RNAi介导的高眼压靶标的抑制的制作方法

专利名称：：RNAi介导的高眼压靶标的抑制的制作方法RNAi介导的高a艮压靶标的抑制发明领域本发明涉及干扰RNA组合物的领域，该组合物用于抑制青光眼特别是原发性开角型青光眼眼压靶标的表达。发明背景青光眼是具有一定临床特征的视神经病的异质群体，青光眼视力的丧失是由于神经视网膜中的视网膜神经节细胞选择性死亡造成的，临床诊断表现为视野的特征性变化、神经纤维层缺损和视盘(ONH)的进行性凹陷。青光眼形成的主要危险因素之一是存在高眼压(升高的眼内压，IOP)。适当的眼内压对于保持眼睛形状和提供压力梯度使房水向无血管角膜和晶状体流动是必要的。普通眼压性青光眼(NTG)的发病机理可能也涉及IOP水平，受益于降IOP药物的患者可以证明这一点。对NTG患者进行眼压测量时，一旦调整中央角膜厚炎可能就会发现这些患者中许多人有高眼压。与青光眼有关的升高的IOP是由于小梁(TM)中升高的房水排出受阻所致，小梁是位于眼球前房的虹膜-角膜角中微小的专门组织。青光眼对沉积和积聚。另外，青光眼的ONH中也发生变化。在青光眼中，ONH神经胶质细胞中存在形态学上的和移动性的变化。应答升高的IOP和/或短暂性脑缺血损伤，ONH细胞外基质组分发生变化以及胶质细胞和视网膜神经节细胞轴突的形态发生改变。原发性青光眼起因于具有解剖学或生理学基础的眼内液流动紊乱。继发性青光眼是由于眼损伤或眼外伤或原有疾病所致。原发性开角型青光眼(POAG)，也称为慢性或单纯性青光眼，占所有原发性青光眼的卯％。POAG的特征在于小梁的变性，导致对眼中引流产生异常高的阻力。这种阻力的结果是导致IOP升高，IOP升高是为了驱动由眼睛正常产生的流体以克服增加的阻力。目前，抗青光眼的治疗包括通过使用房水形成的抑制剂或增加眼色素层巩膜外流量的物质、激光小梁成形术或小梁切除术(其为改善引流的过滤手术)，降低IOP。药物学上的抗青光眼方法表现出多种不良副作用。例如，缩瞳药如匹鲁卡品可引起视力模糊和其他负面的视力副作用。全身性施用的碳酸酐酶抑制剂(CAI)也可引起恶心、消化不良、疲劳和代谢性酸中毒。另外，某些p受体阻滞剂已日益变得与严重的肺部副作用相关，这归因于它们对肺组织中P-2受体的影响。仿交感神经作用的胺物引起心动过速、心律失常和高血压。这种负面的副作用可能导致病人的依从性减少或治疗的终止。此外，目前的IOP降低疗法的疗效相对较短，需要每天重复给药，且在某些情况下，药效随时间而减弱。鉴于高眼压在青光眼中的重要性以及以前治疗方法的不足，需要有一种治疗高眼压的改良的方法来解决其进展的根本原因。发明概述本发明是针对干扰RNA，该干扰RNA沉默高眼压靶标mRNA表达，从而降低开角型青光眼及高眼压患者的眼内压。高眼压靶标包括碳酸酐酶II、IV和XII;pl和p2肾上腺素能受体；乙酰胆碱酯酶；Na+/K+-ATP酶；或Na-K-2Cl协同转运蛋白。本发明的干扰RNA有助于治疗开角型青光眼或高眼压患者。本发明的一个实施方案提供了在受试者中减弱高眼压靶标mRNA表达的方法，该高眼压靶标mRNA是如碳酸酐酶II、IV或XII;pi或卩2肾上腺素能受体；乙酰胆碱酯酶；3+/1^-入1酶或者~3-1<:-2(:1协同转运蛋白mRNA。该方法包括给受试者施用组合物，该组合物包括有效量的具有19-49个核苷酸长度的干扰RNA和药物可接受载体对受试者的眼部给药，以减弱人体内高眼压靶标的表达。在本发明的一个实施方案中，干扰RNA包括有义核苷酸链、反义核酸链和至少19个核苷酸的至少近乎完全连续互补的区域。另外，反义链在生理条件下与mRNA的部分杂充所述mRNA对应于SEQIDNO:l、SEQIDNO:2、SEQIDNO:3、SEQIDNO:4、SEQIDNO:5、SEQIDNO:6、SEQIDNO:7、SEQIDNO:101、SEQIDNO:123、SEQIDNO:124、SEQIDNO:125、SEQID戮126、SEQIDNO:127、SEQIDNO:128、SEQIDNO:129、SEQIDNO:130、SEQIDNO:131、SEQIDNO:132、SEQIDNO:133或SEQIDNO:134,这些是有义cDNA序列，分别编码碳酸酐酶II和IV、pi和卩2肾上腺素能受体、乙酰胆碱酯酶(ACHE)的变体E4-E5、Na+/K+-ATP酶a2多肽、Na-K-2C1协同转运蛋白NKCC2(SLC12A1)、碳酸酐酶XII变体1、乙酰胆碱酯酶变体E4-E6、Na+/K+-ATP酶al多肽变体1和2、Na+/K+-ATP酶a3多肽、Na+/K+-ATP酶a4多肽变体1和2、Na+/K+-ATP酶pl多肽变体1和2、Na+/K+-ATP酶|52多肽、Na+/K+-ATP酶卩3多肽、Na-K-2C1协同转运蛋白NKCCl(SLC12A2)和碳酸酐酶XII变体2。反义链有至少19个核苷酸的与mRNA的杂交部分近乎完全连续互补的区域，所述mRNA分别对应于SEQIDNO:l、SEQIDNO:2、SEQIDNO:3、SEQIDNO:4、SEQIDNO:5、SEQIDNO:6、SEQID脆7、SEQIDNO:lOl、SEQIDNO:123、SEQIDNO:124、SEQIDNO:125、SEQIDNO:126、SEQIDNO:127、SEQID隐128、SEQIDNO:129、SEQIDNO:130、SEQIDNO:131、SEQIDNO:132、SEQIDNO:133或SEQIDNO:134这类组合物的施用减弱了受试者的高眼压靶标mRNA的表达。在一个实施方案中，高眼压靶标mRNA编码碳酸酐酶II、IV或XII，而反义链在生理条件下与对应于SEQIDNO:l、SEQIDNO:2、SEQIDNO:101或SEQIDNO:134的mRNA的部分杂交，并且包含与mRNA的杂交部分有至少19个核苷酸近乎完全连续互补的区域，所述mRNA分别对应于SEQIDNO:l、SEQIDNO:2SEQIDNO:101或SEQIDNO:134在另一个实施方案中，高眼压靶标mRNA编码pi或P2肾上腺素能受体，而反义链在生理条件下与对应于SEQIDNO:3或SEQIDNO:4的mRNA的部分杂充并且包含与分别对应于SEQIDNO:3或SEQIDNO:4的mRNA的杂交部分有至少19个核苷酸的近乎完全连续互补的区域。在另外的实施方案中，高目艮压靶标mRNA编码乙酰胆碱酯酶，而反义链在生理条件下与对应于SEQIDNO:5或SEQIDNO:123的mRNA的部分杂交，并且包含与分别对应于SEQIDNO:5或SEQIDNO:123的mRNA的杂交部分有至少19个核苷酸的近乎完全连续互补的区域。在另一个实施方案中，高眼压靼标mRNA编码Na+/K+-ATP酶的亚基而反义链在生理条件下与mRNA的部分杂交(该mRNA对应于SEQIDNO:氐SEQIDNO:124SEQIDNO:SEQIDNO:SEQIDNO:127、SEQIDNO.128>SEQIDNO:129^SEQIDNO:13化SEQIDNO:131或SEQIDNO:132>并且包含与mRNA的杂交部分有至少19个核苷酸近乎完全连续互补的区域(该mRNA分别对应于SEQIDNO:6SEQIDNO:124、SEQIDNO:125、SEQIDNO:126、SEQIDNO:127、SEQIDNO:128、SEQIDNO:129、SEQIDNO:130、SEQIDNO:131、或SEQIDNO:132)。在另一个实施方案中，高眼压靶标mRNA编码Na-K-2C1协同转运蛋白，而反义链在生理条件下与对应于SEQIDNO:7或SEQIDNO:133的mRNA的部分杂义并且包含与分别对应于SEQIDNO:7或SEQIDNO:133的mRNA的杂交部分有至少19个核苦酸的近乎完全连续互补的区域在本发明的一个实施方案中，干扰RNA被设计成以mRNA为靼标，该mRNA对应于SEQIDNO:l,包含核苷酸232、527、721、728、809、810、855、856、921、1139、506、547、548、740、911、1009、1140、1149、1150、1151、1188、1194、1195、1223、1239、1456、1457、1458、100、158、166、247、286、318、322、328、371、412、482、504、505、541、734、772、777、814、972、998、1232、317或401。在本发明的另一个实施方案中，干扰RNA被设计成以mRNA为靶标，该mRNA对应于SEQIDNO:2，包含核苷酸213、252、258、266、399、457、463、490、595、1064、109、112、125、126、150、261、265、280、398、453、459、462、467、492、534、785、801、825、827、876、1003或1012。在本发明的另一个实施方案中，干扰RNA被设计成以mRNA为靶标，该mRNA对应于SEQIDNO:101，包含核苦酸191、239、274、275、341、389、412、413、423、687、689、695、710、791、792、794、983、993、994、995、691、1039、1568、2326、2332、2425、2433、2844、2845、2880、2884、2891、2954、2955、2956、2957、2964、2965、3006、3007、3012或3026。在另一个实施方案中，干扰RNA被设计成以mRNA为靶标该mRNA对应于SEQIDNO:134，包含核苷酸687、1535、2293、2299、2392、2400、2811、2812、2847、2851、2858、2921、2922、2923、2924、2931、2932、2973、2974、2979或2993。本发明的另一个实施方案提供被设计成以mRNA为靶标的干扰RNA，该mRNA对应于SEQIDNO:3，包含核苷酸468、523、799、1563、1565、1569、1593、1613、1614、1626、310、322、726、769、772、801、802、1501、1576、1577、1579、1580、1581、1586、1590、1592、1594、1615、1616、1632、1633或1654。本发明的另一个实施方案提供被设计成以mRNA为靶标的干扰RNA^该mRNA对应于SEQIDNO:4包含核苷酸329、375^1031、1046、1149、1163、1371、1401、1426、1880、283、607、608、609、619、623、722、857、1037、1091、1115、1124、1136、1137、1151、1164、1393、1394、1395、1406、1407、1427、1428、1429、1442、1725、1726、1756、1757、1758、1767、1790、1791、1792、1793、1803、1861、1869、1971、1972或1979。在本发明另一个实施方案中，干扰RNA被设计成以mRNA为靶标，该mRNA对应于SEQIDNO:123，包含核苷酸1875、1890、1891、2011、2012、2133或2134。本发明另一个实施方案提供被设计成以mRNA为靶标的干扰RNA，该mRNA对应于SEQIDNO:5，包含核苦酸366、370、384、385、525、588、768、1045、1046、1061、1090、1232、1314、1316、1460、1461、1462、1528、1607、1705、1713、382、393、397、622、1131、1459、1530、2251、2885、2886、386、1231、1315、2047、2049、2053、2055、2057、2125、2126、2127、2250、2253、2258、2260、2318、2395、2397、2404、2405、2643、2645或2887。在另一个实施方案中，干扰RNA被设计成以mRNA为靶标该mRNA对应于SEQIDNO:124包含核苷酸220K2275^2307、252&25382592、2628、2979、2985、3093、3474、3504、3505、3506、3518、343、442、700、707、811、907、1059、1363、1594、1662、1758、1760、1896、2037或2147。在另一个实施方案中，干扰RNA被设计成以mRNA为靶标该mRNA对应于SEQIDNO:125，包含核苷酸436、441、443、552、617、701、702、832、2204、2291或2495。本发明另一个实施方案提供被设计成以mRNA为靶标的干扰RNA,该mRNA对应于SEQIDNO:6包含核苷酸471、199(X308(X3797、4037、4093、4225、4323、5213、5285、214、467、470、472、473、632、825、946、1693、1767、1768、2157、2263、2589、25卯、2765、2988、3094、3144、3145、3344、3345、3418、3666、3828、3850、4040、4041、4061、4882、4894、4900、5040、5114、5115、5128、5129、5253、5296、5375、5384或5385。在本发明另一个实施方案中，干扰RNA被设计成以mRNA为耙标，该mRNA对应于SEQIDNO:126，包含核苷酸24(X27136118361851、2103、2137、2138、2139、2157、2158、2160、2425、2580、2601、2646、2650、2794、2803、3116、3124、3126、3129或3377。在本发明另一个实施方案，干扰RNA设计成以mRNA为靼标，该mRNA对应于SEQIDNO:127，包含核苷酸113、612、702、833、1101、1732、1733、1836、2070、2071、2143、2328、2475、2861、2862、2952、3203、3281、3377、3379、3470、3471、3554、3614、3615、3616、3617、3625、3626、3642、3646、3647、3653、3655、3797、3801、3803、3809或3810。在另一个实施方案中，干扰RNA被设计成以mRNA为靶标该mRNA对应于SEQIDNO:128，包含核苦酸126、251、252、253、331、427、429、520、521、530、601、602、603、604、664、665、666、667、675、676、692、696、697、702、703、705、707、847、851、853、859或860。在另一个实施方案中，干扰RNA被设计成以mRNA为靶标该mRNA对应于SEQIDNO:129，包含核苷酸109&1099、1130、1131、1167、1299、1441、1450、1451、1452、1564、1746、1750、1751、1752、1795、203、204、214、222、224、225、226、380、525、591、612、613、615、635、636、663、664、669、699、765、790、839、840、841、900、卯9、933或947。在另一个实施方案中，干扰RNA被设计成以mRNA为靶标该mRNA对应于SEQIDNO:130,包含核苷酸1063、1102、1107、1108、1109、1111或1151。