专利名称：甲基泼尼松龙脱氢物的制备方法
技术领域：
本发明涉及一种甲基泼尼松龙脱氢物的制备方法，属于药物化学及生物制药 技术领域。
背景技术：
甲基泼尼松龙是一种皮质激素药物，它具有抗炎，抗内毒素，抑制免疫，抗 休克等药理作用，可以制成临床用针剂，在临床上具有非常重要的作用。由于甲基泼尼松龙 药物的生产工艺技术非常复杂，生产周期长，属于技术密集型产品。其中，甲基泼尼松龙l 位脱氢工序是甲基泼尼松龙生产过程中的一个关键步骤，直接影响到甲基泼尼松龙的质量和 收率。原有脱氢工艺一般用Se02脱氢，Se02是剧毒物质，污染大，且反应收率低， 一般只有 55%，产物质量差，产物中残留的微量Se02很难消除。经检索，目前甲基泼尼松龙的合成方法有10多种，均为上世纪五六十年代开发，共同缺 点是收率低，成本高。1959年发表于美国化学文摘(见CA59P14074)上的合成方法，共有10步 化学反应，但其中的脱氢和置换两步反应效果都很差，脱氢反应收率只有55%，导致成本太 高，无法实现工业化生产。因此申请人经过试验研究对其中的脱氢反应进行了优化。
发明内容
本发明的目的在于提供一种甲基泼尼松龙脱氢物的制备方法。本发明针对现有技术的 不足，采用甲基泼尼松龙中间体为发酵底物，用生物脱氢代替化学脱氢，其收率达到70 85%，产品纯度达到97%以上，工艺环保。本发明是这样实现的 一种甲基泼尼松龙脱氢物的制备方法以甲基泼尼松龙中间体为发酵底物，用节杆菌进行生物脱氢而得。具体的说，将甲基泼尼松龙中间体以二氧六环作溶剂溶解或用气流粉碎，投入已培养好节杆菌的发酵罐中进行生物转化，然后离心、干燥得粗品，再用甲醇、冰醋酸、T试剂和活性碳提取并精制，干燥后即得甲基泼尼松龙脱氢物。所述的甲基泼尼松龙中间体为以下5种之一①6a-甲基-lie， 17a-二羟基-孕甾-4-稀-3， 20-二酮；②6a-甲基-17a-羟基-孕甾-4-稀-3， 11， 20-三酮-21-醋酸酯；③6a-甲 基-lie， 17 a-二羟基-孕甾-4-稀-3， 20-二酮-21-醋酸酯；④6 a -甲基-17 a-羟基-孕甾 -4-稀-3， 11， 20-三酮； 6 a-甲基-lie， 17 a ， 21-三羟基-孕留-4-稀-3， 20-二酮。甲基泼尼松龙中间体的投料浓度为0.5 2% (相对于发酵液容积)；在发酵罐中的氧化 温度为30 34°C ，氧化时间为42 55小时。溶解投料时溶剂二氧六环的用量为底物重量的7 15倍。 干粉投料时底物用气流粉碎至细度10um以下的占90%以上。 本发明制备甲基泼尼松龙脱氢物的工艺流程如下节杆菌斜面培养-^ 一级种子培养-^二级种子培养-^三级种子培养-^投料-^加热7(TC以上放罐-^离心、干燥-^提取并精制-^产物与现有技术相比，本发明采用甲基泼尼松龙中间体为发酵底物，用节杆菌生物脱氢代替 传统的化学脱氢工艺，收率从55%提高到70 85%，成本大大较低，产品纯度达到97%以上， 从而使甲基泼尼松龙的合成得以实现工业化生产；且完全避免了剧毒物质Se02的残留，工艺 环保。
具体实施例方式本发明的实施例l:节杆菌依次进行斜面培养、 一级种子培养、二级种子培养和三级种子培养；将6a-甲基-11{3， 17a-二羟基-孕甾-4-稀-3， 20-二酮用气流粉碎至细度10um以 下的占90%以上，投入已培养好节杆菌的发酵罐中，投料浓度1.5%，氧化温度3(TC，氧化时间 47小时，加热7(TC以上放罐，然后离心、干燥得粗品，转化率88.66%，底物7. 23%，主杂质 2.79%;再用甲醇、冰醋酸、T试剂和活性碳提取并精制，干燥后得甲基泼尼松龙脱氢物，含 量96. 29%，最大杂质含量l. 10%，收率71. 18%。本发明的实施例2:节杆菌依次进行斜面培养、 一级种子培养、二级种子培养和三级种 子培养；将6a-甲基-17a-羟基-孕甾-4-稀-3， 11， 20-三酮-21-醋酸酯用气流粉碎至细度 10um以下的占90。/。以上，投入已培养好节杆菌的发酵罐中，投料浓度0.5%，氧化温度31。C，氧 化时间42小时，加热7(TC以上放罐，然后离心、干燥得粗品，转化率92. 