包载于例如通过凝聚技术或通过界面聚合制备的微胶嚢中(例如分别是羟曱基纤维素或明胶微胶嚢和聚(曱基丙烯酸甲酯)微胶嚢)、在胶状药物传递系统中(例如脂质体、清蛋白微球体、微乳剂、纳米颗粒和纳米胶嚢)、或在粗滴乳状液中。此类技术公开于《Remington'sPharmaceuticalSciences》，第16版，Osol，A.编，1980。为了延长抗体的血清半衰期，可以如例如美国专利第5,739,277号中所述将补救受体结合表位掺入抗体(尤其是抗体片段)。在用于本文时，术语"补救受体结合表位"指IgG分子(例如IgGpIgG2、IgG3或IgG4)的Fc区中负责延长IgG分子体内血清半衰期的表位。本文7>开的抗DR5抗体还可配制成免疫脂质体。可通过本领;或知道的方法来制备包含抗体的脂质体，诸如Epstein&尸rac.Ato/.Jcat/.5W.6^482:3688(1985);Hwang"a/.，尸rac.A^/.爿c^/.6W.77:4030(1980);美国专利第4,485,045号和第4,544,545号中所记载的。美国专利第5,013,556号中公开了循环时间延长的脂质体。特别有用的脂质体可用含有磷脂酰胆碱、胆固醇和PEG衍生化磷脂酰乙醇胺(PEG-PE)的脂质组合物通过反相蒸发法生成。将脂质体挤过具有限定孔径的滤器，以产生具有期望直径的脂质体。可如Martin&a/.，JB/o/.C/ze附.257:286-288(1982)中所记载的，将本发明抗体的Fab，片段经二硫化物交换反应与脂质体偶联。任选在脂质体中包含4匕疗剂(i^4口多柔比星)。参见Gabizon"a/.,7Va"o"a/Ca"cer/"W.81(19):1484(1989)。本发明的抗体包括"交联"DR5抗体。术语"交联"在用于本文时指至少两个IgG分子结合到一起以形成一个(或单一)分子。DR5抗体可使用多种连接分子来交联，优选的是，DR5抗体是使用抗IgG分子、补体、化学修饰或分子工程而交4关的。本领域技术人员应当领会，一旦抗体结合细胞表面膜，补体对抗体分子具有相对较高的亲和力。因此，认为补体可作为交联分子用于连接细胞表面膜所结合的两个或多个抗DR5抗体。5.重组方法本发明还提供了编码本文所述DR5抗体的分离核酸、包含所述核酸的载体和宿主细胞、及用于生成所述抗体的重组技术。为了重组生成抗体，分离编码它的核酸，并插入可复制载体，用于进一步克隆(DNA扩增)或表达。可以使用常规流程容易地分离编码抗体的DNA并测序(例如使用能够与编码抗体的基因特异性结合的寡核苷酸探针)。可以获得许多载体。载体构件通常包括但不限于下列一种或多种信号序列、复制起点、一种或多种标记基因、增强子元件、启动子、和转录终止序列。本文中的方法包括用于生成嵌合的和重组的抗DR5抗体的方法，包括如下步骤提供包含编码抗DR5抗体轻链或重链(或者轻链和重链二者)的DNA序列的载体；用所述载体转染或转化宿主细胞；并在足以生成重组抗DR5抗体产物的条件下培养所述宿主细胞。(T)信号序列构件本发明的抗DR5抗体不仅可以直接重组生产，而且可以作为与异源多肽的融合多肽，所述异源多肽优选是在成熟蛋白质或多肽的N-末端处具有特异性切割位点的信号序列或其它多肽。所选异源信号序列优选是受到宿主细胞识别并加工(即受到信号肽酶切割)的。对于不识别和加工天然抗体信号序列的原核宿主细胞，用例如选自碱性磷酸酶、青霉素酶、lpp、或热稳定肠毒素II前导序列的原核信号序列取代所述信号序列。为了酵母分泌，可以用例如酵母转化酶前导序列、cc因子前导序列(包括糖酵母属和克鲁维氏酵母属cc因子前导序列)、或酸性磷酸酶前导序列、白色假丝酵母葡萄糖淀粉酶前导序列、或WO90/13646中所述信号取代天然信号序列。在哺乳动物细胞表达中，可以利用哺乳动物信号序列以及病毒分泌前导序列，例如单纯疱疹gD信号。将此类前体区的DNA连接到编码抗体的DNA的读码框中。复制起点构件表达和克隆载体都包含能够使载体在一种或多种选择的宿主细胞中复制的核酸序列。一般来说，在克隆载体中，这种序列为能够使载体不依赖于宿主染色体DNA而复制的序列，包括复制起点或自主复制序列。众所周知多种细菌、酵母、和病毒的此类序列。来自质粒pBR322的复制起点适合于大多数革兰氏阴性细菌，2p质粒起点适合于酵母，而各种病毒起点(SV40、多瘤病毒、腺病毒、VSV、或BPV)可用于哺乳动物细胞中的克隆载体。通常，哺乳动物表达载体不需要复制起点构件(SV40起点通常可能只因含有早期启动子才使用)。选择基因构件表达和克隆载体可包含选择基因，也称为选择标志。典型的选择基因编码如下蛋白质(a)赋予抗生素或其它毒素抗性，例如氨卡青霉素、新霉素、曱氨蝶呤、或四环素；(b)补足营养缺陷；或(c)提供不能由复合培养基获得的关键营养物，例如编码芽孢杆菌D-丙氨酸消旋酶的基因。选择方案的一个实例利用药物来阻滞宿主细胞的生长。用异源基因成功转化的那些细胞生成赋予药物抗性的蛋白质，因而幸免于选择方案。此类显性选择的实例使用药物新霉素、霉酚酸和潮霉素。适于哺乳动物细胞的选择标志的另一个例子是能够鉴定有能力摄取抗体核酸的细胞的选择标志，诸如DHFR、胸苦激酶、金属硫蛋白-I和-II优选灵长类金属硫蛋白基因、腺苷脱氨酶、鸟氨酸脱羧酶等。例如，首先通过将所有转化子在含有曱氨蝶呤(Mtx),DHFR的一种竟争性拮抗剂，的培养基中进行培养来鉴定经DHFR选择基因转化的细胞。在采用野生型DHFR时，适宜的宿主细胞是DHFR活性缺陷的中国仓鼠卵巢(CHO)细胞系。或者，可以通过在含有针对选择标志的选择剂诸如氨基糖苷抗生素例如卡那霉素、新霉素、或G418的培养基中培养细胞来选择经编码抗DR5抗体、野生型DHFR蛋白质、和另一种选择标志诸如氨基糖苷3'-磷酸转移酶(APH)的DNA序列转化或共转化的宿主细胞(特别是包含内源DHFR的野生型宿主)。参阅美国专利4,965,199。适用于酵母的选择基因为存在于酵母质粒YRp7中的^;7基因(Stinchcombetal.，1979，Nature282:39)。基因为缺乏在色氨酸中生长能力的酵母突变4朱，例如ATCCNo.44076或PEP4-1提供了选4奪标志。Jones，1977,Genetics85:12.酵母宿主细胞基因组中存在损害随之提供了用于通过在不存在色氨酸下生长来检测转化的有效环境。类似的，用携带丄ew2基因的已知质粒补足丄w2缺陷型酵母菌林(ATCC20,622或38,626)。此外，衍生自1.6pm环状质粒pKDl的载体可用于转化克鲁维氏酵母属酵母。或者，报导了用于在乳酸克鲁维氏酵母中大规模生产重组小牛凝乳酶的表达系统。VandenBerg，19卯，Bio/Technology8:135。还披露了适用于通过克鲁维氏酵母属的工业菌抹分泌成熟重组人血清清蛋白的稳定多拷贝表达载体。Fleeretal.,1991,Bio/Technology9:968-975。Hv)启动子构件表达和克隆载体通常包含受到宿主生物体识别的启动子，且它与抗体核酸可操作连接。适用于原核宿主的启动子包括尸/zo」启动子、p-内酰胺酶和乳糖启动子系统、石成性磷酸酶、色氨酸(trp)启动子系统、和杂合启动子诸如tac启动子。然而，其它已知的细菌启动子也是合适的。用于细菌系统的启动子还将包含与编码抗DR5抗体的DNA可操作连接的Shine-Dalgarno(S.D.)序列。已知真核细胞的启动子序列。事实上，所有真核基因都具有富含AT区，位于起始转录的位点上游大约25至30个碱基处。在许多基因的转录起点上游70至80个碱基处发现的另一种序列是CNCAAT区，其中N可以是任何核芬酸。在大多数真核基因的3'端是AATAAA序列，它可能是向编码序列的3'端添加聚腺苷酸尾的信号。所有这些序列合适的插入真核表达载体中。适用于酵母宿主的启动子序列的实例包括3-磷酸甘油酸激酶或其它糖酵解酶的启动子，诸如晞醇酶、甘油醛-3-磷酸脱氢酶、己糖激酶、丙酮酸脱羧酶、磷酸果糖激酶、葡萄糖-6-磷酸异构酶、3-磷酸甘油酸变位酶、丙酮酸激酶、磷酸丙糖异构酶、磷酸葡萄糖异构酶、和葡糖激酶。作为具有由生长条件控制转录的额外优点的诱导型启动子的其它酵母启动子是醇脱氢酶2、异细胞色素C、酸性磷酸酶、与氮代^t有关的降解酶、金属硫蛋白、甘油醛-3-磷酸脱氢酶、及负责麦芽糖和半乳糖利用的酶的启动子区。适用于酵母表达的载体和启动子进一步描述于EP73,657。酵母增强子也可以有利的与酵母启动子联用。在哺乳动物宿主细月包中由载体转录抗DR5抗体受到例如由病毒i者如多瘤病毒、禽痘病毒、腺病毒(诸如腺病毒2)、牛乳头瘤病毒、禽类肉瘤病毒、巨细胞病毒、逆转录病毒、乙肝病毒和最优选的猿猴病毒40(SV40)基因组、由异源哺乳动物启动子例如肌动蛋白启动子或免疫球蛋白启动子、及由热休克启动子获得的启动子的控制，倘若此类启动子与宿主细胞系统相容的话。方便的以SV40限制性片段的形式获得SV40病毒的早期和晚期启动子，该片段还包含SV40病毒复制起点。方便的以HindIIIE限制性片段的形式获得人巨细胞病毒的立即早期启动子。美国专利4,419,446中公开了使用牛乳头瘤病毒作为载体在哺乳动物宿主中表达DNA的系统。美国专利4,601,978中描述了该系统的一种改良。关于在小鼠细胞中在来自单纯疱疹病毒的胸苷激酶启动子的控制下表达人P-干扰素cDNA还可参阅Reyesetal.,1982,Nature297:598-601。或者，可以-使用劳氏肉瘤病毒长末端重复序列作为启动子。(v)增强子元件构件常常通过在载体中插入增强子序列来提高高等真核细胞对编码本发明抗DR5抗体的DNA的转录。已知来自哺乳动物基因(球蛋白、弹性蛋白酶、清蛋白、a-胎蛋白和胰岛素)的许多增强子序列。然而，通常使用来自真核细胞病毒的增强子。实例包括SV40复制起点晚期一侧的增强子(bp100-270)、巨细胞病毒早期启动子增强子、多瘤病毒复制起点晚期一侧的增强子、和腺病毒增强子。关于激活真核启动子的增强元件还可参阅Yaniv,1982，Nature297:17-18。增强子可以剪接到载体中，位于抗体编码序列的5'或3'位置，但是优选位于启动子的5'位点。(Vi)转录终止构件用于真核宿主细胞(酵母、真菌、昆虫、植物、动物、人、或来自其它多细胞生物体的有核细胞)的表达载体还将包含终止转录和稳定mRNA所必需的序列。此类序列通常可以由真核或病毒DNA或cDNA非翻i奪区的5'端和偶尔的3'端获得。这些区域包含在编码多价抗体的mRNA的非翻译部分中转录成聚腺苷酸化片段的核苷酸区段。一种有用的转录终止构件是牛生长激素聚腺苷酸化区。参阅WO94/11026及其中公开的表达载体。(vii)宿主细胞的选择和转化适于克隆或表达本文载体中的DNA的宿主细胞是上文描述的原核生物、酵母、或高等真核细胞。适于此目的的原核生物包括真细菌，诸如革兰氏阴性或革兰氏阳性生物体，例如肠杆菌科，诸如埃希氏菌属(&c/zen'c/n'a)例如大肠埃希氏菌(co//)、肠杆菌属(五"fera6a"er)、欧文氏菌属(五rw/m'a)、克雷伯氏菌属(f/eZw/e〃a)、变形菌属(尸rafews)、沙门氏菌属(Sa/mowe〃a)i"列^n氛i^寒;少门氏菌(Sa/wo"e〃a/)/;/z/附Mr/"附)、沙、雷氏菌属(Se/^"//")侈J如粘质沙雷氏菌(5^ra/Z"附"rces"(^my)、和志贺氏菌属(57z/ge〃a)，以及芽孢杆菌属(万flc////)诸如枯草芽孢杆菌(5,油/fo)和地衣芽孢杆菌(丑.//c/zew/orm/sX例如1989年4月12日出版的DD266,710中公开的地衣芽孢杆菌41P)、假单胞菌属(PMM&mowaO诸如铜绿假单胞菌(P和链霉菌属()。一种优选的大肠杆菌克隆宿主是大肠杆菌294(ATCC31,446)，尽管其它菌抹诸如大肠杆菌B、大肠杆菌X1776(ATCC31,537)、和大肠杆菌W3110(ATCC27，325)也是合适的。这些例子只是例示而非限制。除了原核生物以外，真核微生物，诸如丝状真菌或酵母也是编码DR54元体的载体的合适克隆或表达宿主。西良酒冲唐酵母(Sacc/zaramycescerev/w'ae)或常用的面包酵母是最常用的低等真核宿主^(敫生物。然而，通常可获得许多其它属、种、和菌抹且可用于本发明，诸如粟酒裂殖糖酵母(5t/z/zosacc/2araw^ces/wm6e);克鲁纟侏酵母属(尺/w，eramyces)宿主诸3口例如乳酸克鲁维酵母(K./"cfe)、脆壁克鲁维酵母(尺./rag/fc)(ATCC12,424)、保加利亚克鲁维酵母(A!^/gan'cw)(ATCC16,045)、威克克鲁维酵母(X!術'cfe證")(ATCC24,178)、K而/"/(ATCC56,500)、果蝇克鲁维酵母(KAcwoj9/n7aram)(ATCC36,906)、耐热克鲁维酵母(I//2er/wto/era似)、和马克思克鲁维酵母(Kmar:c/m7^);亚罗酵母属(KwroWa)(EP402,226);巴斯德毕赤酵母(户/c/2/a/wtor^)(EP183,070);假丝酵母属(Omcfe/a);瑞氏木霉(rn-c/w^mwreew.a)(EP244,234);粗糙脉孢菌(A^wmy/oracra^");"i午旺酉孝母属(5b/7vrawm'o^yces1)诸^口i午旺酵母(5b/zwa"m.om_yce5occ/ofewto/^);和丝状真菌诸如例如脉孢菌属(7Vwra^wra)、青霉属(Pe"/ci〃/wm)、弯颈霉属(To(ypoc/ad/ww)、禾口曲霉属(爿^erg/〃w)宿主i者3口才勾巢曲霉(J.mWw/aws)和黑曲霉(A.niger)。