在另一个实施方案中，干扰RNA被设计成以mRNA为靶标该mRNA对应于SEQIDNO:131，包含核苷酸653、654、771、773、841、849、853、917、918、926、927、931、981、983、984、996、998、1022、1023、1160、1214、1355、1356、1381、1394、1425、1474、1550、1620、1707、1740、1753、1825、1956、1965、2598、2599、2608、2828、2829、2888、3012或3251。在本发明另一个实施方案中，干扰RNA被设计成以mRNA为耙标，该mRNA对应于SEQIDNO:132，包含核苷酸292、434、438、457、459、488、490、498、499、592、639、723、774、775、788、857、858、910、911、930、931、932、1009、1010、1023、1024、1111、1146、1147、1220、1246、1321、1325、1326、1327、1331、1437、1548、1571、1785、1786或1787。本发明另一个实施方案提供被设计成以mRNA为靶标的千扰RNA，该mRNA对应于SEQIDNO:7，包含核苷酸675^9741373、1780>2102、2151、2315、2542、2609、3197、67、71、73、353、405、864、911、912、913、1409、1748、1811、1935、1937、1993、2012、2346、2388、2437、2586、3007、3008、3022、3130、3210、3237或3271。本发明另一个实施方案提供被设计成以mRNA为靶标的干扰RNA，该mRNA对应于SEQIDNO:133，包含核苷酸74&749、751lll认1169、1499、1509、1820、2081、2118、2147、2615、2644、2659、2663、2671、2672、2793、2812、2914、2948、3044、3334、3391、3480、3520、3549、3639、3840、3941、3944、4001、4995、4997、5141、5143、5249、5375、5834、5852、5981或6678。除第一种干扰RNA外，本发明还提供向受试者施用第二种干扰RNA。该方法包括向受试者施用长度为19-49个核苷酸的第二种干扰RNA，所述第二种千扰RNA还包括有义核苷酸链、反义核酸链和至少19个核苷酸的近乎完全连续互补的区域；其中第二种干扰RNA的反义链在生理条件下与mRNA的第二部分杂交，该mRNA对应于SEQIDNO:l、SEQIDNO:2、SEQIDNO:3、SEQIDNO:4、SEQIDNO:5、SEQIDNO:6>SEQIDNO:7、SEQIDNO:101、SEQIDNO:123^SEQIDNO:12來SEQIDNO:125、SEQIDNO:126、SEQIDNO:127、SEQIDNO:128、SEQIDNO:129、SEQIDNO:130、SEQIDNO:131、SEQID脆132、SEQIDNO:133或SEQIDNO:134，而反义链与mRNA的第二个杂交部分有至少19个核苷酸的近乎完全连续互补的区域，该mRNA分别对应于SEQIDNO:l、SEQIDNO:2、SEQIDNO:3、SEQIDNO:4、SEQIDNO:5、SEQIDNO:6、SEQIDNO:7、SEQIDNO:101、SEQIDNO:123、SEQIDNO:124、SEQIDNO:125、SEQIDNO:126、SEQIDNO:127、SEQIDNO:128、SEQIDNO:129、SEQIDNO:130、SEQIDNO:131、SEQIDNO:132、SEQIDNO:133或SEQIDNO:134。第二干扰RNA可能和第一干扰RNA以相同的mRNA为靶标，或以不同的mRNA为靼标。另外，也可以以相似的方式施用第三种、第四种或第五种等千扰RNA。本发明的另一个实施方案是应受试者需要治疗高眼压的方法。该方法包括给受试者眼部施用组合物，该组合物包含有效量的长度为19-49个核苷酸的干扰RNA和药物可接受载体。该干扰RNA含有有义核苷酸链、反义核苷酸链和至少19个核苷酸的近乎完全连续互补的区域该反义链在生理条件下与mRNA的部分杂交，该mRNA对应于SEQIDNO:l、SEQIDNO:2、SEQIDNO:3、SEQIDNO:4、SEQIDNO:5、SEQIDNO:6、SEQIDNO:7、SEQIDNO:101、SEQIDNO:123、SEQIDNO:124、SEQIDNO:125、SEQIDNO:126、SEQIDNO:127、SEQIDNO:128、SEQIDNO:129、SEQIDNO:130、SEQIDNO:131、SEQIDNO:132、SEQTDNO:133或SEQIDNO:134，并且包含与mRNA的杂交部分有至少19个核香酸的近乎完全连续互补的区域，该mRNA分别对应于SEQIDNO:l、SEQIDNO:2、SEQIDNO:3、SEQIDNO:4、SEQIDNO:5、SEQIDNO:6、SEQIDNO:7、SEQIDNO:lOl、SEQIDNO:123、SEQIDNO:124、SEQIDNO:125、SEQIDNO:126、SEQID隐127、SEQIDNO:128、SEQIDNO:129、SEQIDNO:130、SEQIDNO:131、SEQIDNO:132、SEQIDNO:133或SEQIDNO:134。由此治疗高眼压。本发明另一个实施方案是在受试者中减弱高眼压靶标mRNA表达的方法，包括给受试者施用组合物，该组合物包含有效量的长度为19-49个核苷酸的单链千扰RNA和药物可接受载体。为减弱高眼压耙标的表达，该单链干扰RNA在生理条件下与对应于序列标识符和反义链的上述核苷酸位点的mRNA的部分杂交。本发明另一个实施方案是在受试者中减弱高眼压靶标mRNA表达的方法，包括给受试者施用组合物，该组合物包含有效量的长度为19-49个核苷酸的单链千扰RNA和药物可接受载体，其中，干扰RNA包含至少13个连续核苷酸的区域，该连续核苷酸与以下任一序列的3'端次末端的13个核普酸具有至少90%的序列互补性或至少90%的序列同一性，所述序列为SEQIDNO:&SEQIDNO:14國SEQIDNO:IO(XSEQIDNO:102SEQIDNO:122、SEQIDNO:135-SEQIDNO:717、SEQIDNO:720和SEQIDNO:721，如下。当高眼压靼标mRNA为编码碳酸酐酶mRNA时，干扰RNA包含至少13个连续核苷酸的区域，该连续核苷酸与以下任一序列的3'端次末端的13个核苷酸具有至少90%的序列互补性或至少卯％的序列同一性，所述序列为SEQIDNO:8、SEQIDNO:14-SEQIDNO:32、SEQIDNO:83-SEQIDNO:IOO、SEQIDNO:102-SEQIDNO:122、SEQIDNO:135-SEQIDNO:219、SEQIDNO:720和SEQIDNO:721。当高眼压粑标mRNA为编码p-肾上腺素能受体mRNA咏干扰RNA包含至少13个连续核苷酸的区域，该连续核苷酸与以下任一序列的3，端次末端的13个核苷酸具有至少90%的序列互补性或至少卯％的序列同一性，所述序列为SEQIDNO:33-SEQIDNO:52和SEQIDNO:220-SEQIDNO:282。当高眼压耙标mRNA为编码ACHEmRNA时，干扰RNA包含至少13个连续核苷酸的区域，该连续核苷酸与以下任一序列的3'端次末端的13个核苷酸具有至少90%的序列互补性或至少卯％的序列同一性，所述序列为SEQIDNO:53-SEQIDNO:62和SEQIDNO:283-333。当高眼压耙标mRNA为编码ATP1A1mRNA时，干扰RNA包含至少13个连续核普酸的区域，该连续核苷酸与以下任一序列的3'端次末端的13个核苷酸具有至少90。/。的序列互补性或至少90%的序列同一性，所述序列为SEQIDNO:334-SEQIDNO:374。当高眼压耙标mRNA为编码ATP1A2mRNA时，干扰RNA包含至少13个连续核苷酸的区域，该连续核苷酸与以下任一序列的3'端次末端的13个核苷酸具有至少90%的序列互补性或至少卯％的序列同一性，所述序列为SEQIDNO:63画SEQIDNO:72和SEQIDNO:375國SEQIDNO:416。当高眼压耙标mRNA为编码ATP1A3mRNA时，干扰RNA包含至少13个连续核苷酸的区域该连续核苦酸与以下任一序列的3'端次末端的13个核苷酸具有至少卯％的序列互补性或至少90%的序列同一性，所述序列为SEQIDNO:417-SEQIDNO:440。当高眼压靼标mRNA为编码ATP1A4mRNA时，干扰RNA包含至少13个连续核苷酸的区域，该连续核苷酸与以下任一序列的3'端次末端的13个核苷酸具有至少卯％的序列互补性或至少卯％的序列同一性，所述序列为SEQIDNO:441曙SEQIDNO:511。当高眼压耙标mRNA为编码ATP1B1mRNA时，干扰RNA包含至少13个连续核苦酸的区域，该连续核苷酸与以下任一序列的3'端次末端的13个核苷酸具有至少卯％的序列互补性或至少卯％的序列同一性，所述序列为SEQIDNO:512-SEQIDNO:563。当高眼压靼标mRNA为编码ATP1B2mRNA时，干扰RNA包含至少13个连续核苦酸的区域，该连续核苷酸与以下任一序列的3'端次末端的13个核苷酸具有至少卯％的序列互补性或至少90%的序列同一性，所述序列为SEQIDNO:564墜SEQIDNO:606。当高眼压乾标mRNA为编码ATP1B3mRNA时，干扰RNA包含至少13个连续核苷酸的区域，该连续核苷酸与以下任一序列的3'端次末端的13个核苷酸具有至少卯°/0的序列互补性或至少卯％的序列同一性，所述序列为SEQIDNO:607-SEQIDNO:648。当高眼压耙标mRNA为编码SLC12A1mRNA时，干扰RNA包含至少13个连续核苷酸的区域，该连续核苷酸与以下任一序列的3'端次末端的13个核脊酸具有至少90%的序列互补性或至少卯％的序列同一性，所述序列为SEQIDNO:73-SEQIDNO:82和SEQEDNO:649画SEQIDNO:675。当高眼压耙标mRNA为编码SLC12A2mRNA时，干扰RNA包含至少13个连续核苷酸的区域，该连续核苷酸与以下任一序列的3'端次末端的13个核苷酸具有至少90%的序列互补性或至少90%的序列同一性，所述序列为SEQIDNO:676-SEQIDNO:717。在本发明的另一个实施方案中，连续核苷酸区域含有至少14个连续核苷酸，该连续核苷酸与序列标识符的序列的3'端次末端的14个核苷酸具有至少85%的序列互补性或至少85%的序列同一4生而在本发明的另一个实施方案中，连续核苷酸区域含有至少15、16、17或18个连续核苷酸，分别与序列标识符的序列的3'端次末端的15、16、17或18个核苷酸具有至少80%的序列互补性或至少80%的序列同一性。本发明的一个实施方案是包含干扰RNA的组合物和药物可接受载体，该干扰RNA长度为19-49个核苷酸并且具有SEQIDNO:8、SEQIDNO:14-SEQIDNO:IOO、SEQIDNO:102-SEQIDNO:122、SEQIDNO:135-SEQIDNO:717、SEQEDNO:720以及SEQIDNO:721中任何一个核苷酸序列或其互补序列。在一个实施方案中，干扰RNA是分离的。术语"分离的"意指干扰RNA是从其总的天然环境游离的。本发明的另一个实施方案是应受试者需要治疗高眼压的方法。该方法包括给受试者眼部施用组合物，该组合物包含有效量的长度为19-49个核苷酸的干扰RNA和药物可接受栽体，该干扰RNA包含至少13个连续核苷酸的区域，该连续核苷酸与以下任一序列的3'端次末端的13个核苷酸具有至少卯％的序列互补性或至少90%的序列同一性，所述序列为SEQIDNO:8、SEQIDNO:14-SEQIDNO:IOO、SEQIDNO:102-SEQIDNO:122、SEQIDNO:135-SEQIDNO:717、SEQIDNO:720和SEQIDNO:721，由此治疗高眼压。本发明的另一个实施方案是减弱受试者高眼压靶标mRNA第一种变体的表达而不减弱高眼压靶标mRNA第二种变体的表达的方法。该方法包括给受试者施用组合物，该组合物包含有效量的长度为19-49个核苷酸的干扰RNA和药物可接受载体，该干扰RNA包含至少13个连续核苷酸的区域，所述连续核苦酸与第一种变体的3'端次末端的13个核苷酸具有至少90%的序列互补性或至少卯％的序列同一性，其中第一种变体mRNA的表达被减弱，而没有减弱第二个变体mRNA的表达，且其中第一种变体耙标mRNA分别是SEQIDNO:lOl、SEQIDNO:5、SEQIDNO:124、SEQIDNO:127或SEQIDNO:129,和第二种变体耙标mRNA分别是SEQIDNO:134、SEQIDNO:123、SEQIDNO:125、SEQIDNO:128或SEQIDNO:130。在以上所述方法的另一个实施方案中，第一种变体靶标mRNA分别是SEQIDNO:134、SEQIDNO:123、SEQIDNO:125、SEQIDNO:128或SEQIDNO:130，并且第二种变体耙标mRNA分别是SEQIDNO:101、SEQID隐5、SEQIDNO:124、SEQIDNO:127或SEQIDNO:129。这里描述的任一项实施方案在制备用于减弱高眼压mRNA表达的药物中的用途也是本发明的实施方案。附图简述图1提供western印迹，用抗CA2和肌动蛋白的抗体检测以CA2siRNA#l、#3、#4和#5、无靶向对照siRNA和緩冲液对照(-siRNA)转染的HeLa细胞。SiRNA浓度为100nM或1nM。箭头指示30-kDaCA2蛋白和42-kDa肌动蛋白带的位置。发明详述RNA千扰(RNAi)是使用双链RNA(dsRNA)来沉默基因表达的过程。尽管不期望被理论所束缚，RNAi首先通过类RNaseIII酶-dicer将长dsRNA切割成小的干扰RNA(siRNA)。SiRNA是长度通常为约19-28个核苷酸或20-25个核苷酸或21-22个核苷酸并且通常含有2-核苷酸的3'突出端以及5'磷酸和3'羟基末端的dsRNA。siRNA的一条链被掺入核糖核蛋白复合体即RNA诱导的沉默复合体(RISC)中。RISC利用这一siRNA链来识别与掺入的siRNA链至少部分互补的mRNA分子，然后切割这些耙标mRNA或抑制它们的翻译。因此，掺入RISC的siRNA链被称为引导链或反义链。另一条siRNA链(称为传递链或有义链)从siRNA上被除去，并且至少与耙标RNA有部分同源性。本领域技术人员公认，原则上siRNA的任一条链都能被掺入RISC中并作为引导链起作用。然而，siRNA设计(例如，在反义链的5'端降低的siRNA双螺旋稳定性)能够有利于反义链掺入RISC介导的具有与引导链至少部分互补的序列的mRNA切割导致该mRNA和由该mRNA编码的相关蛋白质的稳态水平降低。备选地，RISC也能通过抑制翻译来减少相关蛋白质的表达，而不切割靶标mRNA。其他RNA分子和类RNA分子也能够与RISC相互作用并沉默基因表达。能够链siRNA、微小RNA(miRNA)和dicer-底物27聚体双螺旋。除非另有说明，术语，，siRNA"指双链干扰RNA。能与RISC相互作用的类RNA分子的实例包括含有一个或多个经化学修饰的核苷酸、一个或多个脱氧核糖核苷酸、和/或一个或多个非磷酸二酯键连接的RNA分子。对于本讨论的目的而言，将所有能与RISC相互作用并参与到RISC介导的基因表达的改变中的RNA或类RNA分子称为"干扰RNA"。因此，SiRNA、shRNA、miRNA和dicer-底物27聚体双螺旋都是"千扰RNA"的亚群。本发明实施方案中的干扰RNA似乎以催化方式切割靶标mRNA，即干扰RNA能够在亚化学计量上对靶标inRNA起抑制作用。与反义疗法相比，在这样的切割条件下提供疗效所需要的千扰RNA明显减少。