用于预防和治疗肝病的包含组合草药提取物的组合物的制作方法

专利名称：用于预防和治疗肝病的包含组合草药提取物的组合物的制作方法
技术领域：
本发明涉及一种用于肝病预防和治疗需要的组合物，其包含云芝(Coriolus versicolor)、黄疾(Astragalus membranaceus Bunge)、 五味子(Schisandra chinensis) 和茵陈蒿(Artemisia capillaris)的草药提取物，还涉及使用以上粗制药物组合物的 方法，以及作为肝脏保护性试剂的药物组合物。
背景技术：
在如今暴露于各种不利环境(例如污染物质、毒性物质如过量饮酒、吸烟等， 以及心理压力，心理压力可通过休息而康复，但是它可严重化而引起其他疾病例
如免疫系统失调的产生)的人类中肝病是最常发生的疾病之一。已有报道由于 细胞膜的损伤，毒性物质例如四氯化碳、D-氨基半乳糖等引起肝脏和肾脏中的毒
性(Brucker， J. V" Fund. Appl. Toxicology, 6, ppl6-34， 1986)。
直至现在，已经报道了几个来自天然产物来源的药物，其通过抑制自由基团 再生而发挥作用，例如，分离自乳蓟(Silybum marianum)[水飞莉(Carduus marianus)] 果实的水飞蓟素(silymarin， SLM)，其属于菊科(Compositae); BDD (联苯二甲 酸二甲酯)为分离自五味子的五味子醇甲(schizandrin)的合成类似物，等等(Camgy A. B.， Food Technology, 46， pp65-68， 1992; Liang jun, Y., et al.， Biochem. And Biophy. Res. Comm., 212 , pp360-366， 1995)。
但是，现在仍然有需求来发展一种用于治疗和预防肝病或者改善肝脏功能的 有效且安全的药物。
已经报道云芝(一种蘑菇，属于多孔菌目(Aphyllophorales)，分布于世界各 地)包含麦角固醇、(3-谷甾醇、柯里聚糖(coriolan)、云芝胞内多糖-D-葡聚糖和 塞夫酸(thelphoric acid)且表现出抗细菌活性、抗炎活性、免疫增强活性、降低 胆固醇的活性等(Park Wan-Hee and Lee Ho-Deuk， Illustrated Book of Korean Medicinal Mushrooms, Kyo-Hak Publishing Co., Ltd, p472, 1st Ed. 1999)。
已经报道黄芪(其属于豆科(Leguminosae))包含剌芒柄花素(formononetin)、 异甘草素(isoliquiritigenin)、葡萄糖醛酸、胆碱、甜菜碱、叶酸、2，,4，-二羟基-5,6-二甲氧基-异黄酮、熊竹素(Kumatakenin)等，并表现出强心剂作用、降血压活性、 利尿剂活性、激素样活性等(Chung, B. S.， et al., Illustrated Crude Drug Encyclopedia, Youngrim Publishing Co. Ltd., 2nd Ed., p662-664, 1998; http:〃www.tradimed.com)。
已经报道五味子(其属于木兰科(Magnoliaceae))包含五味子醇甲、戈米辛 (gomisin) A-Q、柠檬醛、a-依兰稀(ylangene)、柠檬酸、苹果酸、p-花柏烯(chamigrene)、脂肪油、脱氧五味子醇甲等，并表现出血管舒张活性、降血压活 性、化痰活性等(Chung, B. S.， et al., Illustrated Crude Drug Encyclopedia, Youngrim Publishing Co. Ltd., 2nd Ed" p471-473， 1998; http:〃www.tradimed.com)。
已经报道茵陈蒿(其属于菊科)包含滨蒿内酯(sc叩arone)、绿原酸、咖啡酸、 蒎烯(pinene )、茵陈二炔酮(capillin)、茵陈烯块(capillene)、茵陈炔内脂(capillarin)、 硬脂酸、棕榈酸等，并表现出降血压活性、利尿剂活性、利胆剂活性等(Chung, B. S., et al., Illustrated Crude Drug Encyclopedia, Youngrim Publishing Co. Ltd., 2nd Ed., pl016-1018, 1998; http:〃www.tradimed.com)。
但是，在以上所列的所有文献(此处引入作为参考)中，尚未有报道或公开 以上所述的草药组合提取物在肝病中的治疗性效应。