适用于表达糖基化抗体的宿主细胞衍生自多细胞生物体。无脊推动物细胞的例子包括植物和昆虫细胞。已经鉴定了许多杆状病毒抹和变体及相应的允许昆虫宿主细胞，它们来自诸如草地夜蛾Spodoptera/rMg&erab(毛虫)、埃及伊蚊^ecfe(蚊子)、白统伊蚊Jecfesa/6op/"ws(蚊子)、黑腹果虫是Dmso//7//(3脚/a"oga他r(果虫是)、和家香6omxmor/等宿主。公众可获得多种病毒抹用于转染，例如苜蓿尺蠖/^togra//7"a7/^r"&"NPV的L-l变体和家蚕NPV的Bm-5抹，而且此类病毒可依照本发明用作本文的病毒，特别是用于转染草地夜蛾细胞。还可利用棉、玉米、马铃薯、大豆、矮牵牛、番茄、和烟草的植物细胞培养物作为宿主。然后，脊推动物细胞得到广泛关注，而且培养(组织培养)中脊推动物细胞的繁殖已经成为常规流程。有用哺乳动物宿主细胞系的例子是用SV40转化的猴肾CV1系(COS-7,ATCCCRL1651);人胚肾系(293或为了在悬浮培养中生长而亚克隆的293细胞，Grahametal.，1977,J.GenVirol.36:59);幼仓鼠肾细胞(BHK，ATCCCCL10);中国仓鼠卵巢细胞Z-DHFR(CHO，Urlaubetal.,1980，Pro"Natl.Acad.Sci.USA77:4216));小鼠塞托利(sertoli)细胞(TM4,Mather,1980，Biol.Reprod.23:243-251);猴肾细胞(CV1，ATCCCCL70);非洲绿猴肾细胞(VERO-76,ATCCCRL-1587);人宫颈癌细胞(HELA,ATCCCCL2);犬肾细胞(MDCK，ATCCCCL34);牛鼠(buffalorat)肝细胞(BRL3A,ATCCCRL1442);人肺细胞(W138,ATCCCCL75);人肝细胞(H印G2，HB8065);小鼠乳腺胂瘤(MMT060562,ATCCCCL51);TRI细胞(Matheretal.,1982，AnnalsN.YAcad.Sci.383:44-68);證C5细胞；FS4纟田月包；人肝瘤系(HepG2);和骨髓瘤或淋巴瘤细胞(例如YO、J558L、P3和NSO细胞)(参见美国专利5,807,715)。将宿主细胞用上述用于抗体生成的表达或克隆载体转化，并在为了诱导启动子、选择转化子、或扩增编码期望序列的基因而恰当改良的常规营养培养基中培养。(viii)j咅养宿主细月包可以在多种培养基中培养用于生成本发明抗体的宿主细胞。商品化培养基诸如Ham氏FIO(Sigma)、极限必需培养基(MEM，Sigma)、RPMI-1640(Sigma)、和Dulbecco氏改良的Eagle氏培养基(DMEM，Sigma)适于培养宿主细胞。另外，可以使用下列文献中描述的任何培养基作为宿主细胞的培养基Hametal.，1979，Meth.Enz.58:44;Barnesetal.,1980，Anal.Biochem.102:255;美国专利4,767,704;4,657,866;4,927,762;4,560,655;或5,122,469;WO90/03430;WO87/00195;或美国专利复审30,985。任何这些培养基可以根据需要补充激素和/或其它生长因子(诸如胰岛素、运铁蛋白、或表皮生长因子)、盐(诸如氯化钠、钙、镁、和磷酸盐)、緩冲剂(诸如HEPES)、核苷酸(诸如腺苷和胸苷)、抗生素(诸如GENTAMYCINTM药物)、痕量元素(定义为通常以微摩尔范围的终浓度存在的无机化合物)、和葡萄糖或等效能源。还可以以适当浓度包含本领域技术人员知道的任何其它必需补充物。培养条件诸如温度、pH等即先前为表达而选择用于宿主细胞的，这对于普通技术人员而言是显然的。(ix)纯化在使用重组技术时，可以在细胞内、在周质空间中生成抗体，或者直接分泌到培养基中。如果在细胞内生成抗体，那么作为第一步，通过例如离心或超滤清除宿主细胞或裂解片段的微粒碎片。Carteretal.，1992，Bio/Technology10:163-167描述了用于分离分泌到大肠杆菌周质空间的抗体的流程。简单的说，在存在乙酸钠(pH3.5)、EDTA和苯曱基磺酰氟(PMSF)时使细胞糊融化约30分钟。可以通过离心除去细胞碎片。如果将抗体分泌到培养基中，那么通常首先使用商品化蛋白质浓缩滤器，例如AMICON或MILLIPOREPELLICON超滤单元浓缩来自此类表达系统的上清液。在任何上述步骤中，可以包括蛋白酶抑制剂诸如PMSF来抑制蛋白水解，而且可以包括抗生素来防止外来污染物的生长。可以使用例如羟磷灰石层析、凝月交电泳、透析、和亲和层析来纯化由细胞制备的抗体组合物，优选的纯化技术是亲和层析。蛋白A作为亲和配体的适宜性取决于抗体中存在的任何免疫球蛋白Fc区的种类和同种型。蛋白A可用于纯化基于人yl、或y4重链的抗体(Lindmarketal.,1983,J.Immunol.Meth.62:1-13)。蛋白G推荐用于所有小鼠同种型和人丫3(Gussetal.,1986,EMBOJ.5:1567-1575)。亲和配体所附着的基质最常用的是琼脂糖，但是可以使用其它基质。物理稳定的基质诸如可控孔径玻璃或聚(苯乙烯二乙烯)苯能够获得比琼脂糖更快的流速和更短的加工时间。对于包含CH3结构域的抗体而言，可使用BakerbondABXtm村脂(J.T.Baker,Phillipsburg，NJ)进行纯化。根据待回收的抗体，也可使用其它蛋白质纯化技术诸如离子交换柱上的分馏、乙醇沉淀、反相HPLC、硅土上的层析、肝素SEPHAROSETM上的层析、阴离子或阳离子交换树脂(诸如聚天冬氨酸柱)上的层析、层析聚焦、SDS-PAGE、和;克酸4妄沉淀。B.DR5抗体的用途本发明的DR5抗体具有多种效用。已知DR5介导凋亡信号。尽管数种类型的正常细胞表达DR5，但是经由此受体的凋亡信号似乎主要局限于肿瘤细胞，它们在受到癌基因诸如iWT或7L4S转化的背景下变得对死亡受体介导的凋亡更加易感(Wangetal.,CancerCell5:501-12(2004);Nesterovetal.,CancerRes.64:3922-7(2004))。DR5频繁的由人癌细胞系以及原发瘤表达。如此，抗DR5抗体可用于癌症的诊断和治疗。例如，DR5激动性抗体可用于在哺乳动物包括人中治疗癌症DR5抗体，优选激动性抗体。所述癌症可以是任何类型的表达DR5的癌症，包括实体瘤，特别是在接受现有疗法时肿瘤更加进展(progression)或没有有效的已知疗法的晚期或转移性实体瘤。癌症的具体类型包括但不限于结肠直肠癌、非小细胞肺癌(NSCLC)、胰腺癌、卵巢癌、乳腺癌、非何杰金氏(Hodgkin)淋巴瘤(NHL)、成胶质细胞瘤或黑素瘤，优选结肠直肠癌、NSCLC或NHL。另外，DR5抗体可用于哺乳动物包括人中其它DR5相关病理学疾患的-^断和治疗，诸如免疫相关疾病。哺乳动物中本文所述各种病理学疾患的诊断可以由熟练从业人员进行。本领域可以得到得以例如诊断或检测哺乳动物中的癌症或免疫相关疾病的诊断技术。例如，癌症可以通过如下技术来鉴定，包括但不限于触诊、血液分析、X射线、NMR、诸如此类。免疫相关疾病也可以容易的鉴定。在系统性红斑狼疮中，疾病的主要介质是生成对自身蛋白质/组织的自身反应性抗体及随后发生的免疫介导的炎症。多个器官和系统在临床上受到影响，包括肾、肺、肌肉骨骼系统、粘膜皮肤、目艮、中枢神经系统、心血管系统、胃肠道、骨髓和血液。类风湿性关节炎(RA)是一种慢性系统性自身免疫性炎性疾病，主要累及多个关节的滑膜，由此导致对关节软骨的损伤。发病机制依赖T淋巴细胞，而且与类风湿因子，针对自身IgG的自身抗体的生成有关，由此导致免疫复合物的形成，它在关节液和血液中达到高水平。关节中的这些复合物可诱发显著的淋巴细胞和单核细胞浸润到滑膜中及随后显著的滑膜变化；关节腔/液受到类似细胞的浸润及添加许多嗜中性粒细胞。受影响的组织主要是关节，常常是对称样式。然而，关节外疾病也存在两种主要形式。一种形式是形成关节外损伤，伴有正在进行的渐进性关节病和肺纤维化、血管炎和皮肤溃疡的典型损伤。关节外疾病的第二种形式是所谓的费尔提氏(Felty)综合征，它发生在RA病程晚期，有时在关节病已经沉寂后，且涉及出现嗜中性粒细胞减少症、血小板减少症和脾肿大。这可伴随着多个器官中的血管炎及梗塞、皮肤溃疡和坏疽的形成。患者还常常在受影响关节上面的皮下组织中形成类风湿性结节；晚期的结节具有由混合的炎性细胞浸润物包围的坏死中心。可在RA中出现的其它表现包括心包炎、胸膜炎、冠状动脉炎、伴有肺纤维化的间质性肺炎、干燥性角膜结膜炎和类风湿性结节。青少年慢性关节炎是一种慢性特发性炎性疾病，常常开始于16岁之前。其表型与RA有些相似；类风湿因子阳性的一些患者归入青少年类风湿性关节炎。疾病细分为三种主要类别少数关节的、多关节的和系统性的。关节炎可以是严重的，通常是破坏性的，并导致关节僵硬和生长迟緩。其它表现可包括慢性前葡萄膜炎和系统性淀粉样变。脊推关节病是具有一些普遍临床特征且普遍与HLA-B27基因产物表达有关的一组病症。这些病症包括强直性脊柱炎、莱特尔氏(Reiter)综合征(反应性关节炎)、与炎性肠病有关的关节炎、与银屑病相关的脊推炎、幼发型脊推关节病及无差别(undifferentiated)脊推关节病。区别性特征包括具有或没有脊推炎的骶髂关节炎；炎性不对称关节炎；与HLA-B27有关(血清学上定义的MHCI型HLA-B基因座的等位基因)；眼的炎症；及没有与其它类风湿性疾病有关的自身抗体。对于诱发疾病来说关键的最相关细胞是CD8+T淋巴细胞，耙向由MHCI型分子呈递的抗原的细胞。CD8+T细胞可与MHCI型等位基因HLA-B27反应，就像它是由MHCI型分子表达的外源肽。已有假设，HLA-B27的表位可能模拟细菌或其它微生物的抗原性表位，因此诱导CD8+T细胞应答。系统性硬化(硬皮病)的病因学未知。疾病的特点是皮肤硬化；这可能是由活性炎性过程诱导的。硬皮病可以是局部的或系统性的；血管损伤是普遍的，而且微血管系统中的内皮细胞损伤是系统性硬化发展中的早期且重要的事件；血管损伤可能由免疫介导。皮肤损伤中存在单核细胞浸润物及在许多患者中存在抗核抗体暗示免疫学基础。ICAM-1常常在皮肤损伤中成纤维细胞的细胞表面上调，说明T细胞与这些细胞相互作用可能在疾病的发病机理中起作用。累及的其它器官包括胃肠道平滑肌萎缩和纤维化，导致异常虫需动/运动；肾同中心内皮下内膜增生(concentricsubendothelialintimalproliferation),影响小弓形和叶间动脉，从而降低肾皮质血流，导致蛋白尿、氮血症和高血压；骨骼肌萎缩、间质性纤维化、炎症；肺间质性肺炎和间质性纤维化；及心收缩带坏死、疤痕化/纤维化。特发性炎性肌病，包括皮肌炎、多肌炎和其它，是导致肌肉软弱的未知病因的慢性肌肉炎性病症。肌肉损伤/发炎常常是对称的和渐进的。自身抗体与大多数形式有关。这些肌炎特异性自身抗体针对并抑制涉及蛋白质合成的成分、蛋白质和RNA的功能。斯耶格伦氏(Sj6gren)综合征是由免疫介导的炎症及随后泪腺和唾液腺功能破坏引起的。该病可能与炎性结締组织疾病有关或伴随着炎性结締组织疾病。该病与针对Ro和La抗原的自身抗体生成有关，这两种抗原都是d、RNA-蛋白质复合物。损害导致干燥性角膜结膜炎、口干燥、及其它表现或关联，包括胆汁性肝硬化、外周或感觉神经病、和可触知的紫癜。系统性血管炎包括这样的疾病，其中原发性损伤是炎症，后续对血管的损伤导致由受影响血管供应的组织缺血/坏死/变性，且在有些情况中最终导致终端器官功能障碍。血管炎病还可作为其它免疫-炎症介导疾病诸如类风湿性关节炎、系统性硬化等的继发损伤或后遗症发生，特别是在还与免疫复合物形成有关的疾病中。原发性系统性血管炎组中的疾病包括系统性坏死性血管炎结节性多动脉炎、过敏性血管炎和肉芽肿病、多脉管炎；韦格纳氏(Wegener)肉芽胂病；淋巴瘤样肉芽肿病；和巨细胞性动脉炎。各种各样的血管炎病包括粘膜与皮肤淋巴结综合征(MLNS或川畸氏(Kawasaki)病)、分离的CNS血管炎、贝切特氏(Behet)病、血栓闭塞性血管炎(伯格氏(Buerger)病)和皮肤坏死性小静脉炎。所列大多数类型的血管炎的发病机理认为主要是由于免疫球蛋白复合物在血管壁中沉积及随后经ADCC、补体活化或者两者诱导的炎性应答。结节病(sarcoidosis)是病因学未知，特征在于几乎机体任何组织中都存在上皮样肉芽胂的疾患；最常见的是累及肺。发病机理涉及患病部位持续存在活化的巨噬细胞和淋巴样细胞及随后由这些细胞类型释放局部和系统性活性产物而导致的慢性后遗症。