本发明涉及到应用干扰RNA抑制高眼压耙标mRNA的表达，从而减少开角型青光眼或高眼压患者的眼内压。高眼压靶标包4舌碳酸酐酶I1、IV和XII;pi和p2肾上腺素能受体；乙酰胆碱酯酶；Na+/K+-ATP酶亚基和Na-K-2C1协同转运蛋白。根据本发明，外源提供的或内源表达的干扰RNA使眼部组织中高眼压乾标mRNA沉默。碳酸酐酶催化二氧化碳的可逆7JC合并且似乎对房水分泌起调节作用。碳酸酐酶抑制剂通过减少产生的流体量来降低眼内压力。碳酸酐酶抑制剂可作为滴眼液(多佐胺(dorzolamide)、布林佐胺(brinzolamide))或片剂/胶嚢(乙酰唑胺(acetazolamide)、醋甲唑胺(methazolamide))使用。滴眼液的副作用比片剂或胶嚢少，可以更好地被很多病人所接受。AZOPT⑧(布林佐胺)1。/。的眼悬浮液是典型的碳酸酐酶抑制剂(AlconLaboratories,Inc.,FortWorth,TX)。眼部P受体阻滞剂通过减少眼内产生的流体量来降低眼内压力。这些药物被分为两类非选择性p受体阻滞剂(漆吗心安(timolol)、左布诺洛尔(levobunolol)、美替洛尔(metipranolol)、卡替洛尔(carteolol))和p-l选择性受体阻滞剂(倍他洛尔(betaxolol))。通常剂量是每次每眼一滴，一天一至两次，取决于所使用的药物。该产品的实例是BETOPTICS⑧(盐酸倍他洛尔(betaxololHCl))0.25。/。的眼悬浮液(AlconLaboratories,Inc.,FortWorth,TX)。乙酰胆碱酯酶的抑制剂通过阻断造成乙酰胆碱水解的酶(乙酰胆碱酯酶)使乙酰胆碱保留在受体位点。乙酰胆碱积聚于受体，通过睫状肌的收缩降低眼内压力，与直接作用的胆碱能激动剂作用相似。Na+/K+-ATP酶抑制剂例如乌本苷、一氧化氮供体和内皮素降低Na+/K+-ATP酶的活性，减小由睫状突分泌房水的驱动力。氯化物转运抑制剂，例如利尿酸改变小梁细胞容量以增加流出易度。除非另外注明，这里引用的核酸序列都是按5'到3'方向书写的。这里使用的术语"核酸"，指DNA或RNA或其修饰形式，包含存在于DNA(腺噤呤"A"、胞嘧咬"C"、鸟噤呤"G"、胸腺嘧啶"T")或RNA(腺嘌呤"A"、胞嘧咬"C"、鸟嘌呤"G"、尿嘧咬"U")中的嘌呤或嘧咬碱基。这里提供的干扰RNA可能包含"T"碱基，特别是在3'末端，尽管"T"碱基并不天然存在于RNA中。"核酸"包括术语"寡核苷酸，，和"多核苷酸，，并且可以指单链分子或双链分子。双链分子通过A和T碱基、C和G碱基、A和U碱基之间的沃森-克里克碱基配对而形成。双链分子的双链之间可以是部分、基本或完全的互补，并形成一个双螺旋杂交体，其键强度取决于碱基序列互补的性质和程度。很容易从相应的DNA序列推断出mRNA序列。例如，SEQIDNO:l提供对应于编码;友酸酐酶IImRNA的DNA的有义链序列。mRNA序列与DNA有义链序列是一样的，其中，"U，，碱基代替"T，，碱基。因此，从SEQIDNO:l可知碳酸酐酶II的mRNA序列；从SEQIDNO:2可知碳酸酐酶IV的mRNA序列；从SEQIDNO:3可知卩l-肾上腺素能受体的mRNA序列；从SEQIDNO:4可知卩2-肾上腺素能受体的mRNA序列；从SEQIDNO:5可知乙酰胆碱酯酶剪接变体E4-E5的mRNA序列；从SEQIDNO:6可知Na+/K+-ATP酶a2的mRNA序列；从SEQIDNO:7可知Na-K-2Cl协同转运蛋白Al的mRNA序列；从SEQIDNO:lOl可知碳酸酐酶XII变体1的mRNA序列；从SEQIDNO:123可知乙酰胆碱酯酶剪接变体E4-E6的mRNA序列；从SEQIDNO:124可知Na+/K+-ATP酶al，变体1的mRNA序列；从SEQIDNO:125可知Na+/K+-ATP酶al，变体2的mRNA序列；从SEQIDNO:126可知Na+/K+-ATP酶a3的mRNA序列；从SEQIDNO:127可知Na+/K+-ATP酶a4,变体1的mRNA序列；从SEQIDNO:128可知Na+/K+-ATP酶a4，变体2的mRNA序列；从SEQIDNO:129可知Na+/K+-ATP酶pl，变体1的mRNA序列；从SEQIDNO:130可知Na+/K+-ATP酶pi,变体2的mRNA序歹'J;从SEQIDNO:131可知Na+/K+-ATP酶卩2的mRNA序列；从SEQIDNO:132可知NaVl^-ATP酶卩3的mRNA序列；从SEQIDNO:133可知Na-K-2C1协同转运蛋白A2的mRNA序列；从SEQIDNO:134可知石友酸酐酶XII,变体2的mRNA序列。碳酸酐酶II、IV和XII的mRNA(CA2、CA4和CA12):正如在ncbi.nlm.nih.gov上美国国立生物技术信息中心的GenBank数据库所描述的，碳酸酐酶(CA)II、IV和XII是催化二氧化碳可逆水合的锌金属酶大家族成员。碳酸酐酶涉及重要的生理过程例如代谢组织和肺部之间C(V碳酸氢盐的呼吸和运输、pH和C02的内稳态、在多种组织和器官中的电解质分泌、生物合成反应(如糖异生、脂肪生成和尿素生成)、骨吸收、钾化作用和肿瘤发生。已鉴定出14种不同的碳酸酐酶同工酶具有不同的亚细胞定位和组织分布。碳酸酐酶II是胞质同功酶，而碳酸酐酶IV和XII是膜结合的。已鉴定出编码CA-XII基因的不同亚型的两个转录变体；变体1编码较长的亚型，而变体2与变体1转录物相比缺少一个内编码的外显子，从而与亚型l相比缺少了11个氨基酸的区段。全身施用碳酸酐酶抑制剂(CAI)有利于降低青光眼特征的升高的眼内压(IOP)。存在于睫状突的同工酶抑制作用(磺胺易感同工酶CAII和CAIV)降低碳酸氢盐和房水分泌的速率，从而导致IOP降低25-30%。然而，存在于眼外组织的多种CA同功酶的抑制作用产生副作用，包括四肢的麻痹和麻刺感、金属味、抑郁症、疲乏、不适、重量减轻、性欲减少、肠胃道刺激、代谢性酸中毒、肾结石和短暂性近视。GenBank数据库以登记号NM—000067提供CA2的DNA序列，其在"序列表"中被提供为SEQIDNO:l。SEQIDNO:l提供DNA的有义链序列，对应于编码CAII的mRNA(除了"T"碱基替代"U"碱基)。CAII的编码序列来自核苷酸66-848。与以上所述的CA2mRNA序列相当的是选择性剪接体、等位形式、同工酶或其同源物。同源物指来源于其它哺乳动物物种并且与SEQIDNO:l同源的CA2mRNA(即直向同源物)。与SEQIDNO:l有关的CA2核酸序列包括GenBank登记号M77181、X03251、BC011949、BC035424、CR536526、CR541875、J03037、M36532、S69526和Y00339的那些序列。GenBank数据库以登记号NM_000717提供CA4的DNA序列，在"序列表，，中以SEQIDNO:2提供。SEQIDNO:2提供DNA的有义链序列，对应于编码CAIV的mRNA(除了"T"碱基替代了"U"碱基)。CAIV的编码序列来自核苷酸47-985。与以上所述的CA4mRNA序列相当的是选择性剪接体、等位形式、同工酶或其同源物。同源物指来源于其它哺乳动物物种并且与SEQIDNO:2同源的CA4mRNA(即直向同源物)。与SEQIDNO:2有关的CA4核酸序列包括GenBank登记号L10955、BC057792、BC069649、BC074768、CR541766和M83670的那些序列。GenBank数据库以登记号NM—001218提供CA12，变体1的DNA序列，在"序列表，，中以SEQIDNO:101提供。SEQIDNO:101提供DNA的有义链序列，对应于编码CAXII，变体1的mRNA(除了"T"碱基替代了"U"碱基)。CAXII，变体l的编码序列来自核苷酸157-1221。与以上所述的CA12,变体1的mRNA序列相当的是选择性剪接体、等位形式、同工酶或其同源物。同源物指来源于其它哺乳动物物种并且与SEQIDNO:101同源的CA12mRNA(即直向同源物)。GenBank数据库为以登记号NM—206925提供CA12,变体2的DNA序列，在"序列表，，中以SEQIDNO:134提供。SEQIDNO:134提供DNA的有义链序列，对应于编码CAXII,变体2的mRNA(除了"T"碱基替代了"U"碱基)。CAXII，变体2的编码序列来自核苷酸157-1188。与变体l相比，变体2缺少内编码的外显子。与以上所述的CA12，变体2mRNA序列相当的是选择性剪接体、等位形式、同工酶或其同源物。同源物指来源于其它哺乳动物物种并且与SEQIDNO:134同源的CA12mRNA(即直向同源物)。肾上腺素能受体-jJl和-|52mRNA(ADRB1和ADRB2):正如在ncbi.nlm.nih.gov美国国立生物技术信息中心的GenBank数据库所描述的，肾上腺素能受体(亚型al、a2、pl和卩2)是介导荷尔蒙肾上腺素和神经递质去曱肾上腺素的生理效应的G蛋白偶联受体的原型家族。GenBank数据库以登记号NM_000684提供ADRB1的DNA序歹'J，在"序列表，，中以SEQIDNO:3提供。SEQIDNO:3提供DNA的有义链序列，对应于编码pi-肾上腺素能受体的mRNA(除了"T"碱基替代了"U"碱基)。PI-肾上腺素能受体的编码序列是核苷酸87-1520。与以上所迷的ADRB1mRNA序列相当的是选择性剪接体、等位形式或其同源物。同源物是指来源于其它哺乳动物物种并且与SEQIDNO:3同源的ADRB1mRNA(即直向同源物)。与SEQIDNO:3有关的ADRB1核酸序列包括GenBank登记号AF169006AF16卯07、AY567837和J03019的那些序列。GenBank数椐库以登记号NM_000024提供ADRB2的DNA序列，在以下提供为SEQIDNO:4。SEQIDNO:4提供DNA的有义链序列，对应于编码卩2_肾上腺素能受体的mRNA(除了"T"碱基替代了"U"碱基)。P2-肾上腺素能受体的编码序列是核苷酸220-1461。与以上所述的ADRB2mRNA序列相当的是选择性剪接体、等位形式或其同源物。同源物是指来源于其它哺乳动物物种的并与SEQIDNO:4同源的ADRB2mRNA(即直向同源物)。与SEQIDNO:4有关的ADRB2核酸序列包4舌GenBank登记号AF022953、AF022954、AF022955、AF022956*AF16922&AF20230&AF20338&AY011291、J0296(KY00106、AY136741、BC012481、BC063486、BC073856、M15169和X04827的那些序列。乙酰胆碱酯酶mRNA剪接变体E4-E6和E4-E5(ACHE):正如在ncbi.nlm.nih.gov上美国国立生物技术信息中心的GenBank数据库所描述的，乙酰胆碱酯酶在神经肌肉接头和脑胆碱能突触水解神经递质乙酰胆碱，从而终止信号传输。同时也发现在红血细胞膜上，其构成了Yt血型抗原。乙酰胆碱酯酶以多种分子形式存在，其具有相似的催化性能，但在其寡聚体组装和对细胞表面的细胞黏附模式上不同。它是由单个ACHE基因编码的，且基因产物的结构多样性来自选择性的mRNA剪接以及催化亚基和结构亚基的翻译后締合。在脑、肌肉和其它组织中发现的乙酰胆碱酯酶的主要形式是亲水型，该亲水型与胶原性亚基或含脂的结构亚基形成二硫键连接的寡聚体。另一方面，主要表达于红细胞组织的选择性剪接体在C-末端不同，且含有带GPI-锚定位点的可切割的疏水肽。它通过翻译后加入的磷酸肌醇(PI)部分与膜締合。剪接变体E4-E6是主要的转录物并且产生于外显子4至外显子6的剪接。剪接变体E4-E5产生于外显子4至外显子5的选择性剪接。GenBank数据库以登记号NM—015831提供ACHE剪接变体E4-E5的DNA序列，在"序列表，，中以SEQIDNO:5提供。SEQIDNO:5提供DNA的有义链序列，对应于编码乙酰胆碱酯酶E4-E5的mRNA(除了"T，，碱基替代了"U"^J0。乙酰胆碱酯酶E4-E5的编码序列是核苷酸95-1948。与以上所述的ACHEmRNA序列相当的是选择性剪接体、等位形式或其同源物。同源物是指来源于其它哺乳动物物种并与SEQIDNO:5同源的ACHEmRNA(即直向同源物)。与SEQIDNO:5有关的ACHE核#列包括GenBank登记号AC011895、AF002993、AF312032、AY750146、CH236956、L06484、L42812、S71129、AF334270、BC026315、BC036813、M55040和NM_000665那些序列。GenBank数据库以登记号NM_000665提供ACHE剪接变体E4-E6的DNA序列，在"序列表"中以SEQIDNO:123提供。SEQIDNO:123提供DNA的有义链序列，对应于编码乙酰胆碱酯酶E4-E6变体的mRNA(除了"T"碱基替代了"U"碱基)。乙酰胆碱酯酶E4-E6的编码序列是核苷酸95-1939。与以上所述的ACHEmRNA序列相当的是选择性剪接体、等位形式或其同源物。同源物是指来源于其它哺乳动物物种的并与SEQIDNO:123同源的ACHEmRNA(即直向同源物)。与SEQIDNO:123有关的ACHE核酸序列包括GenBank登记号NM_015831、AC011895、AF002993、AF312032、AY750146、CH236956、L06484、L42812、S71129、AF334270、BC026315、BC036813和M55040那些序列。Na+/K+-ATP酶a和(JmRNA(ATP1-A1变体1、-Al变体2、-A2、-A3、-A4变体1、-A4变体2、-Bl变体1、-Bl变体2、-B2和-B3):正如在GenBank数据库所描述，由所述基因编码的蛋白质属于P-型阳离子转运ATP酶家族，并属于3+/1<:+-入1酶亚家族。3+/1^+-厶1酶是整合的膜蛋白，负责建立和维持用于钠离子和钾离子跨越质膜的电化学梯度。这些梯度对于渗透调节、各种有机和无机分子的钠偶联的转运以及神经和肌肉的电兴奋性是必不可少的。该酶由两个亚基组成，即大的催化亚基(a或A)和较小的糖蛋白亚基(p或B)。Na+/K+-ATP酶的催化亚基由多基因编码。GenBank数据库以登记号NM—000701提供ATP1A1变体1的DNA序列，在"序列表，，中以SEQIDNO:124提供。SEQIDNO:124提供DNA的有义链序列，对应于编码Na+/K+-ATP酶亚基Al变体1的mRNA(除了"T"碱基替代了"U"碱基)。3+/1^+-入1酶亚基入1变体l的编码序列来自核苷酸299-3370。与以上所述的ATP1A1变体1mRNA序列相当的是选择性剪接朱等位形式或其同源物。同源物是指来源于其它哺乳动物物种并且与SEQIDNO:124同源的ATP1A1变体1mRNA(即直向同源物)。GenBank数据库以登记号NM—001001586提供ATP1A1变体2的DNA序列，在"序列表，，中以SEQIDNO:125提供。SEQIDNO:125提供DNA的有义链序列，对应于编码Na+/K+-ATP酶亚基Al变体2的mRNA(除了"T，，碱基替代了"U，，碱基)。Na+/K+-ATP酶亚基Al变体2的编码序列是核苷酸299-2344。与以上所述的ATP1A1变体2mRNA序列相当的是选择性剪接朱等位形式或其同源物。同源物是指来源于其它哺乳动物物种并且与SEQIDNO:125同源的ATP1A1变体2mRNA(即直向同源物)。GenBank数据库以登记号NM_000702提供ATP1A2的DNA序列，在"序列表"中以SEQIDNO:6提供。