专利名称：：Adcc活性得到增强的抗体及其制造方法
技术领域：
：本发明涉及将抗体ADCC活性增强的方法和ADCC活性得到增强的抗体。
背景技术：
：使抗体的可变区为小鼠型而恒定区为人型的嵌合抗体、使可变区和恒定区双方均为人型的人源化抗体，作为癌、慢性风湿关节炎的治疗药受到期待。在癌的治疗中，一直以来使用的顺氯氨铂等化学合成的治疗药，对癌细胞和正常细胞的识别能力低，毒性高。因此现状是，癌的化学疗法对癌患者的体力负担大。另一方面，嵌合化或人源化的抗体由于具有识别癌细胞表面上的特异性分子的作用，因此其毒性低，对于接受治疗的患者来说体力负担轻。对于慢性风湿关节炎的治疗，在以往的以类固醇药为中心的治疗中，停留在延迟风湿症状的发展，但是对白介素6受体的人源化抗体由于能够抑制骨破坏、炎症的原因因子，因此发挥显著的治疗效果。这些治疗用抗体(嵌合抗体、人源化抗体)的制作方法大致分为3种。第一种是通过基因重组技术，从小鼠抗体向嵌合抗体、人源化抗体转化，即通过将抗体的抗原结合部位残留并置换成人型蛋白来进行人源化的方法。第二种是使用噬菌体展示的方法。在该方法中，由于使多种源于人的抗体可变区在噬菌体表面表达，因此可以选出能够识别目的蛋白的完全人型可变区，从而可以以选出的完全人型可变区为材料，利用基因重组技术，制作进一步加有人型恒定区的完全人源化抗体。最后，还有利用通过基因操作而具有人的抗体产生基因的TC小鼠的方法(NatureGenetics,Vol.16,113-114，1997)。该TC小鼠被作为目的蛋白的抗原免疫时，由于小鼠产生的抗体被基因操作使得全部成为人型，因此由将对TC小鼠进行抗原免疫后取出的淋巴球细胞和小鼠骨髓瘤细胞融合而得到的杂交瘤细胞，可以产生识别所免疫抗原的完全人源化抗体。14虽然可以通过上述的3种方法制作嵌合抗体或人源化抗体，但是无论使用哪种方法，治疗抗体的制造成本都远远高于低分子化合物的治疗药，这是个问题。由于其的高制造成本，治疗抗体的价格也非常高，对于癌或风湿患者来说形成很大的治疗费负担，这是现状。作为解决该问题的一个解决对策，考虑了使每单位质量的治疗抗体对癌细胞等的治疗效果上升的方法。也就是说，只要以少的治疗抗体量就可以获得与以往给药量同样的治疗效果，则可以减少对患者的每一次给药量，此外，还可以减少每一次的药费。作为显示该治疗抗体的治疗效果的一个指标，是抗体依赖细胞介导的细胞毒(ADCC)活性。该ADCC活性的机理是，治疗抗体的Fc部分与能够杀伤癌细胞的杀伤细胞上的Fq受体结合，进而通过治疗抗体的可变区的识别作用，向癌细胞导入杀伤细胞，结果是杀伤细胞借助于治疗抗体将癌细胞杀伤。作为用于使ADCC活性上升所要求的治疗抗体的性能，可以列举1)治疗抗体的可变区可以高效识别特异性地位于癌细胞表面的蛋白，2)治疗抗体的Fc部分可以与杀伤细胞上的Fq受体牢固结合。一直以来进行了很多通过解决该2)的项目而使ADCC活性上升的研究。ShinkawaT等人着眼于与作为治疗抗体IgGl的Fc区域的297位氨基酸即天冬酰胺(Asn)结合的两个糖链(N-Linkedoligosaccharide)结构，发现如果形成该糖链结构的岩藻糖缺损的糖链结构，则ADCC活性上升20倍~100倍(J.Biol.Chem.Vol.278,3466-3473，2003)。该由岩藻糖缺损结构带来的ADCC活性的报道，也由ShieldsRL等人发表(J.Biol.Chem.Vol.277,26733-26740，2002)。此外，PabloU等人也着眼于同样的糖链结构，发现通过控制该糖链结构中bisectingN國acetylglucosamine的结合量，ADCC活性可以上升数倍(NatureBiotechnologyVol.17,176-180,1999)。除了这样的、通过改变与IgGl的Fc区域结合的糖链结构来使该治疗抗体的ADCC活性上升的方法以外，美国GenentechInc.等研究者釆用计算机检索来检索通过在治疗抗体的Fc结构自身的氨基酸中加入变异而使其与Fc受体的结合增强的技术，通过S298A，E333A，K334A的三重变异，成功地使ADCC活性增强数十倍(J.Biol.Chem.Vol.276,6591-6604，2001)。另外，以下列出与本发明相关的现有技术文献。专利文献l:WO2004/029207专利文献2:WO2000/042072专利文献3:WO2004/063351专利文献4:WO2004/099249专利文献5:WO2006/019447专利文献6:特表2006-512407专利文献7:特表2003-512019专利文献8:WO2006/104989专利文献9:WO2006/105062非专利文献1:NatureGenetics,Vol.16,113-114，1997非专利文献2:J.Biol.Chem.Vol.278，3466-3473,2003非专利文献3:J.Biol.Chem.Vol.277,26733-26740，2002非专利文献4:NatureBiotechnologyVol.l7，176-180，1999非专利文献5:J.Biol.Chem.Vol.276，6591-6604,200
发明内容本发明的课题在于提供ADCC活性得到增强的抗体及其制造方法。本发明人进一步扩展了GenentechInc等研究者进行的Fc区域的氨基酸变异，进行了如下研究，即，在Fc区域导入由计算机检索无法导出的可能伴有大幅度结构变化的氨基酸即半胱氨酸(Cys)，看是否可以使ADCC活性增强。半胱氨酸置换意味着导入硫醇基(-SH)，所以生成二疏键(-S-S-)。因此，期待带来Fc结构的强烈变化。本发明人进行了如下研究，即，在人Cyl(序列号53记载的氨基酸序列)中，将Elvin16A.Kabat等在SequenceofproteinsofImmunologicalInterest(NIHPublicationNo.91-3242,1991)中给出的人IgGlH链恒定区的EUindex编号(在本说明书中，以下有时记作"kabat编号，，)的280、281、282、283、284、285、286、287、288、289、2卯、291、292、293、294、298、299、300、301、302、303、305、306、307、308、309、310或314位的氨基酸置换成半胱氨酸(以下，有时简记为Cys)，看是否可以增强ADCC活性。其结果发现，将人Cyl的286、287、288、289、290、291、292、294、298、301、302、303、305、306、307、308或309位的氨基酸置换成Cys的嵌合抗体，与野生型嵌合抗体相比显示出非常高的ADCC活性，从而完成了本发明。即，本发明提供以下〔1〕~〔41〕的发明。〔1〕一种抗体，其特征在于，在H链恒定区中，选自286、287、288、289、2卯、291、292、294、298、301、302、303、305、306、307、308或309位中的至少1个位置的氨基酸残基被置换成半胱氨酸。〔2〕如〔1〕所述的抗体，其特征在于，H链恒定区是选自人CYl、Cy2、Cy3以及Cy4中的任一个恒定区。〔3〕如〔1〕或〔2〕中任一项所述的抗体，其特征在于，与置换前相比ADCC活性上升。〔4〕如〔1〕~〔3〕中任一项所述的抗体，其特征在于，具有得到改善的稳定性、溶解性或对Fc配体的结合亲和性。