自身免疫性溶血性贫血，包括自身免疫性溶血性贫血、免疫性全血细月包减少症和阵发性夜间血红蛋白尿，是由于生成与红细胞(和在有些情况中以及其它血细胞，包括血小板)表面表达的抗原反应的抗体的结果，是经补体介导的溶解和/或ADCC/Fc受体介导的机制去除那些抗体包被细胞的反映。在自身免疫性血小板减少症，包括血小板减少性紫癜，和其它临床背景中免疫介导的血小板减少症中，由于抗体或补体附着于血小板及随后经补体溶解、ADCC或Fc受体介导的机制去除而发生血小板破坏/去除。甲状腺炎，包括格雷夫斯氏(Graves)病、桥本氏(Hashimoto)甲状腺炎、青少年淋巴细胞性曱状腺炎和萎缩性甲状腺炎，是由于针对曱状腺抗原的自抗体。现有的实验模型包括自发性模型大鼠(BUF和BB大鼠)和鸡(肥胖鸡品系)；可诱导模型用曱状腺球蛋白、曱状腺微粒体抗原(甲状腺过氧化物酶)免疫动物。I型糖尿病或胰岛素依赖性糖尿病是胰岛P细胞的自身免疫性破坏；该破坏由自身抗体和自身反应性T细胞介导。胰岛素或胰岛素受体的抗体也可产生胰岛素不响应的表型。免疫介导的肾病，包括肾小球肾炎和肾小管间质性肾炎，是由于抗体或T淋巴细胞介导的对肾组织的损伤，或是直接由于生成针对肾抗原的自身反免疫复合物在肾中沉积。因此，导致免疫复合物形成的其它免疫介导的疾病也可作为间接后遗症诱导免疫介导的肾病。直接和间接的免疫机制都导致炎性应答，它在肾组织中产生/诱导损伤形成，导致器官功能受损，在有些情况中发展成肾衰竭。体液和细胞两种免疫机制都可涉及损伤的发病机理。中枢和周围神经系统的脱髓鞘病，包括多发性硬化；特发性脱髓鞘多神经病或格-巴二氏(Guillain-Ban^)综合征；和慢性炎性脱髓鞘多神经病，认为具有自身免疫基础，而且由于对少突胶质细胞或对髓鳞脂直接造成损害而导致神经脱髓鞘。在MS中，有证据表明该病的诱导和发展依赖T淋巴细胞。多发性硬化是依赖T淋巴细胞的脱髓鞘病，而且具有复发-緩解过程或漫长的渐进过程。病因未知；然而，病毒感染、遗传恶病质、环境和自身免疫性都会起作用。损伤含有主要由T淋巴细胞介导的浸润物、小胶质细胞和浸润的巨噬细胞；CD4+T淋巴细胞是损伤处的主要细胞类型。少突胶质细胞死亡和随后脱髓鞘的机理未知，但是可能是由T淋巴细胞驱动的。炎性和纤维化肺病，包括嗜曙红细胞性肺炎；特发性肺纤维化和超壽文性肺炎，可能涉及不受调控的免疫-发炎应答。抑制该应答将具有治疗益处。自身免疫或免疫介导的皮肤病，包括大疱性皮肤病、多形性红斑和冲妻触性皮炎，由自身抗体介导，其发生依赖T淋巴细胞。银屑病是T淋巴细胞介导的炎性疾病。损伤含有T淋巴细胞、巨噬细胞和抗原加工细胞，及一些嗜中性粒细胞的浸润物。变应性疾病，包括哞喘；变应性鼻炎；特应性皮炎；食物超敏性；和荨麻渗，它们是T淋巴细胞依赖的。这些疾病主要由T淋巴细胞诱导的炎症、IgE介导的炎症或二者组合介导。移植相关疾病，包括移植排斥和移植物抗宿主病(GVHD)，依赖T淋巴细胞；抑制T淋巴细胞功能具有改善作用。其中通过干预免疫和/或炎性应答有益的其它疾病有传染病，包括^f旦不限于病毒感染(包括但不限于AIDS、甲型、乙型、丙型、丁型、戊型肝炎)、细菌感染、真菌感染、及原生动物和寄生虫感染(刺激MLR的分子(或衍生物/激动剂)可在治疗上用于增强对传染因子的免疫应答)；免疫缺陷病(刺激MLR的分子沐于生物/激动剂可在治疗上用于增强对遗传性、获得性、感染诱发的(如在HIV感染中)或医源性(即如源自化疗)免疫缺陷的疾患的免疫应答)；和瘤形成。抗体优选在载体，优选药学可接受载体中施用于哺乳动物。合适的载体及其配制剂记载于《Remington'sPharmaceuticalSciences》中，第16版，1980,MackPublishingCo.,Oslo等人编。典型的是，在配制剂中使用适宜量的药学可接受盐使得配制剂等渗。载体的例子包括盐水、林格氏(Ringer)溶液和右旋糖溶液。溶液的pH优选约5至约8，更优选约7至约7.5。其它载体包括持续释放制剂，诸如含有抗体的固体疏水性聚合物半透性基质，该基质是定型产品的形式，例如薄膜、脂质体或微胶嚢。对本领域技术人员显而易见的是，根据例如施用路径和所施用抗体的浓度，某些载体可能是更优选的。抗体可通过注射(例如静脉内、腹膜内、皮下、肌肉内、intraportal)施用于哺乳动物，或者通过确保以有效形式才殳递至血流的其它方法诸如灌注。抗体还可通过隔离灌注(isolatedperfosion)技术来施用，诸如隔离组织灌注，以发挥局部治疗效果。局部或静脉内注射是优选的。施用抗体的有效剂量和时间表可凭经验确定，做出此类决定在本领域技术范围内。本领域技术人员将理解，必须施用的抗体剂量将取决于例如将4妾受抗体的哺乳动物、施用路径、所用抗体的具体类型及施用于哺乳动物的其它药物。选择抗体适宜剂量的指导见关于抗体治疗性用途的文献，例如《HandbookofMonoclonalAntibodies》，Ferrone等人编,NogesPublications,ParkRidge，NJ,1985,第22章，第303-357页；Smithetal.,AntibodiesinHumanDiagnosisandTherapy,Haberetal.，eds.,RavenPress,NewYork(1977)pp.365-389。抗体单独使用的典型日剂量可在每天约ljag/kg体重至多达100mg/kg体重的范围内或更多，这取决于上述因素。抗体可以与有效量的一种或多种其它治疗剂联合施用于哺乳动物。在癌症的治疗中，尤其如此，因为许多肿瘤通过p53肿瘤抑制基因的灭活获得了对化疗或放疗的抗性。由于DR5以不依赖p53的方式刺激凋亡，因此预期它在临床上不仅可作为单一药剂使用，而且还可联合其它类型的癌症治疗，诸如例如化疗(化疗剂)、放疗、免疫佐剂(immunoadjuvant)、生长抑制剂、细胞毒剂、和/或细胞因子。还可采用已知在哺乳动物细胞中诱导凋亡的其它药剂，此类药剂包括TNF-a、TNF-P、CD30配体、4-1BB配体和Apo-2配体，以及能诱导凋亡的其它抗体。所述一种或多种其它疗法可包括治疗性抗体(DR5抗体以外的)，此类抗体可包括抗Her受体抗体(诸如HERCEPTIN(trastuzumab),Genentech,Inc.)、抗VEGF4元体、抗CD20抗体(诸^口RITUXAN(rituximab),Genentech,Inc.)和针对Apo-2配体的其它受体的抗体诸如抗DR4抗体或针对其它TNF受体家族成员的抗体诸如ENBREL(etanercept)(Immunex)。本发明所设想的化疗包括本领域已知的且可获得的化学物质或药物，诸如多柔比星(Doxorubicin)、5-氟尿嘧咬(5匿Fluorouracil)、依托泊脊(etoposide)、喜初于石威(camptothecin)、亚叶酉交(Leucovorin)、阿jf唐月包苦(Cytosinearabinoside)、环石寿酰胺(Cyclophosphamide)、塞替。底(Thiotepa)、白消安(Busulfan)、Cytoxin、泰素(Taxol)、曱氨喋呤(Methotrexate)、顺铂(Cisplatin)、美法仑(Melphalan)、长春碱(Vinblastine)和卡铂(Carboplatin)。此类化疗的制备和剂量给药时间表可依照制造商的说明书使用，或者由熟练从业人员凭经验决定。此类化疗的制备和剂量给药时间表还记载于《ChemotherapyService》，MC.Perry编,Williams&Wilkins,Baltimore,MD(1992)。化疗优选在药学可接受载体中施用，诸如那些上文所描述的。化疗的施用模式可以与DR5抗体所采用的相同，或者它可以经不同模式施用于哺乳动物。例如，可对哺乳动物注射DR5抗体和口服施用化疗。放疗可依照本领域常用的和熟练技术人员知道的方案施用于哺乳动物。此类疗法可包括铯、铱、碟或钴照射。放疗可以是全身照射，或者可以是局部针对身体中或身体上的特定部位或组织。典型的是，放疗在约1周至约2周的一段时期以脉沖方式施用。然而，放疗可以在更长时间的一段时期施用。任选的是，放疗可以以单剂或连续的多剂施用。抗体可以与一种或多种其它治疗剂顺序或同时施用。抗体和治疗剂的量取决于例如所用药物的类型、所治疗的病理学疾患、及施用的时间表和路径，但是通常低于各自单独使用时的量。对哺乳动物施用抗体后，可以以熟练从业人员众所周知的多种方式监测哺乳动物的生理学状况。设想了拮抗性或阻断性DR5抗体可用于治疗。例如，可将DR5抗体施用于哺乳动物(诸如上文所述)以阻断DR5受体结合Apo-2L，由此提高Apo-2L疗法期间所施用Apo-2L的生物利用度以在癌细胞中诱导凋亡。检验。多种众所周知的动物模型可用于进一步理解本文中所鉴定的DR5抗体在例如癌症或免疫相关疾病的形成和发病机理中的作用，及测试候选治疗剂的功效。此类模型的体内本质使得它们特别能预报在人类患者中的响应。免疫相关疾病的动物模型包括非重组的和重组的(转基因的)两种动物。非重组动物模型包括例如啮齿类，例如鼠模型。此类模型可使用标准技术，例如皮下注射、尾静脉注射、脾植入、腹膜内植入和肾嚢下的植入，通过将细胞导入同基因小鼠来生成。例如移4直物抗宿主病的动物4莫型是已知的。移植物抗宿主病在将有免疫能力的细胞移植到免疫遏制或耐受患者中时发生。供体细胞识别并应答宿主抗原。应答可从危及生命的严重炎症至腹泻和体重减轻的轻微病例变化。移植物抗宿主病模型提供了评估针对MHC抗原和次要移植物抗原的T细胞反应性的手l爻。一种合适的流程详细记载于《CurrentProtocolsinImmunology》，单元4.3。皮肤同种异体移植物排斥的动物模型是测试T细胞介导体内组织破坏的手段，它指示和测量其在抗病毒和肿瘤免疫中的作用。最常用的和公认的模型使用鼠尾部皮肤移植物。重复实验证明皮肤同种异体移植物排斥是由T细月包、辅助T细胞和杀伤效应T细胞而非抗体介导的。Auchincloss,H.Jr.andSachs,D.H.，《FundamentalImmunology》，第2版，W.E.Paul编，RavenPress,NY，1989,889-992。一种合适的;^详呈"^纟田i己载于《CurrentProtocolsinImmunology》，单元4.4。可用于测试本发明组合物的其它移植物排斥模型有异基因心脏移植模型，记载于Tanabe,M.da/.，rra似p/ama"o",58:23(1994)及Tinubu，S.A./画画/.,4330-4338(1994)。迟发型超敏感性的动物模型同样提供了细胞介导的免疫功能的测定法。迟发型超敏感性反应是T细胞介导的体内免疫应答，特征为在抗原攻击后一段时间流逝后才达到峰值的炎症。这些反应也在组织特异性自身免疫病中发生，诸如多发性硬化(MS)和实验性自身免疫性脑脊髓炎(EAE,MS的一种沖莫型)。一种合适的法L牙呈"^纟田i己载于《CurrentProtocolsinImmunology》，单元4.5。关节炎的动物模型是胶原诱发的关节炎。此模型共享人自身免疫性类风湿性关节炎的临床、组织学和免疫学特征，是人自身免疫性关节炎的公认才莫型。小鼠和大鼠模型的特征为滑膜炎、软骨和软骨下骨的侵蚀。本发明的DR5抗体可使用《CurrentProtocolsinImmunology》，见上文，单元15.5中记载的方案来测试针对自身免疫性关节炎的活性。还可参见使用Issekutz，A.C."a/.,/附附，o/ogy,88:569(1996)中记载的CD18和VLA-4整联蛋白的单克隆抗体的模型。已经记载了一种津喘模型，其中通过用卯清蛋白使动物敏化，然后用通过气雾剂投递的相同蛋白质对动物攻击而诱导抗原诱发的气道高反应性、肺嗜曙红细胞增多和炎症。几种动物模型(豚鼠、大鼠、非人灵长类)在用气雾剂抗原攻击后显示与人的特应性哮喘相似的症状。鼠模型具有人译喘的许多特征。测试本发明组合物在治疗哮喘中的活性和效力的合适方法记载于Wolyniec,W.W.Wa/.,/Wes^V:Ce〃Mo/.5/o/.，18:777(1998)及其引用的参考文献。另外，本发明的DR5抗体可在银屑病样疾病的动物模型上测试。本发明的DR5抗体可在Schon，M.P.Ato.A/W.,3:183(1997)记载的scid/scid小鼠模型中测试，其中小鼠展示与银屑病类似的组织病理学皮肤损伤。另一种合适的模型是如Nickoloff,B.J.""/.,颠J.尸a仇，146:580(1995)所述制备的人皮肤/sdd小鼠嵌合体。众所周知用于测试候选治疗性组合物的安全性和抗癌活性的多种动物模型。这些动物模型包括将人肿瘤异种移植到无胸腺棵鼠和/或scid/scid小鼠中，或者遗传鼠肿瘤模型(geneticmurinetumormodel)诸如p53敲除小鼠。重组(转基因)动物模型可使用用于生成转基因动物的标准技术通过将因操作对象的动物包括但不限于小鼠、大鼠、兔、豚鼠、绵羊、山羊、猪和非人灵长类，例如狒狒、黑猩猩和猴，诸如猕猴。本领域已知的用于将转基因导入jt匕类动物的4支术包4舌原才亥显孩i注射(pronucleicmicroinjection)(HoppeandWanger,美国专利第4,873,191号)；逆转录病毒介导的基因转移进入种系(例如VanderPutten"a/.,Prac.A^/.Jc^/.5W.C7iX4,82:6148-615(1985));胚胎干细胞中的基因寻革巴(ThompsonWa/.,Ce//，56:313-321(1989));胚胎电穿孑L(Lo,M/.Ce/.