专利名称：花楸离体繁殖的方法
技术领域：
本发明涉及花楸的繁殖方法。
背景技术：
花楸(5brZ^; o/ma^a"m^Hendl)又名百花山花楸、花楸树，属蔷薇科 苹果亚科花楸属落叶小乔木，是我国北方珍贵的观果树种之一。花楸兼具观赏 性、耐寒性、适应性，所以非常适合在冬季寒冷、色调单调的北方城市内推广 栽培。
目前生产和科学研究中采用播种方式繁殖花楸，播种繁殖花楸存在以下缺 点1、生长周期长，成型慢；2、由于采种母树均为天然野生花楸树，且在林 内呈散生状态，所以种子收集困难，来源不稳定；3、果实出种率低、仅为1% 左右；4、种子具有深休眠特性，催芽处理技术比较复杂、不易掌握；5、种子 出苗率低，苗木产量低，无法满足市场需要；6、种子(杂交)基因性状易产 生变异，不能保持母本优良性状。所以目前花楸难以大规模产业化繁殖、栽种。
发明内容
本发明的目的是为了解决目前播种方式繁殖花楸存在生长周期长、成型 慢，种子收集困难，果实出种率低，种子催芽处理技术复杂，种子出苗率低， 苗木产量低和基因性状易产生变异的缺陷，而提供的花楸离体繁殖的方法。
花楸按以下步骤离体繁殖 一、将经过消毒的花楸胚接种到每升加入 0.5~1.0 mg 6-苄基氨基嘌呤和0.05~0.1 mg奈乙酸、pH值为5.5~6.0的MS固 体培养基上培养30~40天形成不定芽;二 、将不定芽转移到每升加入0.5~1.0 mg 6-苄基氨基嘌呤和0.05 0.1 mg奈乙酸、pH值为5.5-6.0的MS固体培养基上 继代培养，至形成微枝；三、将微枝或继代培养的微枝剪切成长度为l~3cm、 带有腋芽或顶芽的茎段，然后接种到每升加入0.5-1.0 mg 6-节基氨基嘌呤和 0.05 0.1mg奈乙酸、pH值为5.5~6.0的WPM培养基上培养至腋芽或顶芽的长 度为^lcm的无根苗；四、将无根苗转入每升加入0.1 0.5 mg生长激素、pH 值为5.5 6.0、无机盐浓度为1/2的MS固体培养基，并在每天光照时间为16~18
h，温度为25 3(TC，湿度为60~80%的条件下培养诱导生根，即得到花楸再生 植株；其中步骤四中的生长激素为奈乙酸或吲哚-3-丁酸。
花楸也可以按以下步骤离体繁殖 一、将经过消毒的花楸胚接种到每升加 入0.5-1.0 mg 6-节基氨基嘌呤和0.05-0.1 mg奈乙酸、pH值为5.5-6.0的MS 固体培养基上培养30~40天形成不定芽；二、将不定芽转移到每升加入0.5-1.0 mg 6-苄基氨基嘌吟和0.05~0.1mg奈乙酸、pH值为5.5-6.0的MS固体培养基 上继代培养，至形成微枝；三、将微枝或继代培养的微枝剪切成长度为1~3 cm、 带有腋芽或顶芽的茎段，然后接种到每升加入0.5 1.0mg6-苄基氨基嘌呤和 0.05 0.1 mg奈乙酸、pH值为5.5 6.0的WPM培养基上培养至腋芽或顶芽的 长度为》2cm的无根苗；四、将无根苗剪切下来，再将剪出的新茬口插入由草 炭土、蛭石、珍珠岩按5 : 4 : 1的体积比混合而成的生根基质中，基质含水量 为60%~80%、在温度为25 3(TC，湿度为60~80%的条件下驯化培养3~4周， 即得到花楸再生植株；其中步骤四在生根基质中拌入菌虫双杀，每立方米生根 基质中菌虫双杀的用药量为2 5克。
本发明采用组织培养的方法繁殖花楸，有利于植株脱毒，减少病虫害，提 高花楸苗木生长和观赏质量，达到快速繁殖和复壮的目的。本发明为实现花楸 苗木大规模产业化生产奠定基础。