SEQIDNO:6提供DNA的有义链序列，对应于编码Na+/K+-ATP酶A2亚基的mRNA(除了"T，，碱基替代了"U"碱基)。Na+/K+-ATP酶A2亚基的编码序列是核普酸105-3167。与以上所述的ATP1A2mRNA序列相当的是选择性剪接朱等位形式或其同源物。同源物是指来源于其它哺乳动物物种并且与SEQIDNO:6同源的ATP1A2mRNA(即直向同源物>与SEQIDNO:6有关的ATP1A2核酸序列包括GenBank登记号J05096、M27578、AB018321、AK091617、AK124581、AK126573、AL831991、AL831997、BC013680、BC047533、BC052271、M16795和Y07494的那些序列。GenBank数据库以登记号NM_152296提供ATP1A3的DNA序列，在"序列表，，中以SEQIDNO:126提供。SEQIDNO:126提供DNA的有义链序列，对应于编码Na+/K+-ATP酶A3亚基的mRNA(除了"T"碱基替代了"U"碱基)。Na+/K+-ATP酶A3亚基的编码序列是核苷酸155-3196。与以上所述的ATP1A3mRNA序列相当的是选择性剪接体、等位形式或其同源物。同源物是指来源于其它哺乳动物物种并且与SEQIDNO:126同源的ATP1A3mRNA(即直向同源物)。GenBank数据库以登记号NM144699提供ATP1A4变体1的DNA序列，在"序列表，，中以SEQIDNO:127提供。SEQIDNO:127提供DNA的有义链序列，对应于编码Na+/K+-ATP酶A4亚基变体1的mRNA(除了"T，，碱基替代了"U"碱基)。Na+/K+-ATP酶A4亚基变体1的编码序列是核苷酸469-3558。与以上所述的ATP1A4变体1mRNA序列相当的是选择性剪接朱等位形式或其同源物。同源物是指来源于其它哺乳动物物种并且与SEQIDNO:127同源的ATP1A4变体1mRNA(即直向同源物)。GenBank数据库以登记号NM_01001734提供ATP1A4变体2的DNA序列，在"序列表"中以SEQIDNO:128提供。SEQIDNO:128提供DNA的有义链序列，对应于编码Na+/K+-ATP酶A4亚基变体2的mRNA(除了"T，，碱基替代了"U，，碱基)。Na+/K+-ATP酶A4亚基变体2的编码序列是核苦酸111-608。与以上所述的ATP1A4变体2mRNA序列相当的是选择性剪接朱等位形式或其同源物。同源物是指来源于其它哺乳动物物种并且与SEQIDNO:128同源的ATP1A4变体2mRNA(即直向同源物)。GenBank数据库以登记号NM—001677提供ATP1B1变体1的DNA序列，在"序列表，，中以SEQIDNO:129提供。SEQIDNO:129提供DNA的有义链序列，对应于编码Na+/K+-ATP酶Bl亚基变体1的mRNA(除了"T，，碱基替代了"U，，碱基)。Na+/K+-ATP酶Bl亚基变体1的编码序列是核苷酸122-1033。与以上所述的ATP1B1变体1mRNA序列相当的是选择性剪接朱等位形式或其同源物。同源物是指来源于其它哺乳动物物种并且与SEQIDNO:129同源的ATP1B1变体1mRNA(即直向同源物)。GenBank数据库以登记号NM—001001787提供ATP1B1变体2的DNA序列，在"序列表，，中以SEQIDNO:130提供。SEQIDNO:130提供DNA的有义链序列，对应于编码Na+/K+-ATP酶Bl亚基变体2的mRNA(除了"T，，碱基替代了"U，，碱基)。Na+/K+-ATP酶Bl亚基变体2的编码序列是核苷酸122-1027。与以上所述的ATP1B1变体2mRNA序列相当的是选择性剪接体、等位形式或其同源物。同源物是指来源于其它哺乳动物物种并且与SEQIDNO:130同源的ATP1B1变体2mRNA(即直向同源物)。GenBank数据库以登记号NM—001678提供ATP1B2的DNA序列，在"序列表，，中以SEQIDNO:131提供。SEQIDNO:131提供DNA的有义链序列，对应于编码Na+/K+-ATP酶B2亚基的mRNA(除了"T，，碱基替代了"U"碱基)。Na+/K+-ATP酶B2亚基的编码序列是核普酸584-1456。与以上所述的ATP1B2mRNA序列相当的是选择性剪接朱等位形式或其同源物。同源物是指来源于其它哺乳动物物种并且与SEQIDNO:131同源的ATP1B2mRNA(即直向同源物)。GenBank数据库以登记号NM—001679提供ATP1B3的DNA序列，在"序列表"中以SEQIDNO:132提供。SEQIDNO:132提供DNA的有义链序列，对应于编码Na+/K+-ATP酶B3亚基的mRNA(除了"T，，碱基替代了"U，，碱基)。Na+/K+-ATP酶B3亚基的编码序列是核苦酸175-1014。与以上所述的ATPlB3mRNA序列相当的是选择性剪接朱等位形式或其同源物。同源物是指来源于其它哺乳动物物种并且与SEQIDNO:132同源的ATP1B3mRNA(即直向同源物)。Na-K-2C1协同转运蛋白mRNA(SLC12Al和SLC12A2):钠-钾-氯化物协同转运蛋白(Na-K-2Cl协同转运蛋白或NKCC)便于Na+、K+和Cr离子的偶联协同转运跨越质膜。有两种亚型NKCC1和NKCC2。NKCC1在包括眼睛的大多数组织中表达。相比之下，NKCC2主要在肾中表达，然而，有证据证明这一亚型在眼睛中也有较低水平的表达。NKCC1由SLC12A2基因(溶质载体家族12，成员2)编码且NKCC2由SLC12A1基因编码。小梁细胞具有有力的Na-K-2C1协同转运蛋白。该协同转运蛋白的活性由神经递质和激素调节，如去曱肾上腺素降低协同转运活性，或血管加压素增强协同转运活性。GenBank数据库以登记号NM_000338提供SLC12A1的DNA序列，在"序列表，，中以SEQIDNO:7提供。SEQIDNO:7提供DNA的有义链序列，对应于编码Na-K-2Cl协同转运蛋白NKCC2的mRNA(除了"T"碱基替代了"U"碱基)。Na-K-2C1协同转运蛋白NKCC2的编码序列是核普酸20-3319。与以上所述的Na-K-2C1NKCC2协同转运蛋白mRNA序列相当的是选择性剪接体、等位形式或其同源物。同源物指来源于其它哺乳动物物种并且与SEQIDNO:7同源的Na-K-2C1协同转运蛋白NKCC2mRNA(即直向同源物)。与SEQIDNO:7有关的SLC12A1核餅列包括GenBank登记号AJ005332、AJ005333、AB032525、AB032527、BC040138、BX647067、BX647484和U58130的那些序列。GenBank数据库以登记号NM_001046提供SLC12A2的DNA序列，在"序列表，，中以SEQIDNO:133提供。SEQIDNO:133提供DNA的有义链序列，对应于编码Na-K-2Cl协同转运蛋白NKCC1的mRNA(除了"T，，碱基替代了"U"碱基)。Na-K-2C1协同转运蛋白NKCC1的编码序列是核苷酸165-3803。与以上所述的Na-K-2C1NKCC1协同转运蛋白mRNA序列相当的是选择性剪接体、等位形式或其同源物。同源物指来源于其它哺乳动物物种并且与SEQIDNO:133同源的Na-K-2C1协同转运蛋白NKCC1mRNA(即直向同源物)。mRNA的减弱表达这里使用的短语"mRNA的减弱表达"，意指施用或表达一定量的干扰RNA(如siRNA)，通过切割mRNA或直接抑制翻译来减少靶标mRNA翻译成蛋白质。靶标mRNA或相应蛋白质表达的降低通常称为"敲除"，并且是相对于所报道的施用或表达无耙标对照RNA(如无靶标对照siRNA)后的水平。这里的实施方案考虑到包括并在50%-100%之间的表达量的敲除。然而，对于本发明的目的而言，不必要达到这样的敲除水平。在一个实施方案中，施用靶向高眼压靶标之一的单独的干扰RNA以降低IOP。在其它实施方案中，施用靶向相同的高眼压乾标(如CA2)的两个或多个干扰RNA以降低IOP。在另一些实施方案中，施用靼向多个高眼压耙标(如CA2和ADRB2)的两个或多个千扰RNA以降低IOP。通常通过使用定量聚合酶链式反应(qPCR)扩增测定mRNA水平，或通过利用western印迹或酶联免疫吸附测定(ELISA)测定蛋白质水平来评估敲除。蛋白质水平的分析为mRNA切割和翻译抑制两者提供了评估。测定敲除的其它技术包括RNA溶液杂交、核酸酶保护、northern杂交、用基因芯片的基因表达监控、抗体结合、放射性免疫测定以及荧光激活的细胞分析。通过观察青光眼症状的改善，例如眼内压的改善、视野丧失的改善或视盘变化的改善，推断在人体或哺乳动物中也存在这里所述的靶标的抑制作用。本发明实施方案中的干扰RNA似乎以催化方式切割靶标mRNA，即干扰RNA能够在亚化学计量上对靶标mRNA起抑制作用。与反义疗法相比，在这样的切割条件下提供疗效所需要的干扰RNA明显减少。干扰RNA:在本发明的一个实施方案中，干扰RNA(如siRNA)具有有义链和反义锩并且有义链和反义链包含至少19个核苷酸的至少近乎完全连续互补的区域。在本发明的另一个实施方案中，千扰RNA包含至少13、14、15、16、17或18个连续核苷酸的区域，分别与mRNA中相应耙标序列的3'端次末端的13、14、15、16、17或18个核苷酸有一定百分比的序列互补性或序列同一性。干扰RNA每条链的长度包含19-49个核苷酸，还可能包含19、20、21、22、23、24、25、26、27、28、29、30、31、32、33、34、35、36、37、38、39、40、41、42、43、44、45、46、47、48或49个核苷酸的长度。siRNA的反义链是siRNA的活性导向剂，因为反义链被掺入RISC中，从而使RISC识别与反义siRNA链至少有部分互补的耙标mRNA以用于切割或抑制翻译。在本发明中，通过使用可获得的设计工具选择靶标mRNA序列中的干扰RNA靶标序列(如siRNA靼标序列)。通过转染表达靼标mRNA的细胞来检验对应于这些靶标序列的干扰RNA,随后如上所述通过敲除来评估。选择产生50%-100%之间的表达敲除的干扰RNA用作进一步分析。选择siRNA的靼标序列的技术由Tuschl,T.等人，"ThesiRNAUserGuide",修订于2004年5月6日提供，可获于Rockefeller大学网站；也可由Ambion公司的Ambion网站上"siRNADesignGuidelines"中的技术报告#506提供；也可以通过其它基于网络的设计工具，例如，Invitrogen、Dharmacon、IntegratedDNATechnologies、Genscript或Proligo网站获知。起始搜索参数可包括介于35%-55%之间的G/C含量和19-27个核苷酸之间的siRNA长度。耙标序列可以定位于mRNA的编码区或定位于mRNA的5'或3'端非翻译区。在一个实施方案中，碳酸酐酶II的19个核苷酸的DNA靶标序列存在于SEQIDNO:l的核苷酸232-250中5'-CCCTGAGGATCCTCAACAA-3'SEQIDNO:8。用作靶向SEQIDNO:8的相应mRNA序列并且具有21个核苷酸链和2-核苷酸3'突出端的本发明的siRNA是5'-CCCUGAGGAUCCUCAACAANN國3，SEQIDNO:93'画NNGGGACUCCUAGGAGUUGUU-5，SEQIDNO:IO。每个"N，，残基可以是任何核普酸(A、C、G、U、T)或修饰的核普酸。3'末端可以具有的"N，，残基数目在1、2、3、4、5和6之间并包括它们。在任一条链上的"N，，残基可以是相同的残基(如UU、AA、CC、GG或TT)也可以不同0口AC、AG、AU、CA、CG、CU、GA、GC、GU、UA、UC或UG)。3'突出端可以相同也可以不同。在一个实施方案中，两条链都有3'UU突出端。靼向SEQIDNO:8的相应mRNA序列并且具有21个核苷酸链和在每条链上有3'UU突出端的本发明的siRNA是5,-CCCUGAGGAUCCUCAACAAUU-3'SEQIDNO:ll3'-UUGGGACUCCUAGGAGUUGUU-5'SEQIDNO:12。干扰RNA也可能有5'核苷酸的突出端或其可能有平末端。靶向SEQIDNO:8的相应mRNA序列并且具有19个核苷酸链和平末端的本发明的siRNA是5'-CCCUGAGGAUCCUCAACAA國3'SEQIDNO:7223'-GGGACUCCUAGGAGUUGUU-5'SEQIDNO:723。双链干扰RNA(如siRNA)的链可以连结形成发夹或茎环结构(如shRNA)。靼向SEQIDNO:8的相应mRNA序列并且具有19个碱基对的双链茎区域和3'UU突出端的本发明的shRNA是/\/NUN本领域普通技术人员公知N是核苷酸A、T、C、G、U或其修饰形式。环中核苷酸N的数目在3-23或5-15或7-13或4-9或9-11之间并包括它们，或者核苷酸N的数目是9。环中的一些核苷酸可能涉及与环中其他核苷酸的碱基对相互作用。可用来形成环的寡核苷酸序列的实例包括5'-UUCAAGAGA-3，(Brummelkamp，T.R.等人，(2002)Science296:550)和5'-UUUGUGUAG-3'(Castanotto，D,等人，(2002)RNA8:1454)。本领域技术人员公认产生的单链寡核苷酸形成茎环或发夹结构，该结构包含能与RNAi系统相互作用的双链区域。上面确定的siRNA靶标序列能在3'末端延伸以利于dicer底物27聚体双螺旋的设计。通过6个核苷酸在碳酸酐酶I1DNA序列(SEQIDNO:l)中识别的19个核苷酸的DNA靶标序列(SEQIDNO:8)的延伸，得到25个核苷酸的DNA靶标序列，其存在于SEQIDNO:1的核苷酸232-256:5'-CCCTGAGGATCCTCAACAATGGTCA-3'SEQIDNO:724。粑向SEQIDNO:724的相应mRNA序列的本发明的dicer底物27聚体双螺旋是5'-CCCUGAGGAUCCUCAACAAUGGUCA-3,SEQIDNO:7183'画UUGGGACUCCUAGGAGUUGUUACCAGU-5'SEQIDNO:719。有义链3'末端的两个核苷酸(即SEQIDNO:718的CA核苷酸)可能是用于改良的加工的脱氧核苷酸。正如在这里提供的，来自19-21个核苷酸耙标序列的dicer底物27聚体双螺旋的设计在整合DNA技术(IDT)网站和Kim，D.-H.等人(February，2005)NatureBiotechnology23:2;222-226中有进一步的讨论。当通过化学合成产生干扰RNA时，在一条或两条链(如果存在)的5，末端核苦酸5'位置的磷酸化作用能增强结合的RISC复合体的siRNA有效性和特异性，但是因为磷酸化作用能在细胞内发生，所以并不需要进行磷酸化。表1列出CA2、CA4以及CA12变体1和变体2的DNA序列(分别是SEQIDNO:l、SEQIDNO:2、SEQIDNO:101和SEQIDNO:134)中的siRNA靼标序列的实例，以如上阐明的方式从其设计本发明的siRNA。CA2、CA4以及CA12变体1和变体2分别编码碳酸酐酶I1、IV以及XII变体l和2。