说'o/.,3:1803-1814(1983));精子介导的基因转移(Lavitranoda/.，Cell,57:717-73(1989))。综述参见例如美国专利第为了本发明的目的，转基因动物包括那些只在其部分细胞中携带转基因的动物("镶嵌动物")。转基因可作为单一转基因或者串联物例如头-头或头-尾串联物整合。还可能如下将转基因选择性导入特定细胞类型，例如LaskoAto/.JcadL^4，89:6232-636(1992)的技术。转基因在转基因动物中的表达可通过标准技术来监测。例如，Southern印迹分析或PCR扩增可用于验证转基因的整合。然后可使用诸如原位杂交、Northern印迹分析、PCR或免疫细胞化学的技术分析mRNA表达水平。动物可进一步检验免疫病病理学的征候，例如通过组织学检验以测定免疫细胞进入特定组织的浸润或者癌性或恶性组织的存在。或者，可构建"敲除"动物，它由于编码本文中所鉴定的多肽的内源基因和导入动物胚胎细胞的改变的编码该同样的多肽的基因组DNA之间的同源重组而具有缺陷的或改变的编码该多肽的基因。例如，编码特定多肽的cDNA可依照已建立的技术用于克隆编码该多肽的基因组DNA。可以将编码特定多肽的基因组DNA的一部分删除或用另一基因替换，诸如可用于监测整合的、编码可选择标志的基因。通常，载体中包含数千碱基未改变的侧翼DNA(5'和3'末端都有)(关于同源重组载体的描述参见例如ThomasandCapecchi,Cell,51:503(1987))。将载体导入胚胎干细胞系(例如通过电穿孔)，并选择其中所导入DNA与内源DNA发生同源重组的细胞(参见例如Lie/"/.，Cell,69:915(1992))。然后将所选细胞注射到动物(例如小鼠或大鼠)的胚泡中以形成聚集嵌合体(参见例如Bradley,在《TeratocarcinomasandEmbryonicStemCells:APracticalApproach》中,E.J.Robertson编，IRL,Oxford,1987，第113-152页)。然后可将嵌合胚植入合适的假孕雌性代孕动物，并使胚胎足月产生"敲除，，动物。在其生殖细胞中包含同源重组DNA的后代可通过标准技术鉴定，并用于繁殖其中动物的所有细胞都包含同源重组DNA的动物。敲除动物可以在例如由于缺乏该多肽而具有抵雄卩某些病理状况的能力和形成病理状况方面表征。在本发明的另一个实施方案中，提供了在诊断测定法中使用抗体的方法。例如，可以在i貪断测定法中使用抗体来4企测DR5在特定细胞和组织中的表达或过表达。可以使用本领域已知的多种诊断测定技术，诸如体内成像测定法、体外竟争性结合测定法、直接或间接三明治测定法和免疫沉淀测定法,以异相或同相(heterogeneousorhomogeneousphase)进4亍(Zola,MonoclonalAntibodies:AManualofTechniques,CRCPress,Inc.(1987)pp.147-158)。诊断测定法中所使用的抗体可以用可检测模块(moiety)标记。可检测模块应当能够直接或间接产生可检测信号。例如，可检测模块可以是放射性同位素，诸如3&14C、32P、3、或1251;荧光或化学发光化合物，诸如异硫氰酸荧光素、罗丹明或荧光素；或酶，诸如碱性磷酸酶、(3-半乳糖苷酶或辣根过氧化物酶。可以采用本领域知道的用于将抗体与可检测模块偶联的任何方法，包括下列文献中所记载的那些方法Hunteretal.，Nature144:945(1962);Davidetal.，Biochemistry13:1014-1021(1974);Painetal.，J.Immunol.Meth.40:219-230(1981);Nygren,J.Histochem.andCvtochem.30:407-412(1982)。DR5抗体还可用于从重组细胞培养物或天然来源亲和纯化DR5。在该过程中，使用本领域众所周知的方法将针对DR5的抗体固定化在合适的支持物上，诸如Sephadex树脂或滤纸。接着使固定化抗体接触含有待纯化DR5的样品，然后用合适的溶剂清洗支持物，所述溶剂将会基本上清除样品中除DR5以外的所有物质，而DR5结合到固定化抗体上。最后，用另一种合适的溶剂清洗支持物，所述溶剂将会从抗体上释放DR5。在本发明的另一个实施方案，提供了制品和试剂盒，其中包含可用于治疗病理学疾患或者检测或纯化DR5抗体的物质。制品包括带有标签的容器。合适的容器包括例如药瓶、药管和试管。容器可以用各种材料制成，诸如玻璃或塑料。容器中装有含活性剂的组合物，所述活性剂有效治疗病理学疾患或者检测或纯化DR5。组合物中的活性剂是DR5抗体，优选包括对DR5特异的单克隆抗体。容器上的标签指示该组合物用于治疗病理学疾患或者检测或纯化DR5，而且还可以指示体内或体外使用的用法，诸如上文所述那些。本发明的试剂盒包括上文所述容器和装有緩沖剂的第二容器。它还可以包括商业和用户立场上所需的其它物质，包括其它緩沖剂、稀释剂、滤器、针头、注射器和印有使用说明书的包装插页。提供下文实施例仅仅为了例示目的，而非意图以任何方式限制本发明的范围。在此完整收入本说明书中所引用的所有参考专利和文献作为参考。实施例除另有说明外，实施例中提及的商品化试剂依照制造商的说明书使用。下文实施例和整篇说明书中以ATCC编号鉴别的那些细胞的来源是美国典型培养物寸呆藏中心(AmericanTypeCultureCollection,Manassas,Virginia)。本文中7>开的许多试剂和方案在WO99/37684、WO00/73349、WO98/32856、WO98/51793和WO99/64461中有进一步讨论，在此完整收入其内容作为参考。实施例1:抗DR5抗体变体的设计和测试抗DR5抗体16E2衍生自来自人抗体噬菌体展示库的scFv,而且已经记载于1998年11月19日公开的WO98/51793(见实施例14)。scFv16E2的核苷酸和氨基S殳序列分别显示于图5(SEQIDNO:9)和图6(SEQEDNO:10)。在图6中，鉴定了信号序列及重链和轻链CDR区(CDR1、CDR2和CDR3区标有下划线)。材料和方法全长抗DR5抗体16E2的构建下文所述实施例需要全长IgG。因此，将16E2的可变区克隆到先前记载的pRK载体中，该载体适于全长IgGl抗体的哺乳动物细胞表达(Gormanetal.,DNAProt.Eng.Tech.2:3-10(1990))。16E2可变区的氨基酸序列与Kabat数据库(Kabatetal.，SequencesofProteinsofImmunologicalInterest,U.S.Dept.ofHealthandHumanServices,NIH,5thedition)的比4交指出，16E2的轻链可变区(VL)衍生自人X轻链基因家族。因此，首先将16E2的可变区亚克隆到含有X恒定区的载体中。设计PCR引物以添加限制酶位点Sfil和Mscl，然后用这两种酶消化扩增得到的可变区。将此片段插入经过类似消化的包含入恒定区的载体。因为此载体是为了在大肠杆菌中表达Fab而设计的，对于IgG表达，再次PCR扩增完整轻链编码区，所用引物在编码区的5'端添加限制性位点AgeI，在3'端添加限制性位点HindIII。然后，将此Agel-HindIII片段插入经过类似消化的载体pDRl(Clontech)。质粒pDRl的完整序列显示于图11(SEQIDNO:15)。对于型式1的重链，PCR扩增scFv16E2的重链可变区(VH)，所用引物i殳计成在所述结构域的5'端添加PvuII位点，在3'端添加Apal位点。然后将此片段克隆到载体pDR2(Clontech)的PvuII/Apal位点，用于表达完整重链(VH-CH1-CH2-CH3结构域)。质粒pDR2的完整序列显示于图12(SEQIDNO:16)。全长抗体16E2重链和轻链的核苷酸和氨基酸序列分别显示于图7-10(SEQIDNO:11-14)。具体而言，图7和8(SEQIDNO:11和12)显示了全长16E2重链的氨基酸和核普酸序列，图9和10(SEQIDNO:13和14)显示了全长16E2轻链的氨基酸和核苦酸序列。全长16E2抗体的重链和轻链在下文中将称为"型式1"。IgG变体的构建使用定点诱变(Kunkeletal.，Proc.Natl.Acad.Sci.USA82:488-492(1985))分别对轻链或重链构建变体。将编码轻链型式1的质粒pDRl或编码重链型式1的pDR2转化到大肠杆菌菌才朱CJ236(BioRad,JoyceandGrindley，J.Bacteriol.158:636-643(1984))中，用于制备含脱氧尿苷的单链DNA模板。将诱变反应的等分试样转化到大肠杆菌菌抹XL-lBlue(Stratagene，SanDiego,CA)中，用于纯化双链DNA。对于每种变体，使用ABI377xl或ABI3730xl自动化DNA测序仪(Perkin-ElmerCorp.),对编码轻链或重链的DNA完整测序。对于每种lgG变体，通过将表达轻链的质粒和表达重链的质粒共转染到经腺病毒转化的人胚肾细胞系293(Grahameta.，J.Gen.Virol.36:59-74，(1977))中，进行瞬时转染。简而言之，将293细胞在转染前那天分瓶(split)，并在含血清培养基中涂布(plate)。次曰，连同pAdVantageDNA(Promega,Madison,WI)—起，从轻链和重链的双链DNA制备磷酸钙沉淀物，并逐滴加到板中。将细胞于37°C温育过夜，然后用PBS清洗并在无血清培养基中培养4天，此时收获条件培养液。使用蛋白A-SepharoseCL-4B从培养物上清液纯化抗体，緩冲液交换到10mM琥珀酸钠，140mMNaCl，pH6.0中，并使用Centricon-10(Amicon)浓缩。通过测量280nm处的吸光度或通过定量氨基酸分析来测定蛋白质浓度。电化学发光DR5结合测定法以液相竟争性ELISA形式测定抗DR5抗体的相对结合。DR5-Fc融合蛋白^吏用生物素-X-NHS(ResearchOrganics,Cleveland,OH)生物素化，标准抗体(或是型式1或是Apomab7.3)用ORI-TAGNHS酯(IGENInternational,Ga池ersburg,MD)依照制造商的说明书标记。为了进行结合测定法，将测试抗体样品在测定緩沖液(PBS,pH7.4,含0.5%BSA和0.5%Tween-20)中连续稀释。将等体积(各25^1)的抗体样品(浓度范围50，000-0.85ng/ml)、ORI-TAG标准抗体(150ng/ml)和生物素化的人DR5-Fc(15ng/ml)加到96孔聚丙烯^1中，于室温在轻轻摇动下温育1.5小时。然后添加^t连霉亲合素石兹珠(IGENInternational)(25jil/孔)，将才反如上再温育30分钟。添加测定緩沖液至每孔终体积250|^1,使用ORIGENM384仪器(IGENInternational)对板读数。使用样品曲线的四参数拟合(fourparameterfit)计算IC50值。生物测定法胂瘤细胞生长抑制/杀伤在体外肿瘤细胞杀伤测定法中测定每种抗体变体的表观效力。在含10%胎牛血清的RPMI培养基中培养Colo205人结肠癌细胞系。在装有培养基的96孔组织培养板中进行标准品(或是型式1或是Apomab7.3)和样品的2倍连续稀释，所述培养基中含有或不含10吗/ml浓度的交联抗体(抗人Fc，山羊亲和纯化的F(ab')2)。然后将细胞(20,000/孔)加到板中。将板于37°C温育总共48小时。温育的最后3个小时向孔中加入AlamarBlue。使用荧光计对荧光读数，激发为530nm，发射为590nm。使用四参数曲线拟合程序分析数据。结果此项工作的总体目标是开发具有改良的生化特性和改良的功效且不损害安全性的抗DR5抗体。使用了数种方法来实现期望的改进，包括DR5重链和轻链中的氨基酸替代以改进化学稳定性或热稳定姓；折叠；CDR残基的丙氨酸扫描以确定哪些残基对于结合或折叠可能是重要的，因此可以为了提高亲和力而改变；及使用噬菌体展示CDR库来鉴定具有改进的亲和力的克隆。还对框架区中的变化研究了它们对免疫原性和生物学活性的可能影响。使用同源性模型(图19和20)来帮助选择许多这些改变。重链变体系列1型式2的重链包含相对于型式1的5处改变。这些改变(Q6E、V11L、E12V、R13Q和K105Q)位于可变区的框架中，是为了使框架更接近人VHIII共有序列而添加的。表1显示了首先构建的变体，它们在重链CDR中有改变。这些突变体的ssDNA模板是型式2。第102位Leu变成Tyr是为了改进包装(packing)，及由此提高稳定性。与此改变相结合，Asn53变成Gin或Tyr是为了消除潜在的脱酰胺位点。Met34变成Leu是为了消除潜在的氧化位点。将这些重链变体与最初的轻链一起表达，产生型式20-23(表l)。