用于治疗和预防纤维化的、炎症的和新血管生成的病症的组合物和方法

专利名称：：用于治疗和预防纤维化的、炎症的和新血管生成的病症的组合物和方法
技术领域：
：本发明涉及使用免疫诱导部分来治疗眼部紊乱的方法，该免疫诱导部分可与作为信号分子在人类和/或动物疾病中发^军作用的生物活性脂质分子反应。本发明所考虑的特定的一类信号生物活性脂质是溶血脂质(lysolipids)。尤其优选的信号脱脂脂质为1J粦酸鞘氨醇(SIP)和多种溶血磷脂酸(LPA)。针对信号脂质的抗体、及其书于生物和变异体可通过单独给予包含这种抗体的药物症且合物、或与其他治疗剂和/或治疗联合用于治疗和/或预防眼部疾病或紊乱。
背景技术：
：I.引言以下描述包括可用于理解本发明的信息。但并非承认任何这些信息是本申请发明的现有技术或与本申请发明相关，或者^f壬何明确或潜在引用的出版物是本申请发明的现有技术或甚至与本申请发明净争别相关。II.背景本发明涉及减少或减弱异常的新血管生成、血管生成、异常的纤维生成、纤维4b和瘢痕形成、以及炎症和免疫反应的方法。在i午多疾病和病症中都分别包括或共同包括这些过程。这些疾病或病症可以是系统性(全身性的)的或者可以是相对局部的，例如位于皮肤或位于眼睛。A.目艮^卩疾病和病症病理的或异常的血管生成/新血管生成、异常重塑、纤维化和瘢痕形成以及炎症的发生与一见网膜和眼部缺血疾病例如年龄相关性黄斑变性(AMD)、糖尿病浮见网膜病变(DR)、早产儿^L网膜病变(ROP)以及其他发育障碍相关[Eichleretal.(2006),CurrPharmDes,vol12:2645-60],也是眼部感染和枳4成性损伤的结果[Ciullaetal.(2001),CurrOpinOphthalmol,vol12:442-9andDartetal(2003),Eye,vol17:886-92]。在多种临床病症中，病理性眼部血管生成是导致失明的主要原因。脉络膜新生血管(CNV)发生在许多眼部疾病中，其中最普遍的是渗出型或湿型AMD。由于不断增加的老龄化人口，AMD成为现代流行病并且是导致西方世界超过60岁患者失明的主要原因。尽管视力丧失的流行病是由AMD导致的，仅有少数治疗(主要是基于抗VEGF的)能够减纟爰AMD的发展，甚至更少的治疗能够逆转视力丧失[BylsmaandGuymer(2005),ClinExpOptom,vol88:322-34，Gryziewicz(2005)，AdvDrugDelivRev,vol57:2092-8andLiuandRegillo(2004),CurrOpinOphthalmol,vol15:221-6.]。因;t匕，发现病理性新血管生成的新的治疗方法是非常重要的。这里使用AMD仅仅是为了在描述涉及异常血管生成/新血管生成、异常重塑、纤维化和瘢痕形成、以及炎症的眼部病症中起解释说明的目的，如在本文中公开和要求保护的其他的眼部疾病和紊乱中也发现这些病症。AMD涉及年龄相关性病理性变化[Tezel，BoraandKaplan(2004),TrendsMolMed,vol10:417-20andZarbin(2004),ArchOphthalmol,122:598-614]。虽存在多种理i仑，j旦AMD准确的病原学与发病机理仍未完全了解。老化与累积的氧化损伤、玻璃膜的变厚以及玻璃疣的形成相关。氧化应激导致^L网膜色素上皮(RPE)细胞的损伤，而且在一些情况下，导致对"永络血管的损伤[Zarbin(2004),ArchOphthalmol,vol122:598-614andGorinwa/.(1990),MolVis,,vol5:29]。RPE损伤可能引发玻璃膜和月永络膜内的'f曼'l"生炎症反应[Johnson"(2000)，ExpEyeRes，.vol70:441-9]。这种损伤和炎症通过刺激CNV和萎缩而促进和增强一见网膜损伤[Zarbin(2004),ArchOphthalmol,vol122:598-614andWitmer"(2003)，ProgRetinEyeRes,vol22:1-29]。CNV导致可能^皮i人为是创伤的缺陷和渗漏血管(BV)[KentandSheridan(2003),MolVis,vol9:747-55]。创伤愈合由脉络膜产生并穿过玻璃膜和RPE4曼入^见网膜下腔。创伤愈合反应的特征在于典型的早期炎症反应、显著的血管生成反应以及组织形成，所有涉及因素的终末期成熟随后发生。因而，创伤重塑可以不可逆地损害光感受器和RPE，因此，i正实了佳:用4元血管生成治疗以外的治疗方法来治疗CNV的需要[LaCour,KiilgaardandNissen(2002),DrugsAging，vol19:101-33.12]。由于CNV相关性纤维化、水胂和炎症单独或累积导致的正常视网膜和视网膜下结构的改变，引起AMD相关性视力丧失[TezelandKaplan(2004),TrendsMolMed，vol10:417-20andAmbatiWa/.(2003),SurvOphthalmol,vol48:257-93]。与、渗出4生AMD有关的多种细胞和细胞因子的相互作用使寻找有效的治疗大大地复杂化。尽管通过抗VEGF治疗可部分地控制CNV和水肿，而减轻瘢痕形成和炎症的有效治疗还未得到充分的阐明[BylsmaandGuymer(2005)，ClinExpOptom，vol88:322-34andPauleikhoff(2005),Retina,vol25:1065-84]。只要新血管复合物保持完好(如在用抗VEGF剂治疗的患者的情况下所表现的)，^L网膜下纤维化和将来的一见力丧失的可能性持续存在。在渗出性AMD的治疗中，抗VEGF-A治疗代表最新的，重大的进展。然而，哌加他尼(PEGAPTANIB)(—种高亲和性适体，选择性抑制VEGF-A的165亚型)的III期—见力实-睑，表明一^殳患者继续丧失视力，且只有小比例患者获得一见力[Gragoudas"a/.(2004)，NEnglJMed,vol351:2805-16]。通过抗体片断兰尼单抗(RANINIZUMAB)对VEGF-A的所有亚型的承卩制作用(完全的VEGF承P制作用)产生i午多更加显著的岁文果[Brownetal.NEngMed,2006355:1432-44,Rosenfeldetal.NEngJMed2006355:1419-31]。2年的MARINA实验和1年的ANCHOR实验证明大约40%的患者获得一些视力。尽管这些结果表明我们治疗渗出性AMD的能力有重大的进步，但还表明60%的患者没有得到视力改善。此夕卜，这些患者必须满足严格限定的纳入标准和排除标准。在更多的患者人群中的结果可能没有如此有岁文(lessrobust)。还有一个已充分确定的需要就是开发其他的耙向CNV进展的其他步骤以及最终导致光感受器毁坏的过程的治疗剂。首先，脉络膜BV的生长涉及许多介质间而不只是VEGF的协调的(orchestrated)相互作用，这提供了调节或抑制整个过程的机会。第二，渗出性AMD是由血管和血管外成分组成的。血管成分包括血管内皮细月包(EC)、EC前体和周细胞。血管外成分，从体积上看是最大的成分，是由炎性细胞、神经胶质细胞和-现网膜色素上皮(RPE)细月包和成纤维细"包组成的。组织损害可由4壬一成分产生。当前的才元VEGF治疗未阐明病理过程的这些其他方面。靶向与AMD相关的血管生成〉暴布级联凌丈应(angiogeniccascade)中的其j也成分可为治疗才是供更加有效和增岁文的途径[SpaideRF(2006)，AmJOphthalmol,vol141:149-156]。l.眼部疾病中的炎症有越来越多的证据表明炎症，特别是巨噬细胞以及补体系统[Kleina/.(2005)，Science,vol308:385-9andHagemana/.(2005):ProcNatlAcadSciUSA,vol102:7227-32]在渗出性AMD的发病才几理中发挥重要的作用。外科手术切离的脉络膜新血管膜的组织病理学表明巨噬细月包几乎到处存在[GrossniklausW(1994)，Ophthalmology,vol101:1099-111andGrossniklausd(2002),MolVis，vol8:119-26]。有封片(mounting)表明，巨噬细月包通过包4舌能损害细胞和降解玻璃膜的酶的分泌以及释放促血管生成细胞因子的多种4乍用[OtaniW"/，(1999)，OphthalmolVisSci，vol40:1912-20andAmin，PuklinandFrank(1994),InvestOphthalmolVisSci,vol35:3178-88]，在介导CNV形成和增生中可能发挥活性作用[Grossniklaus"a/.(2003)，MolVis,vol8:119-26;Espinosa画Heidmann,(2003),InvestOphthalmolVisSci,vol44:3586-92;Oha"/，(1999),InvestOphthalmolVisSci,vol40:1891-8;Cousins"a/,(2004)，ArchOphthalmol,vol122:1013-8;Forrester(2003)，NatMed，vol9:1350-1andTsutsumi(2003)，JLeukocBiol,vol74:25-32]。在损伤位置，巨噬细胞表现活化的^f鼓形态的标志，例如脱粒[Oh"a/，(1999),InvestOphthalmolVisSci,vol40:1891-8andTrautmann&fl/,(2000),JPathol,vol190:100-6]。因而认为，限制巨噬细胞渗透入脉络膜新血管复合物中的分子可帮助限制CNV形成。2.目艮部疾病中的月7Jc络月莫新血管生成和血管成熟血管生成是正常的创伤愈合的重要部分，因为它向炎症细力包运專lT氧和营养物且帮助去除死细月包[Lingen(2001)，ArchPatholLabMed,vol125:67-71]。渐进的血管生成由两个不同的步骤组成阶段I:响应邻近的刺激，血管EC迁移至毛细血管的末端，并在那里增殖且形成腔结构；以及阶段II:修剪血管网络并优化脉管系统[Guo"(2003)，AmJPathol,vol162:1083-93]。阶,殳I:新血管生成。血管生成经常帮助创伤愈合。然而，新血管，当不受控制时，通常是有缺陷的且促进渗漏、出血和炎症。通过耙向促血管生成GF来减少功能紊乱性和渗漏性BV，已证实具有一些延ICAMD进展的能力[Pauleikhoff(2005),Retina,vol25:1065-84.14andvanWijngaarden,CosterandWilliams(2005),JAMA,vol293:1509-13]。阶^敬II:血管成熟和药物脱每丈。完全的VEGF抑制作用似乎主要通过导致视网膜内和视网膜下水肿消退的抗渗透作用，而发挥其有利作用，因为实际的CNV损伤不会明显恢复[Presentation.atAngiogenesis2006Meeting.2006.BascomPalmerEyeInstituteMiami:Florida]。没有明显的CNV恢复，可能部分是因为新形成的血管由于周细力包的覆盖而成熟的结果。周细力包在血管组织的形成和维持中破坏了它们抑制血管生成的能力[BergersandSong(2005)，Neuro-oncol，vol7:452-64;YamagishiandImaizumi(2005),IntJTissueReact,vol27:125-35;Armulik,AbramssonandBetsholtz(2005)，CircRes,vol97:512-23;IshibashiWa/.(1995)，ArchOphthalmol,vol113:227-31]。对周细胞的聚集具有抑制作用的制剂可能破坏血管通道的形成和脉络膜新血管通道的成熟，因而维持了它们对抗血管生成剂的敏感性。血管网络的重塑涉及BV密度的调整以满足营养需求[GarianoandGardner(2005),Nature,438:960-6]。BV成熟期对应于新血管发4军作用^f旦还未获得周细月包覆盖的时期[Benjamin，HemoandKeshet(1998),Development,125:1591-8andGerhardtandBetsholtz(2003),CellTissueRes,2003,314:15-23]。这种延迟是重要的，它为根据视网膜或脉络膜的营养需求形成脉管系统的微调提供了一个可塑性窗(windowofplasticity)。生物活性脂质1-磷酸鞘氨醇(S1P)、VEGF、PDGF、血管生成素(Ang)以及其他生长因子(GF)促进血管的生长并向幼稚血管聚集平滑力几细力包(SMC)和周细胞，这促进了新生血管的重塑[AllendeandProia(2002)，BiochimBiophysActa,vol582:222-7;GarianoandGardner(2005),Nature,vol438:960-6;Grosskreutza/.(1999)，MicrovascRes，vol58:128-36;NishishitaandLin(2004),JCellBiochem，vol91:584-93andErberetal.(2004),FASEBJ,vol18:338-40.32]。周细胞很可能是在EC产生时由间充质前体细胞在原位分化产生的，或由动3永平滑力几细力包迁移并去分化而产生，周细力包与EC密切相关并插入(ensheath)EC，导致总体血管的成熟与存活[Benjamin,HemoandKeshet(1998)，Development,vol125:1591-8]。近来的研究表明细胞表面运输和细胞-细胞粘附分子N-钙粘蛋白的活化涉及S1P、以及SIP受体[Paik"a/.(2004)，GenesDev，vol18:2392-403]。N-4丐粘蛋白对于EC、周细胞和壁细胞(其促进稳定的血管床的形成)间的相互作用是重要的[GerhardtandBetsholtz(2003),CellTissueRes，vol314:15-23]。S1P1基因的整体缺失导致壁细胞插入新生BV的异常，而壁细胞插入新生BV在胚胎发育过程中对BV的稳、定性是必需的[AllendeandProia(2002)，BiochimBiophysActa,vol1582:222画7]。局部注射4十义于S1P1的siRNA抑制了肿瘤异种移植模型中血管的稳定性[Chae"a/.(2004)，JClinInvest,vol114:1082-9]。转基因小鼠研究表明VEGF和PDGF-B促进了新BV的成熟和稳定[Guo"(2003),AmJPathol,162:1083-93andGarianoaridGardner(2005)，Nature,vol438:960-6.50]。VEGF上调Ang画l(mRNA和蛋白质)[Asahara"a/.(1998),CircRes，vol83:233-40]。Ang-1通过周细胞在聚集和维持内皮周支持中发挥主要作用[[AsaharaW(1998)，CircRes,vol83:233-40]。VEGF的眼内注射促进了EC丛的周细胞覆盖[Benjamin,HemoandKeshet(1998),Development,vol125:1591-8]。PDGF隱B击夹失的小鼠胚胎击夹少微血管周细胞，这导致水肺、微动脉瘤和致死性出血[Lindahle"/.(1997)，Science,vol277:242-5]。鼠科的产前研究表明血管床成熟的所有VEGF刺激和PDGF刺激需要额外的信号。以上述SIP的转移活化为基础，这种因子可以是SlP[Erber"a/.(2004),FASEBJ,vol18:338-40]。血管稳定和成熟与可塑性减少和不存在VEGF的衰退和其他GF的消退以及对于抗血管生成治疗的抗性相关[ErberWa/.(2004)，FASEBJ，vol18:338-40andHughesandChan-Ling(2004)，InvestOphthalmolVisSci,vol45:2795-806]。BV对血管生成抑制剂的抗性是由最初稳定成熟血管的周细胞以及那些一经治疗就聚集到未成熟的血管的那些细胞贝武予的[Erber"a/.(2004),FASEBJ,vol18:338-40]。在插入未成熟的EC后，周细月包表达^f呆护EC不受促细月包凋亡剂(pro-apoptoticagents)作用的4卜4尝'〖生存活因子(Arg-1和，PDGF-B)。3.水肿和血管通透性CNV膜由有孔的血管EC组成(该有孔的血管EC趋向于将它们的血管内成分渗漏至周围空间内)导致视网膜下出血、渗出液和积液[GerhardtandBetsholtz(2003),CellTissueRes,vol14:15-23]。多年来，CNV组织本身以及最近—见网膜内新血管生成暗示是与AMD相关的视敏度(visualacuity)下降的原因。然而，现在认为，由血管通透性(VP)的提高与随后的血视网膜屏障(BRB)的分解而导致的黄斑水肺，在与AMD和其他眼部疾病相关的S见力丧失中发挥主要作用[HughesandChan-Ling(2004)，InvestOphthalmolVisSci，vol45:2795-806;FelinskiandAntonetti(2005),CurrEyeRes，vol30:949-57;JoussenWa/.(2003)，FASEBJ，vol17:76-8andStromW(2005),InvestOphthalmolVisSci，vol46:3855-8]。4.纤维化、纤维生成和瘢痕形成:规网膜下纤维化的形成导致对光感受器的不可逆的损伤和永久的视力丧失。只要新血管复合物保持完好，如在用抗VEGF剂治疗患者的情况下所表现的，视网膜下纤维化和将来的视力丧失的可能性就持续存在。在最新的兰尼单抗(RANINIZUMAB)的PRONTO研究中，发现那些丧失浮见力的患者是由于4见网膜下纤维化或RPE石皮裂而丧失一见力的[Presentation,atAngiogenesis2006Meeting.2006.BascomPalmerEyeInstituteMiami,Florida.]