〔5〕如〔1〕~〔4〕中任一项所述的抗体，其特征在于，被赋予糖链。〔6〕如〔5〕所述的抗体，其特征在于，改善了效应功能。〔7〕如〔1〕~〔6〕中任一项所述的抗体，其特征在于，与FqrRI、FcyRII、FcyRIII、或FcRn结合。〔8〕如〔1〕~〔7〕中任一项所述的抗体，其特征在于，对选自CD20、CD22、CD33、CD52、Her2/neu、EGFR、EpCAM、MUC1、GD3、CEA、CA125、HLA-DR、TNFa和VEGF中的目标抗原具有特异性。〔9〕一种抗体，其特征在于，是对CD20具有特异性的人源化抗体，选白286、287、288、289、290、291、292、294、298、301、302、303、305、306、307、308以及309位中的至少1个位置的氨基酸残基被置换成半胱氨酸。〔10〕下述(1)~(4)中任一项所述的抗体(1)含有具有如下氨基酸序列的H链的抗体，所述氨基酸序列是作为CDR1的序列号47记载的氨基酸序列、作为CDR2的序列号49记载的氨基酸序列、作为CDR3的序列号51记载的氨基酸序列、和作为CH的序列号95记载的氨基酸序列；(2)含有具有序列号93记载的氨基酸序列的H链的抗体；(3)含有具有如下氨基酸序列的H链的抗体，所述氨基酸序列是作为CDR1的序列号47记载的氨基酸序列、作为CDR2的序列号49记载的氨基酸序列、作为CDR3的序列号51记载的氨基酸序列、和作为Fc区域的序列号97记载的氨基酸序列；(4)具有上述(1)、(2)或(3)中任一项所述的H链、和下述(i)或(ii)所述的L链的对的抗体(i)具有作为CDR1的序列号58记载的氨基酸序列、作为CDR2的序列号60记载的氨基酸序列、作为CDR3的序列号62记载的氨基酸序列、和作为CL的序列号64记载的氨基酸序列的L链；(ii)具有序列号56记载的氨基酸序列的L链。〔11〕下述(1)~(4)中任一项所述的抗体(1)含有具有如下氨基酸序列的H链的抗体，所述氨基酸序列是作为CDR1的序列号47记载的氨基酸序列、作为CDR2的序列号49记载的氨基酸序列、作为CDR3的序列号51记载的氨基酸序列、和作为CH的序列号101记载的氨基酸序列；(2)含有具有序列号99记载的氨基酸序列的H链的抗体；(3)含有具有如下氨基酸序列的H链的抗体，所述氨基酸序列是作为CDR1的序列号47记载的氨基酸序列、作为CDR2的序列号49记载的氨基酸序列、作为CDR3的序列号51记载的氨基酸序列、和作为Fc区域的序列号103记载的氨基酸序列；(4)具有上述(1)、(2)或(3)中任一项所述的H链、和下述(i)或(ii)所述的L链的对的抗体18(i)具有作为CDR1的序列号58记载的氨基酸序列、作为CDR2的序列号60记载的氨基酸序列、作为CDR3的序列号62记载的氨基酸序列、和作为CL的序列号64记载的氨基酸序列的L链；(ii)具有序列号56记载的氨基酸序列的L链。〔12〕下述(1)~(4)中任一项所述的抗体(1)含有具有如下氨基酸序列的H链的抗体，所述氨基酸序列是作为CDR1的序列号47记载的氨基酸序列、作为CDR2的序列号49记载的氨基酸序列、作为CDR3的序列号51记载的氨基酸序列、和作为CH的序列号107记载的氨基酸序列；(2)含有具有序列号105记载的氨基酸序列的H链的抗体；(3)含有具有如下氨基酸序列的H链的抗体，所述氨基酸序列是作为CDR1的序列号47记载的氨基酸序列、作为CDR2的序列号49记载的氨基酸序列、作为CDR3的序列号51记载的氨基酸序列、和作为Fc区域的序列号109记载的氨基酸序列；(4)含有上述(1)、(2)或(3)中任一项所述的H链、和下述(i)或(ii)所述的L链的对的抗体(i)具有作为CDR1的序列号58记载的氨基酸序列、作为CDR2的序列号60记载的氨基酸序列、作为CDR3的序列号62记载的氨基酸序列、和作为CL的序列号64记载的氨基酸序列的L链；(ii)具有序列号56记载的氨基酸序列的L链。〔13〕下述(1)~(4)中任一项所述的抗体(1)含有具有如下氨基酸序列的H链的抗体，所述氨基酸序列是作为CDR1的序列号47记载的氨基酸序列、作为CDR2的序列号49记载的氨基酸序列、作为CDR3的序列号51记载的氨基酸序列、和作为CH的序列号54记载的氨基酸序列；(2)含有具有序列号45记载的氨基酸序列的H链的抗体；(3)含有具有如下氨基酸序列的H链的抗体，所述氨基酸序列是作为CDR1的序列号47记载的氨基酸序列、作为CDR2的序列号49记载的氨基酸序列、作为CDR3的序列号51记载的氨基酸序列、和作为Fc区域的序列号73记载的氨基酸序列；(4)具有上述(1)、(2)或(3)中任一项所述的H链、和下述(i)或(ii)所述的L链的对的抗体(i)具有作为CDR1的序列号58记载的氨基酸序列、作为CDR2的序列号60记载的氨基酸序列、作为CDR3的序列号62记载的氨基酸序列、和作为CL的序列号64记载的氨基酸序列的L链；(ii)具有序列号56记载的氨基酸序列的L链。〔14〕下述(1)~(4)中任一项所述的抗体(1)含有具有如下氨基酸序列的H链的抗体，所述氨基酸序列是作为CDR1的序列号47记载的氨基酸序列、作为CDR2的序列号49记载的氨基酸序列、作为CDR3的序列号51记载的氨基酸序列、和作为CH的序列号83记载的氨基酸序列；(2)含有具有序列号81记载的氨基酸序列的H链的抗体；(3)含有具有如下氨基酸序列的H链的抗体，所述氨基酸序列是作为CDR1的序列号47记载的氨基酸序列、作为CDR2的序列号49记载的氨基酸序列、作为CDR3的序列号51记载的氨基酸序列、和作为Fc区域的序列号85记载的氨基酸序列；(4)具有上述(1)、(2)或(3)中任一项所述的H链、和下述(i)或(ii)所述的L链的对的抗体(i)具有作为CDR1的序列号58记载的氨基酸序列、作为CDR2的序列号60记载的氨基酸序列、作为CDR3的序列号62记载的氨基酸序列、和作为CL的序列号64记载的氨基酸序列的L链；(ii)具有序列号56记载的氨基酸序列的L链。〔15〕下述(1)~(4)中任一项所述的抗体(1)含有具有如下氨基酸序列的H链的抗体，所述氨基酸序列是作为CDR1的序列号47记载的氨基酸序列、作为CDR2的序列号49记载的氨基酸序列、作为CDR3的序列号51记栽的氨基酸序列、和作为CH的序列号89记载的氨基酸序列；(2)含有具有序列号87记载的氨基酸序列的H链的抗体；(3)含有具有如下氨基酸序列的H链的抗体，所述氨基酸序列是作为CDR1的序列号47记载的氨基酸序列、作为CDR2的序列号49记载的氨基酸序列、作为CDR3的序列号51记载的氨基酸序列、和作为Fc区域的序列号91记载的氨基酸序列；(4)具有上述(1)、(2)或(3)中任一项所述的H链、和下述(i)或(ii)所述的L链的对的抗体20(i)具有作为CDR1的序列号58记载的氨基酸序列、作为CDR2的序列号60记载的氨基酸序列、作为CDR3的序列号62记载的氨基酸序列、和作为CL的序列号64记载的氨基酸序列的L链；(ii)具有序列号56记载的氨基酸序列的L链、〔16〕下述(1)~(4)中任一项所述的抗体(1)含有具有如下氨基酸序列的H链的抗体，所述氨基酸序列是作为CDR1的序列号47记载的氨基酸序列、作为CDR2的序列号49记载的氨基酸序列、作为CDR3的序列号51记载的氨基酸序列、和作为CH的序列号131记载的氨基酸序列；(2)含有具有序列号129记载的氨基酸序列的H链的抗体；(3)含有具有如下氨基酸序列的H链的抗体，所述氨基酸序列是作为CDR1的序列号47记载的氨基酸序列、作为CDR2的序列号49记载的氨基酸序列、作为CDR3的序列号51记载的氨基酸序列、和作为Fc区域的序列号133记载的氨基酸序列；(4)具有上述(1)、(2)或(3)中任一项所述的H链、和下述(i)或(ii)所述的L链的对的抗体(i)具有作为CDR1的序列号58记载的氨基酸序列、作为CDR2的序列号60记载的氨基酸序列、作为CDR3的序列号62记载的氨基酸序列、和作为CL的序列号64记载的氨基酸序列的L链；(ii)具有序列号56记载的氨基酸序列的L链。