因此，本发明人旨在发现增强肝脏保护性功效的有效的草药制剂，并研究以 上所述的草药组合提取物的药理学效应，最后本发明人发现以上所述的组合的粗 制药物作为肝脏保护性试剂在预防和治疗肝病中是有效的。

发明内容
技术问题
根据一个方面，本发明提供一种用于预防和治疗肝病的药物组合物，其包含 云芝、黄芪、五味子和茵陈蒿的组合草药的提取物。
本发明还提供一种药物组合物，其包含可有效预防和治疗肝病剂量的作为活 性成分的以上所述提取物，以及药学上可接受的载体。
本发明还提供一种治疗哺乳动物中肝病的方法，所述方法通过向所述哺乳动 物施用有效量的上述提取物及其药学上可接受的载体而保护肝细胞从而治疗肝 病。
本发明还提供上述提取物制备用于治疗或预防人类或哺乳动物中肝病的药物 的用途。
本发明还提供一种健康功能食品，其包含可有效预防和改善肝病剂量的作为 活性成分的上述提取物，所述提取物通过保护肝细胞而预防和改善肝病。 技术方案
因此，本发明的目的是提供一种用于预防和治疗肝病的药物组合物，其包含 可有效预防和治疗肝病剂量的组合草药作为活性成分，所述组合草药由云芝和黄 芪组成，以及药学上可接受的载体。
本发明还提供一种用于预防和治疗肝病的包含组合草药的药物组合物，其除 了包含上述的草药外，还包含至少一种选自五味子或茵陈蒿的草药。
本发明的另一个目的是提供上述草药提取物制备用于治疗或预防人类或哺乳 动物中肝病的药物的用途。
本发明另一个目的是提供一种治疗哺乳动物中肝病的方法，所述方法通过向所述哺乳动物施用有效量的上述提取物及其药学上可接受的载体而保护肝脏细 胞。
在本发明的优选具体实施方式
中，此处所披露的提取物包含组合草药的提取 物，即云芝和黄芪，其以基于每种草药干重的比率(W/W%)混合，优选比率介于 0.1-10:1，更优选为0.5-5:1，再更优选为1-2:1，在本发明中预防或治疗肝病。
在本发明的另一个优选具体实施方式
中，此处所披露的提取物包含组合草药 的提取物，即云芝、黄芪和五味子，其以基于每种草药干重的比率(w/w%)混合， 优选比率介于0.1-10:0.1-10:1，更优选为0.5-5:0.5-5:1，再更优选为1-2:1-2:1，在本 发明中以预防或治疗肝病。
在本发明的另一个优选具体实施方式
中，此处所披露的提取物包含组合草药 的提取物，即云芝、黄芪、五味子和茵陈蒿，其以基于每种草药干重的比率(W/W0/0) 混合，优选比率介于0.1-10:0.1-10: 0.1-10:1，更优选为0.5-5:0.5-5: 0.5-5:1 ，再更优 选为1-2:1-2: 1-2:1，在本发明中以预防或治疗肝病。
与本发明的一个方面相适应，提供了一种健康功能食品，其包含可有效预防 和改善肝病剂量的上述提取物作为活性成分，通过保护肝脏细胞而预防和改善肝 病。
这里的"肝病"包含脂肪肝、急性或慢性肝炎、肝肿大、肝脓肿、肝硬化和 肝癌，优选为脂肪肝、肝硬化和肝炎，更优选为酒精性脂肪肝、非酒精性脂肪肝、 糖尿病性脂肪肝和肝炎。
可用于本发明的草药包括对本领域技术人员来说明显是同属的植物，且其已 经用于相同或相似目的，并可被替换以预防和治疗肝病。
本发明所述组合物以其研磨成粉的形式、提取形式或干燥提取物形式使用。
以上粗制药物组合物的提取形式可使用蒸馏水、低碳醇(如甲醇、乙醇等) 或其混合物，优选为水通过提取来获得。
这里的术语"提取物"包括粗提取物、低碳醇不可溶性成分提取物和非极性 溶剂可溶性提取物。
这里的术语"粗提物"包括在蒸馏水、Cl-C4低碳醇(如甲醇、乙醇等)或其 混合物，优选为乙醇和水的混合溶液，更优选为50-90%乙醇的水溶液中可溶的提 取物。
这里的术语"低碳醇不可溶性成分提取物"包括通过以下步骤制备的提取物 以低碳醇溶液例如乙醇和水的混合溶液，优选为50-90%乙醇的水溶液提取粗提物 以分离低碳醇可溶性成分和低碳醇不可溶性成分；并收集本发明所述低碳醇不可 溶性成分提取物。
这里的术语"非极性溶剂可溶性提取物"包括通过以下歩骤制备的提取物 以非极性溶剂例如己烷、氯仿、二氯甲垸或乙酸乙酯，优选为己烷来提取粗提物-， 并收集本发明所述非极性溶剂可溶性提取物。在本发明最优选的具体实施方式
中，在本发明的组合物中，组合草药的"提 取物"由下列组成云芝的粗提物、黄芪和茵陈蒿的低碳醇不可溶性成分和五味 子的非极性溶剂可溶性提取物；但不是为了限制本发明。
用于治疗肝病的药物组合物可含有基于组合物总重量的大约0.01至95 w/w%， 优选为0.5至80 w/w。/。的上述的本发明所述草药组合物。
可通过以下优选的具体实施方式
来制备本发明草药组合物。