。可卩条^f氐成纟f纟,纟田月包渗透和胶原沉积程度的制剂可能是有价值的。成纤维细胞、特别是成力几纤维细胞，是在响应细胞损伤和炎症的瘢痕形成中的关4建性细月包成分[Tomasek"a/.(2002),NatRevMolCellBiol,vol3:349-63andViragandMurry(2003)，AmJPathol,vol163:2433-40]。成肌纤维细胞的胶原基因表达是重塑的标志并且是痕痕开J成戶斤'义、需的[Sunand\Veber(2000)，CardiovascRes，vol46:250-6andSunandWeber(1996),JMolCellCardiol,vol28:851-8]。SIP通过活化的成纤维细月包的迁移和增殖而促进创伤愈合，同时增力口了月交原的产生[Sun""/.(1994)，JBiolChem,vol269:16512-7]。由受损的细胞局部产生的SIP是与重塑和瘢痕形成相关的不适应的创伤愈合的原因。因此认为S1P抑制剂对于至少部分特征为异常的纤维生成或纤维化的疾病或病症中是有用的。在本文中，"纤维生成"定义为成纤维细胞过度的活性或数量，而"纤维化"定义为成纤维细胞过度的活性或数量，这导致过多的或不适当的胶原生产和瘢痕形成，生理组织结构的破坏和/或基质不适当的收缩，如视网膜脱离或其他导致器官功能障碍的过程中的病理学表现。B.其他疾病或病症S1P和LPA的生物活性4言号脂质的作用并不局限于眼部疾病和病症。因为在许多过程中包括新血管生成、血管生成、异常的纤维生成、纤维化和瘢痕形成、以及炎症和免疫反应中涉及生物脂质信号，认为这些生物活性脂质基于抗体的抑制剂在与一个或多个这些过考呈片目关的多种疾病和病症中是有用的。这些疾病和病症可以是系统寸生的(如系统性石更皮病)或局部^f立于一个或多个4争定的才几体部分或器官的(如皮肤、肺或眼睛)。C.生物活性信号脂质目前认为脂质和其衍生物是医学研究中的重要靶标，而不只是细胞膜中简单的结构成分或|3-氧化、糖酵解或其他代i射过程的能量来源。尤其是，一些生物活性脂质在动物与人体疾病中作为信号传导介质而发挥重要的功能。尽管原生质膜脂质的大多数只起结构作用，而它们中的小部分参与延緩细胞外刺激进入细胞内。"脂质信号传导，，是指任何的使用细胞膜脂质作为第二信使的多个细胞信号传导途径，也指脂质信号分子与其自身的特异受体的直接相互作用。脂质信号传导途径可被多种胞外刺激(从生长因子到炎症细胞因子)活化，调节细胞的命运(fatedecision),例如细月包凋亡、分化和增殖。对于生物活性脂质信号传导的研究是热门的科学探究的领域，因为已鉴别出越来越多的生物活性脂质，并鉴别了它们的作用。生物活性脂质的实例包括类二十烷酸(包括大麻素、白细月包三烯、前列^^素、脂氧素、环氧二十^1三烯酸、以及异二十;^克酸类(异花生酸类，isoeicosanoids))、非二十烷酸类大麻素介质、石岸脂及其衍生物例如磷脂酸(PA)和^寿脂酰甘油酯(PG)、血小板活化因子(PAF)和心肌磷脂，以及溶血磷脂例如溶血磷脂酰胆^咸(LPC)和多种溶血磷脂酸(LPA)。生物活性的信号脂质介质还包括鞘脂，例如鞘磷脂、神经酰胺、神经酰胺-l-磷酸、鞘氨醇、磷酸胆碱鞘氨西事(sphingosylphosphorylcholine)、二氣革肖氛醇、l-石粦f臾二氛華肖氛西孚(二氢-SlP)以及l-磷酸鞘氨醇。鞘脂类及其衍生物表现为一组对重要的细胞过程具有多效作用的胞外和胞内信号分子。生物活性信号脂质的其他实例包括磷脂酰丝氨酸(PS)、磷脂酰肌醇(PI)、磷脂酰乙醇胺(PEA)、甘油二酯(DG)、石危苷脂、神经节苷脂以及脑苷酯。D.溶血脂质溶血磷脂(LPL)也称作溶血脂质，是低分子量(通常小于大约500道尔顿)的脂质，它包含一个碳氢化合物骨架和包含磷酸基团的极性头基团。一些溶血脂质是生物活性信号脂质。医学上重要的生物活性溶血脂质的两个特定实例是LPA(甘油骨架)和S1P(鞘氨基醇骨架)。下面给出了选择的LPA、S1P、以及二氢S1P的结构。LPA^ft4)LPA(1S^LPA(1&苟IPA(1攻"LPA(1&C^SIP0ydc>S1PLPA不是一种分子体而是具有不同长度和饱和度的脂肪酸的内源结构变异体(或变体)的集合(Fujiwara"a/(2005)，JBiolChem,vol.280:35038-35050)。LPA的结构骨架来自以甘油为基础的磷脂，例如卵磷脂(PC)或磷脂酸(PA)。在溶血鞘脂诸如SIP的情况下，缺少神经酰胺骨架的脂肪酸。S1P、二氢S1P(DHS1P)、以及磷酸月旦石威革肖氛酉孚(sphingosylphosphorylcholine)(SPC)的结才勾骨架是以来源于鞘磷脂的鞘氨醇为基础的。LPA和S1P通过结合同类多^争膜结构域G蛋白偶联(GPCR)受体来调节多种细胞信号传导途径(ChunJ，RosenH(2006),CurrentPharmDes,vol.12:161-171andMoole腿rWH(1999),ExperimentalCellResearch,vol.253:230-238)。SIP受体分为SIP丄、S1P2、S1P3、S1P4和S1P5(以前为EDG國1、EDG画5/AGR16、EDG-3、EDG画6以及EDG-8)而LPA受体分为LPA、LPA2、LPA3(以前为EDG-2、EDG-4以及EDG-7)。这个家力矣的第四种LPA受体i人定为LPA(LPA4),并且也已经报道了这些溶血磷脂的其他公认的受体。E.l-磷酸鞘氨醇纟田月包^]亡(Maceykaa/.(2002)，BBA,vol1585:192-201andSpiegelS."a/.(2003),NatureReviewsMolecularCellBiology,vol4:397-407)。已经提出神经酰胺/鞘氨醇(CER/SPH)的水平与SIP之间的平衡4是供了一种可变调节才几制(rheostatmechanism)，它决定了细胞是直接进入死亡途径，还是保护细胞避免凋亡。可变调节枳i制的关4建调节酶是鞘氨醇激酶(SPHK)，它的作用是将促进死亡的生物活性信号脂质(CER/SPH)转换为促进生长的S1P。SIP有两种结果S1P可^皮S1P裂解酶降解，该酶将S1P裂解为^粦酸乙醇胺和十六醛，或者较为不常见的，S1P被S1P磷酸酶水解为SPH。SIP大量产生并储存在血小板中，血小板包含高水平的SPHK而缺少用于S1P降解的酶。当血小板活化时，分泌S1P。此外，认为其4也细胞类型，例如肥大细胞也能够分泌S1P。SIP—旦分泌就认为其以高浓度结合在载体蛋白例如血清白蛋白和脂蛋白上。发现S1P以高浓度存在于血浆中，已报道浓度在0.5-5pM的范围内。然而也已暗示了S1P主要的细月包夕卜、细月包内活性(见，如，SpiegelS,KolesnickR(2002)，Leukemia,vol.16:1596-602;Suomalainen,etal(2005),AmJPathol,vol.166:773-81)。细胞表面SIP受体的广泛表达允许SIP影响不同范围的细胞反应，包括增殖、粘附、收缩、运动、形态发生、分化、以及存活。这种反应类型似乎耳又决于细月包和组织系统中SIP受体的重叠表达或不同的表达(distinctexpression)才莫式。此外，进来已阐明了SIP和生长因子信号通路(包括血小板衍生生长因子(PDGF)、血管内皮生长因子(VEGF)、转化生长因子(3(TGFP)和石咸性成纤维生长因子(bFGF))之间的相互作用(参见例如Baudhuin，eta1(2004),FASEBJ，vol.18:341-3)。由于包括SIP的多种细胞过程的调节刈-于神经元信号传导、血管紧张度、创伤愈合、免疫细胞运输、复制、以及心血管功能具有特別的影响，其中认为改变S1P在这些系乡克中的内源水平会产生有害的影响，引发多种病理生理病症，包括癌症、心力衰竭、眼部疾病和感染以及自身免疫性疾病。我们提出一种用于治疗与AMD相关的CNV的潜在有效的方法是减少生物可利用的SIP的细力包外水平。申请人开发了一种鼠科的单克隆4元体(SPHINGOMAB，抗SIPmAb)，其对于SIP是特异的。SPHINGOMAB代表第一个成功制成的针对生物活性信号鞘脂靶标的单克隆抗体。SPHINGOMAB发挥分子海绵的作用，从胞外液体中选择性地吸收S1P,降低了S1P的有效浓度。它在生物基质中以皮克摩尔的亲和力(picomolaraffinity)选择性i也结合并中和SIP。我们提出SPHINGOMAB将去除眼睛中成纤维细胞、周细胞、以及内皮、炎症和免疫细月包重要的生长和存活因子，乂人而革巴向导致光感受器和视敏度丧失的多种AMD不适应的过程。同时靶向脉络膜新血管反应的多种成分的治疗具有比"单靶向"治疗更有效的潜能。如在本文中使用的，"l-磷酸鞘氨醇"或"SIP"是指l-磷酸鞘氨醇[鞘氨醇(sphingene)-l-磷酸；D-赤-l-磷酸鞘氨醇；l-磷酸鞘氨醇(sphing-4-enine-l-phosphate);(E,2S,3R)画2-氨基画3-羟基-十/\烷_4_烯氧基]碌酸；CAS26993-30-6]及其变异体、SIP和DHSIP(二氢l-磷酸鞘氨醇[l-磷酸鞘氨醇；[(2S,3R)-2-氨基-3-羟基-十八氧]磷酸；D-赤-二氢-D-l-磷酸鞘氨醇；CAS19794-97-9]以及磷酸胆石咸鞘氨醇。S1P和LPA的变异体，如在本文中使用的，分别包括SIP和LPA的类似物和书亍生物，与母体分子(parentmolecule)相比，发挥相似的作用，或被认为发挥相似的作用。越来越多的证据表明SIP参与与渗出性AMD相关的不适应的一见网力莫重塑的早期和晚期阶^殳。SIP具有显著的非VEGF依赖的促血管生成的作用。S1P还刺激多种细胞类型包括成纤维细胞、EC、周细月包和炎症细胞(参与;参出性AMD的多种不适应过程的相同的细胞)的迁移、增殖和存活。SIP与包括在渗出性AMD的发病枳j制中的VEGF、bFGF、PDGF以及其j也生长因子(GF)的产生和;舌化相关。最后，SIP可调节新生血管系统的成熟，该过程导致了乂于抗血管生成剂敏感性的丧失。抑制SIP的作用是渗出性AMD的有效治疗方法，它可纟是供比单独的抗VEGF方法重要的优势或可与抗VEGF方法发4军f办同作用而作用于最终导致与AMD相关的—见力丧失的复杂过程和多个步骤。越来越多的证据表明SIP是炎症事件中重要的调节因子[OliveraandRivera(2005)，JImmunol,vol.174:1153-8]。在凝固和炎症事件后，活化的血小板、中性粒细胞、巨噬细胞以及肥大细月包作为SIP的丰富来源[Yatomi"a/.(2000)Blood,vol96:3431-8]。由于这些细胞是炎症反应和组织损伤中的重要成分，SIP可通过控制炎症纟田月包的功肯巨来^周节这些事寸牛[Tezel(2004),TrendsMolMed，vol10:417-20]。由肥大细胞释放的SIP是在炎症的实验性动物模型中大多凄t反应的原、因[Jolly"a/.(2004),JExpMed，vol.199:959-70andJolly"a/.(2005)，Blood,vol.105:4736-42]。用SPHINGOMAB中和SIP可为限制有害的炎症反应提供有效的新方法，而炎症反应加剧了与AMD相关的CNV的眼部组织损害。多种证据表明S1P和受体的S1P补体在血管生成过程中发4军主要的调节^(乍用[AllendeandProia(2002),BiochimBiophysActa,vol.1582:222-7;Spiegel(1993),J.LipidMed，vol.8:169-175andArgraves"(2004),JBiolChem,vol279:50580-90]。首先，SIP促进DNA合成与局部和骨髓衍生的血管EC向新血管生成的位点的趋化性运动，同时诱导与早期BV形成一致的多细胞结构的分4匕[Leeefa/.(1999),BiochemBiophysResCommun，vol264:743-325andAnnabi""/，(2003)，ExpHematology,vol.31:640-649]。第二，S1P通过活化SlPi和S1P3，以及SIP诱导的EC粘附连接装置来促进血管EC的组装和完整性的形成和维持[PaikWa/.(2004),GenesDev,vol18:2392-403andLee"(1999)，Cell,vol99:301-12]。针对这些SIP受体的反义寡核苷酸减少SIP诱导的血管EC的聚集和细月包屏障的完整性[English,"a/.(1999),JHematotherStemCellRes，vol8:627-34andLee"a/.(2001),MolCell,vol8:693-704]。第三，已阐明由SIPi秀导的毛细血管形成是比bFGF或VEGF更有岁文的促血管生成刺激[Wangfl/.(1999)，J.Biol.Chem,vol274:35343-50andLee"(1999)，BiochemBiophysResCommun,vol264:743-325]。最后，已表明SIP具有与VEGF、EGF、PDGF、bFGF和IL-8的协同作用以促进体内血管网络的形成[Wang"a/.(1999)，J.Biol.Chem，vol274:35343-50]。SIP4黄向活化(trans-activate)EGF和VEGF2受体[Tanimoto,JinandBerk(2002),JBiolChem,vol277:42997-3001]而VEGF上调SIP受体[Igamshi"(2003),ProcNatlAcadSciUSA,vol100:10664-9]。用VEGF处理血管EC可明显4吏S1P1表达上调，并增强S1P介导的导致一氧化氮合酶(eNOS)内皮亚型活化的信号通路[Leeetal.(2001)，MolCell,vol8:693-704andTanimoto，JinandBerk(2002),JBiolChem，vol277:42997-3001andIgarashiandMichel(2001),JBiolChem,vol276:36281-8]。eNOS的活性在不同的细胞反应和重要的血管功能包括抑制细胞凋亡、抑制血小板聚集和血管生成中发挥关键作用[Kwonetal.(2001)，JBiolChem,vol276:10627-33;Huang(2003)，CurrHypertensRep,vol5:473-80;Dantas,IgarashiMichel(2003),AmJPhysiolHeartCircPhysiol,vol284:H2045画52;Rkitake(2002),ArteriosclerThrombVaseBiol,vol22:08-114andKimuraandEsumi(2003),ActaBiochimPol，vol50:49-59]。暴露于bFGF和SIP4寻至'J的血管纟吉冲勾比由单3虫暴露于bFGF而得到的血管结构分化更明显，表明SIP对于bFGF和VEGF发挥完全的活性可能是必需的[English"a/.(2000),FASEBJ，vol14:2255-65]。因此，SPHINGOMAB可通过中和协同促血管生成GF和乂人与CNV相关的炎症细胞的代谢性应激过程中可能产生的过量的S1P,来减轻异常的BV生长。SPHINGOMAB不<又才中制SIP诱导的EC迁移/渗透和BV形成，而且还通过它对SIP的作用而中和bFGF和VEGFi秀导的血管生成。SPHINGOMAB由于它中和SIP的能力，导致经SIP的多效作用的多种GF的中和，比单一靶向治疗具有更大的优势。通过SPHINGOMAB的SIP的直接中和与VEGF和PDGF-B的间接中和可防止周细胞的聚集、BV成熟并且减緩对于抗血管生成药物的抗性的形成。靶向周细胞，致在扩大或增强对于抗血管生成剂的易感性，它表现为在治疗具有活动的CNV损伤的患者方面引人关注的长期治疗方法并可促进血管复合物的萎缩[Erberetal.(2004),FASEBJ,vol18:338-40]。SIP帮助组织激动蛋白至皮质环中并加强月包内和细胞-基质的粘附[McVerryandGarcia(2005)，CellSignal,vol17:131-9andMcVenyandGarcia(2004),JCellBiochem，vol92:1075-85]。这些结构的变化与降低血管通透性相关[Hla(2004),SeminCellDevBiol,vol15:513-20]。已表明封闭SIP的功能增加了肾、肺系统和肿瘤中的血管通透性[LaMontagneWa/.(2006)，CancerRes,vol66:221-31;Sanchez"(2003),JBiolChem,vol278:47281-90andAwad"a/.(2006),AmJPhysiolRenalPhysiol,vol290:F1516-24]。然而，关于不同器官系统(例如脑和眼睛)中SIP的渗透性作用却了解4艮少。脑和可能眼睛中的导管EC形成比肺动脉EC，并且4艮可能比肾和肺瘤EC更力口紧密的、对流体和溶质更不可渗透的屏障[SchnitzerWa/.(1994)，BiochemBiophysResCommun,vol199:11-19]。分4匕的屏障功能有助于形成明显更多的焦点粘着复合体[Schnitzer"(1994)，BiochemBiophysResCommun,vol199:11-19]。才艮才居这些区另廿，SIP诱导的眼部血管通透性的变化可能比较没有影响。VEGF和PDGF可破坏血视网膜屏障(BRB)的完整'性SPHINGOMAB中和VEGF和PDGF的SIP冲黄向活化的能力可i正明它在减轻与AMD相关的黄斑水肺的有效性[SanchezWa/.(2003)，JBiolChem,vol278:47281-90;Saishin&a/.(2003)，JCellPhysiol,vol195:241-8and\%iores(2000)，GenPharmacol,vol35:233-9]。