表1.siRNA的CA2、CA4和CA12耙标序列<table>tableseeoriginaldocumentpage47</column></row><table><table>tableseeoriginaldocumentpage48</column></row><table><table>tableseeoriginaldocumentpage49</column></row><table>CA1乙变体1和2的常用把标序列#起始核苷酸的位置，参考SEQIDNOs101S恥IDNO:<table>tableseeoriginaldocumentpage49</column></row><table><table>tableseeoriginaldocumentpage50</column></row><table><table>tableseeoriginaldocumentpage51</column></row><table><table>tableseeoriginaldocumentpage52</column></row><table><table>tableseeoriginaldocumentpage53</column></row><table><table>tableseeoriginaldocumentpage54</column></row><table><table>tableseeoriginaldocumentpage55</column></row><table>表4列出Na+/K+-ATP酶A和B亚基DNA序列(ATP1Al变体1，SEQIDNO:124;ATP1A1变体2，SEQIDNO:125;ATP1A2，SEQIDNO:6;ATP1A3，SEQIDNO:126;ATP1A4变体1，SEQIDNO:127;ATP1A4变体2，SEQIDNO:128;ATP1B1变体l，SEQIDNO:129;ATP1B1变体2，SEQIDNO:130;ATP1B2,SEQIDNO:131和ATP1B3，SEQIDNO:132)中siRNA靶标序列的实例，按如上阐明的方式从其中设计本发明的siRNA。表4.用作siRNA的ATP1A和ATP1B靼标序列<table>tableseeoriginaldocumentpage55</column></row><table><table>tableseeoriginaldocumentpage56</column></row><table><table>tableseeoriginaldocumentpage57</column></row><table><table>tableseeoriginaldocumentpage58</column></row><table><table>tableseeoriginaldocumentpage59</column></row><table><table>tableseeoriginaldocumentpage60</column></row><table><table>tableseeoriginaldocumentpage61</column></row><table><table>tableseeoriginaldocumentpage62</column></row><table><table>tableseeoriginaldocumentpage63</column></row><table><table>tableseeoriginaldocumentpage64</column></row><table><table>tableseeoriginaldocumentpage65</column></row><table>林多态性或进化趋异而可以预计的序列变化。在本发明的一个实施方案中，siRNA的反义链与靶标mRNA具有至少19个核苷酸的至少近乎完全连续互补。这里^f吏用的"近乎完全"意指siRNA的反义链与至少部分的靶标mRNA是"基本互补的"，并且siRNA的有义链与部分的靼标mRNA是"基本一致的"。如本领域所有普通技术人员公知，"同一性"是指通过匹配序列之间核苷酸的顺序和特征来确定核普酸序列之间的序列关联程度。在一个实施方案中，siRNA的反义链与耙标mRNA序列具有80%和80%-100%之间的互补，例如，85°Xk90%或95%的互补，这被认为是近乎完全的互补并且可以在本发明中应用。"完全的，，连续互补是指相邻碱基对的标准沃森-克里克碱基配对。"至少近乎完全的，，连续互补包括在这里用到的"完全的，，互补。设计用于测定同一性或互补性的计算机方法，例如BLASTN，来确定核苷酸序列的最大匹配程度(Altschul，S.F.,等人(1990)J.Mol.Biol.215:403-410)。术语"同一性百分数"描述连续核苷酸在第一个核酸分子中的百分比，该术语也描述一系列相同长度的连续核苷酸在第二个核酸分子中所占的百分比。术语"互补百分数"描述连续核苷酸在第一个核酸分子中的百分比，该核酸分子能按沃森-克里克原则与第二个核酸分子中一系列连续核苷酸进行碱基配对。靶标mRNA(有义链)和siRNA中的一条链(有义链)之间的关系是同一性的。siRNA的有义链，如果存在，也被称为传递链。靶标mRNA(有义链)和siRNA的另一条链(反义链)之间的关系是互补的。siRNA的反义链也被称为引导链。以5'到3'方向书写的核酸序列的次末端g是倒数第二个碱基，即3'端碱基的相邻碱基。以5'到3'方向书写的核酸序列的次末端13个碱基是3'端碱基相邻的最后13个碱基序列，且不包括3，端碱基。相似地，以5'到3'的方向书写的核酸序列的次末端14、15、16、17或18个碱基分别是3'端碱勤目邻的最后14、15、16、17或18个碱基序列，且不包括3'端碱基。标识符)的3'末端次末端的13个核苷酸具有至少卯％序列互补性或至少卯％序列同一性的至少含有13个连续核苷酸的区域"允许一个核苷酸取代。在这样的短语中不包括两个核苦酸的取代(即11/13=85%同一性/互补性)。在本发明的一个实施方案中，连续核苷酸区域是至少14个连续核苷酸的区域，该区域与每个序列标识符识别的序列3'末端次末端的14个核普酸具有至少85%序列互补性或至少85%序列同一4生在这样的短语中包4舌两个核苷酸的取K(即12/14=86%同一性/互补性)。在本发明的另一个实施方案中，连续核苷酸的区域是至少15、16、17或18个连续核苷酸的区域，该区域与序列标识符的序列3'末端次末端的14个核苷酸具有至少80%序列互补性或至少80%序列同一性。在这样的短语中包括三个核苷酸的取代。mRNA中对应于SEQIDNO:l、SEQIDNO:2、SEQIDNO:3、SEQIDNO:4、SEQIDNO:5、SEQIDNO:6、SEQIDNO:7、SEQIDNO:101、SEQIDNO:123、SEQIDNO:124、SEQIDNO:125、SEQIDNO:126、SEQIDNO:127、SEQID職128、SEQIDNO:129、SEQIDNO:130、SEQIDNO:131、SEQIDNO:132、SEQIDNO:133或SEQIDNO:134的靶标序列可能在mRNA的5'或3'端非翻译区以及在mRNA的编码区。双链干扰RNA的一条或两条链可能含有1-6个核苷酸的3'突出端，该3'突出端可能是核糖核苷酸或脱氧核糖核苦酸或其混合物。突出端的核苷酸不是碱基配对的。在本发明的一个实施方案中，干扰RNA包括TT或UU的3'突出端。在本发明的另一个实施方案中，干扰RNA包括至少一个平末端。该末端通常含有5'磷酸基或3'羟基，在其他实施方案中，反义链具有5'磷g，而有义链含有5'羟基。在另外一些实施方案中，该末端通过共价加入其他分子或功能团而被进一步修饰。双链siRNA的有义链和反义链可能是如上所述的两条单链的双螺旋形式，也可能是单独的分子，其中互补区域是碱基配对的并通过发夹环共价连接以形成单链。普遍认为，称为dicer的蛋白质在细胞内切割发夹以形成两个单独的碱基配对的RNA分子的干扰RNA。通过添加、删除、取代或修饰一个或多个核苷酸，干扰RNA可不同于自然形成的RNA。非核苷酸材料可能结合到干扰RNA的5'末端或者3'末端或者其内部。通常设计这样的修饰来增加干扰RNA的核酸酶抗性、改善细胞的摄入、增强细胞的靶向性、协助追踪干扰RNA、进一步改善稳定性或减少干扰素通路的活化作用潜能。例如，干扰RNA可能在突出端末端包含嘌呤核苷酸。例如，胆固醇通过吡咯烷接头连接到siRNA分子有义链的3，末端也给siRNA提供稳定性。进一步修饰包括例如3'末端生物素分子、已知具有细胞穿透性能的肽、纳米颗粒、拟肽类、荧光染料或树状聚体。可以在分子的碱基部分、糖基部分或磷酸部分修饰核苷酸并在本发明的实施方案中发挥作用。修饰包括用如烷基、烷氧基、氨基、脱氮、离素、羟基、巯基或其组合物取代。可以用更稳定的类似物取代核苷酸，如用脱氧核糖核苷酸取代核糖核苷酸，或具有糖基修饰例如用2'氨基、2'O-曱基、2'甲氧基乙基或2'-0，4'-C亚甲基桥取代2，-羟基。核苷酸的嘌呤或嘧啶类似物的例子包括黄噤呤、次黄噪呤、氮杂噤呤、曱硫基腺噤呤、7-脱氮腺苷以及O-修饰的和N-修饰的核普酸。核苷酸的磷酸基可通过用氮或硫(硫代磷酸)来取代磷酸基中的一个或多个氧来修饰。修饰有利于，例如，增强功能性，提高^l定性或渗透性或指导定位或靶向。反义干扰RNA链可以有一个或多个区域与SEQIDNO:l、SEQIDNO:2、SEQIDNO:3、SEQIDNO:4、SEQIDNO:5、SEQIDNO:6、SEQIDNO:7、SEQIDNO:101、SEQIDNO:123、SEQIDNO:124、SEQIDNO:125、SEQIDNO:126、SEQIDNO:127、SEQIDNO,128、SEQIDNO:129、SEQIDNO:130、SEQIDNO:131、SEQIDNO:132、SEQIDNO:133或SEQIDNO:134的部分并不互补。非互补区域可能是在互补区域的3'端、5'端或这两个末端同时或两个互补区域之间。可通过化学合成、体外转录，或者使用dicer或其它具有相似活性的合适的核酸酶切割较长的双链RNA而外源性生成干扰RNA。可从商业供应商如AmbionInc.(Austin，TX)>mvitrogen(Carlsbad,CA)或Dharmacon(Lafayette,CO)处获得化学合成的干扰RNA，该干扰RNA是使用常规的DNA/RNA合成仪、从保护的核糖核苷亚磷酰胺中制得。可通过例如利用溶剂或树脂的萃取沉淀、电永层析或这些方法的结合来纯化干扰RNA。备选地，可以使用没有纯化或经过极少纯化的干扰RNA以避免因样品加工处理而造成的损失。干扰RNA也可以从质粒或病毒表达载体或从最小表达盒(例如由PCR产生的片段，其包含一个或多个启动子和干扰RNA的一个或多个合适的模板)进行内源表达。商品化的shRNA基于质粒的表达载体实例包括pSilencer系歹'J(Ambion,Austin,TX)和pCpG-siRNA(InvivoGen，SanDiego,CA)成员。表达干扰RNA的病毒载体可能来源于多种病毒，包括腺病毒、腺相关病毒、慢病毒(如HIV、FIV和EIAV)和疱渗病毒。商品化的表达ShRNA的病毒载体实例包括pSilenceradeno(Ambion，Austin，TX)和pLenti6/BLOCK-iTTM-DEST(Invitrogen，Carlsbad,CA)。病毒载体的选择、从载体表达干扰RNA的方法和传递病毒载体的方法都在本领域普通技术人员的能力范围之内。用作生产PCR产生的shRNA表达盒的试剂盒的实例包4舌SilencerExpress(Ambion,Austin,TX)和siXpress(Mirus，Madison,WT)。可以从本领域普通技术人员已知的多种真核启动子包括polIII启动子(如U6或HI启动子)或者polII启动子(如巨细胞病毒启动子)中表达干扰RNA。本领域的那些技术人员承认这些启动子也适用于允许干扰RNA的诱导表达。在生理条件下杂交在本发明的某些实施方案中，干扰RNA的反义链与在体内作为RISC复合体部分的mRNA杂交。"杂交"指其中单链核酸与互补或近乎互补的碱基序列相互作用以形成称为杂交体的氢键复合体的过私杂交反应具有灵敏性和选择'I"么在体外，度以及杂交温度控制，这些操作是本领域所熟知的。特别的，通过降低盐浓度、增加甲酰胺浓度或升高杂交温度而增强严紧性。例如，在大约50%甲酰胺、37。C-42'C时产生高严紧性条件。在大约35%-25%甲酰胺、30。C-35。C时产生降低的严紧性条件。用于杂交的严紧性条件的实例提供在Sambrook，J.,1989，MolecularCloning:ALaboratoryManual,ColdSpringHarborLaboratoryPress,ColdSpringHarbor,N.Y.中。严紧性杂交条件的其它实例包括400mMNaCl、40mMPIPES,pH6.4、lmMEDTA、50。C或70。C下12-16小时后再洗涤；或者在70°C、lxSSC或50°C、lxSSC和50%甲酰胺中杂交后，在70。C、0.3xSSC中洗涤；或者在70。C、4xSSC或50。C、4xSSC和50%曱酰胺中杂交后，在67°C、lxSSC中洗涤。杂交温度比杂交体的熔解温度(TnO大约低5-10°C,使用下面的计算方法确定19-49个碱基对长度的杂交体的Tm:Tm°C=81.5+16.6(log10[Na+)+0.41(%G+C)-(600/N),其中N是杂交体中的碱基数，且[Na+是杂交緩冲液中钠离子的浓度。上述体外杂交测定提供预测在候选siRNA和耙标之间的结合是否具有特异性的方法。然而，在RISC复合物体系中，用不能证明体外杂交的高严紧性的反义链也能对靶标进行特异性的切割。单链干扰RNA:如上所述，干扰RNA最终作为单链起作用。已发现单链(ss)千扰RNA能影响mRNA沉默，但是比双链RNA效率低。因此，本发明的实施方案也提供施用ss干扰RNA,其在生理条件下与SEQIDNO:l、SEQIDNO:2、SEQIDNO:3、SEQIDNO:4、SEQIDNO:5、SEQIDNO:6、SEQIDNO:7、SEQIDNO:lOl、SEQIDNO:123、SEQIDNO:124、SEQIDNO:125、SEQIDNO:126、SEQIDNO:127、SEQIDNO:128、SEQIDNO:129、SEQIDNO:130、SEQIDNO:131、SEQIDNO:132、SEQIDNO:133或SEQIDNO:134的部分杂交，并且与杂交部分有至少19个核苷酸的至少近乎完全连续互补的区域所述杂交部分分别对应于SEQIDNO:l、SEQlDNO:2、SEQIDNO:3、SEQIDNO:4、SEQIDNO:5、SEQIDNO:6、SEQIDNO:7、SEQIDNO:lOl、SEQIDNO:123、SEQIDNO:124、SEQIDNO:125、SEQIDNO:126、SEQIDNO:127、SEQIDNO:128、SEQIDNO:129、SEQIDNO:130、SEQIDNO:131、SEQIDNO:132、SEQIDNO:133或SEQIDNO:134。与上述ds干扰RNA—样，ss干扰RNA长度为19-49个核苷酸。ss千扰RNA含有5'端磷酸或在原位或体内的5，端位置被磷酸化。术语"5，磷酸化，，用于描述，例如，具有磷酸基团的多核苷酸或寡核苷酸，该磷酸基团经由酯键连接到多核苷酸或寡核苦酸的5'末端糖(例如核糖、脱氧核糖或其类似物)的C5羟基上。与ds干扰RNA—样，通过化学合成或体外转录或从载体或表达盒内源性表达得到ss干扰RNA。可以通过激酶加入5，端磷睃基，或5'端磷酸可以由RNA的核酸酶切割生成。传递与ds干扰RNA—样。在一个实施方案中，施用具有保护末端和核酸酶抗性修饰的ss干扰RNA来实现沉默。SS干扰RNA可以千燥贮存或溶解于水溶液中。为了抑制退火或为了稳定，该溶液可以包含緩冲液或盐。发夹干扰RNA:发夹干扰RNA是单个分子(如单个寡核苷酸链)，包含茎环或发夹结构中的干扰RNA的有义链和反义链两者(如shRNA)。例如，shRNA能从DNA栽体表达，其中编码有义干扰RNA链的DNA寡核苷酸通过短的间隔区与编码反向互补的反义干扰RNA链的DNA寡核普酸相连接。