对于本发明，上述粗制药物组合物可通过以下程序来制备将草药，即云芝、 黄芪、五味子和茵陈蒿洗涤、破碎、干燥并以合适的比率(w/w)混合。将上述
混合物研磨成粉以获得粗制药物组合物的研磨成粉的形式。
将上述研磨成粉的粗制药物组合物与5-20倍，优选为10-15倍体积的蒸馏水、 醇(例如甲醇、乙醇等)或其混合物混合，优选为与蒸馏水或者是乙醇和水的混 合物混合；然后，在0至室温，优选为4-6。C的温度范围内冷吸(enfleurage)，持 续12至48小时，优选为20-24小时，或者，在80至12(TC，优选为IO(TC以上的 温度范围内回流提取加热，持续l-24小时，优选为2-5小时，进行2-5次；或者， 通过超声、回流或常规提取以获得水性提取物形式的粗制药物组合物。
另外，过滤并在80-9(TC减压下将草药提取物浓縮。提取物以10-60倍体积的 水通过共沸蒸馏1-5次，然后通过冻干或真空干燥进行干燥以获得粗制药物组合物 的干燥粗提物。
各个草药的"低碳醇不可溶性成分提取物"可通过以下步骤制备将上述步 骤制备的粗提物通过低碳醇溶液(例如乙醇和水的混合物溶液，更优选为50-卯％ 的乙醇的水溶液)提取，其用量为基于粗提物重量的l-8倍；单独置于室温下持续 12-48小时，优选为18-24小时，以分离低碳醇可溶性成分和低碳醇不可溶性成分； 并收集本发明所述低碳醇不可溶性成分提取物。
各个草药的"非极性溶剂可溶性提取物"可通过以下步骤制备将上述歩骤
制备的粗提物通过非极性溶剂分离，用量为基于粗提物体积的l-8倍，优选为2-5 倍；并收集本发明所述非极性溶剂可溶性提取物。
本发明的另一个目的是提供制备上述本发明所述提取物的方法以制备用于预 防或治疗肝病的有效的组合物。
本发明的另一个目的是提供一种用于预防和治疗肝病的药物组合物，其包含 通过上述方法获得的研磨成粉形式的、提取形式的或干燥提取物形式的上述粗制 药物提取物作为活性成分。
通过上述方法制备的本发明所述组合物在大鼠实验模型中显著性抑制肝脏组 织中的GOT、 GPT、 LDL-胆固醇、HMG-CoA还原酶基因的表达水平及肝纤维化， 以及增加血液中HDL-胆固醇的水平。当测定提取物的口服急性毒性时，没有发现 其对于死亡率、临床表征、体重变化、和尸检中总的发现的效应。
用于治疗肝病的药物组合物可含有基于组合物总重量的大约0.01至95w/wn/。，优选为0.5至80 w/w。/。的上述的本发明的粗制药物组合物。
本发明的另一个目的是提供一种肝脏保护性试剂，其包含可有效预防和治疗 肝病剂量的上述提取物作为活性成分。
本发明的另一个目的是提供一种治疗哺乳动物中肝病的方法，所述方法为所 述哺乳动物施用有效量的上述提取物及其药学上可接受的载体。
与使用方法相一致，本发明的组合物还可包含常规载体、佐剂或稀释剂。优 选地，根据用量和使用方法，所述载体用作合适的物质，但不是限制性的。合适 的稀释齐U歹!J在Remington's Pharmaceutical Science (Mack Publishing co, Eastern PA) 中的记载内容中。
以下，下面的制剂方法和赋形剂只是示例性的而绝不是限制本发明。 本发明所述粗制药物组合物可作为药物组合物来提供，所述药物组合物包含 药学上可接受的载体、佐剂或稀释剂，例如，乳糖、葡糖、蔗糖、山梨醇、甘露 醇、木糖醇、赤藻糖醇、麦芽糖醇、淀粉、阿拉伯橡胶、澡酸盐、白明胶、磷酸 钙、硅酸钙、纤维素、甲基纤维素、聚乙烯吡咯烷酮、水、羟苯甲酯、羟苯丙酯、 云母、硬脂酸镁和矿物油。制剂可另外包含填充剂、抗凝集剂、润滑剂、加湿剂、 香味剂、乳化剂、防腐剂等。通过使用本领域熟知的任何程序，本发明所述组合 物可制成制剂以在向病人使用以后提供活性成分的速释、缓释或延释。
例如，本发明所述组合物可溶于油、丙二醇或其他溶剂中，这些溶剂通常被
用于生产注射液。合适的载体的例子包括生理盐水、聚乙二醇、乙醇、植物油、 豆蔻酸异丙酯等，但不限于这些。对于局部使用，本发明所述化合物可制成药膏 或乳剂。
含有粗制药物组合物的药物制剂可以任何形式制备，例如口服剂形式(粉末、
药片、胶囊、软胶囊、水性药品、糖浆、西也剂、药丸、粉末、香袋(sachet)、 颗粒)或局部制备物(乳剂、药膏、洗液、凝胶、香膏(balm)、贴布(patch)、 软膏(paste)、喷雾溶液、气雾剂等)、栓剂或无菌注射制剂(溶液、悬浮液、乳 状液)。
本发明所述粗制药物组合物的药物剂型可以其药学上可接受的盐的形式来提 供，可单独使用或以合适的联合使用，以及与其他药学活性化合物组合使用。本 发明组合物的所需剂量是可变的，取决于个体的状况和体重、严重性、药物形式、 施药途径和时间，且可由本领域技术人员来选择。但是，为了获得所需的效应， 通常推荐以每日0.01-10g/kg重量，优选为l-5g/kg重量的剂量来施用本发明所述 组合物。剂量可以每日单剂或多剂来使用。至于组合物，粗制药物组合物应以基 于组合物总重量的0.01-80%重量，优选0.5-50%重量来呈现。