转基因小鼠过量表达VEGF表明在CNV的区域内发生BRB的分解，与在AMD和并唐尿病^L网月莫病变中所见到的类似[Vinores(2000),AdvExpMedBiol,vol476:129-38]。PDGF受体激酶的氺卩制剂减少了由前列腺素诱导的BRB分解所导致的渗漏[LindahlW(1997),Science,vol277:242扁5]。最后，如在本申"i青实施例中描述的，在鼠科的基质胶塞模型(Matrigelplugmodel)中所测定的，SPHINGOMAB减專5生物体内bFGF和VEGF的作用。SIP和成纤维细力包增殖及其4呆护细胞避免死亡成纤维细力包通过增加DNA合成来对SIP的处理作出反应；寿争染鞘氨醇激酶1(sphKl)的成纤维细月包显示细月包增殖增力口[HammerW(2004)，JCellBiochem，vol91:840-51]。与SIP对多种其他的成纤维细胞类型(Swiss3T3，肺和心脏)的作用相似，SlP可刺^t眼部成纤维细月包的增殖(以及随后的分化)。填加SIP可直4妄保护成纤维细月包不发生凋亡，而sphKl的抑制剂促进细月包凋亡[Olivera(1999)，JCellBiol,vol147:545-58]。SIP阻止细月包色素C释力文和随后的半月光天冬酵的-舌^f匕[OliveraW(1999)，JCellBiol,vol147:545-58andICang"a/.(2004),CellDeathDiffer,vol11:1287-98]。已确定sphKl上调Akt，因jt匕i周节Bcl-2家力矣成员[Limayea/.(2005)，Blood,vol105:3169-77]并避免成纤维细l包凋亡。S1P和成纤维细胞迁移SIP活化包括Rho的信号系统，产生由Rho/Rac/Cdc42系统控制的收缩性肌动蛋白丝组装，并导致细月包迁牙多的实际岁丈果[Radeff-HuangW(2004)，JCellBiochem，vol.92:949-66]。通过SIP对Rho和RhoGTPases的活化可能是眼部成纤维细胞迁移至创伤处的原因，并从而促进纤维化。SIP和成纤维细胞胶原的表达SIP促进静态成纤维细胞分4匕为活性成肌纤维细胞，其在瘢痕形成中表现为月交原表达增强[Urataetal.(2005)，KobeJMedSci，vol51:17-27]。在成纤维纟田胞增殖和向瘢痕区域迁移的同时，成纤维细胞沉积形成一个主要由骨桥蛋白和纤连蛋白组成的临时颗粒网全各[SunandWeber(2000),CardiovascRes,vol46:250-6]。当重塑进行时，临时基质^皮吸收且形成月交原网络[SunandWeber(2000),CardiovascRes,vol46:250-6]。我们已证实S1P促进成肌纤维产生胶原。TGFp，一种熟知的纤维化调节因子已表明上调多种促纤维化蛋白，将成纤维细胞转化为成肌纤维细月包并可能通过SIP肌动蛋白刺激炎症蛋白表达[SquiresW(2005)，JMolCellCardiol,vol39:699-707andButt,LaurentandBishop(1995),EurJCellBiol,vol68:330-5]。TIMP1(TGF(3刺j:敫的成纤维细月包向成月几纤维细胞的分化中涉及的信号分子)的上调是由针对sphKl的siRNA去于闭的[Yamanaka"a/.JBiolChem.2004Dec24:279(52):53994一4001]，表明SPHINGOMAB可减轻TGFP的促纤维化作用，并且减轻S1P本身的纤维生成作用。通过S1P的中和最小化不适应的瘢痕形成可以是有益的并通过限制一见网l莫下纤维化的范围和随后的光感受器损害来阻止不可逆的视敏度丧失。F.溶血磷酸(LPA)早已经知道LPA是在真核细月包和原核细月包中石粦脂生物合成的前体，但近年来LPA才作为由活化的细胞、特别是血小板快速产生并释放的信号分子，通过对特异细胞表面受体作用来影响把细胞(参见，例如，Moole謹rwa/.(2004),BioEssays，vol.26:870-881andvanLeewen"a/.(2003)，BiochemSocTrans,vol31:1209-1212)。除了在内质网中合成并加工为更加复杂的磷脂外，LPA可通过细月包活化后水解预先存在的石粦脂而产生；例如，sn-2位由于脱酰作用通常丢失脂肪酸残基，仅留下sn-3羟基酯化为脂肪酸。此外，产生LPA的关4建酶，自分泌运动因子(溶血PLD/NPP2),可为致癌基因的产物，因为许多肺瘤种类上调自分泌运动因子(Brindley(2004)，JCellBiochem，vol.92:900-12)。已才艮道LPA在人体血浆和血清中的浓度，包括〃使用灵敏和特异的LC/MS方法测定的(Bakeretal.(2001),AnalBiochem，vol292:287-295)。例如，在允许置于25。C下1小时的新鲜制备的人体血清中，LPA的浓度评估为大约1.2pM,其中LPA类似物16:0、18:1、18:2、以及20:4为主要的种类。相似地，在允许置于25°C下1小时的新鲜制备的人体血浆中，LPA的浓度i平估为大约0.7pM,其中18:1、18:2是LPA主要的种类。LPA影响大范围的生物反应，包括"i秀导细月包增殖、刺激细月包迁移和神经突回缩、关闭间隙连接、甚至趋化粘菌(Goetzl.wa/.(2002)，ScientificWorldJournal,vol2:324-338)。随着越来越多的细胞体系才企-验LPA应答性，关于LPA生物学的知识体系(bodyofknowledge)继续增长。例如，已知除了刺激细胞生长和增殖外，LPA促进细胞拉伸和细胞表面纤连蛋白结合，这在创伤修复和再生中是重要过程(Moole腿r"a/.(2004),BioEssays,vol.26:870-881)。近来，已将抗细胞凋亡活性归因于LPA,并且近来已才艮道过氧化物酶体增殖受体Y是LPA的受体或輩巴标(Simon"(2005)，JBiolChem，vol280:14656-14662)。近来，申请人已开发了针对LPA的多种单克隆抗体，如抗SIP抗体，抗LPA抗体可中和多种LPA并减轻它们的生物学和药物学作用。对于眼部疾病和病症的应用，可预期抗LPA抗体在以下过禾呈中发挥治疗作用。CNV和BV成熟自分泌运动因子，一种分泌的负责产生LPA的溶血磷脂酶D，对于在发育过程中血管的形成是重要的[vanMeeteren"a/.(2006),MolCellBiol,vol26:5015-22]。》匕夕卜，不十包和LPA被认为是血管平滑肌细胞去分化诱导的主要贡献者[Hayashia(2001),CircRes,vol89:251-8]。水肿和血管通透性LPA诱导小鼠体内的血浆渗出和组胺释^:[Hashimotoetal.(2006),JPharmacolSci,vol100:82-7]。炎症LPA作为炎症调节介质在人体角膜上皮细胞中发挥作用[Zhang"a/(2006)，AmJPhysiol,June7]。LPA参与角膜创伤愈合[LiliomK"/(1998)，Am.J.Physiol，vol274:C1065-C1074]并刺;敫晶;)犬体纟且织中ROS的释方文[Rao(2004),MolecularVisions,vol10:112-121]。LPA还可再活化兔角膜中的HSV-l[Martinaa/.(1999):MolecularVisions,vol5:36-42]。纤维化和瘢痕形成LPA在皮肤成纤维细胞中通过ERK依赖的途径抑制TGFP介导的I型月交原mRNA稳定性的刺激[SatoW(2004),MatrixBiol,vol23:353-61]。jt匕夕卜，LPA具有一些通过刺5效胶原基因表达和成纤维细胞的增殖的直接的纤维生成作用[Chen，Wa/.(2006)FEBSLett.580(19):4737-45]。3.定义在详细描述本发明之前，将对本发明上下文中使用的多个术语进行定义。除这些术语之外，如需要，在说明书中其他地方对其他术语进行定义。如果本文不另外定义，在本说明书中使用的技术术语将具有该领域公认的含意。"免疫诱导部分(或免疫原性部分，immune-derivedmoiety)，，是指任意的多克隆抗体或单克隆抗体或抗体片断、变异体、或衍生物。"抗S1P抗体"或"与S1P反应的免疫诱导部分"是指任意的结合S1P的4元体或#元体书亍生分子(antibodyderivedmolecule)。"抗LPA抗体"或"与LPA反应的免疫诱导部分"是指任意的结合所有LPA或一个或多个LPA的抗体或抗体书t生分子。"生物活性脂质"是指脂质信号分子。通常，当生物活性脂质发挥其信号作用时，不存在于生物膜中，也就是说尽管这种脂质种类可存在于生物膜的一些位点(例如，细胞膜、细胞器膜等等)，当与生物膜结合时，它不是"生物活性脂质"而是"结构脂质"分子。生物活性脂质与结构脂质(如，膜结合磷脂)的区别在于它们介导胞外和/或胞内信号传导并因而通过调节分化、迁移、增殖、分泌、存活、以及其他过程而参与控制多种类型细胞的功能。在体内，可在细胞外液中发现生物活性脂质，在那里它们可与其^f也分子，例如血清蛋白诸如白蛋白和脂蛋白复合，或以"自由"形式，例如，不与其他分子类型复合。作为胞外调节因子，一些生物活性脂质通过活化膜结合的离子通道或G蛋白偶联受体来改变细胞信号传导，然后又活化复杂的信号系统而导致细胞功能或细胞存活的改变。作为月包内调节因子，生物活性脂质可通过直4妄与月包内成分，例如酶和离子通道相互作用而发挥其作用。生物活性脂质的典型实例包括LPA和S1P。术语"治疗剂，，是指一种制剂，能够减轻血管生成和/或新血管生成，如CNV和BV成熟；与眼部疾病和病症相关的或为其部分基础病理学的水肺、血管通透性和纤维化、纤维生成和瘢痕形成。术语"联合治疗"是指治疗方案，该方案包括提供至少两种不同的治疗以获得必要的治疗效果。例如，一种联合治疗可包括给予两种或多种化学上不同的活性成分，例如，抗LPA抗体和抗S1P抗体。可替换地，联合治疗可包括给予与生物活性脂质反应的免疫诱导部分以及使用一种或多种其他化学治疗制剂。眹合治疗可^l换地包括与给予其他治疗(例如放射治疗和/或手术)一起而使用抗脂质抗体。另外，联合治疗可包括与一种或多种其他生物制剂(如，4元VEGF、TGFP、PDGF、或bFGF齐'J)一起乡会予4元月旨质才元体。在使用两种或多种化学上不同的活性成分的联合治疗的情况下，应理解为活性成分可能作为部分相同组分或不同组分给予。当作为分开的组分给予时，该组分包括不同活性成分的组合物，可在相同或不同时间、以相同方式或不同方式、4吏用相同^合药方案或不同给药方案，所有都根据特定的情况要求的并且由主治医生确定。同样地，当一种或多种抗脂质抗体类型，例如，抗LPA抗体，单独或与一种或多种化学治疗剂联合，可与例如方文射和/或手术结合，可在手术或放射治疗前或后给药。"单一治疗"是指基于给予一种治疗上有效的化合物的治疗方案，无i仑其是单次给药还是随时间多次给药。根据本发明的"可取得专利"的组合物、方法、机器、或制造的制品(articleofmanufacture)是指在进4亍分析时该主题满足所有的可取得专利的法定要求。例如，关于新颖性，非显而易见性等等，如果后来的研究表明一项或多项片又利要求包括一个或多个不符合新颖性、非显而易见性等的实施方式，该受"可取得专利"实施方式的定义限制的权利要求，特别排除非专利性的实施方式。同样，这里所附权利要求应解释为既提供了最大的合理的范围又保护了它们的有效性。另外，从本申请提交或作为专利发行之时，如果可取得专利的一条或多条法定要求修改，或者用于评估是否满足可取得专利的特定法定要求的标准发生改变，一项或多项所附;f又利要求的有效性得到质疑之时，在这些情况下，权利要求应这样解释(l)保护了它们的有效性并且(2)提供了最大的合理的解释。术语"药学上可接受的盐类"是指保留了本发明的制剂和化合物的生物有效性和特性的盐类且其并非是生物学上的或不需要的。在许多情况下，本发明的制剂和化合物能够借助带电基团例如，带电氨基和/或羧基或与其类似的基团形成酸和/或石咸盐。药学上可"l妄受的酸加成盐可由无机酸和有机酸制备，而药学上可接受的石咸加成盐可由无机碱和有机碱制备。关于药学上可接受的盐类的综述(参见Berge,etal.(1977)J.Pharm.Sci.，vol.66，1画19)。术语"分开的"、"纯化的"、"分离的"等等，是指包含在样品寸呆存管中的冲羊品的一个或多个组分净皮或已经净皮物理地M人管中存在的一个或多个其他样品组分中去除，或在其中^皮稀释。在分离或纯化过程中可被去除或稀释的样品组分包括化学反应产物、未反应的化学成分、蛋白质、碳水化合物、脂质以及未结合的分子。本文中在多种情况下使用的术语"种类"，例如特定种类的化学治疗剂。在每种情况下，该术语是指在特定情况下所提及的一类在化学上4皮此相同的一群分子。"特异地结合"和"特异的结合"等是指两种分子间特异的、非随才几的相互作用，这种相互作用依赖于结构、疏水性/亲水性、和/或静电特性的存在，其允许分子间进行适合的化学或分子相互作用。这里，"稳定的"是指两种分子间的相互作用(例如，抗LPA或抗SIP抗体与其耙标生物活性脂质的结合)，这种相互作用足够强可保持这些分子用于所需的目的或处理。"受试者，，或"患者"是指通过用本发明的分子对其治疗可以见岁文的动物。该动物可具有一种疾病或病症、或具有患一种疾病或病症的危险性或祐^人为具有或具有患一种疾病或病症的危险'1"生，该疾病或病症可用本发明的组合物和/或方法来治疗。可4艮据本发明治疗的动物包括脊推动物，其中诸如牛、犬、马、猫、绵羊、猪、以及灵长类(包括人和非人灵长类)的哺乳动物为特别优选的实例。"治疗有效量"(或"有效量")是指活性成分的量，例如根据本发明的制剂当给予受试者或患者时，足以使治疗有效。因此，根据本发明的组合物的治疗有效量的组成可由本领域中普通技术人员容易地确定。在眼部治疗的情况下，"治疗有效量"是产生与治疗眼部疾病或病症相关的一个或多个参lt(包4舌与眼部疾病或病症相关的一个或多个基因的表达的增加或减少、细胞凋亡或其他细胞死亡^4圣的诱导、症状的临床改善、异常的新血管生成或炎症的减轻等等)的客观的可测量到的变化。当然，治疗上有效量将才艮据被治疗的特定受试者和病症、受^式者的体重和年龄、疾病病症的严重程度、选择的特定化合物、所要遵循的给药方案、给药的时间、给药的方式等等而变化，所有这些可由本领域中普通技术人员容易地确定。可以i人为在联合治疗的情况下，特定活性成分的治疗上的有效量的组成可与单一治疗给予的活性成分的治疗上的有效量的组成不同(即，仫使用一种化学分子作为活性成分的治疗方案)。术语疾病或紊乱的"治疗"或"处理"，包纟舌防止或避免疾病或紊乱(即使临床症状不发展)；抑制疾病或紊乱(即阻止或减轻临床病症的发展；和/或緩解疾病或紊乱(即导致临床病症的消退)。正如理解的，并非在任何情况都可区分"阻止"和"减低"疾病或紊乱，因为最终诱导的一个事件或多个事件可能是未知的或潜伏的。因此，术语"预防"将理解为其构成一种包才舌"阻止"和"减轻"二者的"治疗"。术语"治疗"因此包4舌"预防"。术语"治疗方案"是指使用化学治疗药物、放射治疗、手术、基因治疗、DNA疫苗禾口治疗、包括siRNA治疗的基于反义的治疗抗血管形成治疗、免疫治疗、骨髓移植、适体和其他生物体例如抗体和抗体变异体(或变体)、诱骗受体以及其他基于蛋白质的治疗来治疗疾病或紊^L。