如果出于所选择表达载体的需要，可以加入3'末端T's和形成限制性位点的核苷酸。得到的RNA转录物自身折叠以形成茎环结构。施用模式可以通过眼组织注射如眼周、结膜、筋膜嚢(subtenon)、前房内(intracameral)、玻璃体内(intravitreal)、目艮内、视网膜下、结膜下、眼球后或泪管内(intracanalicular)的注射；或通过使用导管或其他放置装置如视网膜药丸、目艮内插入、栓剂或包含多孔的、非多孔的或凝胶状物质的植入物直接运用到眼睛；通过局部眼滴剂或药膏；或通过盲管中或植入的相邻巩膜(巩膜睫状体)或在眼内的緩慢释放装置将干扰RNA直接递送到眼部。前房内注射可通过角膜ii^前房，让药剂到达小梁。泪管内注射可进入静脉收集管引流施莱姆管或进入施莱姆管。预期可以进行全身的或肠道外施用，包括但不限于静脉内、皮下和经口给药。受试者需要治疗高眼压或有发展成高眼压危险的受试者是患有高眼压或具有发展成有高眼压危险的人或哺乳动物，所迷高眼压与这里所述的靶标的不需要或不适当的表达或活性有关，所述靼标即碳酸酐酶II、IV或XII;pi-或卩2-肾上腺素能受体；乙酰胆碱酯酶；Na+/K+-ATP酶或Na-K-2C1协同转运蛋白。与这类病症有关的目艮部结构可能包括例如眼、视网膜、脉络膜、晶状体、角膜、小梁、虹膜、视神经、视盘、巩膜、眼房、玻璃体房或睫状朱受试者也可能是眼部细胞细胞培养物、器官或活体外(exvivo)器官或组织。制剂和剂量药物制剂包括以重量计可高达99。/o的本发明的干扰RNA或其盐，其与生理可接受的眼科栽体介质如水、緩冲液、生理盐水、甘氨酸、透明质酸、甘露醇等等混合。以溶液、悬浮液或乳剂的形式施用本发明的干扰RNA。下面是本发明可能实施的制剂的实例。重量含量％干扰RNA达到99;0.1-99;0.1-50;0.5-10.0羟丙基甲基纤维素0.5氯化钠0.8苯扎氯铵0.01EDTA0.01NaOH/HClqspH7.4纯净水(不含RNA酶)qs100mL重量含量％干扰RNA达到99;0.1-99;0.1-50;0.5-10.0磷酸盐緩冲液1.0苯扎氯铵0.01聚山梨酯800.5<table>tableseeoriginaldocumentpage73</column></row><table>一般来说，本发明实施方案中有效量的千扰RNA在靶细胞表面产生的细胞外浓度从100pM至100nM,或从1nM至50nM，或从5nM至约10nM或至约25nM。达到这一局部浓度所需的剂量取决于许多的因素，包括给药方法、给药位点、在给药位点和靶细胞或组织之间的细胞层数、局部给药还是全身给药等等。给药位点上的浓度比在靶细胞或组织表面的浓度可能高出很多。将组合物局部施用到眼睛表面，每天l-4次，或根据临床医师的常规判断按更大范围的给药时间表如每日、每周、双周、每月或更长时间施用。制剂的pH大约是pH4-9或pH4.5-pH7.4。通过增加作用的持续时间，从而允许减少给药次数和增强受试者依从性，用针对高眼压靶标mRNA的siRNA对受试者的治疗比用小分子局部眼药滴剂被期望更为有利。虽然正确的给药方案取决于临床医师的决定，可以按临床医师指导在每只眼中滴一滴的方法施用干扰RNA。制剂的有效量可能取决于许多因素，例如受试者的年龄、种族和性别，高眼压的严重性、耙标基因转录物/蛋白质转换的比率、干扰RNA效能和干扰RNA稳定性。在一个实施方案中，将干扰RNA按治疗剂量局部施用到眼睛并到达小梁、视网膜或视盘，从而改善与高眼压相关的疾病。可接受的载体眼科可接受的栽体指那些至多引起很少到无眼刺激的载体，如果需要提供适当的防腐，并且以均匀剂量输送一种或多种本发明的千扰RNA。用作施用本发明实施方案的干扰RNA的可接受载体包括阳离子脂质体介导的转染试剂TransIT-TKO(MinisCorporation,Madison,WI>LIPOFECTIN私LipofectamiimOLIGOFECTAMINETM(Invitrogen，Carlsbad,CA)或DHARMAFECTTM(Dharmacon，Lafayette,CO);聚阳离子如聚乙烯亚胺；阳离子肽如Tat、多聚精氨酸或穿膜肽(Antp肽)；或脂质体。脂质体形成于标准的小泡形成脂质和固醇，如胆固醇，并可包括靶标分子例如对内皮细胞表面抗原具有结合亲和力的单克隆抗体。此外，脂质体可以是加入PEG的脂质体。可以在溶液、悬浮液或者在生物溶蚀或非生物溶蚀的给药装置中传递干扰RNA。可以将干扰RNA单独施用，也可以作为共价缀合物的成分，与阳离子脂质体、阳离子肽或阳离子聚合物络合或包裹在靶向的或非靶向的纳米颗粒中施用。为了眼部给药，可将干扰RNA与眼科可接受的防腐剂、共溶剂、表面活性剂、增粘剂、渗透促进剂、緩冲液、氯化钠或水结合，以形成水溶的无菌眼科悬浮液或溶液。可通过将干扰RNA溶解于生理上可接受的等渗水溶緩冲液来制备眼科溶液制剂。另外，眼科溶液可能包括眼科学的可接受的表面活性剂来协助溶解抑制剂。可将增粘剂如羟甲基纤维素、羟乙基纤维素、曱基纤维素、聚乙烯吡咯烷酮或类似物添加到本发明的组合物中，以提高化合物的滞留。为了制备无菌眼药膏制剂，将干扰RNA与防腐剂在合适载体(如矿物油、液体羊毛脂或白凡士林)上组合。根据本领域已知的用于制备其它目艮科制剂的方法，通过将干扰RNA悬浮于由例如CARBOPOL-940(BFGoodrich,Charlotte,NC)或其相似物的组合制备的亲水基质中可制备无菌眼用凝胶制剂。例如VISCOAT(AlconLaboratories,Inc.,FortWorth,TX)可用作眼内注射。本发明的其他组合物可能包含渗透促进药剂如cremephor和TWEEN80(聚氧乙烯山梨醇单月桂酸酯，SigmaAldrich，St.Louis,MO)，其中干扰RNA较少渗透入眼中。试剂盒本发明的实施方案提供试剂盒，其包括用于减弱在这里所述mRNA在细胞中的表达的试剂。试剂盒包含siRNA或shRNA表达载体。对于siRNA和非病毒的shRNA表达栽体，该试剂盒也可能包含转染试剂或其他合适的传递载体。对于病毒的shRNA表达栽体，该试剂盒也可能包含病毒载体和/或用于产生病毒载体的必需组分(例如，包装细胞系以及用于包装的包含病毒载体4莫板和额外的辅助载体的载体)^该试剂盒也可能包含阳性和阴性对照siRNA或shRNA表达载体(例如，无輩巴向对照siRNA或靶向无关mRNA的siRNA)。该试剂盒也可能包含用作评估指定靶标基因的敲除的试剂(例如，用于检测耙标mRNA的定量PCR的引物和探针和/或针对western印迹的相应蛋白质的抗体)。备选地，该试剂盒可能包含siRNA序列或shRNA序列和使用说明以及用于通过体外转录产生siRNA或构建shRNA表达载体的必需物质。还提供试剂盒形式的药物组合，其包括(在包装的组合中)适于接受与此的密闭容器装置的栽体装置，和包括干扰RNA组合物和眼科可接受载体的第一种容器装置。如果需要，该试剂盒还可以包括一种或多种常规的药物学试剂盒组分，例如含有一种或多种药物可接受栽体的容器、额外的容器等等，这对于本领域技术人员而言是显而易见的。该试剂盒也可以包括作为插件或作为标签的用于指示施用的组分量的印刷的使用说明、用于施用的指南和/或用于混合组分的指南。干扰RNA在例如人小梁(TM)细胞中敲除内源靶标基因表达水平的能力在体外按以下方式评估。将转化的人TM细胞，例如指定的细胞系GTM-3或HTM画3(见Pang，I.H.等人，1994.Curr.EyeRes.13:51-63)，在转染之前24小时在标准生长培养基(如用10%牛胎儿血清增补的DMEM)中铺板培养。根据制造商的说明书，使用Dharmafectl(Dharmacon，Lafayette,CO)在干扰RNA浓度从0.1nM-100nM范围内进行转染。无乾向对照干扰RNA和核纤素蛋白A/C干扰RNA(Dharmacon)作为对照。在转染后24小时，使用例如TAQMAN⑧正向和反向引物以及包含乾位点的探针系歹'J(AppliedBiosystems,FosterCity,CA),通过定量PCR来评估耙标mRNA水平。可在转染后约72小时(实际时间取决于蛋白质的更新率)例如通过western印迹评估靼标蛋白质水平。从培养细胞中分离RNA和/或蛋白质的标准技术是本领域技术人员所熟知的。为减少非特异性、脱乾效应的几率，应该使用会产生期望的敲除耙基因表达水平的可能最低浓度干扰RNA。本发明的千扰RNA敲除CA2蛋白质表达水平的能力在如下的实施例1中得以进一步例证。实施例1用于在HeLa细胞中特异性沉默CA2的干扰RNA本研究检测CA2-干扰RNA在培养的Hela细胞中敲除内源CA2表达水平的能力。HeLa细胞的转染是使用CA2siRNA的标准体外浓度(IOOnM和1nM)或无靼向对照siRNA和DharmaFECTTM1转染试剂(Dharmacon，Lafayette,CO)完成的。所有的siRNA溶解在lxsiRNA緩冲液中，该緩沖液是含有20mMKC1、6mMHEPES(pH7.5)、0.2mMMgCl2的水溶液。在转染后72小时，通过western印迹分析来评估CA2蛋白质表达和肌动蛋白蛋白质表达(上样对照)。CA2siRNA是双链干扰RNA，其对以下靼标序列具有特异性siCA2#l靼向SEQIDNO:721;siCA2#3靼向SEQIDNO:13siCA2#4靼向SEQIDNO:72QsiCA2#5乾向SEQIDNO:14L如图1中western印迹数据显示，相对于非靼向对照siRNA，四个CA2siRNA中的每一个在100nM和1nM都显著降低CA2表达靶向SEQIDNO:720的SiCA2#4和革G向SEQIDNO:141的siCA2#5显得特别有效。这里引用的参考文献被特别并入作为参考，其提供示例性的操作或其他的细节作为对在此阐明的那些内容的补充。在本公开的指导下，本领域普通技术人员将会认可，可以对这里公开的实施方案进行明显的修饰而不背离本发明的精神或范围。在本公开的指导下，在这里公开的所有实施方案都能够得到实现和执行而无需过度的实验。在本公开及其等同的实施方案中公布本发明的全部范围。说明书不应该被过于狭隘的解释为本发明要求保护的全部范围。除非另有说明，在这里使用的术语"a"和"an"意指"一个，，、"至少一个"或"一个或多个"。权利要求1.在受试者中减弱高眼压靶标mRNA表达的方法，该方法包括向受试者施用包含有效量的长度为19-49个核苷酸的干扰RNA和药物可接受的载体的组合物，该干扰RNA包含至少13个连续核苷酸的区域，该连续核苷酸与以下任一序列的3′端次末端的13个核苷酸具有至少90％的序列互补性或至少90％的序列同一性，所述序列为SEQIDNO33-SEQIDNO82和SEQIDNO220-SEQIDNO717。2.权利要求l的方法，其中干扰RNA是shRNA。3.权利要求l的方法，其中高眼压靶标mRNA编码p-肾上腺素能受体，且干扰RNA包含至少13个连续核苷酸的区域，该连续核苷酸与以下任一序列的3'端次末端的13个核苷酸具有至少90%的序列互补性或至少卯％的序列同一性，所述序列为SEQIDNO:33-SEQIDNO:52和SEQIDNO:220-SEQIDNO:282。4.权利要求1的方法，其中高眼压乾标mRNA编码乙酰胆碱酯酶，且干扰RNA包含至少13个连续核苷酸的区域，该连续核苷酸与以下任一序列的3'端次末端的13个核苷酸具有至少90%的序列互补性或至少卯％的序列同一性，所述序列为SEQIDNO:53-SEQIDNO:62和SEQIDNO:283-333。5.权利要求l的方法，其中高眼压靶标mRNA编码ATP1A1，且干扰RNA包含至少13个连续核普酸的区域，该连续核普酸与以下任一序列的3，端次末端的13个核苷酸具有至少90%的序列互补性或至少90%的序列同一性，所述序列为SEQIDNO:334-SEQIDNO:374。6.权利要求l的方法，其中高眼压靶标mRNA编码ATP1A2,且干扰RNA包含至少13个连续核苷酸的区域，该连续核苷酸与以下任一序列的3，端次末端的13个核苷酸具有至少卯％的序列互补性或至少90%的序列同一性，所述序列为SEQIDNO:63-SEQIDNO:72和SEQIDNO:375-SEQIDNO:416。7.4又利要求1的方法，其中高眼压靶标mRNA编码ATP1A3，且干扰RNA包含至少13个连续核苷酸的区域，该连续核苷酸与以下任一序列的3'端次末端的13个核苷酸具有至少卯％的序列互补性或至少90%的序列同一性，所述序列为SEQIDNO:417曙SEQIDNO:440。8.^又利要求1的方法，其中高眼压耙标mRNA编码ATP1A4，且干扰RNA包含至少13个连续核苷酸的区域，该连续核苷酸与以下任一序列的3'端次末端的13个核苷酸具有至少90%的序列互补性或至少90%的序列同一性，所述序列为SEQIDNO:441画SEQIDNO:511。9.冲又利要求1的方法，其中高眼压乾标mRNA编码ATP1B1,且干扰RNA包含至少13个连续核苷酸的区域，该连续核苷酸与以下任一序列的3'端次末端的13个核苷酸具有至少90%的序列互补性或至少卯％的序列同一性，所述序列为SEQIDNO:512-SEQIDNO:563。10.权利要求l的方法，其中高眼压耙标mRNA编码ATP1B2,且干扰RNA包含至少13个连续核苷酸的区域，该连续核苷酸与以下任一序列的3'端次末端的13个核苷酸具有至少90%的序列互补性或至少卯％的序列同一性，所述序列为SEQIDNO:564-SEQIDNO:606。11.权利要求l的方法，其中高目艮压靶标mRNA编码ATP1B3,且干扰RNA包含至少13个连续核苷酸的区域，该连续核苷酸与以下任一序列的3'端次末端的13个核苷酸具有至少卯％的序列互补性或至少90%的序列同一性，所述序列为SEQIDNO:607-SEQIDNO:648。12.权利要求1的方法，其中高眼压耙标mRNA编码SLC12A1，且干扰RNA包含至少13个连续核苷酸的区域，该连续核苷酸与以下任一序列的3'端次末端的13个核苷酸具有至少90%的序列互补性或至少90%的序列同一性，所述序列为SEQIDNO:73-SEQIDNO:82和SEQIDNO:649SEQID隐675。13.权利要求l的方法，其中高目艮压靶标mRNA编码SLC12A2，且干扰RNA包含至少13个连续核苷酸的区域，该连续核苷酸与以下任一序列的3'端次末端的13个核普酸具有至少卯％的序列互补性或至少90%的序列同一性，所述序列为SEQIDNO:676-SEQIDNO:717。14.权利要求1的方法，其中连续核苷酸的区域是至少14个连续核苷酸的区域，该区域与序列标识符的序列3'端次末端14个核苷酸具有至少85%的序列互补性或至少85%的序列同一性。15.权利要求1的方法，其中连续核苷酸的区域是至少15、16、17或18个连续核苷酸的区域，该区域分别与序列标识符的序列3'端次末端15、16、17或18个核苷酸具有至少80%的序列互补性或至少80%的序列同一性。16.权利要求l的方法，其中干扰RNA是miRNA。17.权利要求l的方法，其中千扰RNA是siRNA。18.组合物在制备用于治疗受试者高眼压的药物中的用途，该组合物包含有效量的长度为19-49个核苷酸的干扰RNA和药物可接受载体，该干扰RNA包含至少13个连续核苷酸的区域，该连续核苷酸与以下任一序列的3，端次末端的13个核苷酸具有至少卯％的序列互补性或至少卯％的序列同一性，所述序列为SEQIDNO:33-SEQIDNO:82和SEQIDNO:220-SEQIDNO:717,其中由此治疗高眼压。19.