包含三处突变M34L、N53Q和L102Y及型式2中的框架改变的重链此后称为"tripleheavyone"或TH1，而包含三处突变M34L、N53Y和L102Y及型式2的框架的重链类似地称为TH2。表1:重链CDR变体<table>tableseeoriginaldocumentpage74</column></row><table>a模板型式2bOrigen⑧竟争性人DR5结合测定法c肿瘤细胞抑制测定法d肿瘤细胞抑制测定法由于添加M34L突变后结合和体外细胞杀伤活性有损失(即v21与v20相比，v23与v22相比，表l)，使用重链型式20作为模板，在重链CDR1中进行了一系列另外的突变，用丙氨酸或通过扫描Kabat数据库得出的其它残基替代。将这些重链与型式1的轻链一起表达。表2显示了这些型式的突变的氨基酸、得到的相对于vl的结合、及生物测定法数据。Gly33变成Ala提高结合并提高效力。包含三处突变G33A、N53Q和L102Y的此重链称为TH3。同样，构建了包含G33A、N53Y和L102Y的TH4。Thr28变成Ala与vl相比也提高活性，包含T28A、N53Q和L102Y的重链称为TH9。表5总结了TH1、TH2、TH3、TH4和TH9中的CDR改变。这5种重链在与轻链组合(见下文)共表达后进行了进一步研究。表2:CDRH1中的变体<table>tableseeoriginaldocumentpage75</column></row><table>a所有变体的模板都是型式20bOrigen⑧竟争性人DR5结合测定法c肿瘤细胞抑制测定法d肿瘤细胞抑制测定法丙氨酸扫描CDRH2和CDRH3为了进一步阐明重链CDR2和CDR3中每个氨基酸的贡献，通过用丙氨酸替代这些残基中的每一个构建了突变体。使用重链型式l作为模板，用编码丙氨酸替代的合成寡核苷酸进行定点诱变。将这些重链与型式1轻链一起表达。表3和4中显示了所得抗体的表观亲和力和效力的变化。Gly"Ala和ArglOOAla都提高活性，因此这些改变可用于构建重链的另外的组合突变体。表3:CDRH2的丙氨酸扫描<table>tableseeoriginaldocumentpage76</column></row><table>a模板型式1bOrigen⑧竟争性人DR5结合测定法c肿瘤细胞抑制测定法d肿瘤细胞抑制测定法表4:CDRH3中的丙氨酸突变体<table>tableseeoriginaldocumentpage76</column></row><table>a模板型式1bOrigen⑧竟争性人DR5结合测定法c肿瘤细胞抑制测定法d肺瘤细胞抑制测定法系列2构建了与型式TH1、TH2、TH3和TH4使用相同CDR的第2系列重链，其中框架残基E6、Lll、V12、Q13和Q105回复成在型式1中发现的氨基酸，即Q6、Vll、E12、R13和K105。这些重4连称为TH5、TH6、TH7和TH8(见表5)。表5:在所有CDR环中有突变的重链变体重链组合CDRH1中的突变CDRH2中的突变CDRH3中的突变6、11、12、13、105处的框架残基TH1M34LN53QL102YE,L,V，Q,QTH2M34LN53YL102YE，L，V,Q，QTH3G33AN53QL102YE,L,V,Q,QTH4G33AN53YL102YE,L,V,Q,QTH5M34LN53QL102YQ，V,E,R，KTH6M34LN53YL102YQ,V,E,R,KTH7G33AN53QL102YQ，V,E，R，KTH8G33AN53YL102YQ,V，E，R,KTH9T28AN53QL102YE，L,V,Q，Q轻链变体轻链CDR的丙氨酸扫描为了更好的理解轻链CDR残基对结合和生物学活性的贡献，使用定点诱变将每个氨基酸变成丙氨酸。将每一种轻链变体与重链型式1(Vl)组合，用于如上所述的IgG的瞬时表达。表6总结了轻链CDR丙氨酸扫描的结果。有趣的是，与许多其它抗体相反，CDRL1似乎在抗原结合中发挥重要作用。此轻链是X链，图20所示模型说明CDR1能形成cc螺旋。更能容忍L2和L3中的残基用丙氨酸替代，除了CDR2中的G50A,它消除结合。相反，有些丙氨酸替代，尤其是R91A和K51A,提高结合和生物活性。表6:轻链丙氨酸扫描突变体<table>tableseeoriginaldocumentpage78</column></row><table>a模板型式1bOrigen⑧竟争性人DR5结合测定法c肿瘤细胞抑制测定法d肺瘤细胞抑制测定法基因家族残基交换(Genefamilyresidueswap)使用第二种类型的定向突变体来研究轻链。在此方法中，将模型中表现为位于环的任一侧、因此可能发挥支持作用而非直接涉及抗原结合的CDR残基交换成其它密切相关X基因家族中对应位置的残基。也将这些突变体与vl重链一起表达，表7中总结了结果。在CDRL2中，G50K、K51D的组合在结合和生物活性两个方面都产生显著改进，包含四处突变G50K、K51D、N52S、N53E的组合也相对于vl有所改进。不能耐受(tolerate)同一区域中只牵涉一处残基替代的其它更保守的改变。表7:基于相关基因家族序列的轻链变体<table>tableseeoriginaldocumentpage79</column></row><table>bOrigen⑧竟争性人DR5结合测定法c肿瘤细胞抑制测定法d肿瘤细胞抑制测定法用噬菌体抗体库进行的亲和力选择对每个CDR，Ll、L2和L3，分别构建噬菌体展示库并选4奪对DR5-Ig的亲和力提高的克隆。对模型(图20)的检查指出CDR中的哪些残基有可能是暴露的，选择这些残基进行随机化。将型式1的完整X轻链和VH结构域克隆到噬菌体展示载体pS1602中，参见Vajdosetal.,J.Mol.Biol.320:415-428(2002)，进一步描述于Sidhuetal,,Curr.Opin,Biotechnol.11:610-616(2002)。文库构建中使用Kunkel诱变。将vl噬菌粒转化到大肠杆菌菌抹CJ236中，用于制备单链DNA，并使用在为随机化选择的每个位点包含TAA密码子的寡核苷酸来产生文库模板。然后使用利用简并密码子NNS(其中N是G、A、T和C的等比混合物，S是G和C的等比混合物)的寡聚物来构建文库。CDRL1使用终止模板寡聚物CA945和文库寡聚物CA946来突变。CDRL2使用终止模板寡聚物CA947和文库寡聚物CA948来突变。CDRL3使用终止模板寡聚物CA949和文库寡聚物CA950来突变。表8中总结了文库构建。表8<table>tableseeoriginaldocumentpage80</column></row><table>将随机诱变反应的产物电穿孔到XL1-Blue大肠杆菌细胞(Stratagene)中，通过与M13K07辅助噬菌体一起培养14-16小时来扩增。通过连续稀释和涂板来评估库容量(librarysize),假设将最初的转化物涂布到羧苄青霉素板上且是1.9xl09至2.2xl09个克隆。将文库以液相使用生物素化的DR5-Ig(Genentech)淘选4轮。将大约1011个嗟菌体用1mlPBS中的3%脱脂奶粉，0.2%Tween溶液(喧菌体封闭液)在旋转轮上于室温封闭1小时。将DRUG和CD4_IG各自以l微摩尔加到封闭液中以降低非特异性结合。然后第一轮以100nM加入生物素化的抗原'容许结合进行2小时。在后续轮次的淘选中，抗原浓度降至10、5和1纳摩尔。为了捕捉结合抗原的噬菌体，将包被有链霉亲合素的磁珠(Dynal)首先用p藍菌体封闭液清洗3次，然后用lml噬菌体封闭液于室温封闭1小时。将磁珠用磁体集中并加到抗原-噬菌体溶液中达15分钟。然后用磁珠将磁珠-抗原-噬菌体复合物拉出溶液。然后将这些磁珠用噬菌体封闭液清洗3次，用PBS-Tween(0.02。/。Tween)清洗3次，并用PBS清洗1次。通过用lOO(ilO.IMHC1浸泡10分钟从磁珠上洗脱噬菌体，并用NaOH中和。将洗脱的噬菌体用于感染XL1Blue大肠杆菌，如上所述繁殖供后续轮次。每一4仑4是高清洗的严格性。对来自每个文库的克隆测序。对于L1文库，只得到野生型序列，支持此CDR对于抗原结合或抗体构象是重要的想法，潜在螺旋中可容忍极少数突变。对于L2中的文库，没有找到共有序列，说明多种CDRL2序列对于结合DR5是可接受的。对于L3文库，数种序列出现多次，使用寡聚物指导的诱变将这些序列移植到全长轻链载体上。再次在293细胞中表达IgG，使用重链型式1进行共转染。表9描述了表达成全长抗体的L3序列及结合和生物测定法的结果。掺入型式69和70的两种所测序列产生与型式1相比结合和生物活性提高的抗体。表9:衍生自噬菌体文库的轻链CDR3的蛋白质序列型式aCDRL3序列相对于vl的结合比率b有交联的生物测定活性e无交联的生物测定活性d68NSRDSS(SHW1.30.9731.069NSRSYSGNHW0.10.143**林70NSRSSSGSHW0.20.152承**a模板型式1bOrigen⑧竟争性人DR5结合测定法c肿瘤细胞抑制测定法d肿瘤细胞抑制测定法组合轻链如上所述，鉴定了每个轻链CDR中独自提高体外结合和肿瘤细胞杀伤的突变。然后组合这些突变以产生数种每个CDR中有改进的轻链。这些"triplelight1"等称为TL1、TL2和TL3，描述于表10。如此，TL1包含型式44中鉴定的Ll突变、型式26中鉴定的L2突变和型式29中鉴定的L3突变的组合。同样，TL2包含来自型式44的L1突变、来自v65的L2突变和来自v69的L3突变的组合，TL3包含来自v44的Ll、来自v65的L2和来自v74的L3的组合。表10:轻链组合中的突变<table>tableseeoriginaldocumentpage82</column></row><table>表11:Apomab命名法<table>tableseeoriginaldocumentpage82</column></row><table>表12中显示了其它Apomab抗体<table>tableseeoriginaldocumentpage82</column></row><table>*框架与型式l相同**框架与人共有vH-in相同Apomab表达在书f生出triple重链和triple轻链后，通过293细胞中3种轻链中的每一种与9种重链中的每一种的共转染产生了9x3栅格(grid)的组合抗体，并如上所述纯化所得抗体。使用这些Apomab的体外研究指出数种型式在生物测定法中相当有效。因此，制备适于体内小鼠肿瘤模型研究的材料。Apomab回收和纯4匕用于从收获的细胞培养物流体(HCCF)回收和纯化Apomab抗体的方法4苗述^口下Prosep蛋白A层析-将由中国仓鼠卵巢(CHO)细胞产生的收获的细胞培养物流体(HCCF)用1.5MTris碱将pH调至7.0,加载到用25mMNaCl/25mMTris/5mMEDTA,pH7.5平衡的Prosep蛋白A柱(Millipore，USA)上。通过用平衡缓沖液清洗，接着用平衡緩沖液中的0.5MTMAC清洗第二遍，再接着用平衡緩沖液清洗第三遍，使不结合的蛋白质流过并清除。使用0.1M乙酸的阶梯洗脱(stepelution)将Apomab抗体从蛋白A柱上洗脱下来。通过A280监测柱洗脱液。合并Apomab抗体峰。SP-S印haroseFastFlow(速流)层析-将来自Prosep蛋白A的Apomab抗体的合并液用1.5MTris碱将pH调至5.5,然后加载到用25mMMOPSpH7.1平4軒的SP-SepharoseFastFlow牙主(AmershamPharmacia,Sweden)上。力口载样品后，将柱用平衡緩沖液清洗至A280达到基线。通过使用12倍柱体积的平衡緩冲液pH8中的0-0.2MNaCl线性梯度，将Apomab抗体从柱上洗脱下来。通过A280监测柱洗脱液。收集级分并合并根据SEC-HPLC分析的测定含有正确折叠的Apomab抗体的那些级分。Q-SephroseFastFlow层一斤-然后将SP-Sepharose级分合并液加载到用50mMNaCl/25mMTris緩冲液pH8平衡的Q-SepharoseFF柱(Amershampharmacia,Sweden)上。用平衡緩冲液清洗柱子，收集柱洗脱液中的Apomab抗体。UF/DF配制-在分子量截留值约10，000道尔顿的膜上，通过超滤来浓缩Q-Sepharose合并液。然后将浓缩后的QSepharoseFF合并液对10倍体积的10mM组氨酸/8%蔗糖，pH6渗滤。用10%聚山梨醇酯20调节(condition)渗滤后的QSepharose合并液至聚山梨醇酯20的终浓度达到0.02%。将配制好的散装液(bulk)经无菌0.22pm滤器过滤，j^存于2-8。C或-70。C。通过SDS-PAGE、SEC-HPLC和氨基酸序列分析测定Apomab抗体的最终纯度。测序在ABI3700或ABI3730AppliedBiosystems测序仪上进行。测序层析图使用Sequencer(GeneCodes，AnnArbor,MT)序列分析软件进行分析。