本发明所述药物组合物可通过各种途径向动物个体使用，例如哺乳动物(大 鼠、小鼠、家养动物或人类)。考虑了所用的施用模式，例如，口服、直肠或静脉 内、肌内、皮下、皮内、输卵管内、硬脑膜或侧脑室注射。与本发明的一个方面相一致，提供了一种健康功能食品，其包含可有效预防 和改善肝病剂量的上述提取物作为活性成分，通过保护肝脏细胞而预防和改善肝 病。
本发明的健康功能食品的粗制药物组合物以其研磨成粉的形式、提取形式或 干燥提取物形式使用。
用于预防和改善肝病的本发明的健康功能食品可含有基于组合物总重量的大 约0.01-95w/w%，优选0.5-80w/w。/。的上述本发明的粗制药物组合物。
上述粗制药物组合物可添加于食物、添加剂或饮料以预防和改善肝病。其中， 为了预防和改善肝病的目的，食物或饮料中的上述粗制药物组合物的剂量为用于 健康食物组合物的食物总重量的大约0.1-15 w/w%，优选为l-10w/w%， 100 ml健 康饮料组合物中为1-30 g，优选为3-10 g。
鉴于本发明的健康饮料组合物含有表示比率的上述粗制药物组合物作为主要
成分，所以对其他液体成分没有特别限制，其中其他成分可以是各种除臭的或天 然的碳水化合物等例如常规饮料。上述天然碳水化合物的例子为单糖例如葡萄糖、
果糖等；二糖例如麦芽糖、蔗糖等；常规糖如糊精、环状糊精；和糖醇例如木糖 醇和赤藻糖醇等。作为除了上述的以外的除臭剂，可有益地使用天然除臭剂例如
陶马汀(taumatin)、甜菊提取物例如莱沃迪赛A (levaudiosideA)、甘草甜素等， 以及合成的除臭剂例如糖精、天门冬氨酰苯丙氨酸甲酯等。上述天然碳水化合物 的剂量通常为100 ml本饮料组合物中为约1-20 g，优选为5-12 g。
出了上述组合物以外的其他成分为各种营养物、维生素、矿物或电解液、合 成的香味剂、着色剂和精炼剂(如果是奶酪巧克力等)、果胶酸及其盐、褐藻算及 其盐、有机酸、保护性胶质吸附剂、pH控制剂、稳定剂、防腐剂、甘油、醇、碳 酸饮料等中所用的碳化剂。除了上述以外的成分可以是用于制备天然果汁的果汁、 果汁饮料和蔬菜饮料，其中成分可单独使用或组合使用。成分的比率不是那么重 要，但通常为大约0-20w/wy。每100 w/wy。的本组合物。
可添加的含有上述粗制药物组合物的食物的例子为各种食物、饮料、口香糖、 维生素复合物、健康改善食品等。
对本领域技术人员来说，可对本发明的组合物、用途和制备物作出各种修饰 和改变而不脱离本发明的实质。
有益效果
本发明所述组合草药组合物对于升高的GOT、 GPT、胆固醇、甘油三酯、LDL-胆固醇水平显示出有力的抑制效应，以及对降低的HDL-胆固醇水平显示出增加的 效应，以及预防和治疗肝硬化和脂肪肝。
本发明所述组合物在预防和治疗肝病中是有用的，可用作安全且有效的肝脏 保护性试剂。


通过以下具体描述以及附图将更清楚的理解本发明的以上和其他目的、特点 和其他优点，其中
图l显示了CCL4诱导小鼠中比较实施例l中制备的各种提取物处理组的GOT 水平的变化。
图2显示了 CCL4诱导小鼠中比较实施例1中制备的各个提取物处理组的GPT 水平的变化。
图3显示了 CCL4诱导的肝脏损伤预防模型中实施例1中制备的组合提取物 处理组的GOT水平的变化效应。
图4显示了 CCL4诱导的肝脏损伤预防模型中实施例1中制备的组合提取物 处理组的GPT水平的变化效应。
图5显示了 CCL4诱导的肝脏损伤治疗模型中实施例1中制备的组合提取物 处理组的GOT水平的变化效应。
图6显示了 CCL4诱导的肝脏损伤治疗模型中实施例1中制备的组合提取物 处理组的GPT水平的变化效应。
图7显示了 DMN诱导的肝硬化模型中GOT和GPT的水平的变化。
图8显示了对DMN诱导的肝硬化模型中胶原分布的效应。
图9显示了酒精诱导的大鼠脂肪肝中比较实施例2和实施例2所制备的各个 提取物处理组的GOT和GPT水平的变化。
图10显示了酒精诱导的大鼠脂肪肝中以比较实施例2和实施例2所制备的各 个提取物处理组的血液胆固醇水平的变化。
图11显示了酒精诱导的大鼠脂肪肝中比较实施例2和实施例2所制备的提取 物对于血液甘油三酯的变化的效应。
图12显示了酒精诱导的大鼠脂肪肝中比较实施例2和实施例2所制备的提取 物对于血液HDL-胆固醇变化的效应。
图13显示了酒精诱导的大鼠脂肪肝中比较实施例2和实施例2所制备的提取 物对于血液LDL-胆固醇变化的效应。