发明内容才艮据本发明，提供了通过给予药物组合物用于治疗眼部疾病或病症的方法，该药物组合物包括与生物活性脂质反应的免疫i秀导部分(如抗体)，为了减小有效浓度因此生物活性脂质完全或部分地抑制其引发不需要的效果。在一些实施例中，免疫诱导部分为单克隆抗体或片断、变异体或其衍生物。在一些实施例中，免疫诱导部分可与溶血脂质，例如S1P或LPA反应。还提供用于减少或预防异常的纤维生成、纤维化或瘢痕形成；炎症；或异常的新血管生成；调节眼部的外科手术和外伤创伤愈合反应；或用于减弱眼部免疫反应的方法。进一步提供了用于降低生物活性脂质的有效的眼部浓度或活性的方法。还提供了使用可与生物活性脂质(例如溶血脂质S1P或LPA)反应的免疫"i秀导部分治疗石更皮病的方法。典型的生物活性脂质包括鞘脂类及其变异体，例如1-磷酸鞘氨醇(S1P)、鞘氨醇、磷酸胆碱鞘氨醇、二氢鞘氨醇。其他生物活性溶血脂质包括溶血磷酸酸(LPA)及其变异体。本发明的另一个方面涉及药物组合物或兽药组合物，包括给予眼部的那些组合物，该组合物包括载体和分离的免疫诱导部分，例如可与生物活性脂质反应的单克隆抗体或抗体片断、变异体、或衍生物。优选的载体，特别是当该组合物意在人体内为了治疗使用时，它包括药学上可接受的那些载体。对于非人体的治疗应用(例如，在伴生动物、家畜、鱼类、或家禽的治疗中)，可^f吏用兽医上可接受的载体。才艮据本发明的免疫诱导部分的示例性给药途径，优选为作为治疗组合物的一部分，包括系统(或全身性)给药、非肠道给药(例如，通过经静脉、肌内、或皮下途径的注射)、经皮肤、皮内或经粘膜给药、眼内或眼周注射、粘膜或局部给药或通过吸入给药。在以下部分，将对本发明的这些方面和其他方面以及本发明的实施方式进4亍更力O详纟田的i寸{仑。本专利申请包含至少一个彩色制图。一旦要求和支付必要的费用时，可提供具有彩色附图的本专利申请的拷贝。图1:SPHINGOMAB减少眼部损伤中CNV和瘢痕形成。用SPHINGOMAB或同型匹配的非4争异mAb治疗小鼠。CNV损伤由玻璃膜的激光破裂诱导。(A)示出了来自每个治疗组的用若丹明(rhodamine)和荒麻凝集素I(R.communisagglutininI)染色的用于显示血管生成的损伤的图和典型图像，(B)示出了来自每个治疗纟且的用曼力，氏三色法(Masson'sTrichrome)染色的用于显示月交原瘢痕形成的损伤的图和典型图像。图la示出了SPHINGOMAB在激光诱导的玻璃膜破裂后14天和28天显著减弱了脉络膜的新血管生成。图lb示出了SPHINGOMAB在激光诱导的玻璃膜破裂后28天显著降低了与CNV损伤相关的纤维化。图2:通过i秀导HUVEC管的形成和迁移，SIP促进新血管生成，并通过SPHINGOMAB被减少。图A:4妄种在基质胶且培育6小时以评^f介血管形成的HUVEC的显樣t照片。图B:在基质胶细胞侵染室(细胞培养小室)中，用1|liMSIP士SPHINGOMAB(lpg/ml)处理HUVEC6小时。迁移至基质月交膜的细胞数量以5个独立的区域计凄t。图3:SPHINGOMAB中和SIP、VEGF、bFGF诱导的新血管生成。A:来自基质胶栓子士GF的典型FITC染色的BV。B:SIP刺激EC渗透。C:来自由VEGF或bFGF刺激的基质月交栓子的相对荧光定量，作为新血管生成的指示。当用lmg/kg或25mg/kg的SPHINGOMAB系统性治疗小鼠时，SIP、VEGF与bFGF的作用被抑制。图4:SPHINGOMAB中和SIP刺激的瘢痕形成。成纤维细胞为血清饥J我的，然后用0、0.1、0.5或ljaMS1P+/-l|ug/mlSPHINGOMAB处理12-24小时。SIP刺激Swiss3T3成纤维细月包的增殖，如3H胸腺嘧咬核香掺入法测量的(A)，在划痕实验中(scratchassay),刺激了鼠心脏的成纤维细胞的迁移(B)，在来自表达月交原GFP的转基因小鼠的分离的心脏成纤维细胞中胶原基因表达(相对荧光)(C)并且通过降低的细胞增殖和提高的a-SMA表达所测量的WI-38细胞分化为成肌纤维细胞(D);SPHINGOMAB中和了SIP的每种作用。SPHINGOMAB降低了永久性心肌梗塞的鼠类模型体内的血管周纤维化(E)。图5.S1P促进了眼部上皮细胞和成纤维细力包转〗匕为可收缩的、瘢痕组织形成的成肌纤维细胞。SIP对多种人体眼部细胞系的成肌纤维细胞转化的作用进行了分析。发现S1P刺激人视网膜色素上皮细胞(图5A)和人结膜成纤维细胞(图5B)产生a平滑肌肌动蛋白(a-SMA;成肌纤维细胞标记)。这些凄t据第一次表明，SIP是促进眼部上皮细胞和成纤维细胞转化为可收缩的产生瘢痕组织的成肌纤维细胞的因子之一。还才企测了S1P对于血纤维蛋白溶酶原活化剂的抑制剂(PAI-1)在人结膜成纤维细胞中的表达的效果。增加的PAI-1的表达与连4妾组织的蛋白水解的降解作用的减少相关并且在多种包括瘢痕形成增加的纤维化疾病中净皮上调。如图5C中所示，S1P促进了剂量依赖方式(dose-independentmanner)的PAI-1的表达。图6:SPHINGOMAB降低了体内免疫细胞创伤渗透。对小鼠实施了Ml,手术后用盐或25mg/kgSPHINGOMAB处理48小时，然后在第四天处死。SPHINGOMAB减少了巨p藍细月包(A)和月巴大细胞(B)渗透入创伤。数据表现为盐处理数值的成倍降低。图7:SPHINGOMAB对SIP高度特异。基于竟争性EUSA的曲线图表明与其他生物活性脂质相比，SPHINGOMAB对SIP的特异性。SPHINGOMAB表明与鞘氨醇(SPH)、SIP或溶血石舞酸(LPA)的直接代谢前体、与SIP在结构上和功能上相似的重要的胞外信号分子不发生交叉反应。SPHINGOMAB不识别其他结构上类似的脂质和代谢物，包括神经酰胺-l-磷酸(ClP)、二氢鞘氨醇(DH-SPH)、磷脂酰丝氨酸(PS)、石粦脂酰乙醇胺(PE)、或鞘石粦脂(SM)。SPHINGOMAB与二氩1-磷酸鞘氨醇(DH-S1P)发生交叉反应，与石粦酸胆》咸鞘氨醇(SPC)在相对小的程度上发生交叉反应。SPHINGOMAB对SIP的亲和力(Kd)<100pM，远高于大多凄t治疗抗体，特别是其他分子海绵。具体实施方式1.化合物术语"免疫i秀导部分"包括抗体(Ab)或免疫^求蛋白(Ig),是指免疫球蛋白基因来源的、模拟或编码的肽、多肽的任意形式，或能够结合抗原或表位的这种肽或多肽的片断[参见，如，Immunobiology,5thEdition,Janeway，Travers,Walport,Shiomchiked.(editors),GarlandPublishing(2001)]。在本发明中，该抗原是生物活性的脂质分子。抗体分子或免疫球蛋白为较大的糖蛋白分子，具有大约150kDa的分子量，通常由两种不同类型的多肽《连组成。一种多肽链，称为"重，，链(H)，大约为50kDa。另一个多肽，称为"轻"链(L),大约为25kDa。每个免疫J求蛋白分子通常由两条重《连和两条轻4连组成。两条重链通过二石克4建互相连4妄，二石JU建的凄t量在不同免疫球蛋白亚型的重链之间变化。每条轻链通过一个共价二碌u4定与一条重链连接。在任意给定的天然存在的抗体分子中，两条重链和两条轻链是同样的，具有两个同样的抗原结合位点，并因此被称为是二价的，即具有同时结合两个相同分子的能力。来自任意脊推动物种的抗体分子的"轻"链可归为基于其恒定区的氨基酸序列的两种明显不同的类型，K(k)和X(l)中的一种。轻链的两种类型的比例在种与种间变^R:。作为举例方式，k与l的比例的平均值在鼠中是20:1，在人中是2:1而在牛中是1:20。来自任意脊推动物种中的抗体分子的"重"链可归为基于其恒定区的氨基酸序列的五种明显不同的类型中的一种，称为同种型。一些同种型具有多种亚型。免疫球蛋白的五种主要类型为免疫球蛋白M(IgM)、免疫王求蛋白D(IgD)、免疫^求蛋白G(IgG)、免疫球蛋白A(IgA)、以及免疫球蛋白E(IgE)。IgG是最丰富的同种型且具有多个亚型(在人类中IgGl、2、3和4)。Fc片断和4交链区在不同的同种型抗体中有所不同，因而确定它们的功能特性。然而，域的整体组织在所有同种型中是类似的。术语"可变区，，是指抗体分子的N-端部分或其片断。通常，四条链中的每一个在其氨基端部分具有有助于抗体结合位点的可变(V)区，且具有决定同种型的恒定(C)区。轻链通过许多非共价相互作用以及二石克4建与重链结合且抗体分子的每个臂中的重链和轻链的V区配对从而产生两个相同的抗体结合位点。人们认为一些氨基酸残基在轻链和重链的可变区之间形成一个界面[参见Kabat""/，(1991)，SequenceofProteinsofImmunologicalInterest,FifthEdition,NationalInstituteofHealth,Bethesda,Md.andClothiad(1985),J.Mol.Biol，vol186:651]。值得注意的是，变异性并非均匀地分布在抗体的可变区中，而是集中在三个部分，称为"互补决定区，，(CDR)或"高变区，，，二者均存在于轻链和重链的可变区中。可变区的较高^f呆守部分称为"框架区"(FR)。天然重链和轻链的可变区均包括由三个CDR连接的四个FR区。每条链中的CDR通过FR区、与来自另一条链的CDR紧密靠近地保持在一起，形成了抗体的抗原结合位点[参见Kabata/，(1991)，SequenceofProteinsofImmunologicalInterest,FifthEdition,NationalInstituteofHealth,Bethesda,Md.]。6CDR均有助于抗体分子对抗原的结合特性。然而，即使单个可变区(或^f又包含三个对抗原特异的CDR的一半Fv)具有识别和结合抗原的能力[参见Pluckthun(1994)，inThePharmacologyofMonoclonalAntibodies,vol.113，RosenburgandMooreeds.,Springer-Verlag，NewYork,pp.269-315]。术语"恒定区"是指抗体重链或轻链的C-端区。通常，恒定区不直接参与抗体分子结合抗原的特性，但表现多种效应器功能，例如抗体参与抗体依赖的细胞毒性。这里，"效应器功能"是指通过Fc区和免疫系统蛋白之间的分子相互作用聚集的免疫细胞介导的抗体的不同生理步文应(如调理作用、细月包溶解、月巴大纟田月包、嗜碱性粒细胞和嗜酸性粒细力包脱粒，以及其他作用)。重链的同种型决定抗体的功能特性。它们不同的功能特性由重链的羧基部分所才是供，此处它们不与轻链结合。如在本文中使用的，"抗体片断"是指完整抗体的一部分，包括抗原结合位点或完整抗体的可变区，其中该部分可无完整抗体的Fc区的重链恒定区(例如，CH2、CH3、以及CH4)。可4齐换地，重链恒定区(例如CH2、CH3以及CH4)部分可包括在"抗体片Fab'、F(ab')2、Fd以及Fv片断；双链抗体；三链抗体；单链抗体分子(sc-Fv);樣i型抗体、纳米抗体以及由抗体片断形成的多特异抗体。通过举例方式，Fab片断还包含轻链的恒定区和重链的第一恒定区(CH1)。术语"变异体(或变体)"是指与抗体的天然氨基酸序列至少有一个氨基酸残基或修饰不同的氨基酸序列。天然的或亲本的或野生型氨基酸序列是指在自然界中发现的抗体的氨基酸序列。抗体分子的"变异体(或变体)"包括，4旦不限制于，在轻链和/或重链的可变区或恒定区，包4舌高变区或CDR区、Fc区、Fab区、CHi区、CH2￡、CH3区以及4交链区中的变化。术语"特异的"是指抗体与其目标表位选择性结合。抗体分子可通过在纟合定的环境下通过比4交抗体与所需抗原的结合和抗体与无关的抗原或相似抗原或抗原混合物的结合，而4全测抗体分子结合的特异性。优选地，才艮据本发明的抗体将缺少与无关抗原、甚至目标抗原的类似物的明显结合。这里，术语"抗原"是指^^皮抗体分子或结合抗原的免疫i秀导部分识别并结合的分子。由抗体结合的抗原的特异部分称为"表位"。"半抗原"是指在多数情况下，只有当与载体分子(例如，蛋白质、聚乙二醇(PEG)、胶体金、石圭^^等等)连接时才引起免疫反应(即像抗原发挥作用)的一种小分子。载体可以是自身也不引发免疫反应的物质。使用术语"抗体"是指其最广泛的含义，并且包括单克隆、多克隆、多特异性(例如，双特异的，其中抗体的每个臂可与不同的表位或相同或不同的抗原反应)、樣t型抗体、复共辄对配合物(heteroconjugate)、双链抗体、三链抗体、嵌合抗体、和合成抗体，以及具有所需结合特性和/或生物学活性的特异结合抗原的抗体片断。术语"单克隆抗体"(mAb)是指抗体、或相似抗体群，其由基本上同种的抗体群获得，并且不能解释为其要求通过任何特定的方法来制备抗体。例如，单克隆抗体可由杂交瘤细胞方法(首次由KohlerandMilstein(1975),Nature,vol256:495-497描述)、或重组DNA方法制4寻。术语"嵌合"抗体(或免疫球蛋白)是指一种包括重链和/或轻链分子，该重链和/或轻链与来源于一个特定种或属于特定抗体类型或亚类的抗体中的相应序列相同或同源，该链的剩余部分与来源于另一种或属于另一抗体类型或亚类的抗体、以及这种抗体的片断(只要它们表现所需的生物活性)中的相应序列相同或同源[Cabillyef(1984),infra;Morrison"/.,Proc.Natl.Acad.Sci.U.S.A.81:6851]。术语"人源化抗体"是指包含来自非人(如，鼠科)抗体以及人抗体序列的抗体形式。人源化抗体可包括保守的氨基酸的取代或来自相同或不同种的非天然的残基，这不明显改变它的结合和/或生物活性。这种抗体为嵌合抗体，包含来源于非人免疫球蛋白的最小序列。对于多凄t部分，人源化抗体为人免疫球蛋白(受者抗体)，其中来自受者的互补决定区(CDR)的残基被来自非人种(供者抗体)例如小鼠、大鼠、骆驼、牛、羊或兔具有所需特性的CDR残基取代。此外，人源化抗体可包括既不能在受者抗体也不能在引入的CDR或框架序列中发现的残基。进行这些修饰以进一步改进和优化抗体的性能。因此，通常人源化抗体将包括至少一个，以及一方面两个可变区的全部，其中与非人免疫球蛋白对应的全部高变环或高变环中的全部与全部FR区或基本上全部FR区为人免疫球蛋白序列。人源化抗体选择性地还将包4舌免疫球蛋白恒定区(Fc)的至少一部分，或人免疫5求蛋白的至少一部分。参见，如，Cabillye/"/.,U.S.Pat.No.4，816，567;Cabilly"a/.，EuropeanPatentNo.0，125，023Bl;Boss"a/.，U.S.Pat.No.4,816，397;Boss"EuropeanPatentNo.0,120,694Bl;Neuberger,M.S."WO86/01533;Neuberger,M.S."<a/.,EuropeanPatentNo.0，194,276Bl;Winter，U.S.Pat.No.5,225,539;Winter,EuropeanPatentNo.0，239，400Bl;Padlan,E.A.a/.，EuropeanPatentApplicationNo.0,519,596Al;Queen&a/.(1989)Proc.Nat'lAcad.Sci.USA,vol86:10029-10033)。术语"双特异抗体"是指具有与至少两个不同的表位结合特性的抗体、或单克隆抗体。在一个实施方式中，表位来自相同的抗原。在另一个实施例中，表位来自两个不同的抗原。制备只又特异抗体的方法在本领域是已知的。例如，双特异抗体可使用两种免疫3求蛋白的重链/轻链对的共表达而重组制备。可替换地，双特异抗体可使用化学4定合而制备。双特异抗体包括双特异的抗体片断。术语"复共轭对配合物抗体"是指两个共〗介连^妄的抗体。这种抗体可使用合成蛋白化学中的已知方法，包括使用交联剂制备。如本文中^f吏用的，术语"配合物"是指由一个或多个抗体片断或与一个或多个聚合物分子结合的部分共Y介连接形成的分子。术语"生物活性的"是指能够结合所需表位，并在某些方面发挥生物学作用的抗体或抗体片断。生物学作用包括，4旦不局限于生长信号的调节、抗细胞凋亡信号的调节、细胞凋亡信号的调节、效应器功能级联的调节、以及其他配体相互作用的调节。术语"重组DNA"是指表达由人设计、创造、或^f奮饰的核酸和基因产物。"重组"多肽或蛋白是通过重组DNA技术，例如由外源DNA结构(编码所需的多肽或蛋白质)转化的细胞制成的多肽或蛋白质。"合成"多肽或蛋白质是通过化学合成法制备而成的。术语"表达盒"是指能够在与这种序列相容的宿主中，影响结构基因(即蛋白编码基因，例如本发明的抗体)表达的核苷酸分子。表达盒包4舌至少一个与多肽编石马序列，以及可选拷，i也，与其〗也序列例如转录终止信号，可4喿作地连4妾的启动子。还可4吏用另外的影响表达必需的或有益的调节元件，例如增强子。因此，表达盒包括质粒、表达载体、重组病毒、任意形式的重组"棵露DNA"载体等等。2.应用本发明致力于使用一种或多种改变不需要的生物活性脂质、或其前体或^^射物的活性或浓度的一种或多种治疗剂，治疗或预防眼部疾病和病症的《且合物和方法。本发明的治疗方法和症且合物通过改变特定的不需要的生物活性脂质的有效浓度，即完全的、相对的、有效的和/或可获得的浓度和/或活性而起作用。降低生物活性脂质的有效浓度可被称为"中和"靶标脂质或其不需要的作用，包括下游作用。这里，"不需要的"是指由于其在疾病过程中例如作为信号分子参与，而为不希望的生物活性脂质，或指当其过量时促成疾病的生物活性脂质的不希望的量。不希望^皮任何特定理论所束缚，i人为不适合的脂质例如S1P和/或LPA和/或它们的^R^射物或下游步文应器的浓度，可导致或促成多种眼部疾病和紊乱的形成。同样，该组合物和方法可用于治疗这些眼部疾病和紊《L,尤其是通过减少纟争定目标脂质，例如S1P和/或LPA的有效体内浓度。特别地，认为本发明的组合物和方法在治疗至少部分特征为异常的新血管生成、血管生成、纤维生成、纤维化、瘢痕形成、炎症、以及免疫反应的眼部疾病中是有用的。下面对4艮据本发明4寺治疗的多种类型的眼部疾病的实例进行描述。可以理解许多疾病和病症的特征在于，至少部分地，在于多种病理作用(例如，病理的新血管生成和瘢痕形成)，并且本文提供的分类是为了描述方便并不限制本发明。与病理性新血管生成相关的缺血性^L网力莫病变和以一见网力莫外层的和或一见网膜下的膜形成为特4正的疾病缺血性视网膜病变(IR)是一组以受损的视网膜血流为特征的不同的紊乱。IR的实例包括糖尿病视网膜病变(DR)、早产儿视网膜病变(ROP)、镰状红细胞视网膜病变以及视网膜静脉闭塞症。所有这些紊乱可与VEGF驱使的病理视网膜新血管生成的增殖(其最终导致眼内出血、视网膜外膜形成和牵拉性视网膜脱离)相关。原发性4见网膜外膜(ERM)，也称为黄斑皱褶或玻璃纸样一见网膜病变，可导致次于视网膜结构畸变的视力减弱。这些膜尽管进行了手术移除，有时也会复发，且有时与视网膜局部缺血相关。VEGF和其受体位于ERM。VEGF存在于与增生性糖尿病视网膜病变、增生性玻璃体视网膜病变以及黄斑皱褶相关的膜中，进一步说明这种细胞因子在缺血性视网膜疾病的血管生成中和在增生性玻璃体视网膜紊乱中的膜生长中发挥重要作用。此外，在ERM中在细胞上还鉴别出VEGF受体，VEGFR1和VEGFR2。这些数据表明VEGF可为自分泌和/或旁分泌刺激剂，其可促成有血管和无血管的ERM的发展。已描述了具有增生性视网膜疾病[Cassidyetal.(1998)，BrJOphthamol;vol82:181-85andFreybergeretal.(2000)，ExpClinEndocrinolDiabetes,vol108:106-109]的目艮中的PDGF和其受体[Robbinsetal.(1994)，InvestOphthalmolVisSci;vol35:3649-3663]。这些发现表明PDGF配体和受体在不同来源的增生性视网膜膜中广泛存在并表明ERM发病4几理中包4舌PDGF的自分泌和旁分泌刺激。如TGF染色和免疫反应所i兌明的，ERM的形成中涉及转4b生长因子P(TGF-P)[Pournarasetal.(1998),KlinMonatsblAugenheikd,vol212:356-358]。此夕卜，TGF-(3受体II在糖尿病和PVR膜的ERM成肌纤维细胞中表达。这些结果说明在视网膜和ERM的多种细胞类型中产生的TGF-P，是治疗PVR、糖尿病和二级ERM有吸引力的耙标。已报道增生性糖尿病浮见网膜病变(PDR)中的人玻璃体中的白细胞介素画6(IL画6)增力口[LaHeijetal.(2002)，AmJOphthal，134:367-375]且在一项研究中100%所研究的糖尿病ERM表达IL-6蛋白[Yamamotoetal.