测试Apomab的体夕卜活性在开始Apomab的体内研究前，对每个批次如上所述测试体外活性。这些结果显示于表13。<table>tableseeoriginaldocumentpage84</column></row><table>实施例2:在Colo205人结肠癌异种移植物模型和结肠直肠癌的其它异种移植物模型中评估Apomab的抗肿瘤活性此实施例和后续实施例中所使用的常用缩写如下CR冗全消退(completeregression)PR部分消退(partialregression)MTD最大耐受剂量(maximumtolerateddose)MTV中值月中瘤体积(mediantumorvolume)NTR非治疗相关死亡(non-treatmentrelateddeath)LTTFS长期无月中瘤存活者(long-termtumor-freesurvivor)PBS磷酸盐緩沖盐水(phosphate-bufferedsaline)q3dx4每3天1次，共4剂(onceeverythreedaysforatotaloffourdoses)qdx1第1天纟会1剂(onedosegivenonDay1)qdx5每天1次，持续5天(oncedailyforfivedays)TFS无月中瘤存活者(tumor-freesurvivor)TR治疗相关死亡(treatmentrelateddeath)TTE至纟冬点的时间(timetoendpoint)T-C接受治疗的动物和对照动物之间中值TTE值的差异，以天计TGD肺瘤生长延迟(tumorgrowthdelay);T-C;4妻受治疗的组与对照组相比中值TTE的增加通常表述成％对照Timeto2xVo倍增时间(doublingtime,(DT));月中瘤体积加倍所花费的时间LogCe訓l=logl0(V前/V后)，治疗时实际肿瘤体积log10(V前)和Iog10(V后)之间的差异(Chenevertetal"Clin.CancerRes.3:1457-1466(1997))给6-8周龄雌性无胸腺棵鼠(CharlesRiverLaboratories)每只小鼠在右背侧部皮下接种0.2ml体积中的5xl(^个Colo205细胞。给所有小鼠打耳签(ear-tag)以供鉴别。一旦肺瘤体积达到约100-200mm3，将携瘤Colo205小鼠随才几分组并施行治疗。治疗方案是腹膜内单剂及数剂媒介(vehicle)对照、或标准品和测试抗体，3mg/kg/小鼠或10mg/kg/小鼠。在有些情况中，将来自媒介和10mg/kg组的3或4只小鼠安乐死，在治疗后5分钟、24小时或48小时收集血清和肿瘤，供血清药物浓度和肿瘤组织学研究。在剩余的小鼠中，肿瘤测量在前2周每周进行两次，然后另外4周，每周一次。在Colo205异种移植无胸腺棵鼠模型中得到的结果显示于图21-25。图21显示了Apomab5.3、6.3和8.3每一种在测试的所有剂量在降低平均肿瘤体积方面都高度有效，而且它们的功效与抗体16E2型式1基本上相同。在Colo205异种移植无胸腺棵鼠模型中测试了腹膜内单剂Apomab5.2、6.2、5.3、7.2和7.3的功效，结果显示于图22。测试的所有Apomab在降低肿瘤体积方面高度有效，而且它们的功效与抗体16B2型式1基本上相同。类似的，图23所示结果显示了Apomab5.2、7.3和8.3在结肠直肠癌的这个模型中在降低肺瘤体积方面有效。在此实验中，Apomab和16E2以lmg/kg和3mg/kg的剂量施用，但其它方面的治疗如上所述。Apomab7.3和8.3的功效特别显著，而且在20天的测试期间不显示任何逆转。如图24所示，在Colo205异种移才直物^t型中，Apomab7.3的抗癌活性远远超越Apomab23.3和25.3的活性。图25显示了比较衍生自稳定的和瞬时的细胞系的Apomab7.3在Colo205小鼠异种移植物模型中的抗肿瘤活性的测定结果。简而言之，如上所述，给6-8周龄雌性无胸腺棵鼠每只小鼠在右背侧部皮下接种0.2ml体积中的5乂106个Colo205细胞。剂量显示于图中。图25中的数据显示分别衍生自稳定的和瞬时的细胞系的Apomab7.3在Colo205小鼠异种移植物模型中同等有效。图26显示了测试Apomab7.3(10mg/kg剂量M卡为单一疗法(monotherapy)或与80mg/kgCPT-11(伊立替康(irinotecan)，用于治疗结肠直肠癌的一种已知药物)的联合疗法(combinationtherapy)在结肠直肠癌的HCT15异种移植物模型中的抗癌活性的实验结果。所示结果证明，尽管Apomab7.3和CPT-11在单独施用时都是有效的，两种联合显示出卓越的效果，超越Apomab7.3和CPT-11二者作为单一疗法施用的活性。在携带肉瘤LS180异种移植物、用Apomab7.3联合CPT-ll(伊立替康)治疗的棵鼠中进行的代表性实验的结果显示于图27。再次，发现联合疗法优于施用Apomab7.3或CPT-11中任一作为单一药剂，而且差异在统计学上是显著的(第2张小图)。所比较的所有对Tukey-KramerP<0.05。实施例3:在非何杰金氏淋巴瘤的BJAB异种移植物模型中评估Apomab7.3的抗癌活性在非何杰金氏淋巴瘤的BJAB异种移植物模型中评估单独的和联合RITUXAN(rituximab，Genentech.Inc.)(4mg/kg,qlwk)的Apomab7.3(10mg/kgqlwk)的抗癌活性。因为已知淋巴瘤细胞在SCID小鼠中生长更好，所以在此项研究中使用6-8周龄SCID小鼠(CharlesRiverLaboratory)。治疗参数和结果显示于图28。Apomab7.3和RITUXAN⑧在联合施用时显示出十办同活'l"生(synergisticactivity)。实施例4:在人胰腺腺癌的BxPC3异种移植物才莫型中评估Apomab7.3的抗癌活性在雌性无胸腺棵鼠(CharlesRiverLaboratory)中的人胰腺腺癌的BxPC3异种移植物模型中调查单独的和联合吉西他滨(gemcitabine)(160mg/kg，腹膜内)的Apomab7.3(10mg/kg,静脉内)的抗癌活性。治疗参^t和结果显示于图29。数据显示作为单一疗法施用的Apomab7.3的抗癌活性远远优于吉西他滨的功效。Apomab7.3和吉西他滨的联合施用导致功效的进一步提高。实施例5:在人肺癌的H460异种移植物模型中评估单独的及联合卡铂和泰素的Apomab7.3的抗癌活性相对于媒介对照及卡铂和泰素的组合，评估单独的及联合卡铂和泰素的Apomab7.3(10mg/kg,lxwk,腹膜内)的抗癌活性。给60只雌性无胸腺棵鼠(CharlesRiverLaboratory)每只小鼠在右背侧部皮下接种0.2ml体积中的5xl(^个H460细胞。给所有小鼠打耳签以供鉴别。容许胂瘤达到平均肿瘤体积100-200mm3并如图30所示治疗。简而言之，将小鼠分成四组。第1组是媒介治疗对照组(10mM组氨酸，8%蔗糖，0.02%Tween20pH6)。第2组用Apomab7.3治疗，10mg/kg/小鼠剂量，腹膜内，每周1次，持续2周。第3组施用卡铂(carboplatin)(100mg/kg/小鼠，腹膜内,第0天单剂)+泰素(taxol)(6.25mg/kg/小鼠，皮下，连续5天每天一次，持续2周)。第4组接受Apomab7.3(10mg/kg/小鼠剂量，腹膜内，每周1次，持续2周)+卡铂(100mg/kg/小鼠，腹膜内，第0天单剂)+泰素(6.25mg/kg/小鼠，皮下，连续5天每天一次，持续2周)。作为单一疗法施用的Apomab7.3的抗癌活性与卡柏+泰素组合的抗瘤活性相当。Apomab7.3+卡铂+泰素的联合施用优于其它治疗模态。实施例6:在人肺癌的H2122异种移植物模型中评估单独的及联合卡铂和泰素的Apomab7.3的抗癌活性在此项研究中，给雌性无胸腺棵鼠(CharlesRiverLaboratory,每组10只小鼠)每只小鼠在右背侧部皮下接种0.2ml体积中的5xl(^个H2122细月包。给所有小鼠打耳签以供鉴别。容许肺瘤达到平均肿瘤体积100-200mm3，随机分成四组(每组6只小鼠)，并如图31所示治疗。第l组是i某介治疗对照组(10mM组氨酸，8%蔗糖，0.02%Tween20pH6)。第2组施用卡铂(100mg/kg/小鼠，腹膜内，第0天单剂)+泰素(6.25mg/kg/小鼠,皮下，连续5天每天一次，持续2周)。第3组接受Apomab7.3(10mg/kg/小鼠剂量，腹膜内，每周1次，持续2周)。第4组接受Apomab7.3(10mg/kg/小鼠剂量，腹膜内，每周1次，持续2周)+卡铂(100mg/kg/小鼠，腹膜内，第0天单剂)+泰素(6.25mg/kg/小鼠，皮下，连续5天每天一次，持续2周)。如图31所示，卡铂+泰素组合不显示相对于媒介治疗对照组的显著抗癌活性。完全相反，作为单一疗法施用的Apomab7.3显示出显著的抗肿瘤活性。用Apomab7.3治疗的所有6只小鼠在70天治疗期间显示出完全响应(CR)而没有任何逆转。在用Apomab7.3+卡铂+泰素组合治疗的组中发现相同的活性。为了测定Apomab7.3在此模型中的最大有效剂量，给6-8周龄雌性无胸腺棵鼠(CharlesRiverLaboratory)每只小鼠在右背侧部皮下接种0.2ml体积中的5xl(^个H2122细胞。给所有小鼠打耳签以供鉴别。容许肿瘤达到平均肿瘤体积100-200mm3,随机分组(每组13只小鼠)，并如下所述治疗。将排除在治疗组以外的任何小鼠安乐死。A组是媒介治疗对照组(0.5M琥珀酸精氨酸，20mMTris,0.02%Tween20,pH7.2)。々某介腹膜内施用，每周5次，持续1周。B组施用Apomab7.3，lmg/kg/小鼠，静脉内，单剂。C组施用Apomab7.3,3mg/kg/小鼠，静脉内，单剂。D组施用Apomab7.3,10mg/kg/小鼠，静脉内，单剂。首次治疗后48小时，将来自B组、C组和D组的3只小鼠安乐死，如下收集它们的肿瘤。将一个肺瘤保存在10%福尔马林中供组织学研究。将一个肿瘤在液氮中冷冻供RNA研究。将一个肺瘤在液氮中冷冻供Western印迹。肿瘤测量头2周每周进行两次，然后每周一次，持续4周。在6周结束时或者直到肿瘤体积达到约800-lOOOmm3，将所有剩余小鼠安乐死。图32第一张小图所示剂量-响应曲线指出Apomab7.3在测试的所有剂量都是有效的，但是3mg/kg和10mg/kg剂量显示出相对于lmg/kg剂量的明显(distinct)(尽管不是统计学显著的)改善。所比较的所有对Tukey-KramerP0.05(见图32第二张小图)。实施例7:在人结肠直肠癌的Colo205异种移植物模型中评估Apomabs23.3、25.3和7.3的抗癌活性在此项研究中，给雌性无胸腺棵鼠(CharlesRiverLaboratory)每只小鼠在右背侧部皮下接种0.2ml体积中的5xl06个Cob205细胞。给所有小鼠打耳签以供鉴别。容许肿瘤达到平均肿瘤体积100-200mm3,随机分成七组(每组10只小鼠)，并如图33所示治疗。第1组是i某介治疗对照组(10mM组氨酸，8%蔗糖，0.02%Tween20pH6)。第2组施用单剂3mg/kg/小鼠静脉内Apomab7.3。第3组施用单剂10mg/kg/小鼠静脉内Apomab7.3。第4组施用单剂3mg/kg/小鼠静脉内Apomab23.3。第5组施用单剂10mg/kg/小鼠静脉内Apomab23.3。第6组施用单剂3mg/kg/小鼠静脉内Apomab25.3。第7组施用单剂10mg/kg/小鼠静脉内Apomab25.3。治疗后24小时对所有小鼠称重。肿瘤测量头2周每周进行两次，然后每周一次，持续4周。6周后或者肿瘤体积达到M000mm3时，将小鼠处死。结果显示于图33。如25天的数据所示，Apomab7.3和Apomab25.3在此模型中都显示出显著的抗癌活性。实施例8:评估单克隆抗体Apomab7.3针对棵鼠中Colo205人结肠癌异种移植物的抗癌活性动物雌性无胸腺棵鼠(服/歷,Harlan)在研究的第1天时是11或12周龄。给动物随意喂养水和NIH31ModifiedandIrradiatedLabDiet(改良和照射实验室饮食)，其含有18.0%粗蛋白质，5.0%粗脂肪，5.0%粗纤维。将小鼠收养在静态孩i型隔离装置(staticmicroisolator)中的irradiatedALPHA-Dribed-o'cobsLaboratoryAnimalBedding(实验室动物草垫)上，12小时光照循环，21-22°C，40-60%湿度。肿瘤植入异种移植物源自培养的Colo205人接触癌细胞。将肿瘤细胞在补充有10%热灭活胎牛血清，100U/mL青霉素G钠，100吗/mL硫酸链霉素,0.25吗/mL两性霉素B,25吗/mL庆大霉素，2mM谷氨酰胺，lmM丙酮酸钠10mMHEPES和0.075%碳酸氢钠的RPMI-1640中培养至对数中期。在增湿培养箱中于37°C在5%C02和95%空气的环境中在组织培养瓶中维持细胞培养物。