〔17〕下述(1)~(4)中任一项所述的抗体(1)含有具有如下氨基酸序列的H链的抗体，所述氨基酸序列是作为CDR1的序列号47记载的氨基酸序列、作为CDR2的序列号49记载的氨基酸序列、作为CDR3的序列号51记载的氨基酸序列、和作为CH的序列号137记载的氨基酸序列；(2)含有具有序列号135记载的氨基酸序列的H链的抗体；(3)含有具有如下氨基酸序列的H链的抗体，所述氨基酸序列是作为CDR1的序列号47记载的氨基酸序列、作为CDR2的序列号49记载的氨基酸序列、作为CDR3的序列号51记载的氨基酸序列、和作为Fc区域的序列号139记载的氨基酸序列；(4)具有上述(1)、(2)或(3)中任一项所述的H链、和下述(i)或(ii)所述的L链的对的抗体(i)具有作为CDR1的序列号58记载的氨基酸序列、作为CDR2的序列号60记载的氨基酸序列、作为CDR3的序列号62记载的氨基酸序列、和作为CL的序列号64记载的氨基酸序列的L链；(ii)具有序列号56记载的氨基酸序列的L链。〔18〕下述(1)~(4)中任一项所述的抗体(1)含有具有如下氨基酸序列的H链的抗体，所述氨基酸序列是作为CDR1的序列号47记载的氨基酸序列、作为CDR2的序列号49记载的氨基酸序列、作为CDR3的序列号51记载的氨基酸序列、和作为CH的序列号143记载的氨基酸序列；(2)含有具有序列号141记载的氨基酸序列的H链的抗体；(3)含有具有如下氨基酸序列的H链的抗体，所述氨基酸序列是作为CDR1的序列号47记载的氨基酸序列、作为CDR2的序列号49记载的氨基酸序列、作为CDR3的序列号51记载的氨基酸序列、和作为Fc区域的序列号145记载的氨基酸序列；(4)具有上述(1)、(2)或(3)中任一项所述的H链、和下述(i)或(ii)所述的L链的对的抗体(i)具有作为CDR1的序列号58记载的氨基酸序列、作为CDR2的序列号60记载的氨基酸序列、作为CDR3的序列号62记载的氨基酸序列、和作为CL的序列号64记载的氨基酸序列的L链；(ii)具有序列号56记载的氨基酸序列的L链。〔19〕下述(1)~(4)中任一项所述的抗体(1)含有具有如下氨基酸序列的H链的抗体，所述氨基酸序列是作为CDR1的序列号47记载的氨基酸序列、作为CDR2的序列号49记载的氨基酸序列、作为CDR3的序列号51记载的氨基酸序列、和作为CH的序列号149记载的氨基酸序列；(2)含有具有序列号147记栽的氨基酸序列的H链的抗体；(3)含有具有如下氨基酸序列的H链的抗体，所述氨基酸序列是作为CDR1的序列号47记载的氨基酸序列、作为CDR2的序列号49记载的氨基酸序列、作为CDR3的序列号51记载的氨基酸序列、和作为Fc区域的序列号151记载的氨基酸序列；(4)具有上述(1)、(2)或(3)中任一项所述的H链、和下述(0或(ii)所述的L链的对的抗体(i)具有作为CDR1的序列号58记载的氨基酸序列、作为CDR2的序列号60记载的氨基酸序列、作为CDR3的序列号62记载的氨基酸序列、和作为CL的序列号64记载的氨基酸序列的L链；(ii)具有序列号56记载的氨基酸序列的L链。〔20〕下述(1)~(4)中任一项所述的抗体(1)含有具有如下氨基酸序列的H链的抗体，所述氨基酸序列是作为CDR1的序列号47记载的氨基酸序列、作为CDR2的序列号49记载的氨基酸序列、作为CDR3的序列号51记载的氨基酸序列、和作为CH的序列号155记载的氨基酸序列；(2)含有具有序列号153记载的氨基酸序列的H链的抗体；(3)含有具有如下氨基酸序列的H链的抗体，所述氨基酸序列是作为CDR1的序列号47记载的氨基酸序列、作为CDR2的序列号49记载的氨基酸序列、作为CDR3的序列号51记载的氨基酸序列、和作为Fc区域的序列号157记载的氨基酸序列；(4)具有上述(1)、(2)或(3)中任一项所述的H链、和下述(i)或(ii)所述的L链的对的抗体(i)具有作为CDR1的序列号58记载的氨基酸序列、作为CDR2的序列号60记载的氨基酸序列、作为CDR3的序列号62记载的氨基酸序列、和作为CL的序列号64记载的氨基酸序列的L链；(ii)具有序列号56记载的氨基酸序列的L链。〔21〕下述(1)~(4)中任一项所述的抗体(1)含有具有如下氨基酸序列的H链的抗体，所述氨基酸序列是作为CDR1的序列号47记载的氨基酸序列、作为CDR2的序列号49记载的氨基酸序列、作为CDR3的序列号51记载的氨基酸序列、和作为CH的序列号161记载的氨基酸序列；(2)含有具有序列号159记载的氨基酸序列的H链的抗体；(3)含有具有如下氨基酸序列的H链的抗体，所述氨基酸序列是作为CDR1的序列号47记载的氨基酸序列、作为CDR2的序列号49记载的氨基酸序列、作为CDR3的序列号51记载的氨基酸序列、和作为Fc区域的序列号163记载的氨基酸序列；(4)具有上述(1)、(2)或(3)中任一项所述的H链、和下述(i)或(ii)所述的L链的对的抗体23(i)具有作为CDR1的序列号58记载的氨基酸序列、作为CDR2的序列号60记载的氨基酸序列、作为CDR3的序列号62记载的氨基酸序列、和作为CL的序列号64记载的氨基酸序列的L链；(ii)具有序列号56记载的氨基酸序列的L链。〔22〕下述(1)~(4)中任一项所述的抗体(1)含有具有如下氨基酸序列的H链的抗体，所述氨基酸序列是作为CDR1的序列号47记载的氨基酸序列、作为CDR2的序列号49记载的氨基酸序列、作为CDR3的序列号51记栽的氨基酸序列、和作为CH的序列号167记载的氨基酸序列；(2)含有具有序列号165记载的氨基酸序列的H链的抗体；(3)含有具有如下氨基酸序列的H链的抗体，所述氨基酸序列是作为CDR1的序列号47记载的氨基酸序列、作为CDR2的序列号49记载的氨基酸序列、作为CDR3的序列号51记栽的氨基酸序列、和作为Fc区域的序列号169记载的氨基酸序列；(4)具有上述(1)、(2)或(3)中任一项所述的H链、和下述(i)或(ii)所述的L链的对的抗体(i)具有作为CDR1的序列号58记载的氨基酸序列、作为CDR2的序列号60记载的氨基酸序列、作为CDR3的序列号62记载的氨基酸序列、和作为CL的序列号64记载的氨基酸序列的L链；(ii)具有序列号56记载的氨基酸序列的L链。