专利名称：一种生物催化合成阿魏酰低聚糖的方法
技术领域：
一种生物催化合成阿魏酰低聚糖的方法，属于阿魏酸衍生物合成技术领域。
背景技术：
我国是小麦食用大国，小麦制粉后产生的麦麸量非常大，约在2000万吨左 右。麦麸中含有很多有益的物质，如阿魏酰低聚糖，可以发挥阿魏酸和低聚糖 的生理作用，但麦麸中阿魏酰低聚糖的含量很低，提取率不高，分离较为困难， 难以得到较纯的产品，不利于产品开发。
以分离后的低聚糖和阿魏酸为原料，采用脂肪酶法催化合成阿魏酰低聚糖， 可以得到不同的阿魏酰低聚糖的产品，可以方便的对其功能作用进行研究、比 较，使其得到更有效的利用。
发明内容
本发明的目的是提供一种生物催化合成阿魏酰低聚糖的方法，为其下一步 研究提供技术支持。
本发明的技术方案 一种生物催化合成阿魏酰低聚糖的方法，先将麦麸进 行酶解处理，分离得到不同的低聚糖，即侧链连有阿拉伯糖的组成个数不同的 低聚木糖，加入阿魏酸和脂肪酶，在叔丁醇中进行合成反应，对产物进行分离 得到阿魏酰低聚糖；
(1) 低聚糖的制取麦麸通过常规处理得到侧链连有阿拉伯糖的组成个数 不同的低聚糖木糖，木二糖，木三糖或木四糖；
(2) 催化合成加入分离后的低聚糖和阿魏酸，两者的摩尔比为l:l，介质 为叔丁醇，添加阿魏酸重量10-12%的脂肪酶，温度控制在50-70°C，反应时间 为10-14h;
(3) 混合物的分离反应结束后，加入蒸馏水过滤回收脂肪酶，供重复使 用；旋转蒸发回收得到叔丁醇，剩余液冷却至室温，过滤去除未反应的部分阿 魏酸和低聚糖；滤液为粗产物；
(4)产物的分离滤液粗产物过0.45pm的微孔滤膜，滤液浓縮，浓縮液 上AmberliteXAD-2(80x2.5cm)柱，柱预先用体积分数95%乙醇洗涤，再用蒸馏 水平衡，依次用2倍柱体积的蒸馏水、3倍柱体积的体积分数50%甲醇水溶液和 2倍柱体积的体积分数100%甲醇进行洗脱，将体积分数50%甲醇水溶液洗脱组 分浓縮，并进行冷冻干燥，再将固形物配成50mg/mL的水溶液，用SephadexLH20 作进一步分离，SephadexLH20(40x2.5cm)柱预先用体积分数25。/。乙醇平衡，并
用体积分数25%乙醇做洗脱液，上样量10mL，洗脱液流速0.5mL/min，每管收 集8mL。
所用的脂肪酶是诺维信脂肪酶435，酶活是10000PLU/g。 本发明的有益效果本发明以阿魏酸和麦麸中分离的低聚糖为原料，通过诺
维信脂肪酶435的催化作用，合成阿魏酰低聚糖。由于分离的低聚糖的不同，
可以得到不同的阿魏酰低聚糖，有利于对其进行理化性质及其他特性的分析，
得到更好的利用。
具体实施方式
实施例1
对麦麸进行水解处理，得到不同的低聚木糖，分离纯化，然后于叔丁醇介 质中在诺维信脂肪酶435的催化下与阿魏酸合成阿魏酰低聚糖。
(1) 不同的低聚糖的制取麦麸处理得到不溶性膳食纤维，再用木聚糖酶 水解得到低聚糖混合物，然后分离纯化得到组成个数不同的低聚木糖，包括木 糖，木二糖，木三糖，木四糖，低聚木糖的侧链连有阿拉伯糖。
(2) 阿魏酰低聚糖的催化合成称取等摩尔的阿魏酸和低聚糖，加入叔丁