本发明花楸离体繁殖方法操作简单、易掌握，不受天气和季节的限制，而 且不需要占用大量的土地。本发明方法繁殖出的花楸与优良母体具有相同的基 因，保证了性状的统一。本发明方法繁殖花楸具有繁殖周期短，繁殖系数高(由 一个胚形成多棵再生植株)，成活率高(成活率高达99%以上)和成型快的优 点。
具体实施例方式
具体实施方式
一本实施方式花楸按以下步骤离体繁殖 一、将经过消毒 的花楸胚接种到每升加入0.5 1.0 mg 6-节基氨基嘌呤和0.05 0.1mg奈乙酸、 pH值为5.5~6.0的MS固体培养基上培养30~40天形成不定芽；二、将不定芽 转移到每升加入0.5 1.0 mg 6-苄基氨基嘌呤和0.05~0.1 mg奈乙酸、pH值为 5.5~6.0的MS固体培养基上继代培养，至形成微枝；三、将微枝或继代培养 的微枝剪切成长度为l~3cm、带有腋芽或顶芽的茎段，然后接种到每升加入
0.5 1.0 mg 6-节基氨基嘌呤和0.05~0.1mg奈乙酸、pH值为5.5~6.0的WPM培
养基上培养至腋芽或顶芽的长度为》lcm的无根苗；四、将无根苗转入每升加 入0,1-0.5 mg生长激素、pH值为5.5 6.0、无机盐浓度为1/2的MS固体培养 基，并在每天光照时间为16 18h，温度为25 3(TC，湿度为60 80%的条件下 培养诱导生根，即得到花楸再生植株；其中步骤四中的生长激素为奈乙酸或吲 哚-3-丁酸。
本实施方式在无菌、无病毒的条件下繁殖花楸再生植株，再生植株为无病 毒植株。本实施方式繁殖再生植株无需占用土地，节省空间，室内每平方米可 繁殖上千株再生植株。本实施方式步骤二形成的微枝可继代培养2代以上。
具体实施方式
二本实施方式与具体实施方式
一的不同点是步骤一中的 花楸胚为成熟的花楸胚或幼嫩的花楸胚。其它步骤及参数与实施方式一相同。
具体实施方式
三本实施方式与具体实施方式
一的不同点是还包括步骤 五将根系发达的再生植株移栽到由泥炭土和砂子按2 : 1的体积比混合而成的 驯化基质中，在温度为25 3(TC，湿度〉80%的条件下驯化培养。其它步骤及 参数与实施方式一相同。
本实施方式驯化培养就是陆续增加再生植株的光照时间和通风量，经过驯 化培养的再生植株可移栽到温室或大棚中进行培养。
具体实施方式
四本实施方式与具体实施方式
三的不同点是步骤五中驯 化基质的含水量为60%~80%。其它步骤及参数与实施方式三相同。
具体实施方式
五本实施方式与具体实施方式
三的不同点是步骤五中先 洗掉再生植株根系上的培养基再移栽到驯化基质中。其它步骤及参数与实施方 式三相同。
具体实施方式
六本实施方式与具体实施方式
三的不同点是步骤五中多
于4条根、每条根长度〉3 cm的再生植株为根系发达的再生植株。其它步骤
及参数与实施方式三相同。
具体实施方式
七本实施方式与具体实施方式
一的不同点是步骤三中将
继代培养了 3 4代的微枝剪切成长度为1.5 2.8cm、带有腋芽或顶芽的茎段， 然后接种到WPM培养基上长成无根苗。其它步骤及参数与实施方式一相同。 本实施方式所选用的继代培养了 3-4代的微枝具有高繁殖系数，繁殖系数
》10。
具体实施方式
八本实施方式与具体实施方式
一的不同点是步骤二继代 培养中每隔3 4周更换一次培养基。其它步骤及参数与实施方式一相同。
具体实施方式