图14显示了酒精诱导的大鼠脂肪肝中比较实施例2和实施例2所制备的提取 物对于肝胆固醇水平变化的效应。
图15显示了酒精诱导的大鼠脂肪肝中比较实施例2和实施例2所制备的提取 物对于肝甘油三酯水平变化的效应。
图16显示了酒精诱导的大鼠脂肪肝中实施例2所制备的提取物对于肝组织形 态学变化的效应。
图17显示了酒精诱导的大鼠脂肪肝中实施例2所制备的提取物对于 HMG-CoA还原酶基因表达变化的效应。
具体实施例方式
最佳实施方式
以下实施例和实验例是为了进一步说明本发明而不是限制其范围。 发明模式
比较实施例l各个草药提取物(1)的制备 1-1.云芝粗提物1 (CV30E)的制备
将购买自首尔Kyung-dong market的500 g云芝洗涤，加入10 L蒸馏水。在第 一歩中，将溶液在10(TC以蒸馏水回流提取两次。将第一步获得的提取物过滤并在 105。C浓縮以制备800 ml浓縮物。将浓縮物在60。C干燥以获得62.0 g的云芝干燥 粗提物(产率12.4%)。
1-2.黄芪粗提物(AM80M)
将购买自首尔Kyung-dong market的800 g黄芪洗涤，加入10 L 70%的乙醇溶 液。在第一步中，将溶液在10(TC以蒸馏水回流提取两次。将第一步获得的提取物 过滤并在105'C浓縮以制备750 ml浓縮物。将浓縮物在6(TC干燥以获得153.6 g的 黄芪干燥粗提物(产率19.2%)。
1-3.五味子粗提物(SC80M)
将购买自首尔Kyung-dong market的500 g五味子洗涤，加入10 L 70%的乙醇 溶液。在第一歩中，将溶液在10(TC以蒸馏水回流提取两次。将第一歩获得的提取 物过滤并在105。C浓縮以制备卯0ml浓縮物。将浓縮物在60。C干燥以获得183.0 g 的五味子干燥粗提物(产率36.6%)。
1- 4.茵陈蒿粗提物(ACDW)
将购买自首尔Kyung-dong market的500 g茵陈蒿洗涤，加入10 L蒸馏水。在 第一歩中，将溶液在10(TC以蒸馏水回流提取两次。将第一步获得的提取物过滤并 在105。C浓縮以制备650ml浓縮物。将浓縮物在6CTC干燥以获得91.5 g的茵陈蒿 干燥粗提物(产率18.3%)。
比较实施例2.各个草药提取物的制备(2)
2- 1.云芝低碳醇不可溶提取物(CO)
将购买自首尔Kyung-dong market的1000 g云芝洗涤，加入10 L蒸馏水。在 第一步中，将溶液在10(TC以蒸馏水回流提取两次，持续2个小时。将第一步获得 的提取物过滤并在105'C浓縮以制备1000ml浓縮物。通过向浓縮物中加入95%的 乙醇而制成70%的乙醇溶液，将此70%的乙醇溶液单独置于室温下12小时以分离 上清层和沉淀层，将沉淀在60。C干燥以获得31.5 g的云芝的干燥的低碳醇不可溶 提取物(产率3.15%，以下称为CO)。
2-2.黄芪粗提物(AS)
将购买自首尔Kyung-dong market的1000 g黄芪洗涤，加入10 L 95%的乙醇 溶液。在第一步中，将溶液在95'C以蒸馏水回流提取两次，持续2小时。将第一步获得的提取物过滤并在105。C浓缩3小时以制备1000 ml浓縮物。将浓縮物在60 'C干燥以获得80.3g的黄芪干燥粗提物(产率8.03%，以下称为AS)。 2-3.五味子非极性溶剂可溶性提取物(AR)
将购买自首尔Kyung-dong market的1000 g五味子洗涤，加入10 L 95%的乙 醇溶液。在第一步中，将溶液在95"C以蒸馏水回流提取两次，持续2个小时。将 第一歩获得的提取物过滤并在105t:浓縮以制备1000ml浓縮物。加入等量的己垸 以分离水层和己垸可溶性层，收集己烷可溶性层以获得五味子的己烷可溶性提取 物(产率1.21%，以下称为AR)。 —
2-4.茵陈蒿低碳醇不可溶提取物(SC)
将购买自首尔Kyung-dong market的1000 g茵陈蒿洗涤，加入10 L蒸馏水。 在第一歩中，将溶液在IO(TC以蒸馏水回流提取两次，持续2个小时。将第一歩获 得的提取物过滤并在105'C浓縮以制备1000ml浓縮物。通过向浓縮物中加入95% 的乙醇而制成70%的乙醇溶液，将此70%的乙醇溶液单独置于室温下12小时以分 离上清层和沉淀层，将沉淀在6(TC干燥以获得119.7 g的茵陈蒿的干燥的低碳醇不 可溶提取物(产率11.97%，以下称为SC)。
实施例l.发明性组合制剂(1)的制备
l-l.发明性Hl的制备
将比较实施例1中所制备的每个云芝和黄芪的提取物以1:1的重量比率混合以 制备发明性组合制剂(以下称为H1)。 1-2.发明性H2的制备