〔23〕下述(1)~(4)中任一项所述的抗体(1)含有具有如下氨基酸序列的H链的抗体，所述氨基酸序列是作为CDR1的序列号47记载的氨基酸序列、作为CDR2的序列号49记载的氨基酸序列、作为CDR3的序列号51记载的氨基酸序列、和作为CH的序列号173记载的氨基酸序列；(2)含有具有序列号171记载的氨基酸序列的H链的抗体；(3)含有具有如下氨基酸序列的H链的抗体，所述氨基酸序列是作为CDR1的序列号47记载的氨基酸序列、作为CDR2的序列号49记载的氨基酸序列、作为CDR3的序列号51记载的氨基酸序列、和作为Fc区域的序列号175记载的氨基酸序列；(4)具有上述(1)、(2)或(3)中任一项所述的H链、和下述(i)或(ii)所述的L链的对的抗体(i)具有作为CDR1的序列号58记载的氨基酸序列、作为CDR2的序列号60记载的氨基酸序列、作为CDR3的序列号62记载的氨基酸序列、和作为CL的序列号64记载的氨基酸序列的L链；(ii)具有序列号56记载的氨基酸序列的L链。〔24〕下述(1)~(4)中任一项所述的抗体(1)含有具有如下氨基酸序列的H链的抗体，所述氨基酸序列是作为CDR1的序列号47记载的氨基酸序列、作为CDR2的序列号49记栽的氨基酸序列、作为CDR3的序列号51记载的氨基酸序列、和作为CH的序列号179记载的氨基酸序列；(2)含有具有序列号177记载的氨基酸序列的H链的抗体；(3)含有具有如下氨基酸序列的H链的抗体，所述氨基酸序列是作为CDR1的序列号47记载的氨基酸序列、作为CDR2的序列号49记载的氨基酸序列、作为CDR3的序列号51记载的氨基酸序列、和作为Fc区域的序列号181记载的氨基酸序列；(4)具有上述(1)、(2)或(3)中任一项所述的H链、和下述(i)或(ii)所述的L链的对的抗体(i)具有作为CDR1的序列号58记载的氨基酸序列、作为CDR2的序列号60记载的氨基酸序列、作为CDR3的序列号62记载的氨基酸序列、和作为CL的序列号64记载的氨基酸序列的L链；(ii)具有序列号56记载的氨基酸序列的L链。〔25〕下述(1)~(4)中任一项所述的抗体(1)含有具有如下氨基酸序列的H链的抗体，所述氨基酸序列是作为CDR1的序列号47记载的氨基酸序列、作为CDR2的序列号49记载的氨基酸序列、作为CDR3的序列号51记载的氨基酸序列、和作为CH的序列号185记载的氨基酸序列；(2)含有具有序列号183记载的氨基酸序列的H链的抗体、(3)含有具有如下氨基酸序列的H链的抗体，所述氨基酸序列是作为CDR1的序列号47记载的氨基酸序列、作为CDR2的序列号49记载的氨基酸序列、作为CDR3的序列号51记载的氨基酸序列、和作为Fc区域的序列号187记载的氨基酸序列；(4)具有上述(1)、(2)或(3)中任一项所述的H链、和下述(i)或(ii)所述的L链的对的抗体25(i)具有作为CDR1的序列号58记载的氨基酸序列、作为CDR2的序列号60记载的氨基酸序列、作为CDR3的序列号62记载的氨基酸序列、和作为CL的序列号64记载的氨基酸序列的L链；(ii)具有序列号56记载的氨基酸序列的L链。〔26〕下述(1)~(4)中任一项所述的抗体(1)含有具有如下氨基酸序列的H链的抗体，所述氨基酸序列是作为CDR1的序列号47记载的氨基酸序列、作为CDR2的序列号49记载的氨基酸序列、作为CDR3的序列号51记载的氨基酸序列、和作为CH的序列号191记载的氨基酸序列；(2)含有具有序列号189记载的氨基酸序列的H链的抗体；(3)含有具有如下氨基酸序列的H链的抗体，所述氨基酸序列是作为CDR1的序列号47记载的氨基酸序列、作为CDR2的序列号49记载的氨基酸序列、作为CDR3的序列号51记载的氨基酸序列、和作为Fc区域的序列号193记载的氨基酸序列；(4)具有上述(1)、(2)或(3)中任一项所述的H链、和下述(i)或(ii)所述的L链的对的抗体(i)具有作为CDR1的序列号58记载的氨基酸序列、作为CDR2的序列号60记载的氨基酸序列、作为CDR3的序列号62记载的氨基酸序列、和作为CL的序列号64记载的氨基酸序列的L链；(ii)具有序列号56记载的氨基酸序列的L链。〔27〕下述(1)~(4)中任一项所述的抗体(1)含有具有如下氨基酸序列的H链的抗体，所述氨基酸序列是作为CDR1的序列号47记载的氨基酸序列、作为CDR2的序列号49记载的氨基酸序列、作为CDR3的序列号51记载的氨基酸序列、和作为CH的序列号241记载的氨基酸序列；(2)含有具有序列号243记载的氨基酸序列的H链的抗体；(3)含有具有如下氨基酸序列的H链的抗体，所述氨基酸序列是作为CDR1的序列号47记载的氨基酸序列、作为CDR2的序列号49记载的氨基酸序列、作为CDR3的序列号51记栽的氨基酸序列、和作为Fc区域的序列号245记载的氨基酸序列；(4)具有上述(1)、(2)或(3)中任一项所述的H链、和下述(i)或(ii)所述的L链的对的抗体(i)具有作为CDR1的序列号58记载的氨基酸序列、作为CDR2的序列号60记载的氨基酸序列、作为CDR3的序列号62记载的氨基酸序列、和作为CL的序列号64记载的氨基酸序列的L链；(ii)具有序列号56记载的氨基酸序列的L链。〔28〕下述(1)~(4)中任一项所述的抗体(1)含有具有如下氨基酸序列的H链的抗体，所述氨基酸序列是作为CDR1的序列号195记载的氨基酸序列、作为CDR2的序列号197记载的氨基酸序列、作为CDR3的序列号199记载的氨基酸序列、和作为CH的序列号83记载的氨基酸序列；(2)含有具有序列号209记载的氨基酸序列的H链的抗体；(3)含有具有如下氨基酸序列的H链的抗体，所述氨基酸序列是作为CDR1的序列号195记载的氨基酸序列、作为CDR2的序列号197记载的氨基酸序列、作为CDR3的序列号199记载的氨基酸序列、和作为Fc区域的序列号85记载的氨基酸序列；(4)具有上述(1)、(2)或(3)中任一项所述的H链、和下述(i)或(ii)所述的L链的对的抗体(i)具有作为CDR1的序列号203记载的氨基酸序列、作为CDR2的序列号205记载的氨基酸序列、作为CDR3的序列号207记载的氨基酸序列、和作为CL的序列号247记载的氨基酸序列的L链；(ii)具有序列号201记载的氨基酸序列的L链。〔29〕ADCC活性得到增强的抗体的制造方法，包括如下工序在H链恒定区中，将选自286、287、288、289、290、291、292、294、298、301、302、303、305、306、307、308以及309位中的至少1个位置的氨基酸残基置换成半胱氨酸。〔30〕ADCC活性得到增强的抗体的制造方法，包括以下的(a)以及(b)的工序(a)使编码H链的DNA、以及编码L链的DNA表达的工序，在所述H链恒定区中，选自286、287、288、289、2卯、291、292、294、298、301、302、303、305、306、307、308以及309位中的至少1个位置的氨基酸残基被置换成半胱氨酸；(b)回收工序(a)的表达产物的工序。27〔31〕如〔29〕或〔30〕所述的方法，其特征在于，H链恒定区是选自人Cyl、C/2、Cy3以及Cy4中的任一个恒定区。〔32〕一种医药组合物，含有〔1〕~〔28〕中任一项所述的抗体和医药上能容许的担载体。〔33〕一种非人哺乳动物的治疗方法，包括将〔1〕~〔28〕中的任一抗体给予对象的工序。〔34〕一种核酸，编码〔1〕~〔28〕中的任一抗体。〔35〕一种载体，含有〔34〕所述的核酸。〔36〕一种宿主细胞，具有〔35〕所述的载体。〔37〕一种宿主生物，具有〔35〕所述的载体。〔38〕将抗体的ADCC活性增强的方法，其中，包括如下工序在H链恒定区中，将选自286、287、288、289、290、291、292、294、298、301、302、303、305、306、307、308以及309位中的至少1个位置的氨基酸残基置换成半胱氨酸。