在植入肿瘤细胞那天，收获Colo205细胞，并以5x106细胞/mL的浓度重悬于PBS中的50%Matrigel基质(BDBiosciences)。每只测试小鼠接受lxl()S个Colo205细胞，皮下植入右侧，当平均尺寸达到100-300mm3时监测肿瘤的生长情况。13天后，称为研究的第1天，各个肿瘤的体积在126-288mm3的范围内，将动物分成六组，每组由平均肺瘤体积188mm3的10只小鼠组成。测试材冲牛和治疗在剂量给药期间将测试材料置于冰上，随后将剂量给药溶液贮存于4°C。在媒介对照组(第l组)中，小鼠接受媒介，腹膜内施用，每天一次，持续5天，接着休息2天，然后每天一次，再持续5天。在测试组(第2-4组)中，动物用Apo2L.0配体(60mg/kg,腹膜内，5/2/5时间表)、Apomab7.3(3mg/kg,静脉内，第1和8天)和抗VEGF鼠单克隆抗体B20-4.1(10mg/kg，腹膜内，第1和8天)。第5和6组分别接受B20-4.1与Apo2L.0的组合和B20-4.1与Apomab7.3的组合。每剂以0.2mL每20g体重(10mL/kg)的体积投递，根据动物体重按比例决定。终点使用卡尺(caliper)每周两次测量肿瘤。当动物的肿瘤体积达到2000mm3或者在第68天结束研究时，取先发生者，将每只动物安乐死。由于未达到2000mm3尺寸的肿瘤数目，为肿瘤生长延迟研究选择1000mn^的终点(endpoint)肺瘤体积。由如下方程式计算每只小鼠的至终点的时间(TTE):TTE(天)=[log1()(终点体积，mm3)-b]/m其中b和m分别是通过转化肿瘤生长数据集的log值的线性回归得到的直线的截距和斜率。此数据集包含超过研究终点体积的第一次观测结果和恰在终点体积前的三次连续观测结果。对未达到终点的动物指派TTE值，等于研究的最后一天。对遭受治疗相关死亡或由于转移遭受非治疗相关死亡的动物指派TTE值，等于死亡那天。遭受非治疗相关死亡或原因未知的死亡的动物排除在TTE计算之外。90治疗成果通过肿瘤生长延迟(TGD)来评估，它定义为治疗组与对照组相比中值至终点的时间(TTE)的增长TGD=T-C，以天计，或者表述成相对于对照组中值TTE的百分比%TGD=(T-C)/Cx100，其中T=治疗组的中值TTE，C=对照组的中值TTE。治疗可引起动物中肿瘤的部分消退(PR)或完全消退(CR)。在PR响应中，研究期间的连续三次测量的肿瘤体积是其第1天体积的50%或以下，而且这三次测量中的一次或多次等于或大于13.5mm3。在CR响应中，研究期间的这三次测量中的一次或多次肿瘤体积小于13.5mm3。在研究结束时具有CR响应的动物另外归入无肺瘤存活者(TFS)。监测并记录消退响应(Regressionresponse)。取样在终点时从每组中的动物采集肿瘤样品。恰在取样前通过颈脱位法将这些动物安乐死。采集每组三只动物的肿瘤，切成两半，并保存于10°/。中性緩冲的福尔马林中，室温12-24小时。统计学和图形分析使用Logrank检验来分析治疗组和对照组TTE值间差异的显著性。在P=0.05的显著性水平进行双尾统计学分析(two-tailedstatisticalanalysis),认为0.01￡P^).05的结果是显著的，P<0.01的结果是高度显著的。中值肿瘤生长曲线将组中值月中瘤体积(groupmediantumorvolume)显示为时间的函数。当动物由于肺瘤尺寸而退出研究时，将为该动物记录的最终肿瘤体积包括在用于计算后续时间点的组中值肿瘤体积的#t据内。绘制Kaplan-Meier曲线图将研究中剩余动物的百分比显示为时间的函数。这些曲线图使用与Logrank检验相同的数据集。结果图34显示了此项研究中每组的组中值肿瘤生长曲线(上图)和Kaplan-Meier曲线图(下图)。媒介治疗对照小鼠的中值TTE是10.0天，其中1个胂瘤(总共10个)未达到1000mm3的终点肿瘤体积。在第1和8天以10mg/kg腹膜内施用B20-4.1,产生适度的19.9天(113%)TGD，它在统计学上是不显著的。Apo2L.0和Apomab7.3单一疗法对Colo205是有效的，分别产生28.4天(190%)和53.0天(355%)的肺瘤生长延迟。对Apo2L.0或Apomab7.3中任一添加B20-4.1在TGD或消退响应方面不提高治疗功效。实施例9:评估作为单一疗法的及联合卡铂加紫杉醇的单克隆抗体Apomab7.3针对SKMES-1人NSCLC的抗癌活性测试作为单一疗法的及联合卡铂加紫杉醇(paclitaxel)的Apo2L.0配体和Apomab7.3针对SKMES-1人NSCLC的体内抗肿瘤活性。动物雌性无胸腺棵鼠("M/"M，Harlan)在研究的第1天时是9-10周龄，体重17.4-25.4g。给动物随意喂养水和NIH31ModifiedandIrradiatedLabDiet(改良和照射实验室饮食)，其含有18.0%粗蛋白质，5.0%粗脂肪，5.0%粗纤维。将小鼠收养在静态微型隔离装置(staticmicroisolator)中的irradiatedALPHA-Dribed-o'cobsLaboratoryAnimalBedding(实验室动物草垫)上，12小时光照循环，21-22。C,40-60%湿度。肺瘤植入异种移植物源自培养的SKMES-1肺肿瘤，其通过在PRC连续移植来维持。每只测试小鼠接受1mm3SKMES-1肺瘤碎片，皮下植入右侧，并监测肺瘤的生长情况。13天后，称为研究的第l天，各个肿瘤的体积在63-144mm3的范围内，将动物分成六组，其中四组各由10只小鼠组成，两组各由9只d、鼠组成。平均肿瘤体积为93-95mm3。测试材料和治疗所有测试材料以O.lmL每20g体重(5mL/kg)为剂量给药准备就绪，在收到时贮存于-80。C。在剂量给药的第一天将测试材料融化，在剂量给药期间置于冰上，随后贮存于4。C。卡柏(PARAPLATIN⑧注射液，BristolMyersSquibb)用水(D5W)中的5%右旋糖稀释，以产生每10g体重(10mL/kg)(UmL体积的期望剂量。紫杉醇(NaturalPharmaceuticals,Inc.)在剂量给药的每一天用D5W从10X储液稀释，以产生媒介，其由卯。/oD5W中的5%乙醇和5%克列莫佛(Cremophor)EL组成(5%EC媒介)，使得期望剂量在每20g体重O.lmL投递。第l组(媒介对照(vehiclecontrol))小鼠接受媒介，腹膜内施用，每天一次，持续5天(i.p.qdx5)，充当肿瘤生长对照。第2和3组的小鼠分别接受Apo2L.0(60mg/kg，皮下，qdx5)和Apomab7.3(10mg/kg，静脉内，qdxl)的单一疗法。第4组的小鼠接受卡铂(100mg/kg，腹膜内，qdxl)加紫杉醇(6.25mg/kg，皮下，qdx5)组合。第5和6组的小鼠分别接受卡铂加紫杉醇与Apo2L或Apomab7.3的组合。每一剂以前一节所述体积施用，根据动物体重按比例决定。终点，耳又样和统计学分析如前面实施例8中所述决定终点，进行取样和统计学分析。结果图35和36分别显示了用Apo2L.0和Apomab7.3治疗的组的组中值肿瘤生长曲线和Kaplan-Meier曲线图。所有i/某介治疗对照小鼠的肺瘤生长至1500mm3的终点体积，中值TTE为18.9天。因此，此45天研究中可实现的最大TGD是26.1天(138%)。对照组的中值肺瘤生长曲线和Kaplan-Meier曲线图包括在图35和36的上图和下图中。对于Apo2L.0治疗组(第2组)，中值TTE是22.9天，对应于4.0天(21%)TGD和统计学不显著的活性。图28(上图)指出第2组的中值肿瘤体积在治疗期间缩小，然后快速肿瘤生长恢复。第3组的中值TTE是2.0天，对应于7.1天(38%)TGD和统计学高度显著的活性(P=0.005)。没有消退响应的记录，所有肿瘤达到1500mm3的终点体积。第3组的中值肿瘤生长曲线显示出肿瘤生长相对于对照的初始延迟。用卡铂加紫杉醇治疗的第4组小鼠的中值TTE是26.5天，对应于7.6天(40%)TGF和统计学显著的活性(P=0.01)。第4组的所有肿瘤生长至1500mn^终点体积，没有消退响应的记录。第4组小鼠的中值肿瘤生长曲线指出胂瘤生长相对于对照小鼠的适度延迟(modestdelay)(见图35和36，上图)。Apo2L.0、卡铂和紫杉醇三联组合的治疗产生32.7天的中值TTE,对应于13.9天(73%)TGD和相对于第1组统计学高度显著的活性(P=0.002)。此三联组合的32.7天中值TTE比Apo2L.0单一疗法组的22.9天中值TTE或化疗对照组的16.5天中值TTE长，但是根据Logrank分析，该差异未达到统计学显著性。尽管缺乏统计学显著性，中值肿瘤生长曲线指出第5组的联合治疗与Apo2L.0单一疗法或卡铂加紫杉醇化疗相比有更大活性(见图28，上图)。Apomab7.3、卡铂和紫杉醇的三联组合的治疗(第6组)导致3/10TR死亡，因此，这组不能评估TGD。然而，中值胂瘤生长曲线指出第6组的联合治疗与Apomab7.3单一疗法或卡铂加紫杉醇化疗相比有更大活性(见图37,上图)。结论尽管此实验有较高死亡率，数据说明Apo2L.0和Apomab7.3中任一可对卡铂和紫杉醇的治疗增加抗肺瘤效果。实施例10:在人Colo205癌异种移植物模型中评估作为单一疗法的及联合抗VEGF抗体的单克隆抗体Apomab7.3的抗癌活性动物雌性无胸腺棵鼠(鼎/聽，Harlan)在研究的第l天时是7-8周龄。给动物随意喂养水和NIH31ModifiedandIrradiatedLabDiet(改良和照射实验室饮食)，其含有18.0%粗蛋白质，5.0%粗脂肪，5.0%粗纤维。将小鼠收养在静态4效型隔离装置(staticmicroisolator)中的irradiatedALPHA-Dribed-o'cobsLaboratoryAnimalBedding(实验室动物草垫)上，12小时光照循环，21-22°C,40-60%湿度。肿瘤纟田I包J咅养人Colo205结肠癌细胞在含有100U/mL青霉素G钠，100pg/mL硫酸链霉素，0.25吗/mL两性霉素B和25pg/mL庆大霉素的RPMI1640培养基中培养。培养基补充有10%热灭活胎牛血清，2mM谷氨酰胺和lmM碳酸氢钠。肺瘤细胞在组织培养并瓦中在增湿培养箱中于37°C在5%C02和95%空气的环境中培养。体内植入在对数期生长过程中收获用于植入的人Colo205癌细胞，并以5x106细胞/mL重悬于50%Matrigel中。每只小鼠在右侧皮下注射lxl(^个细胞(0.2mL细胞悬浮液)。每周两次监测肿瘤，当它们的体积达到100-300mm3时每天监测一次。在研究的第1天，将动物分成治疗组，肿瘤体积108.0-220.5mm3,组平均肿瘤体积149.8mm3。可估算肿瘤重量，lmg相当于lmm3肿瘤体积。测试材料和治疗提供测试材料以进行剂量给药。将剂量给药溶液贮存于4。C。将小鼠分成六组，每组十只小鼠。所有治疗都是腹膜内(i.p.)施用的。Apo2L.0及其媒介各自在第1-5天每天施用一次(qdx5)。Apomab7.3和鼠抗VEGF抗体抗G6(anti-G6)各在第1天给药一次(qdx1)。对照第1组小鼠用Apo2L0的媒介治疗。第2组接受Apo2L.0单一疗法，60mg/kg。第3组接受Apomab7.3单一疗法，3mg/kg。第4组接受BY4单一疗法，5mg/kg。第5和6组分别接受60mg/kg的Apo2L.0和3mg/kg的Apomab7.3，各联合5mg/kg的抗G6。在所有组中，0.2mL/20g小鼠的剂量给药体积根据每只动物的体重按比例决定。终点，取样和统计学分析如前面实施例8中所述决定终点，进行取样和统计学分析。结果结果显示于图37，其中上图中的曲线显示组中值肿瘤体积相对于时间的图示，下图中的Kaplan-Meier曲线图显示各组剩余可评估动物百分比相对于时间的图示。对照第1组小鼠接受Apo2L.0媒介，充当所有治疗组的对照。所有10只小鼠中的肿瘤生长至1500mmS终点体积，中值TTE为20.8天。因此，此61天研究中的最大可能TGD为193%。第2组接受Apo2L.0单一疗法，60mg/kg。这种治疗相对于媒介对照组产生高度显著的抗肿瘤活性(P<0.001)，中值TTE为53.6天。此中值TTE对应于32.8天T-C和158%TGD。5只小鼠在第61天的中值肿瘤体积为1,210mm3。^己录了1例LTTFS。第3组接受Apomab7.3单一疗法，3mg/kg。这种治疗产生高度显著的活性(PO.001),最大可能TGD为193%,MTV(6)为776mm3。记录到1例LTTFS、1例瞬时CR响应和3例FR响应。第4组接受抗G6单一疗法，5mg/kg。这种治疗产生高度显著的活性(PO.Ol)，TGF为860/。，MTV(3)为1,224mm3。没有记录到消退响应。第5组接受60mg/kg的Apo2L.0与5mg/kg的抗G6的组合。这种联合治疗产生138。/。TGD。