(2001)AmJOphthal，vol132:369-377]。已表明碱性成纤维生长因子(bFGF)的外源给药诱导内皮细胞的增殖和VEGF表达[Stavrietal.(1995)，Circulation,vol92:11-14]。与这些7见察一致，在来自PDR患者的3皮璃体样品中bFGF浓度增加[Sivalingametal.(1990),ArchOphthalmol,vol108:869-872andBoultonetal.(1997)，BrJOphthalmol,vol81:228-233]。ERM的形成中也涉及bFGF[Hueberetal.(1996),Int.Ophthalmol,vol20:345-350]，表明所研究的PDR膜10个中有8个为bFGF。此夕卜，这些工作者发现对相应受体FGFR1的阳性染色。也表明了在非血管原发性ERM中对bFGF的免疫反应。这些结果i兌明在有血管和无血管ERM的形成有bFGF[Haradaetal,(2006),ProginRetinalandEyeRes，vol25:149-164]。已4企观'J至'JROP患-者血5青中bFGFi曾力口[Becerriletal.(2005)，Ophthalmology,vol112,2238]。确定S1P已知的多效作用及其与VEGF、bFGF、PDGF、TGF-(3和IL-6的相互作用，人们i人为结合、对抗、抑制SIP的作用或生产的制剂对于在视网膜缺血和以有血管或无血管ERM的形成为特征的后萃殳疾病中减轻病理性^L网膜新血管形成是有效的。其他至少相关性黄斑变性、角膜移植排斥、新血管性青光眼、隐形眼镜过度磨损、角膜感染，包括单纯性疱疹、带状疱疹和原虫感染、翼状胬肉葡萄膜炎、慢性视网膜脱离、激光损伤、镰状红细胞视网膜病变、静脉闭塞疾病、脉络膜新血管生成、视网膜血管瘤增殖、以及原发性息肉状月永全各月莫血管病变。增生性玻璃体碎见网膜病变(BVR)在自发性孔源性视网膜脱离后和损伤性视网膜脱离后观察到PVR。它是视网膜脱离手术失败的主要原因。其特征在于，在视网膜两个面上、在后玻璃体表面和玻璃体基底上的细胞膜的生长和收缩。眼睛中这种过度的瘢痕组织形成可导致牵拉性视网膜脱离的形成，因此旨在抑制或阻止增生性玻璃体视网膜病变(PVR)的治疗是处理一见网月莫脱离的逻辑原理。组织病理学上PVR的特4正为过度的月交原产生、^欠缩以及细月包增歹直[Michels,RetinalDetachment2ndEdition.WilkinsinCP,RiceTAEds,Complicatedtypesofretinaldetachment,pp641-771，MosbyStLouis1997]。在PVR膜中鉴别的细胞类型主要包括视网膜色素上皮细胞、成纤维细胞、巨噬细胞以及血管内皮细月包[JerdanJAetal.(1989),Ophthalmology,vol96:801-10andVidinovaetal.(2005),KlinMonatsblAugenheilkd;vol222:568-571]。这种过度的瘢痕反应的发病机理似乎是由许多细胞因子介导的，包括血小板衍生的生长因子(PDGF)、转化生长因子(TGF)P、石咸性成纤维细胞生长因子(bFGF)、白细胞介素-6(IL-6)、白纟田胞介素-8(IL-8)[Nagineni"(2005),JCellPhysiol,vol203:35-43;LaHeij"a/(2002),AmJOphthalmol,134:367-75;Planck"(1992),CurrEyeRes;vol11:1031-9;Canataroglu"a/.(2005)OculImmunolInflamm;vol13:375-81andAndrews(1999)OphthalmolVisSci;vol40:2683-9]。这些细月包因子的才中制，fe口果及时给予，可帮助防止PVR的发展或限制其严重性[Akiyama"a/(2006)，JCellPhysiol,vol207:407-12andZhengY"(2003)，JpnJOphthalmolm,vol47:158-65]。1-磷酸鞘氨醇(SIP)是具有多效作用的生物活性溶血脂质。它是促血管生成、促炎症(刺激巨噬细胞和肥大细胞的聚集)以及促纤维化(刺激瘢痕形成)的。SIP通常刺激细胞增殖和迁移且为抗细月包凋亡的。SIP通过其与多种细月包因子和生长因子相互作用来达到这些生物学上的多种功能。已表明通过单克隆抗体(SPHINGOMAB)对SIP的抑制阻碍血管内皮生长因子(VEGF)、bFGF、IL-6和IL陽8的功能[VisentinBWa/.(2006),CancerCell,vol9:1-14]。S1P与SlPi受体的结合还可增加PDGF产生；因此结合SIP的制剂祐j人为也可减少PDGF的产生[MilstienandSpifgel(2006),CancerCell,vol9:148-150]。如在下面实例中所示，已表明在体外SIP将人RPE细胞转化为与在PVR中见到的类型相似的成肌纤维细胞样的表型。已给定最终在PVR中见到的过度瘢痕形成的病理生理学以及SIP只于这些相同的重要介导因子的已知作用，人们认为结合、对抗、或抑制SIP的作用或生产的制剂对于减轻或最小化PVR的形成发展及其对眼睛的严重损伤作用是有效的。葡萄膜炎葡萄膜炎是眼睛的葡萄膜的炎症疾病。它可影响眼睛的前l殳(anterior)或后段(posterior)或二者都影响。它的病因可能是先天的或感染的并可威胁一见力。先天性葡萄膜炎与前房中l是高的CD4+表达相关[Calderetal.(1999)，InvestOphyhalmolVisSci，vol40:2019-24]。数据还表明T淋巴细胞以及化学引诱物IP-10在葡萄膜炎发病才几理中的病理作用[AbuEl-Asrar(2004)，AmJOphthalmol,vol138:401-11]。在急性前葡萄月莫炎中的其他趋^f匕因子包^fe巨噬细胞炎症蛋白、单核细胞化学引诱物蛋白-1以及IL-8。这些细胞因子在急性前葡萄膜炎中的白细胞聚集中可能发挥重要作用[Vermaetal.(1997),CurrEyeRes;vol16:1202-8]。已给定SIP信号级联的深刻和多效作用，认为降低生物活性脂质有效浓度的SPHINGOMAB和其他免疫分子可作为降低或调节与葡萄膜炎相关的眼内炎症的有效方法而发挥作用。屈光手术角膜创伤愈合反应对于屈光手术程序具有特别的意义，因为它是安全性和有效性的主要决定因素。这些手术用于治疗近视、远视和散光而进行。准分子激光原位角膜磨镶术(LASIK)和屈光性角膜切除术(PRK)为最普遍的屈光手术，然而已开发了试图克服并发症的其他纟喿作。这些并发症其中包括的过校正、欠纟交正、退化和的生物反应中具有其根源。角膜生物学中最大的挑战之一是通过再生而不是纤维化来促进组织修复。认为再生和纤维化之间的选择取决于成纤维细月包活4b的控制[Strameretal(2003)，InvestOphthalmolVisSci;vol44:4237-4246andFini(1999)ProgRetinEyeRes,vol18:529-551]。称为成"几纤维细力包的细月包在手术或损伤后1-2周，可出现在上皮下基质中。成肌纤维细胞大4既是在TGF-(3影响下来源于角膜基质细胞[Jesteretal(2003)ExpEyeRes，vol77:581-592]。角月莫混浊和基质瘢痕形成是以降低的角膜透明度为特征的且可与成纤维细胞和成肌纤维细胞再生相关。原位和体外研究已表明TGF-P和PDGF在刺激成肌纤维细胞分化过程中是重要的[Folgeretal.(2001)，InvestOphthalmolVisSci;42:2534-2541]。在净争定十青;兄下的LASIK后，可在中心界面中发现混浊。这些包括弥漫性板层角膜炎、圓环形薄片、以及界面上的上皮死细月包的滞留。可能所有这些都与TGF-P/人上皮细月包进入活化的角月莫基质细胞的增加有关[Nettoetal.(2005)，Cornea,vol24:509-522]。退化4艮可能是由于加强的上皮基质创伤愈合的相互作用引起的，例如由角膜成纤维细胞和或成肌纤维细月包生产的上皮调节生长因子增力口[Nettoetal.(2005),Cornea,vol24:509-522]。已表明用局部#元TGF-P4元体抑制TGF-P与受体结合减少由PRKi秀导的混浊[Jesteretal.(1997)，Cornea,vol16:177-187]。已给出抗生物活性脂质的抗体对纤维化过程和TGF-(3的已知作用，我们i人为其可帮助治疗屈光手术的一些并发症，例如混浊、基质瘢痕形成和退化。音光眼滤过手术的调节传统认为青光眼是一种疾病，由此提升的眼内压导致视神经的损害且最终损害3见野和或视4t度。青光眼的其他形式存在于碎见神经损害发生在普通压力环境中，或者所谓的"正常眼压性青光眼"。对于许多患者来说，药物治疗能够控制他们的疾病，但对于其他患者而言，需要进4亍青光眼滤过手术，由此在眼内手术产生瘘管以允许液体排出。这可通过小梁切除术、医疗设备的插入或外^1"手术治疗的其他方法来完成。青光眼滤过手术由于以成纤维细胞增殖和最终的瘢痕形成为特征的创伤愈合作用而失败。抗代i射物，例如5-氟尿嗜p定和丝裂霉素C可减少随后的瘢痕形成；然而，即4吏长期佳:用这些药物加强效果表明手术失败仍然是一个严重的临床问题[MutschandGrehn(2000),GraefesArchClinExpOphthalmol;vol238:884-91andFontanaetal.(2006)，Ophthalmology,vol113:930-936]。人眼球筋膜成纤维细胞的研究表明它们具有合成bFGF和PDGF以及TGF-(3的能力并且这些生长因子涉及在青光眼滤过手术后的组织修复过程，这促使了手术的失败[Trpathietal.(1996)，ExpEyeRes,vol63:339-46]。其他研究也涉及后滤过创伤反应中的这些生长因子[Denketal.(2003),CurrEyeRes;vol27:35-44]，推定PDGF的不同型为青光眼滤过手术后眼^求筋膜成纤维细胞增殖的主要刺激剂，而TGF-P对于眼球筋膜成纤维细胞转化为成肌纤维细胞是重要的。我们已证明SIP存在于人眼球筋膜/结膜成纤维细胞中并且S1P在创伤愈合反应中强烈表达。S1P还刺激了多种成纤维细胞类型的促纤维化功能和成肌纤维细胞表型向胶原产物的转化。已给出SIP的特定多效作用及其与bFGF、PDGF和TGF-|3之间已知的相互作用，认为结合、对抗、抑制S1P或可能其他生物活性脂质例如LPA的作用或其产生的制剂，对于调节创伤愈合和/或纤维化反应(其导致青光眼手术的失败)是有效的，且将成为提高手术成功结果的有效治疗方法。可预见的是，这种制剂可通过，例如，玻璃体内或结膜下注射或局部给药。角膜移植角膜移植(穿透性角膜移植(PK))是人体最成功的组织移植手术。然而在美国每年进行的47，000例角膜移植中，角膜移植排斥仍然是角膜移植失败的主要原因[IngJJetal.(1998)，Ophthalmology,vol105:1855-1865]。目前，我们还没有足够的能力防止异体移植排斥，尽管免疫抑制和免疫调节可能是一种有前途的方法。近年来，已发现CD4(+)T细胞在角膜异体移植排斥中直接如效应细胞一样发挥功能而不是发挥辅助细胞的功能[HegdeSetal.(2005)，Transplantation,vol79:23-31]。对鼠的研究已表明经历排斥的角膜基质中的中性粒细胞、巨噬细胞和肥大细胞的数量增加。巨噬细胞是主要的浸润细胞类型，随后是T细胞、肥大细胞和中性粒细胞。在高风险角膜移植中的早期趋化因子表达是IL-8的小鼠同源部分(巨噬细胞炎症蛋白2)和单核细胞趋化蛋白-l(MCP-l)[YamagamiSetal.(2005),MolVis,vol11,632-40]。FTY720(FTY)是一种豸斤型免疫水卩制药物，它通过改变'淋巴细胞运输发挥作用；导致外周血淋巴球减少症和淋巴结中淋巴细胞数目增多。FTY通过结合在淋巴细胞上表达的一些SIP受体来介导其免疫调节4乍用[BohlerTetal.(2005),Transplantation,vol79:492-5]。这种药物是口服给药的且一次口服给药可减少外周淋巴细胞个数的30-70%。FTY减少T细月包亚群CD4(+)细月包多于CD8(+)细月包[Bohleretal.(2004),NephrolDialTransplant,vol19:702-13]。FTY治疗小鼠表明当口服给药时原位角膜移植存活可显著延长[Zhangetal.(2003),Transplantation,vol76:1511-3]。FTY口服治疗还显著延迟了排斥反应并减小了角膜异体移植的大鼠至小鼠模型中的严重性[Sedlakovaetal.(2005)，Transplantation,vol79,297-303]。结合数据已给出异体移植排斥的已知发病机理，该数据表明调节SIP信号传导作用可促进角膜移植的存活，认为减少生物活性脂质的有效浓度的免疫部分，例如SPHINGOMAB，在免疫病症例如异体移才直排斥的治疗中也是有用的，例如通过减弱免疫反应，因此将可能在PK后改善角膜移植的存活。该药物还可具有更多的优势，除系统给药外，可以局部《合药，例如通过局部眼周或眼内给药是可能的。其^也具有炎症或免疫成分的眼部疾病包^^曼性JE皮璃体炎、感染包括单纯性疱渗、带状疱渗和原虫感染、以及眼部网状内皮细胞真菌病。以瘢痕形成为特4正的前,殳疾病i人为4吏用以生物活性脂质为輩巴标的抗体治疗也对多种以眼睛前革殳部分瘢痕形成为特4正的病症是有益的。这些病症包括创伤角膜，作为眼睛最前端结构，暴露于多种危险中，从大气中散落物至可导致才几械性损伤的钝性损伤。眼睛的角膜和前表面还可能暴露于来自手术、和化学的例如酸性和》咸性、创伤的其他形式的损伤。这些类型的损伤结果可能是破坏性的常常导致角膜和结膜瘢痕睑球粘连形成。此外角膜新血管生成可相继发生。中性粒细胞积累、其释放白细胞三烯以及白细胞介素-1和白细胞介素-6的存在，用于连纟卖聚集炎症纟田月包(successivewave)[Sotozonoetal.(1997),CurrEyeRes，vol19:670-676],浸润角膜并释放蛋白水解酶，其导致角膜组织的进一步损害和分解和角膜融解。此外角膜和结膜成纤维细胞一皮活化并4受入且导致力交原沉积和纤维化。TGF-(3促进过度炎症和瘢痕形成所不需的作用[SaikaSetal.(2006)，AmJPatholvol168,1848-60]。这种作用导致角膜透明性的损失并损伤4见力。减轻的炎症，包括减少的中性粒细胞浸润和降低的纤维化导致鼠模型的碱烧伤角膜中更快且更完全的愈合[Uenoetal.(2005)，OphthalmolVisSci，vol46:4097-106]。眼瘢痕性类天疱瘙(OCP)OCP是一种慢性瘢痕性(瘢痕形成性的)自体免疫疾病，其主要影响结膜。这种疾病为持续渐进的且预后非常差。在其最后阶段结膜瘢痕形成和相伴的角膜病导致双侧盲。在组织学上结膜表现粘膜下瘢痕形成和慢性炎症，其中肥大细胞的参与是极多的[YaoLetal.(2003),OculImmunolInflamm,vol11:211-222]。自身抗原导致自身抗体形成。自身抗体与自身抗原的结合开始了一系列复杂的事件即T淋巴细胞的浸润(其中CD4(辅助)细胞远多于CD8(抑制)细胞)。巨噬细胞和肥大细胞浸润以及促炎症和促纤维化细胞因子的释放也相继发生。细胞因子引发结膜成纤维细胞增殖和活化的结果，结果发生上皮下纤维化(见下文中实例)。研究已表明TGF-P和IL-1在OCP患者的结膜纤维4b中的作用[RazzaqueMSetal.(2004)，InvestOphthalmolVisSci，vol45:1174-81]。史-约综合症(SJS)和中毒性表皮坏死松解症(TEN)SJS和TEN是药物治疗威胁生命的副反应。这两个相关病症的眼部后遗症可以是严重的并涉及球结膜和睑结膜、眼睑和角膜的病理变化。药物和感染是最普遍的促成因素。慢性目艮发现(chroniceyefindings)包4舌瘢痕、睑球粘连形成、以及由最初炎症过程导致的结膜瘢痕。这导致睑内翻形成、倒睫和泪液膜的不稳定。眼部表面的分解导致角膜瘢痕形成、新血管生成、以及严重情况下的角质化。如在OCP中结膜的上皮下纤维化发生的。认为旺盛的自体免疫淋巴细胞对药物或感染的反应在SJS/TEN的发展中发挥作用[Harilaosetal.(2005)，ErythemaMultiforme,StevensJohnsonSyndrome,andToxicEpidermalNecrolysis,inCornea2ndedition.Krachmer，Mannis,Hollandeds.ElesevierMosbyPhiladelphia]。SJS中的〉'曼润细月包种群包括巨噬细胞、CD4阳性T细胞、以及CD8阳性T细月包。这种细月包群与化学损伤中看到的细胞群相似[Kawasakietal.(2000),JOphthalmol,vol84:1191-3]。翼状胬肉临床上翼状胬肉为肉质血管块出现，其发生在眼睑间裂中。翼状胬肉体是肉质纤维血管块。活性翼状胬肉特征为明显的血管充血和越来越严重的生长。它们坚固地粘着在眼球上。在严重的情况下翼状胬肉侵害角膜并可导致视轴内角膜透明度降低或不规则散光，然后继发导致:枧力损失。症状上，患者可感到异物感，流泪和一见力模糊。组织学表明固有层的上皮下结締组织的玻璃样变性、成纤维细胞的凄丈量增加以及月巴大细月包增加[Butrusetal.(1995),AmJOphthalmol,vol119:236-237]。翼状资肉的处理仍是一个问题。夕卜科手术切除常常进行，然而复发率很高[Kragetal.(1992)，ActaOphthalmol,vol70:530]。为了帮助降^氐翼状胬肉的复发率，已使用多种药物佐剂，例如丝裂霉素C和道诺霉素。虽然这些可能是有益的，长期数据是受局限的且他们可能与巩膜变薄和角膜融解有关。