〔39〕如〔38〕所述的方法，其特征在于，H链恒定区是选自人Cirl、C/2、Cy3以及C丫4中的任一个恒定区。〔40〕一种判定工序(a)的抗体的ADCC活性是否得到增强的方法，在工序(b)中测定的ADCC活性高于置换前抗体的ADCC活性时，判定工序(a)的抗体的ADCC活性得到增强；(a)提供具有ADCC活性的抗体的变异体，即选自H链恒定区中的286、287、288、289、2卯、291、292、294、298、301、302、303、305、306、307、308以及309位中的至少1个位置的氨基酸残基被置换成半胱氨酸的抗体的工序，和(b)测定工序(a)的抗体的ADCC活性的工序。〔41〕ADCC活性得到增强的抗体的筛选方法，其中，包括以下的(a)~(d)的工序(a)提供具有ADCC活性的抗体的工序；(b)将工序(a)的抗体的选自H链恒定区中的286、287、288、289、290、291、292、294、298、301、302、303、305、306、307、308以及309位中的至少1个位置的氨基酸残基置换成半胱氨酸的工序；(c)采用〔40〕所述的方法判定在工序(b)中得到的抗体的ADCC活性是否得到增强的工序；(d)选择在工序(c)中判定ADCC活性得到增强的的抗体的工序。根据本发明，提供ADCC活性得到增强的抗体及其制造方法。关于釆用乳酸脱氢酶释放分析体系评价的ADCC活性，本发明的抗体与野生型抗体相比，ADCC活性上升(野生型抗体和变异型抗体为相同浓度的2点间的、变异型抗体相对于野生型抗体的细胞毒比例之比上升)。因此，通过使用本发明的变异型抗体，与野生型抗体相比，可以引起更多的细胞毒。此外，本发明的抗体特别是在低浓度时，ADCC活性上升(野生型抗体和变异型抗体显示相同的细胞毒比例的2点间的、变异型抗体相对于野生型抗体的浓度比上升)。因此，通过将本发明的抗体作为治疗抗体使用，可以使对每单位质量的癌细胞等的治疗效果上升。此外，如果使用本发明的抗体，则可以减少对患者的每一次给药量，因此还可以减少药费。图1是表示经基因克隆的Anti-CD20小鼠L链可变区的DNA序列的图。该DNA序列的开始部分与MKV5引物序列一致。此外，图中的CDR是complementaritydetermingregion的缩写。粗的下划线是小鼠L链恒定区的一部分，除了该恒定区之外的序列是Anti-CD20小鼠L链可变区。图2是表示经基因克隆的Anti-CD20小鼠H链可变区的DNA序列的图。该DNA序列的开始部分与MHV7引物序列一致。此外，图中的CDR是complementaritydetermingregion的缩写。粗的下划线是小鼠H链恒定区的一部分，除了该恒定区之外的序列是Anti-CD20小鼠H链可变区。29图3是表示经精制的野生型嵌合抗体或Cys型嵌合抗体的电泳图像的照片。各种精制嵌合抗体与含有2-巯基乙醇的SDS-PAGE样品緩冲液混合，煮沸5分钟。煮沸后的样品用12.5%SDS-PAGE凝胶进行电泳。在该照片中，50kDa附近的带是H链，25kDa附近的带是L链。图4是表示野生型、294Cys型、298Cys型、301Cys型的Anti-CD20嵌合抗体的ADCC活性结果的曲线图。与野生型嵌合抗体的ADCC活性相比，294Cys型嵌合抗体和301Cys型嵌合抗体在高浓度条件下(0.1~10ng/mL)显示出非常高的ADCC活性。另一方面，298Cys型嵌合抗体与野生型相比，在包括低浓度(0.1jig/mL以下的浓度)的所测定的全部范围内，均显示出高的ADCC活性。图5是表示野生型、2卯Cys型、291Cys型、292Cys型的Anti-CD20嵌合抗体的ADCC活性结果的曲线图。与野生型嵌合抗体的ADCC活性相比，291Cys型嵌合抗体和292Cys型嵌合抗体在高浓度条件下(0.01~10jig/mL)显示出非常高的ADCC活性。另一方面，290Cys型嵌合抗体与野生型相比，在包括低浓度(0.1ng/mL以下的浓度)的所测定的几乎全部范围内，均显示出高的ADCC活性。图6是表示野生型、302Cys型、303Cys型的Anti-CD20嵌合抗体的ADCC活性结果的曲线图。与野生型嵌合抗体的ADCC活性相比，303Cys型嵌合抗体在高浓度条件下(0.0110jig/mL)显示出非常高的ADCC活性。另一方面，302Cys型嵌合抗体与野生型相比，在包括低浓度(O.lng/mL以下的浓度)的所测定的几乎全部范围内，均显示出高的ADCC活性。图7是表示野生型、298Cys型的Anti-EGFR嵌合抗体的ADCC活性结果的曲线图。298Cys型嵌合抗体与野生型相比，在包括低浓度(0.1ng/mL以下的浓度)的所测定的全部范围内，均显示出高的ADCC活性。图8是表示野生型、286Cys型、287Cys型、288Cys型、289Cys型的Anti-CD20嵌合抗体的ADCC活性结果的曲线图。与野生型嵌合抗体的ADCC活性相比，286Cys型嵌合抗体和289Cys型嵌合抗体在高浓度条件下(0.01~10ng/mL)显示出非常高的ADCC活性。图9是表示野生型、305Cys型、306Cys型、307Cys型、308Cys型的Anti-CD20嵌合抗体的ADCC活性结果的曲线图。与野生型嵌合抗体的ADCC活性相比，这些嵌合抗体在较高浓度条件下(0.001~10Hg/mL)显示出高的ADCC活性。图10是表示野生型以及309Cys型的Anti-CD20嵌合抗体的ADCC活性结果的曲线图。与野生型嵌合抗体的ADCC活性相比，这些嵌合抗体在低浓度条件下(0.001~10ng/mL)显示出高的ADCC活性。具体实施例方式本发明提供氨基酸残基被人为地置换成半胱氨酸的抗体，所述氨基酸残基是ElvinA.Kabat等人在SequenceofproteinsofImmunologicalInterest(NIHPublicationNo.91-3242,1991)中给出的选自人IgGlH链恒定区的EUindex编号(在本说明书中，只要没有特别说明，以下的氨基酸位置都是按照kabat编号中记载的EUindex而记载的)的280、281、282、283、284、285、286、287、288、289、2卯、291、292、293、294、298、299、300、301、302、303、305、306、307、308、309、310或314位中的至少l个位置的氨基酸残基。将人Cy1的碱基序列示为序列号71、氨基酸序列示为序列号53。作为人的免疫球蛋白，已知IgGl、IgG2、IgG3、IgG4、IgAl、IgA2、IgD、IgE、IgM这9种类型(同种型)。本发明的抗体包括这些同种型之中的IgGl、IgG2、IgG3、IgG4。此外，本发明的抗体还包括抗体的Fc区域以外的部分被置换成具有抗原结合能力的其他肽的抗体。作为抗体的Fc区域以外的部分，可以列举例如可变区、CH1区域、绞链区等，但并不限于这些。抗体的同种型由恒定区的结构决定。IgGl、IgG2、IgG3、IgG4的各同种型的恒定区分别被称为Cyl、Cy2、Cy3、Cy4。本发明的抗体还包括在Cy2、Cy3、或C/4中选自280、281、282、283、284、285、286、287、288、289、290、291、292、293、294、298、299、300、301、302、303、305、306、307、308、309、310或314位中的至少1个位置的氨基酸被置换成Cys的抗体。