将比较实施例1中所制备的每个云芝、黄芪和五味子的提取物以1:1:1的重量 比率混合以制备发明性组合制剂(以下称为H2)。 1-3.发明性H3的制备
将比较实施例1中所制备的每个云芝、黄萬和茵陈蒿的提取物以1:1:1的重量 比率混合以制备发明性组合制剂(以下称为H3)。
1- 4.发明性H4的制备
将比较实施例1中所制备的每个云芝、黄芪、五味子和茵陈蒿的提取物以 1:1:1:1的重量比率混合以制备发明性组合制剂(以下称为H4)。 实施例2.发明性组合制剂(2)的制备
2- l.发明性HFl的制备
将比较实施例2中所制备的每个云芝和黄芪的提取物以1:1的重量比率混合以 制备发明性组合制剂(以下称为HF-1)。 2-2.发明性HF2的制备
将比较实施例2中所制备的每个云芝、黄芪和五味子的提取物以1:1:1的重量 比率混合以制备发明性组合制剂(以下称为HF2)。 2-3.发明性HF3的制备将比较实施例2中所制备的每个云芝、黄芪和茵陈蒿的提取物以1:1:1的重量 比率混合以制备发明性组合制剂(以下称为HF3)。 2-4.发明性HF4的制备
将比较实施例2中所制备的每个云芝、黄芪、五味子和茵陈蒿的提取物以 1:1:1:1的重量比率混合以制备发明性组合制剂(以下称为HF4)。
实验例l.对大鼠模型中CC14诱导的慢性肝损伤的效应
为了研究实施例1中获得的发明性组合提取物(与比较实施例1中的相比) 对于肝损伤的抑制效应，进行了下列实验。 '
l-l.试剂和实验动物
CC14 (Sigma Co.)、橄榄油(Sigma Co.)、丙氨酸氨基转移酶(ALT、 GPT， StanbioCo.)和天门冬氨酸氨基转移酶(AST、 GOT， ， StanbioCo.)购买自商业公 司，以用于实验。
实验中使用雄性Sprague-Dawley大鼠(体重大约200g) (Daehan Biolink Co. Ltd., Korea),将其置于可自由获取饲料(Harlan， teklan， USA)和饮水。所有的 动物保持在受控环境中，温度为21。C-24。C，湿度为60%-80%， 12小时光照-12小 时黑暗循环，在使用前至少持续1个星期。每组的平均重量根据每组进行优化， 每组有10只。
1-2.各个草药对CC14诱导的慢性肝损伤的效应
为了评估对于肝损伤的效应，正常组只以盐水处理。将橄榄油和CC14的混合 物溶液(1:3)通过腹膜内注射入每只实验大鼠，剂量为1.0ml/kg，持续3天，以 此来诱导急性肝中毒以用作对照组。诱导后1个小时，将各种浓度的比较实施例1 中的提取物补充盐水后通过口服向大鼠使用，剂量为1.0 ml/kg，持续三天，这是 测试组；对于阴性对照组，只以等量的盐水处理。诱导后18小时，从眼眶下静脉 收集血液样品，3000rpm下离心20分钟。使用BT2000+装置(SEACCo.)测定每 个样品的每个GOT和GPT水平。
如图1和2所示，只以盐水溶液处理的正常组显示出大约200U/I的GOT水平 和74U/I的GPT水平，而以橄榄油和CC14混合溶液(1:1)处理的对照组显示出 大约461 U/I的GOT水平和168 U/I的GPT水平。但是，以每个草药提取物处理 的测试组显示出肝脏保护性活性，其顺序为云芝，五味子，黄芪和茵陈蒿(见图1 和2)。
因此确认本发明的发明性提取物对于缓和肝脏功能是有效的。
l-3.组合制剂对于CC14诱导的慢性肝损伤的效应
为了评估对于肝损伤的效应，正常组只以盐水处理。将橄榄油和CC14的混合 物溶液(1:1)通过腹膜内注射入每只实验大鼠，剂量为1.0ml/kg，持续3天，以 此来诱导急性肝中毒以用作对照组。诱导后1个小时，将各种浓度的实施例1中 的发明性组合提取物，即H1、 H2、 H3和H4补充盐水后通过口服向大鼠使用，剂量为lg/60kg，持续三天，这是测试组；对于阴性对照组，只以等量的盐水处理。
诱导后18小时，从眼眶下静脉收集血液样品，3000 rpm下离心20分钟。使用 BT2000+装置(SEAC Co.)测定每个样品的每个GOT和GPT水平。
如图3和4所示，以橄榄油和CC14混合溶液(1:1)处理的对照组显示出大约 462 U/I的GOT水平和186 U/I的GPT水平。但是，以HI处理的测试组显示出大 约355U/I的GOT水平和142.1U/I的GPT水平。H2处理组中GOT和GPT的水平 与H3处理组中相似，相对于H1处理组显示出更强的肝脏保护性活性。但是，H4 处理组在他们中显示出最强的肝脏保护性活性(见图3和4)。
因此确认本发明的发明性组合提取物对于治疗和预防肝病是有效的。
1- 4.组合制剂对于CC14诱导的慢性肝损伤的效应