Dougherty等人和Lee等人[Doughertyetal.(1996),Cornea,vol15:537-540andLeeetal.(2001)，Cornea,vol20:238-42]首先阐明了VEGF在翼状胬肉发展中发挥重要作用并在翼状胬肉上皮中鉴别到VEGF和一氧化氮。这些研究者推测这些以及其他细胞因子是翼状胬肉纤维血管向内生长特性的原因。已表明在原发和复发翼状胬肉中存在石咸性FGF和TGF-|3[Kiraetal.(1998),GraefesArchClinExpOphthalmol,vol236:702-8]并且发表的形态和免疫组织化学证据进一步支持血管发生可能在翼状胬肉形成中发挥作用的想法[Marcovichetal(2002),CurrEyeRes,vol25:17-22]。其他研究已预示IL-6和IL-8以及VEGF作为调节因子，可能与翼状资肉的发展有关[DiGirolamoetal.(2006),InvestOphthalmolVisSci，vol47:2430-7]。对翼状胬肉形成和生长有效的制剂可减少手术介入的需要或降低复发率。其他也具有纤维生成、纤维4b或瘢痕成分的眼部疾病和病症包才舌AMD、糖尿病视网膜病变、早产儿视网膜病变、镰刀细胞视网膜病变、缺血性视网膜病变、视网膜静脉闭塞疾病和隐形眼镜的过度磨损。总之，过度瘢痕形成是许多眼部和非眼部疾病和病症的病理生理学的基本组成。生物活性脂质l象SIP和LPA的在这个过程中发挥作用并且减少这些制剂浓度的抗体相关治疗可能给接受治疗的患者带来治疗益处。在一个实施方式中，生物活性脂质的抑制剂，尤其是针对SIP和/或LPA的单克隆抗体，被认为在调节手术和外伤创伤愈合反应中是有用的。用于治疗硬皮病的抗SIP抗体和抗LPA抗体本发明的组合物和方法在治疗至少部分特4正为异常的新血管生成、血管生成、纤维生成、纤维化、瘢痕形成、炎症、以及免疫反应的紊乱和疾病中是有益的。一种这样的疾病是硬皮病，它也被称为系统性硬化症。石更皮病是自体免疫性疾病，它导致瘢痕形成或皮力夫的加厚，且有时涉及身体的其他部分，包括肺、心脏和/或肾脏。硬皮病的特征在于皮肤和身体器官中瘢痕组织(纤维化)的形成，这可导致涉及部分的加厚和坚硬，及随后的功能降低。今天，根据硬皮病基金会统计，大约300,000美国人具有硬皮病。他们中三分之一或更少具有广泛疾病，而剩余的三分之二主要具有皮力夫症状。当该疾病影响肺并导致瘢痕形成时，呼吸可能受限制，因为肺部不再^f象他们应该的而进4于扩张。为测量呼吸能力，医生〗吏用一种评估最大肺活量(FVC)的设备。在FVC小于预期读数的50%的人群中，来自硬皮病相关的肺病的10年死亡率为大约42%。死亡率3。it匕之高的一个原因是当前没有有效的治疗。如在本申请实例中所描述的，已有证据表明S1P和LPA为促纤维化生长因子，促纤维化生长因子可促进成纤维细胞的活化、增殖以及与不适应的瘢痕形成和重塑相关的产生的成纤维细力包的活性才是高。此外，S1P和LPA对皮肤和其他类型的成纤维细胞活性的潜在作用已阐明。例如，已表明LPA刺激鼠皮肤成纤维细胞的移动(Hama,etal.,JBiolChem.2004Apr23;279(17):17634-9),而人皮月夫成纤维细胞表达多种SIP受体亚型(Zhang，etal.,Blood.1999Mayl;93(9):2984-90)。除了SIP对成纤维细胞活性的许多直接作用夕卜，S1P对于成纤维细胞活性还可具有许多潜在的间接作用。例如，SIP可帮助其〗也熟知的促纤维4匕因子发4军作用，例如TGF-P和血小4反源生长因子(PDGF)。TGF-P是最为广泛地进行研究和认识的纤维化的贡献者之一(Desmouliere，etal.,/Ce〃Ao/122:103-111,1993)。TGF-(3上调SphKl的表达和活性，导致金属蛋白酶组织抑制因子1(TIMP-1)-—种抑制ECM降解的蛋白的表达(Yamanaka，etal.,/C&w279:53994-54001，2004)。TIMP画l表达的增多与心力衰竭患者的间质纤维化和舒张功能障碍相关(Heyman，etal.,爿wJPa^o/166:15-25,2005)。相反，SIP刺激TGF-P的表达和释力文(Norata,etal.，Ocw/a"ow111:2805-2811,2005)。还存在SIP和PDGF之间相互作用的直4矣i正据。SIP直4妄促进PDGF的表达(Usui,etal.，J^/o/C7^w279:12300-12311,2004)。此夕卜，SIP!受体和PDGF受体互相结合而它们的结合对于下游信号的PDGF活化(其促进了多种细胞类型的增，歹直和迁移)是必需的(Long,etal.,PraW"g/awW朋OAer丄—她Ww80:74-80,2006;Baudhuinetal.，F騰6/18:341-343,2004)。同样，TGF-P和PDGF对纤维化的作用可能部分是由于与SIP信号通^各的相互作用。同样，本发明的组合物和方法可用于治疗石更皮病，特别是通过减少特定目标脂质例如，SIP和/或LPA在体内的有效浓度。认为针对PDGF受体的刺激性自身抗体可恶化系统性硬皮病(Ba画i，etal.,NEnglJMed.2006v354(25):2667-76)，而PDGF受体在TGF-(3作用下在石更皮病成纤维细月包中^皮上调(Yamakage,etal.，JExpMed.1992May1;175(5):1227-34)。由于SIP、PDGF和TGF-P叶言号系统中大量的相互作用，用4元S1P剂(如才元SlP的mAb)封闭SIP的生物活性可间4妄减轻PDGF和TGF-P的促硬化作用。此外，^吏用这种^元SIP剂的治疗可通过减轻SIP^j"皮力夫和其j也形式的成纤维细胞的直接效果(其促进疾病的发展)而对硬皮病患者有益。3.给药方法如以上*会出的实例，疾病和病症的治疗可通过<吏用不同制剂和装置的多种途径给药。适合的药物可接受的稀释液、载体、和赋形剂在本领域中是熟知的。本领域中技术人员会理解对于任何特定治疗方案给药的量可很容易地确定。预计合适的量落在10/ig/剂量至10g/剂量的范围内，优选在10mg/剂量至lg/剂量的范围内。可通过本领i或中已知的4支术给予药物，包括^旦不局限于系统(全身性)、皮下、皮内、粘膜使用，包括通过吸入、以及局部给药。粘膜是指沿身体内腔的上皮组织。例如，粘膜包括消化道(包括口、食管、胃、肠、以及肛门)；呼吸道(包括鼻道、气管、支气管、以及肺)；以及生殖器。对于本i兌明书的目的，粘力莫还可包括眼的外表面，即角膜和结膜。局部给药(与系统给药相对)可以是有益的，因为这种方法可限制潜在的系统方面的副作用，但仍然具有治疗作用。在本发明中使用的药物组合物包括但不局限于溶液、乳液、以及包含脂质体的制剂形式。这些组合物可由多种成分制成，其包括但不局限于预成形脂、自乳化固体和自乳化半固体。本发明中使用的药物制剂可根据制药业中熟知的传统技术制备。这种技术包括将活性成分与药物载体或赋形剂结合的步骤。优选的载体包括那些药物可接受的载体，尤其是当旨在将组合物用于人体时。对于非人的治疗应用(如在伴生动物、家畜、鱼、或家禽的治疗中)，可使用兽医可接受的载体。通常这种制剂通过将活性成分与液态载体或精细分割的固态载体或者与二者均匀且紧密地结合而制成，然后如果需要，将产品成形。本发明的组合物可形成多种可能的剂量形式中的任何一种，例如但不局限于片剂、胶嚢、液态糖浆、软胶、栓剂以及灌肠剂。本发明的组合物还可制成在水性、非水性或混合介质中的悬浮液。水性悬浮液可进一步包含提高悬浮液粘度的物质包括例如羧甲基纤维素钠、山梨糖醇和/或葡聚糖。该悬浮液还可包含稳定剂。在一个实施例中该药物《且合物可以;故形成泡沫并作为泡沫<吏用。药物泡沫包括制剂例如但不局限于乳剂、微乳剂、乳脂、胶状物和脂质体。尽管在性质上基本相似，这些制剂在最终产品的成分和稠度上不同。关于这种组合物和制剂制备的专业知识，通常对于制药和制剂领域中的技术人员是已知的并且可应用于本发明的组合物的制剂中。在一个实施例中，可将免疫i秀导部分经例如局部滴剂或药膏、眼周注射，通过植入式投药系统经前眼房注射至前房或玻璃体、或通过注射或口服给药系统地运送至眼睛。使用的抗体的数量可由本领域中技术人员容易地确定。将治疗药物输送至眼睛的传统方法包括局部应用、系统给药后再分配至眼睛或直4妄的眼内/目艮周注射[Sultanaetal.(2006),CurrentDrugDelivery,vol3:207-217;GhateandEdelhauser(2006)，ExpertOpinion,vol3:275-287andKaurandKanwar(2002)，DrugDevelopIndustrialPharmacy,vol28:473-493]。抗S1P、抗LPA或其4也抗生物活性脂质的抗体治疗将可能与任何这些方法一起使用，虽然全部具有特定的认识到的优点和缺点。局部滴剂是方便的，但主要因为鼻泪引流而经常流出应用的药物的少于5%至眼睛的前部，该剂量甚至更少的部分运送至眼球后段。除了滴剂之外，喷雾提供另一种局部给药的模式。第三种模式是眼药膏或乳剂，可用于延长制剂与眼部表面的接触时间，然而视力模糊和眼睑的覆盖可能是令人苦恼的。这种局部方法仍然是优选的，因为治疗眼部紊乱的治疗药物的系统性给药，将整个才几体暴露于潜在的药物毒性中。眼睛后l殳的治疗在医药上是重要的，因为年龄相关性黄斑变性、糖尿病视网膜病变、后葡萄膜炎、以及青光眼，在美国和其他发达国家中是视力丧失的主要原因[Mylesetal.(2005),AdvDrugDelivRev;57:2063-79]。将药物运送至后l殳最有效的才莫式是通过睫状体平坦部的玻璃体内注射。然而，直接注射要求熟练的医药从业才支术人员以实现药物运送并且可导致许多患者的治疗限制焦虑。眼周注射，包括结膜下、眼J求后、目艮^求周和后筋膜注射，比玻璃体内注射，侵入性d、一些。重复的长期的玻璃体内注射可导致并发症，例如^皮璃体出血、一见网月莫脱离、或眼内炎。抗生物活性脂质的抗体治疗还可通过使用一种新型眼部给药系统给药[Sultanaetal.(2006)，CurrentDrugDelivery,vol3:207-217andGhateandEdelhauser(2006),ExpertOpinion,vol3:275-287],包括持续的或受控的释放系统，例如(a)眼部插入物(可溶的、可侵蚀的、非可侵蚀的或基于水凝胶的)，角膜保护膜，如，基于胶原的绷带和隐形眼镜，其提供药物向眼睛的控制输送，(b)原位凝胶系统，其提供像滴剂一样给药的便利性，它在眼睛内转化为凝胶形式，由此提供眼睛内药物的持续作用，(c)嚢泡系统，例如脂质体、非离子表面活性剂嚢泡/两性离子表面活性剂嚢泡(discome)等等，它具有靶向输送、生物相容性和不使视力模糊的优势，(d)粘膜粘附系统，它提供眼睛内更好的保留，(e)前药，(f)渗透增强因子，(g)冻干载体系统，(h)微粒，(i)亚微粒乳剂，(j)电离子透入疗法，(k)树枝状大分子，(l)微球体，包括生物粘附微球体，(m)纳米球体和其他纳米颗粒，(n)胶质体(或胶束，collasome)以及(o)药物给药系统结合上述一个或多个系统以提供添加的、或甚至是增效的、有益的效果。大多这些方法耙向眼睛前^殳并可能对治疗前^史疾病是有益的。然而，一个或多个这些方法对于影响眼睛后段中生物活性脂质浓度仍然可能是有用的，因为脂质的相对低分子量将可能允许脂质在眼睛内的大量运动。此外，特别是如果以较低分子量抗体变异体(例如Fab片断)制备时，眼睛前段中引入的抗体能够在整个眼睛中移动。还可使用用于后段的持续^^药系统，例如那些已净皮^:准的或正在开发中的给药系统(见上述参考文献)。如前面所述，后^L网力莫、月永纟各力莫、以及黄斑疾病的治疗在医学上是非常重要的。在这点上，经巩膜离子导入[Eljarrat-BinstockandDomb(2006)，ControlRelease,110:479-89〗是一个重要的进步并可为运送抗体至眼睛的后段提供有效的途径。还可向制备的抗体中加入多种赋形剂以改善治疗的效果，使治疗更加方便或者以清楚地确保制备的抗体仅用于其期望的、被批准的目的。赋形剂的实例包括控制pH的化学物质、抗-微生物剂、防腐剂以防止抗体效力的丧失，染料以鉴别仅用于眼部的制剂、助溶剂以提高抗体在制剂中的浓度，渗透增强剂以及使用调整等渗性和/或粘度的制剂。可加入抑制剂(例如蛋白酶的抑制剂)以延长抗体的半衰期。在一个实施例中，通过将包括适合眼睛pH的磷酸盐緩冲液的溶液进4亍3皮璃体内注射而将抗体运送至眼睛。抗体还可进行化学修饰以产生前药，其以一种上述的制剂或装置给药。抗体的活性形式随后通过内源酶的活化得到释放。本申请中考虑的可能的眼部酶是多种细胞色素p450、乙醛还原酶、酮还原酶、酯酶或N-乙酰-P-氨基葡萄糖苷酶。抗体的其他化学修饰可提高它的分子量，且结果增加了抗体在眼睛中的滞留时间。这种化学^修饰的一个实例是聚乙二醇化[HarrisandChess(2003),NatRevDrugDiscov;2:214-21]，对于诸如二硫化物[Sha腿ketal.(2006)，NatChemBiol;2:312-3]或石克醇[Dohertyetal.(2005)，BioconjugChem;16:1291-8]的功能基团可能是普遍的或特异的作用。实施例将参照以下具体实施例对本发明作进一步描述。这些实施例绝不应认为限制本发明的范围。对于下面描述的数据，体外研究进行三重测定并至少重复三次而进行，而体内研究在至少5只鼠中进行。在所有研究中，统计分析4吏用StudentsT-test或ANOVA,用GraphPad4t件进行。在应用时，数据表现为平均值士SEM其中承代表p^0.05。实施例1.SPHINGOMAB显著减少CNV鼠模型中的CNV和瘢痕形成对雌性C57BL6/J小鼠进行玻璃膜的激光诱导破裂并给予0.5pg的Sphingomab或稀释在2pl生理盐水中的同型配对的非特异性(NS)抗体。小鼠在激光破裂后14和28天处死。为诱导CNV损伤，使用眼用托吡卡胺(0.5%)和苯肾上腺素(2.5%)扩张瞳孔。在眼睛上方文置盖片。OculightGL532nm(Iridex公司，MountainView,CA)与裂隙灯连接，开始以150mW输送100msec脉沖，其中50|nM的斑点大小用来破裂右眼四分之三圏的玻璃膜，它位于距离视神经盘大约50pM处相对9、12和3点的位置。在所有情况下，左眼作为未损伤的对照。任何与蒸汽泡不相关的损伤或成为融合性的损伤排除在分析之外。为测量CNV损伤的大小，制备巩膜-脉络膜-RPE复合物的脉络月莫平片并只寸血管系纟克(凡comm""z、agg/w"m'",，纟工色)和周细月包(CD140b;绿色)进行染色。使用具有RGBSpot高分辨率数码相机和激光扫描共聚焦显孩i镜(BioRadMRC1024，BioRad7>司，Temecula,CA)的epifluorescenceZeissAxioplan24乾获凄史字图4象。对于体积分析，使用z系列捕获，经过z系列的总损伤区域的总数与z厚度(4fim)相乘获得损伤体积。为评估月交原沉积，用Masson'Trichrome对工凡月莫-月永纟各月莫-RPE复合物进行染色。将巩膜-月永络膜-RPE复合物包埋在石蜡中并随后连续切片成6微米的厚度。每个损伤评估大约30个切片。胶原沉积体积的定量以CNV损伤体积中所描述的相同方式进4亍计算。使用ImageJ软件(ResearchServicesBranchNationalInstitutesofHealth,Bethesda，MD)对捕获的凄t字图像进行形态学评估。图1A示出了激光豫导的玻璃膜破裂后14和28天SPHINGOMAB显著减弱了脉络膜新血管生成。图IB示出了在激光诱导玻璃膜破裂后28天SPHINGOMAB显著降j氐了与CNV损伤形成相关的纤维4b。实施例2.SPHINGOMAB通过包括抑制内皮细胞迁移和管形成的多种机制抑制新血管生成。S1P促进人的脐静脉内皮细胞(HUVEC)迁移，在基质胶和其他试验中，促进了体外BV的从头形成[112];SPHINGOMAB可中和SIP的这些作用。按照Visentin等人所描述的进行试验(CancerCell2006Mar;9(3):225-38)。图2A中的数据表明接种在GF减少的基质胶上的HUVEC在存在SIP的情况下，形成多种毛细管样的结构而在没有SIP的情况下或当用SPHINGOMAB和SIP共孵育时，不能形成毛细管样结构。图2B中的数据表明在基质月交化学4曼染试验中，0.1-l|aMSIP刺激HUVEC迁移的潜在能力超过未处理的HUVEC，或与SPHINGOMAB共孵育的HUVEC2-2.5倍。同时，这些研究表明SPHINGOMAB可有效地减緩SIP对EC的促血管生成作用。实施例3.SPHINGOMAB通过包括减緩SIP、VEGF和bFGF在体内的效果的多种机制来抑制新血管生成。体内研究表明S1P增力口了内皮毛细血管向皮下植入的基质胶才全子[54]生长，以此为基础，我们推测SPHINGOMAB可减少体内,人头形成BV。为对此进行研究，我们运用用于新血管生成的体内基质胶栓子试验。在一批试验中，将lpM的SlP，0.5pg/mL的bFGF或lpg/mL的VEGF添加到基质月交中并随后给小鼠(n=4)注射I.P.。10天后，对小鼠进行肝素治疗并注射荧光外源凝集素，异凝集素B4-FITC,其结合由血管EC(形成生长的BV)表达的粘附分子。才全子随后^皮切除，在OCT中水冻，切片并用于》见察FITC染色的BV。图3A中的数据表明S1P是比bFGF或VEGF更加有潜力的体内杀斤血管生成刺；敫剂[Lee,etal.，(1999),BiochemBiophysResCommun，.Vol264:743-50]，如在包含SIP的才全子中比包含bFGF或VEGF的纟全子具有大量的FITC染色的BV所显示的。然后用苏木精&伊红对栓子切片进行染色，用于评估EC的渗透(图3B)。EC的渗透是新血管生成中的关键步骤。包含SIP的栓子与只含有基质胶的栓子相比，其EC渗透具有三倍增长。细月包渗透被认为是EC,然而我们认为诸如免疫细胞的其他细胞类型也可被染色。