九本实施方式花楸按以下步骤离体繁殖 一、将经过消毒 的花楸胚接种到每升加入0.5-1.0 mg 6-苄基氨基嘌呤和0.05~0.1 mg奈乙酸、 pH值为5.5~6.0的MS固体培养基上培养30 40天形成不定芽；二、将不定芽 转移到每升加入0.5~1.0 mg 6-苄基氨基嘌呤和0.05~0.1mg奈乙酸、pH值为 5.5 6.0的MS固体培养基上继代培养，至形成微枝；三、将微枝或继代培养 的微枝剪切成长度为1 3 cm、带有腋芽或顶芽的茎段，然后接种到每升加入 0.5 1.0mg6-苄基氨基嘌呤和0.05 0.1 mg奈乙酸、pH值为5.5~6.0的WPM培 养基上培养至腋芽或顶芽的长度为》2cm的无根苗；四、将无根苗剪切下来， 再将剪出的新茬口插入由草炭土、蛭石、珍珠岩按5 : 4 : 1的体积比混合而成 的生根基质中，基质含水量为60%~80%、在温度为25 3(TC，湿度为60~80% 的条件下驯化培养3 4周，即得到花楸再生植株；其中步骤四在生根基质中拌 入菌虫双杀，每立方米生根基质中菌虫双杀的用药量为2 5克。
本实施方式在无菌、无病毒的条件下繁殖花楸再生植株，再生植株为无病 毒植株。本实施方式繁殖再生植株无需占用土地，节省空间，室内每平方米可 繁殖上千株再生植株。本实施方式的再生植株可移栽到温室或大棚中进行培 养。本实施方式步骤二形成的微枝可继代培养2代以上。本实施方式生根基质 中拌入的药物(菌虫双杀)为粉末状。
具体实施方式
十本实施方式与具体实施方式
九的不同点是步骤四每立 方米生根基质中菌虫双杀的用药量为3~4克。其它步骤及参数与实施方式九相同。
具体实施方式
十一本实施方式与具体实施方式
九的不同点是步骤一中 的花楸胚为成熟的花楸胚或幼嫩的花楸胚。其它步骤及参数与实施方式九相 同。
具体实施方式
十二本实施方式与具体实施方式
九的不同点是步骤四中 驯化培养是先将盖在无根苗上方的培养盒盖一端支起1/4高度培养一周，再将 培养盒盖一端支起1/2高度培养一周，然后将培养盒盖一端支起3/4高度培养
一周，之后将培养盒盖撤去继续培养一周。其它步骤及参数与实施方式九相同。 本实施方式中的培养盒购自于长沙长锦科技有限公司。本实施方式中的
1/4、 1/2和3/4高度分别为培养盒盖可支起最大高度的1/4、 1/2和3/4。
具体实施方式
十三本实施方式与具体实施方式
九的不同点是步骤三中
将继代培养了 3 4代的微枝剪切成长度为1.5 2.8cm、带有腋芽或顶芽的茎段，
然后接种到WPM培养基上长成无根苗。其它步骤及参数与实施方式九相同。 本实施方式所选用的继代培养了 3~4代的微枝具有高繁殖系数，繁殖系数
》10。
权利要求
1、花楸离体繁殖的方法，其特征在于花楸按以下步骤离体繁殖一、将经过消毒的花楸胚接种到每升加入0.5～1.0mg 6-苄基氨基嘌呤和0.05～0.1mg奈乙酸、pH值为5.5～6.0的MS固体培养基上培养30～40天形成不定芽；二、将不定芽转移到每升加入0.5～1.0mg 6-苄基氨基嘌呤和0.05～0.1mg奈乙酸、pH值为5.5～6.0的MS固体培养基上继代培养，至形成微枝；三、将微枝或继代培养的微枝剪切成长度为1～3cm、带有腋芽或顶芽的茎段，然后接种到每升加入0.5～1.0mg 6-苄基氨基嘌呤和0.05～0.1mg奈乙酸、pH值为5.5～6.0的WPM培养基上培养至腋芽或顶芽的长度为≥1cm的无根苗；四、将无根苗转入每升加入0.1～0.5mg生长激素、pH值为5.5～6.0、无机盐浓度为1/2的MS固体培养基，并在每天光照时间为16～18h，温度为25～30℃，湿度为60～80％的条件下培养诱导生根，即得到花楸再生植株；其中步骤四中的生长激素为奈乙酸或吲哚-3-丁酸。