为了评估对于肝损伤的效应，正常组只以盐水处理4天。将橄榄油和CC14的 混合物溶液(1:1)通过腹膜内注射入每只实验大鼠，剂量为1.0ml/kg，持续3天， 以此来诱导急性肝中毒以用作对照组。诱导后1个小时，将各种浓度的实施例1 中的发明性组合提取物，即H1、 H2、 H3和H4补充盐水后通过口服向大鼠使用， 剂量为1 g/60kg，持续四天，这是测试组；对于阴性对照组，只以等量的盐水处理。 在测试的最后一天，从麻醉的实验动物中收集1.5 ml血液，并通过重灌注固定， 3000 rpm下离心20分钟。使用CH100+装置(SEAC Co.)测定每个样品的每个 GOT禾卩GPT7jC平。
如图5和6所示，以橄榄油和CC14混合溶液(1:1)处理的对照组显示出大约 488 U/I的GOT水平和201.4 U/I的GPT水平。但是，以H1、 H2和H3处理的测 试组分别显示出大约347.6、 304.1、 107.9 U/I的GOT水平禾口 136.4、 99.2、 97.3 U/I 的GPT水平。H4处理组中GOT和GPT的水平与H2和H3处理组中相似，比H2 和H3处理组显示出相当强的处理活性(见图5和6)。
实验例2.对大鼠模型中胶原分布和GOT和GPT水平的抑制的效应 为了研究实施例1中获得的发明性组合提取物的改善性效应，进行了下列实验。
2- l.试剂和实验动物
DMN (二甲基亚硝胺，SigmaCo.)、丙氨酸氨基转移酶(ALT、 GPT， Stanbio Co.)和天门冬氨酸氨基转移酶(AST、 GOT, Stanbio Co.)购买自商业公司，以 用于实验。
实验中使用Wister大鼠(体重大约270g)，将其置于可自由获取饲料(Harlan， teklan， USA)和饮水。所有的动物保持在受控环境中，温度为2rC-24。C，湿度 为60%-80%， 12小时光照-12小时黑暗循环，在使用前至少持续1个星期。
2-2.对胶原分布和GOT和GPT水平的抑制的效应
为了评估对于肝硬化的效应，将1%的DMN (二甲基亚硝胺)通过腹膜内注 射入每只实验大鼠，剂量为40 mg/kg/天，持续3天，以此来诱导肝硬化。将实施例1中制备的发明性组合提取物悬浮于盐水溶液，通过口服向大鼠使用，剂量为 lg/60kg，持续两周，这是测试组；对于阴性对照组，只以等量的盐水处理。在测
试的最后一天，从麻醉的实验动物中收集1.5ml血液，并通过重灌注固定，3000rpm 下离心20分钟。使用CH100+装置(SEAC Co.)测定每个样品的每个GOT和GPT 水平。
为了测定肝组织中胶原的分布，使用Masson三色染色方法，其只染胶原部分； 将分离的肝组织嵌入自动组织分析仪(Citadel 2000, ShandonCo.)，使用组织切片 机(LEICARM2145)切成4微米宽度的片。每个组织选取5个损伤，通过成像分 析系统确定该损伤的纤维化比率。计算平均的比率值并转化为胶原量。
如图7所示，以实施例1中获得的发明性提取物处理的组显著性抑制肝损伤 大鼠模型中GOT和GPT水平。H2和H3处理组比Hl处理组显示出更强的抑制活 性，H4处理组在测试组中显示出最强的活性(显著性pO.OOOl，见图7)。
而且，以实施例1中获得的发明性提取物H1、 H2、 H3和H4处理的组中的胶 原量分别为1.83、 1.5、 1.33禾n 1.66，而对照组和正常组分别为2.44和1.33 (见图 8)。
因此确认本发明的发明性组合提取物对于肝纤维化进程是显著有效的。 实验例3.对于大鼠模型中酒精诱导的脂肪肝的效应
为了研究实施例2中获得的发明性组合提取物对于脂肪肝的抑制效应(与比 较实施例2中相比)，进行了下列实验。 3-l.实验动物和预处理
实验中使用雄性Sprague-Dawley大鼠(体重大约200g) (Samtaco Co. Ltd., Korea),将其置于可自由获取饲料和饮水。所有的动物保持在受控环境中，温度 为22士2。C，湿度为60±5%， 12小时光照-12小时黑暗循环，在使用前至少持续l 个星期。每组的平均重量根据每组进行优化，每组有10只。
3-2.预处理
为了诱导脂肪肝，将动物饲料(AIN76，含有1%的胆固醇，FeedlabCo.Ltd.) 通过口服向实验大鼠施用21天。另外，从词养第8天开始，通过口服向实验大鼠 施用35%酒精，以用作对照组；从词养第10天开始，将比较实施例2和实施例2 中所制备的提取物通过口服向实验大鼠施用，剂量为50mg/kg。 口服施用21天后， 用乙醚麻醉实验动物以用于以下实验。
3-3.对脂肪肝中GOT和GPT的效应