小鼠每48小时(在栓子植入前1天开始)系统性给予SPHINGOMAB,表明即使当向基质月交中加入SIP时，EC渗透量减少。这些结果表明SPHINGOMAB抑制体内EC渗透的能力。来自血液和周围组织的内源性SIP可为创伤提供促血管生成的刺激物。研究了SPHINGOMAB减少创伤中内源S1P的能力。将最优的刺激栓子(补充了0.5|ug/mLbFGF或10mg/mLVEGF的基质月交)植入小鼠中。小鼠在基质胶植入前一天开始每48小时接受25mg/kgSPHINGOMAB或盐的腹腔内注射。每个处理组(基质胶、基质月交加GF或基质月交加GF以及给予SPHINGOMAB)包括至少6只小鼠。10天后，用肝素处理小鼠，注射异凝集素B4-FITC,4全子切除，包埋入OCT冷冻介质中并进行切片。微血管密度通过外源凝集素-FITC染色的血管进行定性(如图3C中所示)。BV染色在对照(未处理)栓子中零星出现，而包含bFGF或VEGF的栓子表现出血管生成的重要证据。来自用SPHINGOMAB处理的小鼠的栓子与来自盐处理的小鼠的bFGF或VEGF栓子相比，表现出BV形成中明显的减少。染色的血管的定量表明，来自用SPHINGOMAB处理的动物与盐处理的动物相比，在包含VEGF或bFGF的纟全子的新血管生成中分别有5至8.5倍的减少(图3C)。这种评价进一步表明内源血清和组织SlP^是高微血管生成的能力以及SPHINGOMAB中和内源S1P的促血管生成效果的能力。实施例4.SPHINGOMAB才中制体内瘢痕形成S1P通过活化成纤维细胞迁移、增殖和胶原生成，对创伤愈合做出了深远的贡献；SPHINGOMAB中和这些作用。许多研究，4吏用多种类型的成纤维细月包i正实了S1P促进创伤愈合的能力1)^口4吏用标准方法通过3H胸^，嘧，定脱氧核苷掺入法测量的，S1P增力口了Swiss-3T3成纤维细胞的增殖(图4A);2)S1P在标准的划痕创伤愈合试-验中促进了心脏成纤维细胞的迁移(图4B);3)如免疫荧光微显微镜所表现的，S1P促进了从具有胶原laGFP受体的转基因小鼠中分离的心脏成纤维细胞中的胶原表达(图4C);以及4)S1P诱导WI-38肺成纤维细胞分化为成肌纤维细胞，这种细胞在瘢痕重塑中活化，如通过〗吏用免疫杂交分析的成月几纤维细胞标记蛋白-cc平滑肌肌动蛋白的表达增加所指示的(4D)。在每种试-验中，SPHINGOMAB中和S1P。可预期到眼部成纤维细胞对S1P和SPHINGOMAB的反应相似。已注意到，心血管疾病和AMD的新血管损伤的相似性包括瘢痕重塑和随后的不适应的纤维性组织形成[Vineetal.(2005)，Ophthalmology,.Vol112:2076-80andSeddonandChen(2004)，IntOphthalmolClin,.Vol44:17-39];因而i人为SPHINGOMAB将对眼部新血管生成和瘢痕形成具有与在心血管系统中所表明的作用类似的作用。在Lpath的研究评1介了SPHINGOMAB在通过小鼠左降支的冠状动脉结扎的永久性心肌梗塞(MI)后对减少心脏瘢痕形成的有效性。在手术后48小时开始系统性给药25mg/kgSPHINGOMAB或盐类。选择在48小时给予抗体允许在早期重塑阶段中眼部普通的、补偿性的瘢痕形成并允许在MI后立即进行有益的、S1P刺激的血管生成。在梗塞后两周，小鼠被处死且通过曼森氏三色法对心脏组织染色以评价纤维化。才妄受SPHINGOMAB处理的动物表现出血管周纤维化的几乎完全消失(图4E)。作为任意非特异性创伤愈合反应的对照，假手术动物经受胸廓切开术而不进4于冠状动脉结4匕。实施例5:S1P促进眼部上皮细胞和成纤维细胞转化为可收缩的、生成瘢痕组织的成肌纤维细胞。病理学组织纤维化(瘢痕形成)是多种眼部紊乱(包括年龄相关性黄斑变性、糖尿病视网膜病变、早产儿视网膜病变、增生性磁:璃体视网膜病变以及青光眼手术后果)中主要的促成因子。在许多这些紊乱中，循环的生长因子和趋化因子促进普通眼吾卩细胞转化为纤维收缩的、生成瘢痕组织的细胞，该细胞已被称为"成月几纤维细月包"。通常，成月几纤维细月包负责损伤后创伤愈合反应的一部分的组织修复。然而，在肝、皮肤、肺、肾、心脏和眼睛中以病理性瘢痕组织形成为特征的疾病中，表现出成肌纤维细胞的数量和功能的改变。在眼睛中，视网膜色素上皮(RPE)细胞转化为成月几纤维细胞表型，与纤维收缩膜的形成相关，纤维收缩膜导致视网月莫脱离和随后的视力损伤。此外，在引发随后的视力丧失的眼睛损伤生成。尽管已鉴别促进成肌纤维细胞形成的许多眼内循环蛋白因子，关于诸如S1P的溶血脂质在这种过程中的作用一无所知。因此，我们4企测了S1P对许多人眼部细胞系的成肌纤维细胞转化的作用。如图5中所示，S1P刺激了人视网膜色素上皮细胞(图5A)中和人结膜成纤维细胞(图5B)中a平滑肌肌动蛋白(a-SMA;成肌纤维细胞标记)的生成。这些数据首次表明，S1P是促进眼部上皮细胞和成纤维细胞转化为可促使视网膜脱离、眼部纤维化和随后的祁L力损伤的可收缩的，生成瘢痕组织的成肌纤维细胞的循环化学因子之一。在这些试验中，在视网膜色素上皮细胞和结膜成纤维细胞中，S1P促进ot-SMA表达的能力在浓度依赖方式上有所不同。如所示，在O.OOIjliM的浓度下，观察到上皮细胞中ct-SMA表达显著提高，随后在10pM下降低到基础水平。相反，结膜成纤维细胞中只有在10jxM浓度下，观察到ot-SMA表达的显著提高。这种不同，认为是由于上皮细胞与成纤维细胞相比，S1P受体表达的增加造成的。我们假设，由于S1P受体表达水平的增加，在低浓度下，视网膜色素上皮细胞可能对于S1P更加敏感。相反，在高S1P水平下，受体变得敏化或者甚至可能被内化，导致S1P刺激的减弱。胶原是主要的结构蛋白之一，它支持体内的所有组织并且是瘢痕组织的主要成分之一。在非病理性情况下，在通过成纤维细胞的月交原生成和通过特定酶的月交原降解之间的平纟軒来维持组织中总的月交原成分。许多涉及瘢痕组织水平提高的紊乱，部分地是由于抑制瘢痕形成所需的抑制胶原降解的生理和分子过程。我们假设S1P促进瘢痕组织形成的能力可能是由于抑制胶原降解的能力导致的，从而导致器官内瘢痕组织净增长。因此，我们检测了S1P对于人结膜成纤维细胞中血纤维蛋白溶酶原活化剂的抑制剂(PAI-1)表达的4乍用。提高的PAI-1表达与结締组织的蛋白水解的减少相关并且在与涉及增力口瘢痕的"i午多纤维^f匕疾病中上调。如图5C所示，S1P刺;敫剂量依赖方式的PAI-1的表达。这些数据表明，也可通过刺激抑制其降解的蛋白质的表达来促进瘢痕组织形成，表明S1P通过多种枳J械性途径发挥作用以促进和维持与眼部疾病相关的病理性瘢痕形成。实施例6:SPHINGOMAB抑制炎症和免疫细胞、渗透炎症是重塑过程中的第一个反应[7]。它是由局部缺血和细胞损害而引发的并导致细胞因子表达的上调，这刺激巨噬细胞和中性粒细月包迁移至损伤区i或以吞p藍死亡细月包并进一步上调炎症反应[Jordanetal.(1999)，CardiovascRes,.Vol43:860-78]。月巴大细月包也是炎症反应的重要细胞调节因素。由肥大细胞释放的SIP是炎症的实验性动物模型中观察到的许多有害反应的原因[Jollyetal(2004),JExpMed,.Vol199:959-70andJollyetal(2005),Blood，.Vol105:4736-42]。基于CNV和CVD中免疫和炎症反应的相似性，在鼠科梗塞才莫型中，对SPHINGOMAB减轻免疫细胞向伤口中渗透的能力进行了评估，其作为SPHINGOMAB减轻AMD过程中这些损害的潜在作用的才示志、[Vineetal.(2005)，Ophthalmology,.Vol112:2076-80andSeddonandChen(2004)，IntOphthalmolClin，.Vol44:17-39]。MI后四天，使用MAC-1和MCG35抗体，分别对有危险的区域内的巨嗟细胞和肥大细胞渗透进行评价。SPHINGOMAB极大地减弱了炎症巨噬细胞(图6A)和肥大细胞(图6B)的密度，这表明SPHINGOMAB可中和AMD过程中的免疫和炎症损害。实施例7:SPHINGOMAB对于SIP是高度特异的竟争性ELISA表明与其^f也生物活性脂质相比SPHINGOMAB对于SIP的特异性。SPHINGOMAB表明与鞘氨醇(SPH)，SIP的直接代谢前体或溶血石粦酸(LPA)(—种重要的细胞外信号分子，在结构上和功能上与SIP相似)之间没有交叉反应。SPHINGOMAB不识别其他结构上相似的脂质和代谢物，包括神经酰胺-l-磷酸(C1P)、二氢鞘氨醇(DH-SPH)、磷脂酰丝氨酸(PS)、磷脂酰乙醇胺(PE)或鞘石粦脂(SM)。SPHINGOMAB与二氢1-石粦酸鞘氨醇(DH-S1P),以及更小的程度上，与磷酸胆碱鞘氨醇(SPC)发生交叉反应(图7)。实施例8:抗LPA的mAb的开发这些试-验的总目的是产生和开发对LPA特异的mAb，以开发用于治疗LPA相关的疾病，特别是那些涉及过度纤维化的疾病的基于抗体的治疗。例如，LPA通过刺激胶原基因表达和成纤维细胞的增殖具有一些直4妄纤维生成的4乍用[Chen,etal.(2006)FEBSLett.580(19):4737-45]。因此，抗LPA的mAb在治疗纤维化和以过量成纤维细胞活性为特征的疾病中是有用的。这些疾病包括但不限于多种眼部紊乱、心脏重塑、心脏衰竭和硬皮病。抗体以生物活性脂质，LPA为耙标，这表明在体外试验和体内试验中的良好性能特点在治疗和it断应用中将是非常有益的。为了产生针对LPA的单克隆抗体(mAb)，用溶血磷酸的衍生物(LPA,1-酰基-2-溶血-sn-甘油-3-磷酸(l-acyl-2-lyso-sn-glycero-3-phosphate))乂于80只小鼠进4亍免疫。通过在免疫后3个时间点用ELISA分析被免疫小鼠的血清来确定抗LPA抗体的存在。各个小鼠之间的免疫反应无论是在抗体反应时间和获得水平方面都显著不同。大体上，在至少一半的小鼠中，观察到明显的免疫反应(滴定度>125，000)。选出具有最高抗体滴定度的五只小鼠开始杂交瘤细力包系的形成。在对/人这5种融合而产生的2000多杂交瘤细胞进行初步筛选后，总共29个抗分泌抗LPA的杂交瘤细胞系显示与LPA结合。在这些克隆中，24个被进一步亚克隆并在ELISA试验面板中被鉴别。从维持阳性的14个克隆中，选出6个克隆进一步鉴别。mAb的同型是多数抗体的IgGl。在初步筛选中，对所有mAb与12:0LPA和S1P的结合特性进4亍比较。26个mAb中，5个克隆与S1P发生交叉反应。对8个与12:0和18.'0LPA具有4交高结合的抗LPAmAb进一步鉴别其特异性和结合特性。通过使用一系列类似物的竟争性ELISA充分鉴定了来自6个单个细胞系的mAb的特异性并且在一系列体外试验中鉴定了它们的结合能力(表1)。多数mAb表现对LPA同型的特异性。估计抗体亲和力在皮克摩尔范围内。在动物才莫型中的进一步测定将确定这些mAb是否可为LPA相关疾病提供有前途的治疗的基础。使用表面等离子体共振，对6种mAb的亲和力和动力学进4亍测量(表2)。所有6种mAb以相似的《D值(在0.34至3.8pM范围内)和相似的动力学参数结合LPA。对于许多这些相互反应，当复合物非常緩慢地分解时，在设定程序中^固定在1x10-6s"。表1还描述了这6种mAb与以不断增加的浓度结合到ELISA板的小孔中的18:0和12:0的LPA之间的结合。4吏用18:0和12:0LPA作为包#皮抗原，确定mAb表现50%有效浓度的浓度(EC5Q)和最大结合(MB)。ECs。的值通常对于18:0LPA较低。应注意到，mAbB3与其他mAb相比，与18:0LPA比与12:0LPA表现4交高的结合特性。通过确定与一系列LPA变异体和相关生物脂质例如二;更脂酰磷脂酸、溶血磷脂胆碱、S1P、神经酰胺和神经酰胺-l-磷酸的结合，评估抗LPA的mAb的特异性。表3中总结了针对不同LPA相关化合物的6种选才奪的mAb和两种另外的mAb(504B58-3F8和504B104)的ICso和交叉反应。所有mAb在12:0(月桂酰)、14:0(肉豆蔻酰)、16:0(才宗浙司酰)、18:1(油酰)、18:2(亚油酰)和20:4(花生酰)LPA之间都不同(表3)，虽然它们均不表现与二硬脂酰PA和LPC、LPA的直接代谢前体的交叉反应。此外，其他检测的脂质例如S1P、神经酰胺和神经酰胺-l-磷酸的抑制效果可以忽略。这些发现清楚i也表明，抗LPA的mAb不识别这种结构上相似的脂质，包括前体脂质，表明抗体对于溶血;粦酸的高特异性。ECso的排名顺序是，对于不饱和的18.'2>18:1>20:4，而对于饱和脂质为14:0〉16:O18:0。有趣的是，与18:1LPA的竟争表明6种mAb的不同性能。在6种mAb中，504B3表现最低的IC50(50%的结合抑制.)。在填力口的具有287nMICm^直的18:1LPA的情况下，mAb504B3与固定的18:1LPA的直接结合被有效地阻止。令人惊讶地，没有ICso的值接近它们各自的结合LPA的尺j直。ICso的值至少比它们的尺^值高100倍(nM范围wpM范围)。如在竟争实验中所显示的，5种mAb表现对18:1LPA的特异性。18:1LPA不与结合于固定的18:1LPA的mAb63竟争，而它以皮克摩尔范围内的i^值结合LPA。因此，虽然所有6种mAb以相似的亲和力结合LPA,6种mAb中的5种表现出与18:1LPA的有效和特异结合。表l.直接结合的动力学检测作为包#1抗原用于结合12:0LPA或18:0LPA(O.lpM)的渐增数量的mAb(达40ng/100jul反应混合)。EC5。具有50%最大结合的有效抗体浓度。MB:最大结合(表现为OD450)。<table>tableseeoriginaldocumentpage70</column></row><table>表2，抗LPA的小鼠mAb的结合亲和力LPA以150共振仪的密度范围固定于传感器芯片上。每种mAb的稀释液完全覆盖固定的LPA,通过结合/分离阶段的非线性回归获得动力学常数。双份实验中使用至少三个测定值给出作为标准差的误差值。表观亲和力由Kcr^/i^确定。Ka=以<table>tableseeoriginaldocumentpage71</column></row><table>IC50:半最大抑制浓度MI:最大抑制(在没有抑制剂的情况下结合的％)…由于抑制4效弱没有4企测到材料和方法生物脂质试剂所有生物脂质购自AvantiPolarLipids乂>司，具有由HPLC和质谱仪证实的特性。LPA衍生物在化学系(圣地亚哥州立大学)合成。所有的其他试剂购自Fisher公司，除非另外说明。DLPC:l-棕榈酰-2-肉豆蔻酰—w-甘油-3-胆石咸石粦酸DASA:1，2-二石更脂酰-^-甘油-3-石粦酸14:0LPA:1-肉豆蔻酰-2-羟基-sw-甘油-3-石粦酸16:0LPA:1-棕榈酰-2-羟基-s"-甘油-3-磷酸18:0LPA:1-硬脂酰-2-羟基-s"-甘油-3-磷酸18:1LPA:1-油酰-2-羟基-s"-甘油-3-磷酸18:2LPA:1-亚油酰-2-羟基-s"-甘油-3-磷酸20:4LPA:1-花生酰-2-羟基-s"-甘油-3-磷酸S1P:D-赤-l-磷酸鞘氨醇定量ELISA:孩吏量滴定ELISA板(Costar,CatNo.3361)用兔抗鼠IgG、稀释在1M碳酸盐緩冲液(pH9.5)中的F(ab')2片断特异抗体(Jackson,315-005-047)在37°C下包4皮lh。用PBS洗才反并用PBS/BSA/Tween-20在37°C下封闭lhr。对于首次孵育，将非特异的鼠IgG或人IgG的稀释液、全部分子(用于校准曲线)和待测样品加入孔中。洗板并特育每孔IOOjliI的1:40,000稀释的羊抗鼠(H+L)偶联的HRP(Jackson,catNo115-035-146)在37°C下孵育lhr。洗板后，用四曱基对二氨基联苯(Sigma,catNoT0440)检测酶促反应并通过加入1MH2S04终止反应。^使用ThermoMultiskanEX在450nm下测量光密度(OD)。原始数据转入用于分析的GmphPad软件。直接ELISA:微量滴定ELISA板(Costar，CatNo.3361)用稀释在1M石灰酸盐纟爰冲'液(pH9.5)中的LPA-BSA在37°C下包被lh。用PBS(137mMNaCl、2.68mMKCl、lO.lmMNa2HP04、1.76mMKH2P04;pH7.4)洗板并用PBS/BSA/Tween-20在室温下封闭lh或在4°C下过夜。待测才羊品,希释为0.4pg/mL、0.2|tig/mL、0.1jig/mL、0.05fig/mL、0.0125ng/mL、以及0iag/mL，并向每孑L中力口入lOOjal。洗才反并用每孑LlOOpl与羊抗鼠(1:20,000稀释)(Jackson,catNo115-035-003)偶联的HRP在室温下孵育lh。洗板后，用四曱基对二氨基联苯(Sigma,catNoT0440);险测酶促反应并通过加入1MH2S04终止反应。4吏用ThermoMultiskanEX在450nm下测量光密度(OD)。原始数据转入用于分析的GraphPad软件。竟争实验mAb的特异性在ELISA试验中#:测。孩丈量滴定ELISA板(Costar，CatNo.3361)用稀释在1M碳酸盐緩冲液(pH9.5)的18:0LPA-BSA在37。C下包#皮lh。用PBS(137mMNaCl、2.68mMKCl、10.1mMNa2HPO4、1.76mMKH2P04;pH7.4)洗板并用PBS/BSA/Tween-20在37。C下封闭lh或在室温下过夜。对于首次孵育，0.4pg/mL抗LPA的mAb和指定量的(14:0、16:0、18:0、18:1、18:2和20:4)LPA、DSPA、18:1LPC(溶血磷月旨酰胆碱)、S1P、神经酰胺和神经酰胺-l-石粦酸加入ELISA氺反的孑L中并在37。C下卵孚育lh。