权利要求18的用途，其中干扰RNA包含至少13个连续核苷酸的区域，该连续核苦酸与以下任一序列的3'端次末端的13个核苷酸具有至少卯％的序列互补性或至少90%的序列同一性，所述序列为SEQIDNO:33-SEQIDNO:42和SEQIDNO:220-SEQIDNO:241。20.权利要求18的用途，其中干扰RNA包含至少13个连续核苷酸的区域，该连续核苷酸与以下任一序列的3，端次末端的13个核苷酸具有至少卯％的序列互补性或至少90%的序列同一性，所述序列为SEQIDNO:43-SEQIDNO:52和SEQIDNO:242-SEQIDNO:282。21.权利要求18的用途，其中干扰RNA包含至少13个连续核苷酸的区域，该连续核苷酸与以下任一序列的3'端次末端的13个核苷酸具有至少卯％的序列互补性或至少90%的序列同一性，所述序列为SEQIDNO:53-SEQIDNO:62和SEQIDNO:283-333。22.权利要求18的用途，其中干扰RNA包含至少13个连续核苷酸的区域，该连续核苷酸与以下任一序列的3'端次末端的13个核苷酸具有至少卯％的序列互补性或至少90%的序列同一性，所述序列为SEQIDNO:334-SEQIDNO:374。23.权利要求18的用途，其中干扰RNA包含至少13个连续核苷酸的区域，该连续核苷酸与以下任一序列的3'端次末端的13个核苷酸具有至少卯％的序列互补性或至少90%的序列同一性，所述序列为SEQIDNO:63-SEQIDNO:72和SEQIDNO:375-SEQIDNO:416。24.权利要求18的用途，其中干扰RNA包含至少13个连续核苷酸的区域，该连续核苷酸与以下任一序列的3'端次末端的13个核苷酸具有至少卯％的序列互补性或至少90%的序列同一性，所述序列为SEQIDNO:417-SEQIDNO:440。25.权利要求18的用途，其中干扰RNA包含至少13个连续核苷酸的区域，该连续核苷酸与以下任一序列的3'端次末端的13个核苷酸具有至少90%的序列互补性或至少90%的序列同一性，所述序列为SEQIDNO:441-SEQIDNO:511。26.权利要求18的用途，其中干扰RNA包含至少13个连续核苷酸的区域，该连续核苷酸与以下任一序列的3'端次末端的13个核苷酸具有至少90%的序列互补性或至少卯％的序列同一性，所述序列为SEQIDNO:512-SEQIDNO:563。27.权利要求18的用途，其中干扰RNA包含至少13个连续核苷酸的区域，该连续核苷酸与以下任一序列的3'端次末端的13个核苷酸具有至少90%的序列互补性或至少90%的序列同一性，所述序列为SEQIDNO:564國SEQIDNO:606。28.权利要求18的用途，其中干扰RNA包含至少13个连续核苷酸的区域，该连续核苷酸与以下任一序列的3'端次末端的13个核苷酸具有至少90%的序列互补性或至少90。/。的序列同一性，所述序列为SEQIDNO:607-SEQIDNO:648。29.权利要求18的用途，其中干扰RNA包含至少13个连续核苷酸的区域，该连续核苷酸与以下任一序列的3'端次末端的13个核苷酸具有至少卯％的序列互#卜性或至少卯％的序列同一性，所述序列为SEQIDNO:73-SEQIDNO:82和SEQIDNO:649-SEQIDNO:675。30.权利要求18的用途，其中干扰RNA包含至少13个连续核苷酸的区域，该连续核苷酸与以下任一序列的3'端次末端的13个核苷酸具有至少卯％的序列互补性或至少卯％的序列同一性，所述序列为SEQIDNO:676-SEQIDNO:717。31.权利要求18的用途，其中干扰RNA是shRNA。32.4又利要求18的用途，其中干扰RNA是siRNA。33.权利要求18的用途，其中制备组合物用于局部、玻璃体内、巩膜睫状体、眼周、结膜、筋膜嚢、前房内、视网膜下、结膜下、眼球后或泪管内的施用。34.权利要求18的用途，其中组合物是能够表达干扰RNA的表达载体。35.权利要求18的用途，其中干扰RNA是miRNA。36.减弱受试者高眼压靶标mRNA第一种变体的表达而不减弱高眼压靶标mRNA第二种变体的表达的方法，其包括对受试者施用组合物，该组合物包含有效量的长度为19-49个核苷酸的干扰RNA和药物可接受栽体，该干扰RNA包含至少13个连续核苷酸的区域，该连续核苷酸与第一种变体的3'端次末端的13个核苷酸具有至少卯％的序列互补性或至少90%的序列同一性，其中第一种变体mRNA的表达被减弱，而没有减弱第二种变体mRNA的表达，并且其中第一种变体靶标mRNA分别是SEQIDNO:5、SEQIDNO:124、SEQIDNO:127或SEQIDNO:129，且第二种变体耙标mRNA分别是SEQIDNO:123、SEQIDNO:125、SEQIDNO:128或SEQIDNO:130。37.减弱受试者高眼压靶标mRNA第一种变体的表达而不减弱高眼压靶标mRNA第二种变体的表达的方法，其包括对受试者施用组合物，该组合物包含有效量的长度为19-49个核苷酸的干扰RNA和药物可接受栽体，该干扰RNA包含至少13个连续核苷酸的区域，该连续核苷酸与第一种变体的3，端次末端的13个核苷酸具有至少90%的序列互补性或至少90%的序列同一性，其中第一种变体mRNA的表达被减弱，而没有减弱第二种变体mRNA的表达，并且其中第一种变体单巴标mRNA分别是SEQIDNO:123、SEQIDNO:125、SEQIDNO:128或SEQIDNO:130，且第二种变体靼标mRNA分别是SEQIDNO:5、SEQIDNO:124、SEQIDNO:127或SEQID隐129。38.减弱受试者高眼压靶标mRNA表达的方法，其包括对受试者施用组合物，该组合物包含有效量的长度为19-49个核苷酸的干扰RNA和药物可接受载体，该干扰RNA包含有义核苷酸链、反义核苷酸链和至少19个核苷酸的至少近乎完全连续互补的区域；其中反义链在生理条件下与对应于SEQIDNO:3、SEQIDNO:4、SEQIDNO:5、SEQIDNO:6、SEQIDNO:7、SEQIDNO:123、SEQIDNO:124、SEQIDNO:125、SEQIDNO:126、SEQIDNO:127、SEQIDNO:128、SEQIDNO:129、SEQIDNO:130、SEQIDNO:131、SEQIDNO:132或SEQIDNO:133的mRNA的部分杂交，并且与mRNA的杂交部分具有至少19个核苷酸的至少近乎完全连续互补的区域，所述mRNA分别对应于SEQIDNO:3、SEQIDNO:4、SEQIDNO:5、SEQIDNO:6、SEQIDNO:7、SEQIDNO:123、SEQIDNO:124、SEQIDNO:125、SEQIDNO:126、SEQIDNO:127、SEQIDNO:128、SEQIDNO:129、SEQIDNO:130、SEQIDNO:131、SEQIDNO:132或SEQIDNO:133,其中高眼压靶标mRNA的表达被减弱。39.权利要求38的方法，其中经由局部、玻璃体内、巩膜睫状体、眼周、结膜、筋膜嚢、前房内、视网膜下、结膜下、目艮球后或泪管内的途径施用组合物。40.权利要求38的方法，其中通过从能够表达干扰RNA的表达栽体在体内表达施用组合物。41.权利要求38的方法，其中高眼压靶标mRNA编码卩l-或|52-肾上腺素能受体，并且反义链在生理条件下与分别对应于SEQIDNO:3或SEQIDNO:4的mRNA的部分杂交，且含有至少19个核苷酸的与mRNA的杂交部分至少近乎完全连续互补的区域，所述mRNA分别对应于SEQIDNO:3或SE()IDNO:4。42.权利要求38的方法，其中高眼压靶标mRNA编码乙酰胆碱酯酶，并且反义链在生理条件下与对应于SEQIDNO:5或SEQIDNO:123的mRNA的部分杂交，且含有至少19个核苷酸的、与分别对应于SEQIDNO:5或SEQIDNO:123的mRNA的杂交部分至少近乎完全连续互补的区域。43.权利要求38的方法，其中高眼压耙标mRNA编码Na+/K+-ATP酶的亚基，并且反义链在生理条件下与对应于SEQIDNO:6、SEQIDNO:124、SEQIDNO:125、SEQIDNO:126、SEQIDNO:127、SEQID脆128、SEQIDNO:129、SEQIDNO:130、SEQIDNO:131或SEQIDNO:132的mRNA的部分杂交，且含有至少19个核苷酸的、与分别对应于SEQIDNO:6、SEQIDNO:124、SEQIDNO:125、SEQIDNO:126、SEQIDNO:127、SEQIDNO:128、SEQIDNO:129、SEQIDNO:130、SEQIDNO:131或SEQIDNO:132的mRNA的杂交部分至少近乎完全连续互补的区域。44.权利要求38的方法，其中高眼压耙标mRNA编码Na-K-2C1协同转运蛋白，并且反义链在生理条件下与对应于SEQIDNO:7或SEQIDNO:133的mRNA的部分杂交，且含有至少19个核苷酸的、与分别对应于SEQIDNO:7或SEQIDNO:133的mRNA的杂交部分至少近乎完全连续互补的区域。45.权利要求38的方法，其中反义链被设计成以对应于SEQIDNO:3的mRNA为耙标，所述mRNA包含核苷酸468、523、799、1563、1565、1569、1593、1613、1614、1626、310、322、726、769、772、801、802、1501、1576、1577、1579、1580、1581、1586、1590、1592、1594、1615、1616、1632、1633或1654。46.权利要求38的方法，其中反义链被设计成以对应于SEQIDNO:4的mRNA为耙标，所述mRNA包含核苷酸329、375、1031、1046、1149、1163、1371、1401、1426、1880、283、607、608、609、619、623、722、857、1037、1091、1115、1124、1136、1137、1151、1164、1393、1394、1395、1406、1407、1427、1428、1429、1442、1725、1726、1756、1757、1758、1767、1790、1791、1792、1793、1803、1861、1869、1971、1972或1979。47.权利要求38的方法，其中反义链被设计成以对应于SEQIDNO:123的mRNA为輩巴标，所述mRNA包含核苷酸1875、18卯、1891、2011、2012、2133或2134。48.权利要求38的方法，其中反义链被设计成以对应于SEQIDNO:5的mRNA为耙标，所述mRNA包含核苷酸366、370、384、385、525、588、768、1045、1046、1061、10卯、1232、1314、1316、1460、1461、1462、1528、1607、1705、1713、382、393、397、622、1131、1459、1530、2251、2885、2886、386、1231、1315、2047、2049、2053、2055、2057、2125、2126、2127、2250、2253、2258、2260、2318、2395、2397、2404、2405、2643、2645或2887。49.权利要求38的方法，其中反义链被设计成以对应于SEQIDNO:124的mRNA为耙标，所述mRNA包含核苷酸2208、2275、2307、2526、2538、2592、2628、2979、2985、3093、3474、3504、3505、3506、3518、343、442、700、707、811、907、1059、1363、1594、1662、1758、1760、1896、2037或2147。50.权利要求38的方法，其中反义链被设计成以对应于SEQIDNO:125的mRNA为靶标，所述mRNA包含核苦酸436、441、443、552、617、701、702、832、2204、2291或2495。51.权利要求38的方法，其中反义链被设计成以对应于SEQIDNO:6的mRNA为輩巴标，所述mRNA包含核苷酸471、1990、3080、3797、4037、4093、4225、4323、5213、5285、214、467、470、472、473、632、825、946、1693、1767、1768、2157、2263、2589、2590、2765、2988、3094、3144、3145、3344、3345、3418、3666、3828、3850、4040、4041、4061、4882、4894、4900、5040、5114、5115、5128、5129、5253、5296、5375、5384或5385。52.;f又利要求38的方法，其中反义链#_设计成以对应于SEQIDNO:126的mRNA为乾标，所述mRNA包含核苷酸240、272、362、1836、1851、2103、2137、2138、2139、2157、2158、2160、2425、2580、2601、2646、2650、2794、2803、3116、3124、3126、3129或3377。53.权利要求38的方法，其中反义链^皮设计成以对应于SEQIDNO:127的mRNA为靶标，所述mRNA包含核苷酸113、612、702、833、1101、1732、1733、1836、2070、2071、2143、2328、2475、2861、2862、2952、3203、3281、3377、3379、3470、3471、3554、3614、3615、3616、3617、3625、3626、3642、3646、3647、3653、3655、3797、3801、3803、3809或3810。54.权利要求38的方法，其中反义链被设计成以对应于SEQIDNO:128的mRNA为革巴标，所述mRNA包含核苷酸126、251、252、253、331、427、429、520、521、530、601、602、603、604、664、665、666、667、675、676、692、696、697、702、703、705、707、847、851、853、859或860。55.权利要求38的方法，其中反义链浮皮设计成以对应于SEQIDNO:129的mRNA为靼标，所述mRNA包含核苷酸1096、1099、1130、1131、1167、1299、1441、1450、1451、1452、1564、1746、1750、1751、1752、1795、203、204、214、222、224、225、226、380、525、591、612、613、615、635、636、663、664、669、699、765、790、839、840、841、900、909、933或947。56.权利要求38的方法，其中反义链祐没计成以对应于SEQIDNO:130的mRNA为靶标，所述mRNA包含核苷酸1063、1102、1106、1107、1108、1109、1111或1151。57.权利要求38的方法，其中反义链被设计成以对应于SEQIDNO:131的mRNA为靶标，所述mRNA包含核苷酸653、654、771、773、841、849、853、917、918、926、927、931、981、983、984、996、998、1022、1023、1160、1214、1355、1356、1381、1394、1425、1474、1550、1620、1707、1740、1753、1825、1956、1965、2598、2599、2608、2828、2829、2888、3012或3251。58.4又利要求38的方法，其中反义链蜂皮i更计成以对应于SEQIDNO:132的mRNA为靼标，所述mRNA包含核苷酸292、434、438、457、459、488、4卯、498、499、592、639、723、774、775、788、857、858、910、911、930、931、932、1009、1010、1023、1024、1111、1146、1147、1220、1246、1321、1325、1326、1327、1331、1437、1548、1571、1785、1786或1787。