2、 根据权利要求1所述的花楸离体繁殖的方法，其特征在于步骤一中的 花楸胚为成熟的花楸胚或幼嫩的花楸胚。
3、 根据权利要求1所述的花楸离体繁殖的方法，其特征在于还包括步骤 五将根系发达的再生植株移栽到由泥炭土和砂子按2 : 1的体积比混合而成的 驯化基质中，在温度为25 30'C，湿度〉80%的条件下驯化培养。
4、 根据权利要求3所述的花楸离体繁殖的方法，其特征在于步骤五中驯 化基质的含水量为60% 80%。
5、 根据权利要求3所述的花楸离体繁殖的方法，其特征在于步骤五中先 洗掉再生植株根系上的培养基再移栽到驯化基质中。
6、 根据权利要求1所述的花楸离体繁殖的方法，其特征在于步骤三中用 继代培养了3 4代的微枝剪切成长度为L5 2.8cm、带有腋芽或顶芽的茎段后 接种到WPM培养基上长成无根苗。
7、 根据权利要求1所述的花楸离体繁殖的方法，其特征在于步骤二继代 培养中每隔3~4周更换一次培养基。
8、 花楸离体繁殖的方法，其特征在于花楸按以下步骤离体繁殖 一、将 经过消毒的花楸胚接种到每升加入0.5-1.0 mg 6-节基氨基嘌呤和0.05-0.1 mg 奈乙酸、pH值为5.5-6.0的MS固体培养基上培养30 40天形成不定芽；二、 将不定芽转移到每升加入0.5 1.0 mg 6-苄基氨基嘌呤和0.05-0.1 mg奈乙酸、 pH值为5.5 6.0的MS固体培养基上继代培养，至形成微枝；三、将微枝或继 代培养的微枝剪切成长度为1~3 cm、带有腋芽或顶芽的茎段，然后接种到每 升加入0.5~1.0 mg 6-苄基氨基嘌呤和0.05-0.1 mg奈乙酸、pH值为5.5-6.0的 WPM培养基上培养至腋芽或顶芽的长度为》2cm无根苗；四、将无根苗剪切 下来，再将剪出的新茬口插入由草炭土、蛭石、珍珠岩按5 : 4 : 1的体积比混 合而成的生根基质中，基质含水量为60% 80%、在温度为25~30°C，湿度为 60~80%的条件下驯化培养3 4周，即得到花楸再生植株；其中步骤四在生根 基质中拌入菌虫双杀，每立方米生根基质中菌虫双杀的用药量为2 5克。
9、 根据权利要求8所述的花楸离体繁殖的方法，其特征在于步骤四每立 方米生根基质中菌虫双杀的用药量为3~4克。
10、 根据权利要求8所述的花楸离体繁殖的方法，其特征在于步骤四中驯 化培养是先将盖在无根苗上方的培养盒盖一端支起1/4高度培养一周，再将培 养盒盖一端支起1/2高度培养一周，然后将培养盒盖一端支起3/4高度培养一 周，之后将培养盒盖撤去继续培养一周。
全文摘要
花楸离体繁殖的方法，它涉及花楸的繁殖方法。它解决了目前播种方式繁殖花楸存在生长周期长、成型慢，种子收集困难，果实出种率低，种子催芽处理技术复杂，种子出苗率低，苗木产量低和基因性状易产生变异的缺陷。离体繁殖先形成不定芽，再形成微枝，然后微枝或继代培养的微枝增殖形成无根苗，再生根，即得到花楸再生植株。本发明花楸离体繁殖方法操作简单、易掌握，不受天气和季节的限制，而且不需要占用大量的土地。本发明方法繁殖出的花楸与优良母体具有相同的基因，保证了性状的统一。本发明方法繁殖花楸具有繁殖周期短，繁殖系数高，成活率高和成型快的优点。
文档编号C12N5/04GK101103702SQ200710072700
公开日2008年1月16日 申请日期2007年8月24日 优先权日2007年8月24日
发明者玲 杨, 沈海龙, 王爱芝 申请人:东北林业大学;沈海龙;王爱芝;杨 玲