洗才反并且每孔用100pl与羊抗鼠偶联的HRP(1:20,000稀释液)(Jackson，catNo115-035-003)或与1:50,000稀释的羊抗人(H+L)偶联的HRP(Jackson,catNo109-035-003)在37。C下孵育lh。洗板后，用四甲基对二氨基联苯(Sigma，catNoT0440)检测酶促反应并通过加入1MH2S04终止反应。使用ThermoMultiskanEX在450nm下测量光密度(OD)。原始数据转入用于分析的GraphPad软件。抗体纯化单克隆抗体通过将由培养上清液以0.5mL/min穿过蛋白A/G柱(Pierce,Cat.No53133)进4亍纯4b。移动相由1xpierceIgG结合緩冲液(Cat.No21001)和0.1M甘氨酸pH2.7(Pierce，洗脱緩冲液，Cat.No21004)组成。在0.1M甘氨酸中的抗体收集物用pH8.0的IM磷酸緩沖液稀释10%(v/v)，以中和pH。IgGl收集物集中起来并对1xPBS(PierceSlide-A隱LyzerCassette,3,500MWCO，Cat.No66382)进4亍彻底;参透。洗出液用CentriconYM-3(10,000MWCO,AmiconCat.No4203)通过在2，500rcf下离心lh进行浓缩。抗体浓度通过上述〗吏用可商购的骨髓瘤IgGl卞者备液作为标准品通过定量ELISA确定。通过^f吏用单克隆抗体同型^式剂盒(Sigma,ISO-2)的ELISA确定mAb的重型链。实施例9:人源4匕抗SIP单克隆抗体-SPHINGOMAB本实施例描述了可与SIP特异反应的特别优选的人源化单克隆抗体。这种称为LT1009的抗体的结构、合成、纯化和;险测，在通常拥有的、共同^f寺决的、同时提交的美国专利申i青序列号-A，-的申请中描述[代理人案号LPT-3010-PV,名为"用于结合鞘氨酸-l-磷酸的组合物和方法"],为了各种内容其全部内容通过引用结合于此。与鼠科抗SIP抗体(LT1009是从其获得的)相比，人源化形式表现出皮克摩尔范围内的S1P结合亲和力，以及较高的稳定性和在体内的效率。如与天然存在的抗体相比，LT1009在每两个轻链多肽和每两个重链多肽(其包括每个抗体分子)中包括三个互补决定区(每个"CDR")。下面直4妄^合出了这6个CDR中每一个的氨基酸序列("VL"指免疫球蛋白轻链的可变区，而"VH"指免疫球蛋白重链的可变区)CDR1VL:ITTTDIDDDMN[SEQIDNO:1]CDR2VL:EGNILRP[SEQIDNO:2]CDR3VL:LQSDNLPFT[SEQIDNO:3]CDR1VH:DHTIH[SEQIDNO:4]CDR3VH:GGFYGSTIWFDF[SEQIDNO:5]CDR2VH:AISPRHDITKYNEMFRG[SEQIDNO:6]下面直4妄列出了LT1009的重链多肽和轻《连多肽的核苷酸和氨基酸序列LT1009HC核香酸序列[SEQIDNO:7]:1ststgcttgccgccaxrca.tgga这tggagctgggtgrttcctgttctttctgte51ctgaggtgcagetggtgeaigtctggagcag101gcccgggg^gtctctgaagatctcctgtca151tattcactggtgcccgggca201崎gcctggagtggatgggggctatttctcccagacatgatMlaoaatgsgatcsggtcacca301agcacrcgcctact:tgcagtggageagect:gaaggectegg351gtatttctgtggttctac:ggtggtttgact401仁tt:ggggcc这gtcaccgtctteageetccacc纹stgggc451ce為tcggtcttccccctggcsccctcctccctgggggcae501agcggccctgggctgcc:tggcttccccgaacc;ggtgacgg551tgtcgtgg貼ctca歸cgccctgaccagcggcgtgca_c^c!cttcccggct601gtcctacagtcctcaggaicttgaccgtgcc651ctcc这gcsgcttgggcacecagaectacatctgca改cgtg701agcacaggga751gggagggtgtctgctggaagcgctcctgcctggaegcate801ccggctatgcsgtccc的tcegtctgcctc851ggcctctgccatgctcagggagagggtctt901ctggctttttecccaggctctgggcaggc这caggctaggtgcccctaacc951caggccctgcacaicsaatggggcaggtgctgtgecaagage1001catatccgggaggaccctgcccctgaccta这gccca^ccccaaaggcca&a1051cctcagctcggacaccttctctcctcccag1101ctcceaatcttctctctgca^ga^g'GCcaaatcttgtgacaagcc:c这ggtaagcc^gcccaggcctcgccctccagctcaag12QltgcectagaLgrccagggacaggccecagccg1251g订tgctgacaogtceacc.tctcagc逸cctg'aac仁cctggrgr1301gggaccgtcagtcttcctcttcccccc这sa1351tctcccggscccctgaggtcacatgcgtggtggtggacgt1401ctggtacgtggacggegtggaggtgeataa1451tgccaagac汰tacegtgtgg15Cntcagc:gtcc:tcaccgtcctgggctgaatggcaaggagt改c1551aagftgcaaggagccctcccagecc:ccateg:i60iaaaggtgggacccgtggggtgcgagggc:cacatggacaga1651ggccggctcggctccaiccc;tcgtgac:cgctgtacc这acctc1701■si/""^gggcagcccegagaaccacaggtgta.csccctgcccccet1751.cocgggaggsgcctgacctg1801ggcttcta仁cccagcgacat1851ggaga.acaactacaagaccacgcctcccgtgctggactccgaeggctcet1901tctteetetatageaagrete.accjgtgg"acaagageaggtggeagc'agggg1951aacgtctteteatgcteegtgatgcatgaggretctgeaeaaceactoeae2001gcagaagagcctctccctgtctccgggtaaatagLT1009HC氨基酸序列[SEQIDNO:8]:1mewswvfIffvqlvcjsgaevkkpgeslkiscgsfgyifid511ewntgaisprhditkynatdkssstayi10:1qwsslkasdtamyfcarggfygstiwfdfwgqgtmvtvss151lapsskstsggtaalgclvkdyfpepvtvsvmsgaltsgvhtfpavlqss201giyslssw.tyicnvnhkpsritkv'dkrvapellggpsvf1251isrtpwtcvwdvshedps301eeqynstyrvvsnkalpapiektiskakgg351pr邻qvytlpvsltclvkgfypsdiavewesngqpeimyk磁ttppvldsdgsfflyskltvfscswihealhnhytgksls451lspgkLT1009LC核芬酸序列[SEQIDNO:9]:1aagtcttgccgccaccatgtc:tgtgcctaoceaggtgetgggactgctget51gctgt節ctgacagacgcecgacagtgacgcagtctccat101ccttectgtctgcatctgtatcaccatcacttgcataacc151ttgatgatgattccagcagg201agcccct關gctcetgatetccg改aggcaeitattcttegtcctggggtcc251cagcagcsgtggatatggca301agcaaatt:ffcagcctgaa$attttgcaacttattaetgtttgcagagtga351ta.actta.ccattcactttcggc:c鋒gggaccaagctgg的atcaa.acgta401c.ggtggctgcttcatcttcecg'ccatctga451.ctgcctctgttgtgtgcctg501agaggccasia这ggtggata纹cgccctccaatcgggtaact551ccc3ggfagagtgtcacagagctac改gcctcSOIagcagcacceacaaagtcta651cgcctgcgaagtcacccatcagggcctgagctcgcccgtcacaaagag'ct701agagtgttagLT1009LC氨基酸序列[SEQIDNO:10]:1msvptgvlgllllwltda.reettv'tgspsf1sasvgdrvtiteitttdid51ddranwfgqepgkapkllisegnilrpgvpsrfsssgygtdftltisklqp101.edfatyyclgsdnlpftfg<igtkleikrtvaapsvfif卯sdeglksgta151swcllnnfypreakvqwkvdnalqsgnsqesvtecjdskdstyslsstlt201lskadyekhkvyacevthq;gljsspv汰sfnrgec权利要求1.一种减少或预防动物眼睛的异常纤维生成、纤维化或瘢痕形成的方法，所述方法包括给予所述动物可与生物活性脂质反应的免疫诱导部分，其中，所述免疫诱导部分能够减少所述生物活性脂质的有效浓度。2.根据权利要求1所述的方法，其中所述免疫诱导部分是单克隆抗体或其片断、变异体或衍生物。3.才艮据权利要求1所述的方法，其中，所述生物活性脂质是溶血脂质。4.根据权利要求3所述的方法，其中所述溶血脂质是S1P或LPA或它们的变异体。5.根据权利要求2所述的方法，其中所述免疫诱导部分是可与S1P或LPA或它们的变异体反应的单克隆抗体。6.4艮据权利要求1所述的方法，其中所述动物是人类。7.—种调节动物眼睛的外一牛手术和创伤的伤口愈合反应的方法，所述方法包括乡会予所述动物可与生物活性脂质反应的免疫诱_导部分，其中所述免疫诱导部分能够减少所述生物活性脂质的有效浓度。8.根据权利要求7所述的方法，其中所述免疫诱导部分是单克隆抗体或其片断、变异体或衍生物。9.根据权利要求7所述的方法，其中所述生物活性脂质是溶血脂质。10.根据权利要求9所述的方法，其中，所述溶血脂质是S1P或LPA或它们的变异体。11.根据权利要求8所述的方法，其中所述免疫诱导部分是可与S1P或LPA或它们的变异体反应的单克隆纟元体。12.根据权利要求7所述的方法，其中所述动物是人类。13.—种减少或预防动物眼睛炎症的方法，所述方法包括:纟会予所述动物可与生物活性脂质反应的免疫"i秀导部分，其中所述免疫诱导部分能够减少所述生物活性脂质的有效浓度。14.根据权利要求13所述的方法，其中所述免疫诱导部分是单克隆抗体或其片断、变异体或衍生物。15.根据权利要求13所述的方法，其中所述生物活性脂质是溶血脂质。16.根据权利要求15所述的方法，其中所述溶血脂质是S1P或LPA或它们的变异体。17.根据权利要求14所述的方法，其中所述免疫诱导部分是可与S1P或LPA或它们的变异体反应的单克隆抗体。18.根据权利要求13所述的方法，其中所述动物是人类。19.一种减少或子贞防动物眼睛异常新血管生成的方法，所述方法包括给予所述动物可与生物活性脂质反应的免疫i秀导部分，其中，所述免疫诱导部分能够减少所述生物活性脂质的有效浓度。20.根据权利要求19所述的方法，其中所述免疫诱导部分是单克隆抗体或其片断、变异体或衍生物。21.根据权利要求19所述的方法，其中所述生物活性脂质是溶血脂质。22.才艮据4又利要求21所述的方法，其中所述溶血脂质是S1P或LPA或它们的变异体。23.根据权利要求20所述的方法，其中所述免疫诱导部分是可与S1P或LPA或它们的变异体反应的单克隆纟元体。24.才艮据;K利要求19所述的方法，其中所述动物是人类。25.—种用于减弱动物眼部免疫反应的方法，所述方法包4舌纟会予所述动物可与生物活性脂质反应的免疫诱导部分，其中所述免疫诱导部分能够减少所述生物活性脂质的有效浓度。26.根据权利要求25所述的方法，其中所述免疫诱导部分是单克隆抗体或其片断、变异体或衍生物。27.根据权利要求25所述的方法，其中所述生物活性脂质是溶血脂质。28.根据权利要求27所述的方法，其中所述溶血脂质是S1P或LPA或它们的变异体。29.根据权利要求26所述的方法，其中所述免疫诱导部分是可与S1P或LPA或它们的变异体反应的单克隆抗体。30.根据权利要求25所述的方法，其中所述动物是人类。31.—种用于减少动物中生物活性脂质的有效眼部浓度或活性的方法，所述方法包括给予所述动物可与生物活性脂质反应的免疫诱导部分，其中所述免疫诱导部分能够减少所述生物活性脂质的有效浓度。32.根据权利要求31所述的方法，其中所述免疫诱导部分是单克隆抗体或其片断、变异体或衍生物。33.才艮据权利要求31所述的方法，其中所述生物活性脂质是溶血脂质。34.4艮据权利要求33所述的方法，其中所述溶血脂质是S1P或LPA或它们的变异体。35.根据权利要求32所述的方法，其中所述免疫诱导部分是可与S1P或LPA或它们的变异体反应的单克隆4元体。36.根据权利要求31所述的方法，其中所述动物是人类。37.—种治疗受i式者目艮部疾病或病症的方法，所述方法包括「纟会予所述受试者一种包括可与生物活性脂质反应的免疫i秀导部分的药物组合物，其中所述免疫诱导部分能够减少所述生物活性脂质的有效浓度。38.根据权利要求37所述的方法，其中所述免疫诱导部分是单克隆抗体或其片断、变异体或衍生物。39.根据权利要求37所述的方法，其中所述生物活性脂质是溶血脂质。40.根据权利要求39所述的方法，其中所述溶血脂质是S1P或LPA或它们的变异体。41.根据权利要求38所述的方法，其中所述免疫诱导部分是可与S1P或LPA或它们的变异体反应的单克隆抗体。42.根据权利要求37所述的方法，其中所述受试者是人类受试者。43.根据权利要求37所述的方法，其中所述眼部疾病或病症至少部分地以异常的纤维生成、纤维化、或瘢痕形成为特^正。44.才艮据权利要求43所述的方法，其中至少部分以异常的纤维生成、纤维化、或瘢痕形成为特征的所述眼部疾病或病症选自由年龄相关性黄斑变性、糖尿病视网膜病变、早产儿#见网膜病变、镰状红细胞性视网膜病变、缺血性视网膜病变、3见网膜静脉闭塞疾病、黄斑铍褶、玻璃纸样视网膜病变、ERM形成、隐形眼镜过度磨损、牵拉性视网膜脱离、增生性玻璃体一见网膜病变、创伤损伤、眼瘢痕性类天疱疮、史-约综合症、中毒性表皮坏死爭〉解症、翼状胬肉、以及包括屈光手术、^皮璃体+刀开术和青光眼手术的眼部手术的后果组成的组。45.根据权利要求37所述的方法，其中所述眼部疾病或病症是炎症或免疫病症。46.根据权利要求45所述的方法，其中所述炎症或免疫病症选自由年龄相关性黄斑变性、葡萄膜炎、玻璃体炎、包4舌单纯性疱渗感染、带状疱渗感染和原虫感染的各种感染；角膜移才直排斥以及眼部纟且织力包浆菌病组成的组。47.根据权利要求37所述的方法，其中所述眼部疾病或病症至少部分地以异常新血管生成为特征。48.根据权利要求47所述的方法，其中至少部分地以异常新血管性、糖尿病视网膜病变、早产儿视网膜病变、角膜移植排斥、新血管性青光眼、隐形眼镜过度磨损、包括单纯性疱渗感染、带状疱瘆感染和原虫感染的角膜感染；翼状胬肉、缺血性视网膜病变、视网膜静脉闭塞疾病、感染性葡萄膜炎、t曼性—见网膜脱离、激光损伤、镰状红细胞视网膜病变、静脉闭塞疾病、脉络膜新血管生成、视网膜血管瘤增生、以及原发性息肉状脉络月莫血管病变组成的组。49.根据权利要求37所述的方法，其中所述免疫诱导部分是通过以下方式给药的系统的、局部的、通过玻璃体内或眼周注射、电离子透入疗法、喷雾或滴剂、或作为原位胶部分、眼部插入物、角膜保护膜或隐形眼镜、脂质体、非离子表面活性剂嚢泡/discome、粘膜粘附系统、冻干载体系统、微粒、亚微粒乳剂、树枝状大分子、孩"求、纳米球、或collasome以及它们的组合。50.根据权利要求37所述的方法，其中所述免疫诱导部分是经修饰的、未^务饰的、或作为具有或不具有增强剂和/或渗透增强剂的前药而4是供的。51.一种药物组合物，包括在药物可接受的载体中与生物活性脂质反应的免疫i秀导部分。52.才艮据4又利要求51所述的药物组合物，适于在眼睛内和/或眼睛上使用。53.根据权利要求51所述的药物组合物，其中所述药物纟且合物包4舌;岸酸盐IC冲液。54.—种治疗受试者石更皮病的方法，所述方法包:l舌给予所述受试者包括可与生物活性脂质反应的免疫诱导部分的药物组合物，其中所述免疫诱导部分能够减少所述生物活性脂质的有效浓度。55.根据权利要求54所述的方法，其中所述药物组合物是系统性、皮内、皮下、通过吸入粘膜给药或局部;也给药的。56.才艮据4又利要求54所述的方法，其中所述受试者是人类受试者。全文摘要本发明涉及用于预防和治疗包括眼部疾病和病症在内的疾病和病症的组合物和方法，所述疾病和病症的特征在于异常的纤维生成或瘢痕形成、炎症和/或异常的新血管生成或血管生成。本发明的组合物和方法利用能针对生物活性脂质具有特异反应活性并能够减少所述生物活性脂质的有效浓度的免疫诱导部分。在一些实施例中，该免疫诱导部分是针对1-磷酸鞘氨醇(S1P)或溶血磷脂酸(LPA)具有反应活性的单克隆抗体。文档编号C12P21/08GK101340929SQ200680048337公开日2009年1月7日申请日期2006年10月27日优先权日2005年10月28日发明者威廉·A·加兰,格伦·L·斯托勒,罗格·A·萨巴迪尼申请人:勒帕斯公司