将人C/2、C/3、G/4的碱基序列例示为序列号65、67、69。此外，将人Cy2、C/3、C/4的氨基酸序列例示为序列号66、68、70。应说明的是，在表1~表7中示出本说明书所附的序列表中记载的Cy1(械基序列序列号71;氨基酸序列序列号53)、Cy2(械基序列序列号65;氨基酸序列序列号66)、Cy3(碱基序列序列号67;氨基酸序列序列号68)、以及Cy4(碱基序列序列号69;氨基酸序列序列号70)的各序列中的密码以及氨基酸、与kabat的EUindex的关系。表1~7中的密码以及氨基酸按从上到下的顺序、与序列表的N末端侧到C末端侧的密码以及氨基酸相对应。应说明的是，本说明书中的恒定区的序列全部是以[SequenceofProteinsofImmunologicalInterest,5thEd.PublicHealthService,NationalInstitutesofHealth,Bethesda，MD(1991)]为基础制作的。表lIgG1(Cr1)IgG2(C")IgG3(Cr3)IsG4(Cr4)EUINDEXofKabatDNA序列氨基酸序列DNA序歹'J氨基酸序列DNA序列氨基酸序列DNA序列氨基酸序列118gccAlagccAlagetAlagetAla"9tecSertecSertecSertecSer1203CCThr3CCThr3CCThr3CCThr121aagLysaagLysLysaag匕ys122ggcGlyggcGlyggcGlvggcGly123CC3ProCC3ProCC3ProCC3Pro124tegSertegSertegSertecSer125EtcValgtcVafRtcValgtcVal126ttcPhettcPhettcPhettcPhe127cccProcccProcccProcccPro128ctg匕euctgLeuctgLeuctg匕eu129gC3AlagcgAlagcgAlagcgAla130cccProcccProcccProcccPro131tecSertgcCystgcCystgcCys132tecSertecSertecSertecSer133asgLysaggArgaggArgaggArg134ageSer3gCSerageSerageSer1353CCThrThr3CCThr3CCThr136tctSertecSertctSertecSer137gggGly靴Gfu鹏GlvsagGlu138ggcGlyageSerGlyageSer1393C3Thr3C3Thr3C3Thr3C3Thr140gcgAlaAlagcgAlagccAla141gccAlagccAlagccAlagccAla142ctgLeuctg匕euctgLeuctgLeu143ggcGlv収cGlyggcGlvggcGly144tgcCystgcCystgcCystgcCys145ctgLeuctgLeuctgLeuctg匕eu146gtcValgtcValfftcValgtcVal147aag匕ysaagLysLys柳Lys148gacAspg3CAspg3CAspgacAsp149t3CThrtacTyrtacTyrtacTV150ttcPhettcPhettcPhettcPhe151cccProcccProcccProcccPro152ga3GlugaaGlu柳GlugaaGlu153ccgProccgProccgProccgPro154StgValgtgValfftgValRtgVal1553CgThracgThrThr3CgThr156ValRtgValValVal157tegSertegSertegSertegSer158tggTrptggIVptggT巾tggTrp15933CAsn33CAsnAsn33CAsn160teaSerteaSertC3SerteaSer161ggcGlyggcGlyggcGlyggcGly162gccAlagetAlagccAlagccAla163ctgLeuctgLeuctgLeuctg匕eu1643CCThr3CCThr3CCThr3CCThr1653gCSerageSerageSerSer166ggcGlyggcGlyGlv战c'Gly167ValValgtgValgtgVal168C3CHisC3CHisC3CHisC3GHis表2(IH3)凶W邀TOSIV33<table>tableseeoriginaldocumentpage34</column></row><table>gacAsp222333LysgtcVal3C3Thr223setThr3CtThr224C3CHis梆GluC3CHiscccPro225Thr3C3ThrCC3Pro226tgcCysCystRCCystgcCys227CC3ProCC3ProCC3ProCC3Pro228ccgProccgProeggArgteaSertgcCysPro靴GluCCCProLystctSer时Cysg3CAsp3C3ThrcctProcccProccgProtgcCysCC3ProeggArgtgcCysCC3ProgagGlucccPro333l_ystctSerCysgacAspThrcctProCCCProProtgcCysProeggArgtgcCysProgagGlucccPro3331_YStctSerCysgacAspThrcctProcccProccgProtgcCysCC3Pro鄉Arg229tgcCysCystgcCystgcCys230CC3ProCC3ProCC3ProCC3Pro表435<table>tableseeoriginaldocumentpage36</column></row><table>AsnaatAsn33tAsnsatAsn287gccAlagccAlagccAlaAla28833gLysaagLysLysaagLys2893C3Thr3G3ThrThrThr290aagLysaag匕ys33gLys靴Lys291ccgProCC3ProccgProccgPro292cgtArgc朋Arg鄉Argc照Arg293gagGlu印gGluGlugagGlu294gagGlugagGlugagGlugagGlu295cagGincagGinGincagGin296TyrttcPhetacTyrtePhe29733CAsnAsn33CAsn33CAsn298ageSer3gCSer3gCSer鄉Ser299aegThr3CgThracgThrThr300tacTyrttcPhettcPhetacTyr301cgtArgcgtArgcgtArgArg302gtgValgtgValRtsVal跑Val303gtcValgtcValVaiVal304ageSer3gCSerSerageSer305gtcValValValVal306etcLeuetc匕euetcI_euetcLeu3073CCThr3CCThr3CCThrThr308gtcValffttValValgtcVal309ctgl_euRtgValctgLeuctgLeu310C3CHisC3CHisG3CHisHis311cagGincagGinC3gGincagG[n312gacAspgacAspgacAspgacAsp313tggTrptggTrPtggTVptggT「P314ctgLeuctgLeuctg匕euLeu31533tAsn33CAsn33CAsnAsn316ggcGlv邵GlyGlyGly317a站LVsaagLys匕yssagLys318gagGlugagGluGlugagGlu319t8CTyrtacTyrtacTYrtacTyr320aagLysaagLysaagLysaagLys321CystgcCystgcCystgc322aagLysaagLyssag匕ysaagLys323ValgtcValgtcValgtcVa!324tecSertecSertecSertCGSer32533CAsn33CAsn33CAsnAsn326333Lys333LysLys333Lys327gccAlaGlygccAEaggcGly328etcLeuetcLeuetcLeuetcLeu329CC3ProCCSProProCGgPro330gccAlagccAlagccAlatecSer331cccProCGCProCCCProtCGSer332atelieatelielieatelie333gagGlu柳G，ugagGlu挑Glu334333LysLys333Lys333匕ys3353CCThr3CCThr3CCThr3CCThr336atelieatelieatelielie337tecSertecSertecSertecSer338333LysLys333l_ys333Lys339gccAla3CCThrgccThrAla340333333Lys333Lys333l_ys表637341ggsGlyGlyfgaGlyGly342cagGlnGinGincagGin343cccProcccProcccProcccPro344cgaArgArgArgcgaArg345gaaGlugaaGluGlugagGlu346CC3ProProCC3ProCC3Pro347C3gGincagGincagGinGin348ValgtgValValVal349tacTyrtacTyrTyrtacTyr3503CCThr3CCThr3CCThr3CCThr351ctgLeuctgLeuLeuctgLeu352cccProProcccProcccPro353CC3ProCC3ProCC3ProPro354tccSertccSertccSertccSer355cggArgeggArgeggArgcagGfn356gatAspgagGluK站Glu靴Glu357gagGlugagGlugagGlugagGlu358ctgLeuatgMetatgMetatgMet3593CCThr3CCThr3CCThr3CCThr3603ag匕ys33gLysLysLys36133CAsn33CAsn33CAsn33CAsn362C3gG!ncagGincagGhcagGin363etcValValetcValgtcVal3643gCSer3gCSerageSerageSer365ctgLeuctgI_euctg匕euctgLeu3663CGThr3CCThr3CCThrThr367tgcCystgcCysCystgcCys368ctgl_euctgLeuctg匕euLeu369KtcValValValgtcVal370朋3LysLysLys333Lys371ggcGlyGlyggcGlyG，y372ttcPhettcPhettcPhettcPhe373tatTyrtscTyrtscTyrtacTyr374ProcccProcccProcccPro3753gCSerageSerageSerageSer376gacAspgacAspg3CAspgacAsp3773tclie3tClie3tClieatelie378gccAlagecAlagecAlagecAla379KtgValRtgValgtgValfftgVal380gagGlugagGlugagGiugagGlu381tggTrptggTrptggT卬tggTrp382gagGlugagGlugagGlugagGlu3833gCSer日gcSerageSerageSer38433tAsn33tAsnageSeraatAsn385gggGlygggGlyg战GfygggGly386cagGincagGincagGincagGin387ccgProccgProccgProccgPro388gagGlugagGlu柳GlugagGlu38933CAsn33CAsn33CAsn33CAsn39033CAsnAsn33CAsnAsn391tacTyrtacTyrTyrtac丁yr392aag匕ysaagLysaasLysLys3933CCThrThr3CCThrThr394acgThrThracgThracgThr395cctProcctProcctProcctPro(￡5)38<table>tableseeoriginaldocumentpage39</column></row><table>本发明的半胱氨酸还包括其衍生物。作为本发明的半胱氨酸衍生物，可以列举在半胱氨酸分子中加成有羟基、甲基、乙基、羧基、氨基等的化合物，构成半胱氨酸分子的原子、官能团部分缺失的化合物，构成半胱氨酸分子的原子、官能团部分被置换成其他原子、官能团的化合物等，但并不限于这些。关于采用乳酸脱氢酶释放分析体系评价的ADCC活性，本发明的抗体与野生型抗体相比，ADCC活性上升(野生型抗体和变异型抗体为相同浓度的2点间的、变异型抗体相对于野生型抗体的细胞毒比例之比上升)。此外，286Cys型抗体、289Cys型抗体、305Cys型抗体、306Cys型抗体、307Cys型抗体、308Cys型抗体、290Cys型抗体、291Cys型抗体、292Cys型抗体、298Cys型抗体、302Cys型抗体、303Cys型抗体、309Cys型抗体特别在低浓度下，ADCC活性上升约2倍以上、优选约5倍以上、更优选约10倍以上、约100倍以上，进而优选约500倍以上、特别优选约1000倍以上(野生型抗体和变异型抗体显示相同细胞毒比例的2点间的、变异型抗体相对于野生型抗体的浓度之比上升)。此外，本发明的抗体具有得到改善的稳定性、溶解性、对Fc受体的结合亲和性、或CDC活性。本发明的抗体优选与野生型相比其稳定性、溶解性、对Fc受体的结合亲和性、或CDC活性没有变化或者上升。然而本发明的抗体只要至少ADCC活性上升即可，其稳定性、溶解性、对Fc受体的结合亲和性、或CDC活性减少的抗体也包括在本发明的抗体中。另外，作为Fc受体，可以列举FcyRl、FcyRII、FcyRIII、FcRn等，但并不限于这些。本发明的抗体包括多克隆抗体和单克隆抗体这两者。单克隆抗体和多克隆抗体的制备和精制方法在本领域中是已知的，记载于例如HarlowandLane,Antibodies:ALaboratoryManual(NewYork:ColdSpringHarborLaboratoryPress,1988)。本发明的抗体的一种形态是人源化抗体。所谓"人源化抗体"，是指使结构与人的抗体类似的抗体，包括人型嵌合抗体(例如抗体的一部分被人源化的抗体、CH2区域被人源化的抗体、Fc区域被人源化的抗体、恒定区被人源化的抗体)、以及在恒定区以及可变区存在的CDR(互补性决定区域)以外的部分被人源化的人型CDR移植(CDR-grafted)抗体(P.T.Johonsetal.,Nature321,522(1986))、完全人源化抗体等。