59.权利要求38的方法，其中反义链,皮设计成以对应于SEQIDNO:7的mRNA为耙标，所述mRNA包含核苷酸675、974、1373、1780、2102、2151、2315、2542、2609、3197、67、71、73、353、405、864、911、912、913、1409、1748、1811、1935、1937、1993、2012、2346、2388、2437、2586、3007、3008、3022、3130、3210、3237或3271。60.权利要求38的方法，其中反义链被设计成以对应于SEQIDNO:133的mRNA为耙标，所述mRNA包含核苷酸748、749、753、1119、1169、1499、1509、1820、2081、2118、2147、2615、2644、2659、2663、2671、2672、2793、2812、2914、2948、3044、3334、3391、3480、3520、3549、3639、3840、3941、3944、4001、4995、4997、5141、5143、5249、5375、5834、5852、5981或6678。61.权利要求38的方法，还包括向受试者施用长度为19-49个核苷酸的第二种干扰RNA,并且包括有义核苷酸链、反义核苷酸链和至少19个核普酸的至少近乎完全互补的区域；其中第二种干扰RNA的反义链在生理条件下与对应于SEQIDNO:3、SEQIDNO:4、SEQIDNO:5、SEQIDNO:6、SEQIDNO:7、SEQIDNO:123、SEQIDNO:124、SEQIDNO:125、SEQIDNO:126、SEQIDNO:127、SEQIDNO:128、SEQIDNO:129、SEQIDNO:130、SEQIDNO:131、SEQIDNO:132或SEQIDNO:133的mRNA的第二部分杂交，且反义链含有至少19个核苷酸的、与分別对应于SEQIDNO:3、SEQIDNO:4、SEQIDNO:5、SEQIDNO:6、SEQIDNO:7、SEQIDNO:123、SEQIDNO:124、SEQIDNO:125、SEQIDNO:126、SEQIDNO:127、SEQIDNO:128、SEQIDNO:129、SEQIDNO:130、SEQIDNO:131、SEQIDNO:132或SEQIDNO:133的mRNA的第二杂交部分至少近乎完全连续互补的区域。62.组合物在制备用于治疗受试者高眼压的药物中的用途，该组合物包含有效量的长度为19-49个核苷酸的干扰RNA和药物可接受载体，该干扰RNA包含有义核苷酸链、反义核苷酸链和至少19个核香酸的至少近乎完全互补的区域；其中反义链在生理条件下与对应于SEQIDNO:3、SEQIDNO:4、SEQIDNO:5、SEQIDNO:6、SEQIDNO:7、SEQIDNO:123、SEQIDNO:124、SEQIDNO:125、SEQIDNO:126、SEQIDNO:127、SEQIDNO:128、SEQIDNO:129、SEQIDNO:130、SEQIDNO:131、SEQIDNO:132或SEQIDNO:133的mRNA的部分杂交，并且具有至少19个核苷酸的、与分别对应于SEQIDNO:3、SEQIDNO:4、SEQIDNO:5、SEQIDNO:6、SEQIDNO:7、SEQIDNO:123、SEQIDNO:124、SEQIDNO:125、SEQIDNO:126、SEQIDNO:127、SEQIDNO:128、SEQIDNO:129、SEQIDNO:130、SEQIDNO:131、SEQIDNO:132或SEQIDNO:133的mRNA的杂交部分至少近乎完全连续互补的区域。63.权利要求62的用途，其中有义核苷酸链和反义核苷酸链通过环形核苷酸序列连结。64.权利要求62的用途，其中制备组合物用于局部、玻璃体内、巩膜睫状体、眼周、结膜、筋膜嚢、前房内、视网膜下、结膜下、眼球后或泪管内的施用。65.权利要求62的用途，其中组合物包含能够表达干扰RNA的表达载体。66.减弱受试者高眼压靶标mRNA的表达的方法，其包括向受试者施用组合物，该组合物包含有效量的长度为19-49个核*酸的干扰RNA和药物可接受载体，其中单链干扰RNA在生理条件下与对应于SEQIDNO:3的mRNA的部分杂交，所述部分包含核苷酸468、523、799、1563、1565、1569、1593、1613、1614、1626、310、322、726、769、772、801、802、1501、1576、1577、1579、1580、1581、1586、1590、1592、1594、1615、1616、1632、1633或1654，并且该干扰RNA具有至少19个核苷酸的、与对应于SEQIDNO:3的mRNA的杂交部分至少近乎完全连续互补的区域；或其中单链干扰RNA在生理条件下与对应于SEQIDNO:4的mRNA的部分杂交，所述部分包含核苷酸329、375、1031、1046、1149、1163、1371、1401、1426、1880、283、607、608、609、619、623、722、857、1037、1091、1115、1124、1136、1137、1151、1164、1393、1394、1395、1406、1407、1427、1428、1429、1442、1725、1726、1756、1757、1758、1767、1790、1791、1792、1793、1803、1861、1869、1971、1972或1979，并且该干扰RNA含有至少19个核苷酸的、与对应于SEQIDNO:4的mRNA的杂交部分至少近乎完全连续互补的区域；或其中单链干扰RNA在生理条件下与对应于SEQIDNO:123的mRNA的部分杂交，所述部分包含核苷酸1875、18卯、1891、2011、2012、2133或2134，并且该干扰RNA含有至少19个核苷酸的、与对应于SEQIDNO:123的mRNA的杂交部分至少近乎完全连续互补的区域；或其中单链干扰RNA在生理条件下与对应于SEQIDNO:5的mRNA的部分杂交，所述部分包含核苷酸366、370、384、385、525、588、768、1045、1046、1061、1090、1232、1314、1316、1460、1461、1462、1528、1607、1705、1713、382、393、397、622、1131、1459、1530、2251、2885、2886、386、1231、1315、2047、2049、2053、2055、2057、2125、2126、2127、2250、2253、2258、2260、2318、2395、2397、2404、2405、2643、2645或2887,并且该干扰RNA含有至少19个核苦酸的、与对应于SEQIDNO:5的mRNA的杂交部分至少近乎完全连续互补的区域；或其中单链干扰RNA在生理条件下与对应于SEQIDNO:124的mRNA的部分杂交，所述部分包含核苷酸2208、2275、2307、2526、2538、2592、2628、2979、2985、3093、3474、3504、3505、3506、3518、343、442、700、707、811、卯7、1059、1363、1594、1662、1758、1760、1896、2037或2147，并且该干扰RNA含有至少19个核苷酸的、与对应于SEQIDNO:124的mRNA的杂交部分至少近乎完全连续互补的区域；或其中单链干扰RNA在生理条件下与对应于SEQIDNO:125的mRNA的部分杂交，所述部分包含核苷酸436、441、443、552、617、701、702、832、2204、2291或2495，并且该干扰RNA含有至少19个核苷酸的、与对应于SEQIDNO:125的mRNA的杂交部分至少近乎完全连续互补的区域；或其中单链干扰RNA在生理条件下与对应于SEQIDNO:6的mRNA的部分杂交，所述部分包含核苷酸471、1990、3080、3797、4037、4093、4225、4323、5213、5285、214、467、470、472、473、632、825、946、1693、1767、1768、2157、2263、2589、25卯、2765、2988、3094、3144、3145、3344、3345、3418、3666、3828、3850、4040、4041、4061、4882、4894、4900、5040、5114、5115、5128、5129、5253、5296、5375、5384或5385,并且该干扰RNA含有至少19个核苷酸的、与对应于SEQIDNO:6的mRNA的杂交部分至少近乎完全连续互补的区域；或其中单链干扰RNA在生理条件下与对应于SEQIDNO:126的mRNA的部分杂交，所述部分包含核苷酸240、272、362、1836、1851、2103、2137、2138、2139、2157、2158、2160、2425、2580、2601、2646、2650、2794、2803、3116、3124、3126、3129或3377,并且该干扰RNA含有至少19个核苷酸的、与对应于SEQIDNO:126的mRNA的杂交部分至少近乎完全连续互补的区域；或其中单链干扰RNA在生理条件下与对应于SEQIDNO:127的mRNA的部分杂交，所述部分包含核苷酸113、612、702、833、1101、1732、1733、1836、2070、2071、2143、2328、2475、2861、2862、2952、3203、3281、3377、3379、3470、3471、3554、3614、3615、3616、3617、3625、3626、3642、3646、3647、3653、3655、3797、3801、3803、3809或3810，并且该干扰RNA含有至少19个核苷酸的、与对应于SEQIDNO:127的mRNA的杂交部分至少近乎完全连续互补的区域；或其中单链干扰RNA在生理条件下与对应于SEQIDNO:128的mRNA的部分杂交，所述部分包含核苷酸126、251、252、253、331、427、429、520、521、530、601、602、603、604、664、665、666、667、675、676、692、696、697、702、703、705、707、847、851、853、859或860,并且该干扰RNA含有至少19个核苷酸的、与对应于SEQIDNO:128的mRNA的杂交部分至少近乎完全连续互补的区域；或其中单链干扰RNA在生理条件下与对应于SEQIDNO:129的mRNA的部分杂交，所述部分包含核苷酸1096、1099、1130、1131、1167、1299、1441、1450、1451、1452、1564、1746、1750、1751、1752、1795、203、204、214、222、224、225、226、380、525、591、612、613、615、635、636、663、664、669、699、765、790、839、840、841、卯0、卯9、933或947，并且该干扰RNA含有至少19个核苷酸的、与对应于SEQIDNO:129的mRNA的杂交部分至少近乎完全连续互补的区域；或其中单链干扰RNA在生理条件下与对应于SEQIDNO:130的mRNA的部分杂交，所述部分包含核苷酸1063、1102、1106、1107、1108、1109、1111或1151，并且该干扰RNA含有至少19个核苷酸的、与对应于SEQIDNO:130的mRNA的杂交部分至少近乎完全连续互补的区域；或其中单链干扰RNA在生理条件下与对应于SEQIDNO:131的mRNA的部分杂交，所述部分包含核苷酸653、654、771、773、841、849、853、917、918、926、927、931、981、983、984、996、998、1022、1023、1160、1214、1355、1356、1381、1394、1425、1474、1550、1620、1707、1740、1753、1825、1956、1965、2598、2599、2608、2828、2829、2888、3012或3251，并且该干扰RNA含有至少19个核苷酸的、与对应于SEQIDNO:131的mRNA的杂交部分至少近乎完全连续互补的区域；或其中单链干扰RNA在生理条件下与对应于SEQIDNO:132的mRNA的部分杂交，所述部分包含核苷酸292、434、438、457、459、488、490、498、499、592、639、723、774、775、788、857、858、910、911、930、931、932、1009、1010、1023、1024、1111、1146、1147、1220、1246、1321、1325、1326、1327、1331、1437、1548、1571、1785、1786或1787，并且该干扰RNA含有至少19个核苷酸的、与对应于SEQIDNO:132的mRNA的杂交部分至少近乎完全连续互补的区域；或其中单链干扰RNA在生理条件下与对应于SEQIDNO:7的mRNA的部分杂交，所述部分包含核苷酸675、974、1373、1780、2102、2151、2315、2542、2609、3197、67、71、73、353、405、864、911、912、913、1409、1748、1811、1935、1937、1993、2012、2346、2388、2437、2586、3007、3008、3022、3130、3210、3237或3271，并且该干扰RNA含有至少19个核苷酸的、与对应于SEQIDNO:7的mRNA的杂交部分至少近乎完全连续互补的区域；或其中单链干扰RNA在生理条件下与对应于SEQIDNO:133的mRNA的部分杂交，所述部分包含核苷酸748、749、753、1119、1169、1499、1509、1820、2081、2118、2147、2615、2644、2659、2663、2671、2672、2793、2812、2914、2948、3044、3334、3391、3480、3520、3549、3639、3840、3941、3944、4001、4995、4997、5141、5143、5249、5375、5834、5852、5981或6678，并且该干扰RNA含有至少19个核苦酸的、与对应于SEQIDNO:133的mRNA的杂交部分至少近乎完全连续互补的区域；其中高眼压靶标mRNA的表达由此被减弱。67.权利要求66的方法，其中干扰RNA是miRNA。68.权利要求66的方法，其中干扰RNA是siRNA。69.包含干扰RNA和药物可接受载体的组合物，所迷干扰RNA长度为19-49个核苷酸并且含有SEQIDNO:33-SEQIDNO:82和SEQIDNO:220-SEQIDNO:717中任一的核苷酸序列或其互补序列。70.权利要求69的组合物，其中干扰RNA是shRNA。71.权利要求69的组合物，其中干扰RNA是siRNA。72.权利要求69的组合物，其中干扰RNA是miRNA。全文摘要本发明提供抑制高眼压靶标mRNA表达的RNA干扰以降低开角型青光眼或高眼压患者中升高的眼内压。高眼压靶标包括碳酸酐酶II、IV和XII；1和2肾上腺素能受体；乙酰胆碱酯酶；Na⁺/K⁺-ATP酶和Na-K-2Cl协同转运蛋白。通过施用本发明的干扰RNA来治疗高眼压。文档编号C12N15/11GK101155918SQ200680010246公开日2008年4月2日申请日期2006年2月1日优先权日2005年2月1日发明者A·F·克拉克,A·R·谢帕德,J·E·查特尔顿申请人:爱尔康公司