醇，然后按照阿魏酸质量的10%添加诺维信脂肪酶435， 6(TC反应10-12h，摇床 震动速率为100转/min。
(3) 反应结束后混合物的分离反应结束后，加入蒸馏水过滤回收诺维信 脂肪酶435，旋转蒸发回收得到叔丁醇。剩余液冷却至室温，过滤去除未反应的 部分阿魏酸和低聚糖。再对产物进行下一步的分离。
(4) 产物的分离产物过0.45pm的微孔滤膜，滤液浓縮。浓縮液上Amberlite XAD-2柱(80x2.5cm)，柱预先用体积分数95%乙醇洗涤，再用蒸馏水平衡。依 次用2倍柱体积的蒸馏水、3倍柱体积的体积分数50%甲醇水溶液和2倍柱体积 的体积分数100%甲醇进行洗脱。将体积分数50%甲醇水溶液洗脱组分浓缩，并 进行冷冻干燥。再将固形物配成50mg/ml的水溶液，用SephadexLH20作进一步 分离。SephadexLH20(40x2.5cm)柱预先用体积分数25。/。乙醇平衡，并用体积分 数25%乙醇做洗脱液，上样量10mL，洗脱液流速0.5mL/min，每管收集8mL。
权利要求
1、一种生物催化合成阿魏酰低聚糖的方法，其特征是先将麦麸进行酶解处理，分离得到不同的低聚糖，即侧链连有阿拉伯糖的组成个数不同的低聚木糖，加入阿魏酸和脂肪酶，在叔丁醇中进行合成反应，对产物进行分离得到阿魏酰低聚糖；(1)低聚糖的制取麦麸通过常规处理得到侧链连有阿拉伯糖的组成个数不同的低聚糖木糖，木二糖，木三糖或木四糖；(2)催化合成加入分离后的低聚糖和阿魏酸，两者的摩尔比为1∶1，介质为叔丁醇，添加阿魏酸重量10-12％的脂肪酶，温度控制在50-70℃，反应时间为10-14h；(3)混合物的分离反应结束后，加入蒸馏水过滤回收脂肪酶，供重复使用；旋转蒸发回收得到叔丁醇，剩余液冷却至室温，过滤去除未反应的部分阿魏酸和低聚糖；滤液为粗产物；(4)产物的分离滤液粗产物过0.45μm的微孔滤膜，滤液浓缩，浓缩液上Amberlite XAD-2柱，柱预先用体积分数95％乙醇洗涤，再用蒸馏水平衡，依次用2倍柱体积的蒸馏水、3倍柱体积的体积分数50％甲醇水溶液和2倍柱体积的体积分数100％甲醇进行洗脱，将体积分数50％甲醇水溶液洗脱组分浓缩，并进行冷冻干燥，再将固形物配成50mg/mL的水溶液，用SephadexLH20作进一步分离，Sephadex LH20柱预先用体积分数25％乙醇平衡，并用体积分数25％乙醇做洗脱液，上样量10mL，洗脱液流速0.5mL/min，每管收集8mL。
2、 根据权利要求1所述的方法，其特征是所用的脂肪酶为诺维信脂肪酶435。
全文摘要
一种生物催化合成阿魏酰低聚糖的方法，属于阿魏酸衍生物合成技术领域。本发明以阿魏酸和麦麸中分离的低聚糖为原料，通过诺维信脂肪酶435的催化作用，合成阿魏酰低聚糖。由于分离的低聚糖的不同，可以得到不同的阿魏酰低聚糖，有利于对其进行理化性质及其他特性的分析，得到更好的利用。
文档编号C12P19/00GK101191137SQ20071030244
公开日2008年6月4日 申请日期2007年12月26日 优先权日2007年12月26日
发明者姚惠源, 晖 张, 立 王, 郭晓娜, 坤 马 申请人:江南大学