16%，底物l. 56%，主 杂质4.54%;再用甲醇、冰醋酸、T试剂和活性碳提取并精制，干燥后得甲基泼尼松龙脱氢物 ，含量96. 30%，最大杂质含量l. 23%，收率78. 75%。本发明的实施例3:节杆菌置于发酵罐中进行培养；将6a-甲基-lie， 17a-二羟基-孕 甾-4-稀-3， 20-二酮-21-醋酸酯用15倍重量的二氧六环溶解，投入已培养好节杆菌的发酵罐 中，投料浓度1.0%，氧化温度30。C，氧化时间55小时，加热70。C以上放罐，然后离心、干燥 得粗品，转化率89. 17%，底物6. 46%，主杂质2. 67%;再用甲醇、冰醋酸、T试剂和活性碳提取 并精制，干燥后得甲基泼尼松龙脱氢物，含量96. 99%，最大杂质含量O. 85%，收率82. 36%。本发明的实施例4:节杆菌依次进行斜面培养、 一级种子培养、二级种子培养和三级种
子培养；将6a-甲基-17a-羟基-孕甾-4-稀-3， 11， 20-三酮用7倍重量的二氧六环溶解，投 入已培养好节杆菌的发酵罐中，投料浓度1.1%，氧化温度34。C，氧化时间49小时，加热7(TC 以上放罐，然后离心、干燥得粗品，转化率87. 7%，底物8.26%，主杂质2. 17%;再用甲醇、冰 醋酸、T试剂和活性碳提取并精制，干燥后得甲基泼尼松龙脱氢物，含量97. 05%，最大杂质含 量O. 86%，收率79. 53%。本发明的实施例5:节杆菌置于发酵罐中进行培养；将6a-甲基-lie， 17a，21-三羟基 -孕甾-4-稀-3， 20-二酮用10倍重量的二氧六环溶解，投入已培养好节杆菌的发酵罐中，投 料浓度2%，氧化温度3rC，氧化时间55小时，加热7(TC以上放罐，然后离心、干燥得粗品， 转化率87. 7%，底物8.26%，主杂质2. 17%;再用甲醇、冰醋酸、T试剂和活性碳提取并精制， 干燥后得甲基泼尼松龙脱氢物，含量97. 05%，最大杂质含量O. 86%，收率70. 58%。
权利要求
1.一种甲基泼尼松龙脱氢物的制备方法，其特征在于它是以甲基泼尼松龙中间体为发酵底物，用节杆菌进行生物脱氢而得。
2.按照权利要求l所述甲基泼尼松龙脱氢物的制备方法，其特征在于 :将甲基泼尼松龙中间体以二氧六环作溶剂溶解或用气流粉碎，投入已培养好节杆菌的发酵 罐中进行生物转化，然后离心、干燥，提取并精制，即得甲基泼尼松龙脱氢物。
3.按照权利要求1或2所述甲基泼尼松龙脱氢物的制备方法，其特征在于所述的甲基泼尼松龙中间体为以下5种之一①6a-甲基-lie， 17a-二羟基-孕甾 -4-稀-3， 20-二酮;②6a-甲基-17 a-羟基-孕甾-4-稀-3， 11， 20-三酮-21-醋酸酯；③6 a -甲基-lip, 17 a-二羟基-孕甾-4-稀-3， 20-二酮-21-醋酸酯；④6 a -甲基-17 a -羟基-孕 甾-4-稀-3， 11， 20-三酮；⑤6a-甲基-11{3， 17 a ， 21-三羟基-孕甾-4-稀-3， 20-二酮。
4.按照权利要求2所述甲基泼尼松龙脱氢物的制备方法，其特征在于 :甲基泼尼松龙中间体的投料浓度为0.5 2%;在发酵罐中的氧化温度为30 34'C，氧化时 间为42 55小时。
5.按照权利要求2所述甲基泼尼松龙脱氢物的制备方法，其特征在于 :溶解投料时溶剂二氧六环的用量为底物重量的7 15倍。
6.按照权利要求2所述甲基泼尼松龙脱氢物的制备方法，其特征在于 :干粉投料时底物用气流粉碎至细度1 Oum以下的占90%以上。
全文摘要
本发明公开了一种甲基泼尼松龙脱氢物的制备方法，该方法是以甲基泼尼松龙中间体为发酵底物，用节杆菌进行生物脱氢而得。与现有技术相比，本发明采用甲基泼尼松龙中间体为发酵底物，用节杆菌生物脱氢代替传统的化学脱氢工艺，收率从55％提高到70～85％，成本大大较低，产品纯度达到97％以上，使甲基泼尼松龙的合成得以实现工业化生产；且完全避免了剧毒物质SeO<sub>2</sub>的残留，工艺环保。
文档编号C12P33/00GK101153313SQ20071020163
公开日2008年4月2日 申请日期2007年9月10日 优先权日2007年9月10日
发明者应明华, 张直庆, 伟 林 申请人:浙江仙琚制药股份有限公司