抗肺瘤活性相对于媒介治疗高度显著(PO.001),但相对于两种单一疗法不显著。在第5组中，MTV(3)为1，080mm3，记录到1例PR响应。第6组接受3mg/kg的Apomab7.3和5mg/kg的抗G6的联合治疗。这种治疗产生193。/。的最大可能TGD。抗肿瘤活性相对于媒介治疗是高度显著的(PO.001),相对于抗G6单一疗法是显著的，但相对于Apomab7.3单一疗法是不显著的。在第6组中，MTV(8)为208mm3，记录到5例PR响应。结论肿瘤对3mg/kgqdx1Apomab7.3的单一疗法(第3组)有强响应。这种治疗相对于媒介对照组产生高度显著的活性，最大可能TGD为193%。在存活至第61天、MTV为776mn^的6只小鼠中，5只动物发生了肿瘤消退。这种单一疗法产生i例LTTFS、1例瞬时CR响应和3例PR响应。中值肿瘤体积直到第15天后才增长(图37)。Apomab7.3和鼠抗VEGF抗体抗G6的联合疗法产生比用单独的Apomab7.3或抗G6所观察到的活性更强的活性。这种联合治疗产生8只61天存活者，产生了研究的最低MTV，为208mm3。中值肿瘤生长曲线显示肿瘤缩小或停滞直至第33天，随后的肿瘤生长也很慢(图37)。这种联合治疗产生比抗G6单一疗法显著更强的活性，但与Apomab7.3单一疗法的结果没有显著差异。另外，这种联合治疗产生5例PR响应，而用Apomab7.3单一疗法获得的5例消退响应包括1例瞬时CR和1例LTTFS。所有疗法都得到很好的耐受。在研究中没有观察到体重减轻或其它明显毒性。总之，Apomab7.3/抗G6联合疗法比相应单一疗法的治疗产生更多的61天存活者和更低的MTV。然而，Apomab7.3/抗G6联合不产生治愈活性(curativeactivity)，而这在Apomab7.3单一疗法中观察到了。权利要求1.抗DR5抗体或其片段，其包含全长抗体16E2的重链和/或轻链(分别是SEQIDNO11和13)中的至少一处突变，其中所述抗体或抗体片段具有比所述全长抗体16E2更高的对DR5的亲和力，和/或展现出比所述全长抗体16E2更高的生物学活性和/或效力。2.权利要求1的抗DR5抗体或其片段，其中所述抗体与全长抗体16E2结合基本上相同的表位。3.权利要求1的抗DR5抗体或其片段，其包含具有表1-7和9-12中任一所列至少一处替代的重链和/或轻链。4.权利要求1的抗DR5抗体或其片段，其包含全长16E2抗体重链(SEQIDNO:ll)可变区框架中的一处或多处突变。5.权利要求4的抗DR5抗体或其片段，其中所述框架突变选自下组Q6E、V11L、E12V、R13Q和K105Q。6.权利要求5的抗DR5抗体或其片段，其包含如下所有框架突变Q6E、V11L、E12V、R13Q和K105Q。7.权利要求1或权利要求6的抗DR5抗体或其片段，其包含选自下组的至少一处突变氨基酸序列SEQIDNO:11中的T28A、G33A、M34L、M34A、M34I、M34S、N53Q、N53Y和L102Y。8.权利要求1或权利要求6的抗DR5抗体或其片段，其包含氨基酸序列SEQIDNO:11中的G99A和R100A中的至少一处突变。9.权利要求6的抗DR5抗体或其片段，其包含氨基酸序列SEQIDNO:11中的选自下组的突变(i)N53Q，L102Y;(ii)M34L,N53Q，L102Y;(iii)N53Y，L102Y;(iv)M34L，N53Y，L102Y;(v)G33A,N53Q,L102Y;(vi)M34L，N53Y，L102Y;(vii)G33A,N53Q,L102Y;(viii)G33A，N53Y，L102Y;(ix)T28A,N53Q,L102Y;及(x)T28A，N53Y，L102Y。10.权利要求1或权利要求6的抗DR5抗体或其片段，其包含全长16E2抗体轻链(SEQIDNO:13)中的至少一处突变。11.权利要求10的抗DR5抗体或其片段，其中所述轻链是X链。12.权利要求11的抗DR5抗体或其片段，其中所述突变在CDRL1中。13.利要求12的抗DR5抗体或其片段，其中所述突变选自下组氨基酸序歹寸SEQIDNO:13中的Q24A、Q24S、G25A、D26E、S27A、L28A、R29A、S30A、Y31A、Y31K、Y32H、A33G、S34A和S34Y。14.权利要求12的抗DR5抗体或其片段，其包含选自下组的突变氨基酸序列SEQIDNO:13中的(i)Q24S,D26E，Y31K,S34Y;及(ii)D26E，Y31K。15.权利要求11的抗DR5抗体或其片段，其中所述突变在CDRL2中。16.权利要求15的抗DR5抗体或其片段，其中所述突变选自下组氨基酸序列SEQIDNO:13中的G50A、G50K、G50S、K51D、N52A、N52S、N52L、N52Q、N53A、N53E、N53Q、N53S、P55A和S56A。17.权利要求15的抗DR5抗体或其片段，其包含选自下组的突变氨基酸序列SEQIDNO:13中的(i)G50K，K52S，N53E;(ii)G50S，K51D,N52S,N53E;(iii)N52S，N53E;及(iv)N52Q，N53S。18.权利要求11的抗DR5抗体或其片段，其中所述突变在CDRL3中。19，权利要求18的抗DR5抗体或其片段，其包含选自下组的至少一处突变氨基酸序列SEQIDNO:13中的N89A、N89L、N89Q、R91A、S93A、N95aA、N95aT、N95aQ、H95bA、N95bY、V96A、V97A。20.权利要求18的抗DR5抗体或其片段，其包含选自下组的突变氨基酸序列SEQIDNO:13中的(i)N89L，R91A,N95aT,H95bY;及(ii)N95aT,H95bY。21.权利要求1的抗DR5抗体或其片段，其包含选自下组的轻链突变氨基酸序列SEQIDNO:13中的(i)Q24S,G50K，K51D，H95bY;(ii)Q24S,K51A,D92S,S93Y;及(iii)Q24S,K51A,R91A。22.权利要求21的抗DR5抗体或其片段，还包含选自下组的重链突变氨基酸序列SEQIDNO:11中的(i)M34L，N53Q,L102Y;(ii)M34L,N53Y,L102Y;(iii)G33A,N53Q,L102Y;(iv)G33A，N53Y,L102Y;(v)M34L,N53Q,L102Y;(vi)M34L,N53Y,L103Y;(vii)G33A,N53Q,L102Y;(viii)G33A，N53Y，L102Y;及(ix)T28A，N53Q，L102Y。23.权利要求22的抗DR5抗体或其片段，还包含表5所列的框架突变。24.权利要求1的抗DR5抗体或其片段，其包含如下突变序列SEQIDNO:11中的G33A、N53Q、L102Y及序列SEQIDNO:13中的Q24S、K51A、頻A。25.权利要求24的抗DR5抗体或其片段，还包含至少一处框架突变。26.权利要求25的抗DR5抗体或其片段，其中所述框架突变是SEQIDNO:11中的残基6、11、12、13和105中的至少一个。27.权利要求24的抗DR5抗体或其片段，其选自下组Apomabl.l、2.1、3.1、4.1、5.1、6.1、7.1、8.1、9.1、1.2、2.2、3.2、4.2、5.2、6.2、7.2、8.2、9.2、1.3、2.3、3.3、4.3、5.3、6.3、7.3、8.3和9.3。28.权利要求27的抗DR5抗体或其片段，其是Apomab7.3或8.3。29.权利要求28的抗DR5抗体或其片段，其是Apomab7.3。30.权利要求1的抗DR5抗体或其片段，其中所述抗体与Apomab7.3结合基本上相同的表位。31.权利要求1或权利要求29的抗DR5抗体或抗体片段，其中所述抗体片段选自下组Fab、Fab'、F(ab')2和Fv片d双抗体、单《连抗体分子和由抗体片段形成的多特异性抗体。32.权利要求31的抗DR5抗体或抗体片段，其中所述抗体是单链抗体。33.权利要求31的抗DR5抗体或抗体片段，其中所述片段是Fv片段。34.权利要求1的抗DR5抗体或其片段，其中所述生物学活性是抗癌活性。35.权利要求1的抗DR5抗体或抗体片段，其中所述生物学活性是对癌细胞中凋亡的活化或刺激。36.权利要求34的抗DR5抗体或抗体片段，其中所述癌选自下组癌、淋巴瘤、母细月包瘤、肉瘤和白血病。37.权利要求36的抗DR5抗体或抗体片段，其中所述癌选自下组鳞状细胞癌、小细胞肺癌、非小细胞肺癌(NSCLC)、非何杰金氏淋巴瘤、母细胞瘤、胃肠癌、肾癌(renalcancer)、卵巢癌、肝脏癌(livercancer)、胃癌、膀胱癌、肝瘤(hepatoma)、乳腺癌、结肠癌、结肠直肠癌、胰腺癌、子宫内膜癌、唾液腺癌、肾癌(kidneycancer)、前列腺癌、外阴癌、甲状腺癌、肝癌(hepaticcarcinoma)、及头和颈癌。38.权利要求37的抗DR5抗体或抗体片段，其中所述癌症是NSCLC、非何杰金氏淋巴瘤、结肠直肠癌或胰腺癌。39.权利要求36的抗DR5抗体或抗体片段，其中所述癌症是&泉癌。40.权利要求39的抗DR5抗体或抗体片段，其中所述腺癌是结肠直肠癌、胰腺癌或转移性腺癌。41.权利要求1的DR5抗体或抗体片段，其中所述效力是在体外肿瘤杀伤测定法中测定的。42.权利要求1的抗DR5抗体或抗体片段，其是嵌合的、人源化的或人的抗体。43.权利要求1的抗DR5抗体或抗体片段，其介导抗体依赖性细胞的细胞毒性(ADCC)。44.权利要求1的抗DR5抗体或其片段，其包括Apomab7.3或Apomab8.3。45.权利要求1的抗DR5抗体或其片段，其是二聚体的形式。46.权利要求2的抗DR5抗体或其片段，其与抗人IgGFc区交联。47.权利要求1的抗DR5抗体或抗体片段，其与表位标签序列融合。48.包含权利要求44的抗体与异源氨基g臾序列相融合的嵌合分子。49.权利要求48的嵌合分子，其中所述异源氨基酸序列包括免疫球蛋白序列。50.权利要求49的嵌合分子，其中所述免疫球蛋白序列是抗人IgGFc区。51.分离的核酸，其编码权利要求1的抗DR5抗体的重链或轻链。52.分离的核酸，其编码Apomab7.3或Apomab8.3的重4连或轻《连。53.载体，其包含权利要求51或权利要求52的核酸。54.宿主细胞，其包含权利要求51或权利要求52的核酸。55.生产抗DR5抗体的方法，包括在DNA表达的条件下培养4又利要求54的宿主细胞。56.组合物，其包含权利要求1、28或29的抗DR5抗体或其片段，及载体。57.权利要求56的组合物，其中所述载体是药学可接受的载体。58.权利要求57的组合物，还包含另外的抗癌剂。59.权利要求58的组合物，其中所述另外的抗癌剂是抗体。60.权利要求59的组合物，其中所述抗体选自下组另外的抗DR5抗体、Rituxan(rituximab)和抗VEGF抗体。61.权利要求58的组合物，其中所述另外的抗癌剂是化疗剂。62.权利要求61的组合物，其中所述化疗剂选自下组CPT-11(伊立替康)、吉西他滨、卡铂、泰素和紫杉醇。63.权利要求58的组合物，其中所述另外的抗癌剂是包含图1(SEQIDNO:l)的氨基酸114-281的Apo2L配体。64.诱导凋亡的方法，包括使哺乳动物癌细胞暴露于权利要求1、28或29的抗DR5抗体或其片段。65.权利要求64的方法，其中所述抗体是嵌合的、人源化的或人的抗体。66.权利要求64的方法，其中使所述哺乳动物癌细胞暴露于活化DR5的药剂。67.治疗癌症的方法，包括对哺乳动物受试者施用有效量的权利要求1、28或29的抗DR5抗体或其片段。68.权利要求67的方法，其中所述哺乳动物受试者是人类受试者。69.权利要求68的方法，其中所述癌症选自下组鳞状细胞癌、小细胞肺癌、非小细胞肺癌(NSCLC)、非何杰金氏淋巴瘤、母细胞瘤、胃肠癌、肾癌(renalcancer)、卵巢癌、肝脏癌(livercancer)、胃癌、膀胱癌、肝瘤(hepatoma),乳腺癌、结肠癌、结肠直肠癌、胰腺癌、子宫内膜癌、唾液腺癌、肾癌(kidneycancer)、前列腺癌、外阴癌、曱状腺癌、肝癌(hepaticcarcinoma)、及头和颈癌。70.权利要求69的方法，其中所述癌症是NSCLC、结肠直肠癌、非何杰金氏淋巴瘤或胰腺癌。71.权利要求68的方法，其中所述癌症是腺癌。72.权利要求71的方法，其中所述腺癌是结肠直肠癌、胰腺癌或转移性腺癌。73.权利要求67-72任一项的方法，还包括施用另外的抗癌剂。74.制品，包括容器和装在所述容器中的组合物，其中所述组合物包含权利要求1、28或29的抗DR5抗体或其片孚爻。75.权利要求74的制品，还包括在体外或在体内使用抗DR5抗体的说明书。76.权利要求75的制品，其中所述说明书说明对癌症的治疗。全文摘要本发明关注具有改良特性的抗DR5抗体、包含此类抗体的组合物、用于制备此类抗体的方法和手段、及其治疗性用途，特别是在癌症的治疗中。文档编号C12N15/00GK101247825SQ200680009970公开日2008年8月20日申请日期2006年1月31日优先权日2005年2月2日发明者卡姆利亚·W·亚当斯申请人:健泰科生物技术公司