为了提高人型CDR移植抗体的抗原结合活性，已经开发出选择与小鼠抗体同源性高的人抗体FR的方法、制作同源性高的人源化抗体的方法、将小鼠CDR移植到人抗体之后进一步置换FR的氨基酸的方法的改良技术(参照美国专利第5585089号、美国专利第5693761号、美国专利第5693762号、美国专利第6180370号、欧州专利第451216号、欧州专利第682040号、日本特许第2828340号等)，还可以用于制作本发明的人型CDR移植抗体。人型嵌合抗体可以如下制作，例如，将具有上述的H链可变区结构和/或L链可变区结构的抗体的恒定区置换成人抗体的恒定区。作为人抗体的恒定区，可以釆用公知的区域。以下示出人型嵌合抗体的制作方法的一例。首先，从对特定对象抗原产生小鼠抗体的杂交瘤中提取mRNA，根据常规方法合成cDNA。将所合成的cDNA组入栽体，构建cDNA文库。根据该cDNA文库，通过将H链基因片段以及L链基因片段作为探针使用，来选择含有H链基因以及L链基因的载体。通过进行所选择载体的插入序列的测序，确定H链可变区以及L链可变区的基因序列。以如此得到的序列数据为基础，釆用化学合成、生化学的切断/再结合等制作编码H链可变区的DNA。使所得到的编码H链可变区的DNA和编码人H链恒定区的DNA进行连接反应而组入到表达用载体中，由此制作H链表达载体。作为表达载体，可以使用例如基于SV40病毒的载体、基于EB病毒的载体、基于BPV(乳头瘤病毒)的载体等，但并不限于这些。另一方面，釆用同样的方法制作L链表达载体。通过这些H链表达载体以及L链表达载体将宿主细胞共转化。作为宿主细胞，优选使用CHO细胞(中国仓鼠卵巢细胞)(人.\￥1^111&S丄.Morrison,J.Immuno1.160，3393-3402(1998))、SP2/0细胞(小鼠骨髓瘤)(K.Motmansetal"Eur.J.CancerPrev.5，512-519(1996)，R.P.Junghansetal"CancerRes.50，1495-1502(1990))等。此外，转化优选4吏用lipofectin法(R.W.Maloneetal"Proc.Natl.Acad.Sci.USA86,6077(1989),P.L.Felgneretal.，Proc.Natl.Acad.Sci.USA84，7413(1987)、电穿法、磷酸4丐法(F.L.Graham&A.JT.vanderEb，Virology52,456-467(1973))、DEAE-葡聚糖法等。培养转化体后，从转化体的细胞内或培养液分离人型嵌合抗体。抗体的分离、精制可以将离心分离、硫酸铵分级分离、盐析、超滤、亲和41色镨法、离子交换色镨法、凝胶过滤色镨法、蛋白A柱色镨法、蛋白G柱色镨法、蛋白L柱色镨法等方法适当组合利用。另一方面，人型CDR移植抗体可以采用例如以下的方法来制作。首先，采用在上述嵌合抗体的制造方法栏中叙述的方法，确定对特定抗原的抗体的H链可变区以及L链可变区的氨基酸序列以及编码其的碱基序列。并且确定各CDR区域的氨基酸序列以及碱基序列。接着，选择夹着CDR区域而存在的FR(框架区域)。FR的选择可以采用大约三种方法。第一种方法是^f吏用NEWM、REI等已经清楚三维结构的人抗体框架的方法(RiechmannL.etal.,Nature332，323-3Z7(1988);Tempst，PR.etal"ProteinEngineering7，1501-1507(1994);EllisJH.etal.,J.Immunol155,925-937(1995))。第二种方法是从数据库中选择与目的小鼠抗体可变区具有最高同源性的人抗体可变区，使用其FR的方法(QueenC.etal.,ProcNatlAcadSciUSA86,10029-10033(1989);RozakMJ.etal.,JBiolChem271,22611-22618(1996);ShearmanCW.etal.，J.Immunol147,4366-4373(1991))。第三种方法是在人抗体的FR中选择最共通使用的氨基酸的方法(SatoK.etal.,MolImmunol31,371-381(1994);KobingerF.etal.，ProteinEngineering6,971-980(1993);KettleboroughCA.etal.，ProteinEngineering4,773-783(1991))。在本发明中可以使用这些任意的方法。另外，即使是将所选择的人FR的氨基酸序列改变而得到的氨基酸序列，只要最终得到的人型CDR移植抗体对对象抗原具有特异的结合性，就可以作为FR的氨基酸序列利用。特别是所选择的人FR的一部分氨基酸变更为成为CDR的抗体的来源的FR的氨基酸时，抗体的特性得到维持的可能性很高。改变的氨基酸数目优选是FR全体的30%以下，更优选是FR全体的20。/。以下，进一步优选是FR全体的10%以下。接着，将采用这些任一方法选择的FR和上述CDR组合，由此设计编码H链可变区以及L链可变区的DNA。以该设计为基础，通过化学合成、生化学的切断/再结合等分别制作编码H链可变区的DNA和编码L链可变区的DNA。接着将编码H链可变区的DNA与编码人免疫球蛋白H链恒定区的DNA—起组入到表达载体中，构建H链表达载体。同样地，将编码L链可变区的DNA与编码人免疫球蛋白L链恒定区的42DNA—起组入到表达载体中，构建L链表达载体。作为表达载体，可以使用例如基于SV40病毒的载体、基于EB病毒的载体、基于BPV(乳头瘤病毒)的载体等，但并不限于这些。通过用以上方法制作的H链表达载体以及L链表达载体，将宿主细胞共转化。作为宿主细胞，优选使用CHO细胞(中国仓鼠卵巢细胞)(九\￥1^1^&S丄.Morrison，J.Immuno1.160,3393-3402(1998))、SP2/0细胞(小鼠骨髓瘤)(K.Motmansetal.，Eur.J.CancerPrev.5，512-519(1996)R.P.Junghansetal"CancerRes.50，1495-1502(19卯))等。此外，转化优选使用lipofectin法(R.W.Maloneetal.，Proc.Natl.Acad.Sci.USA86,6077(1989),P.L.Felgneretal.，Proc.Natl.Acad.Sci.USA84，7413(1987)、电穿法、磷酸钩法(F.L.Graham&A丄vanderEb，Virology52,456-467(1973))、DEAE-葡聚糖法等。培养转化体后，从转化体的细胞内或培养液中将人型CDR移植抗体分离。抗体的分离、精制可以将离心分离、硫酸铵分级分离、盐析、超滤、亲和色i普法、离子交换色镨法、凝胶过滤色谱法、蛋白A柱色镨法、蛋白G柱色镨法、蛋白L柱色谱法等方法适当组合进行。此外，人抗体的获取方法也是已知的。例如，在体外用所需抗原或表达所需抗原的细胞致敏人淋巴球，使致敏淋巴球与人骨髓瘤细胞、例如U266融合，可以得到对抗原具有结合活性的所需人抗体(参照特公平1-59878)。此外，用所需抗原免疫具有人抗体基因的全部库的转基因动物，可以获得所需的人抗体(参照国际专利申请发明者村上昭弘申请人:株式会社医学生物学研究所