为了测定实施例2中所制备的发明性组合提取物对于脂肪肝中血液GOT和 GPT浓度变化的效应，按照文献(Bergmeyer HU， Scheibe P， Wahlefeld AW : optimization of methods for asparate aminotransferase and alanine aminotransferase. Clin Chem 24:58,1978)中的程序进行了以下测试。
在进行了 3-2中类似的步骤以后，收集麻醉的实验动物的血液。4550xg下离心20分钟。使用BT2000+装置(SEAC Co.)测定血清中的每个GOT和GPT水平。 如图9所示，以比较实施例2中制备的各个草药处理的测试组不能显著降低 1%胆固醇和35%酒精诱导的升高的GOT和GPT水平；然而，以实施例2中制备 的组合草药处理的测试组显著降低了 GOT和GPT的水平，其中，在酒精诱导的 脂肪肝模型中，HF4处理组显示出对于升高的GOT和GPT水平最强的降低效应 (GOT: 131.2mg/dl， GPT: 89.6mg/dl)(见图9)。 3-4.对脂肪肝中血脂浓度的效应
为了测定对于脂肪肝中血脂浓度变化的效应，按照文献(Trinder, P. Determination of glucose in blood using glucose oxidase with an alternative oxygen acceptor. Ann Clin Bio Chem. 6; 24-27, 1969)中的程序进行了以下测试。
在进行了 3-2中类似的歩骤以后，收集麻醉的实验动物的血液。4550 xg下离 心20分钟。使用BT2000+装置(SEAC Co.)测定血清中的每个胆固醇、甘油三酯、 HDL禾卩LDL的tK平。
胆固醇水平的结果
如图10所示，与未处理的正常组(65.6mg/dl)相比，以1%胆固醇和35%酒 精处理的对照组的血液胆固醇水平增加至2倍(158.1 mg/dl);然而，以比较实施 例2和实施例2中制备的提取物处理的组对于升高的胆固醇水平显示出显著降低 效应，其中，在酒精诱导的脂肪肝模型中，HF3处理组(91.5 mg/dl)和HF4处理 组(88.2mg/dl)显示出对于升高的血液胆固醇水平最强的降低效应(见图IO)。
甘油三酯水平的结果
如图11所示，与未处理的正常组(63.6 mg/dl)相比，以1%胆固醇和35%酒 精处理的对照组的血液甘油三酯水平增加至3倍(173.2 mg/dl);然而，以比较实 施例2和实施例2中制备的提取物处理的组对于升高的甘油三酯水平显示出显著 降低效应，其中，在酒精诱导的脂肪肝模型中，HFl处理组(120.2 mg/dl)显示出 对于升高的血液甘油三酯水平最强的降低效应(见图11)。
HDL-胆固醇和LDL-胆固醇水平的结果
如图12所示，与未处理的正常组(53.8 mg/dl)相比，以1%胆固醇和35%酒 精处理的对照组显示出降低的血液HDL-胆固醇水平(55.4 mg/dl);然而，以比较 实施例2和实施例2中制备的提取物处理的组对于降低的HDL水平显示出显著升 高效应(见图12)。
如图13所示，与未处理的正常组(53.2 mg/dl)相比，以1%胆固醇和35%酒 精处理的对照组的血液LDL-胆固醇水平增加至3倍(168.7mg/dl);然而，以比较 实施例2和实施例2中制备的提取物处理的组对于升高的LDL水平显示出显著降 低效应，与图10中的结果相似；其中，在酒精诱导的脂肪肝模型中，HF4处理组 (114.8 mg/dl)显示出对于升高的血液LDL水平最强的降低效应(见图13)。
从以上描述的结果确定比较实施例2和实施例2中制备的提取物对于升高的胆固醇、甘油三酯、LDL-胆固醇显示出有力的降低效应；对降低的HDL-胆固醇 显示出升高效应，结果为抑制血清中脂肪的堆积。 实验例4.肝脏中脂肪含量变化的确定
为了研究实施例2中获得的发明性组合提取物对于脂肪肝中脂肪含量的抑制 效应(与比较实施例2中相比)，按照文献(Zlatkis， A and Zak, B. Study of a new cholesterol reagent. Anal, biochem, 29, 143-148, 1969)中的程序进行了以下测试。
在进行了3-2中类似的步骤以后，从实验大鼠传送肝脏，将2ml的盐水溶液 加入1 g的肝切片。将组织以匀浆器研磨，加入3 ml的CM混合物(氯仿:甲醇=2:1 )。 重复上述步骤3次，在3000rpm的速度下离心悬浮液10分钟。除去氯仿层，以氮 气除去溶剂。加入含有氯仿的Triton X-100以防止液体恶臭，以氮气除掉剩余的氯 仿。使用BT2000+装置(SEACCo.)测定血清中的总胆固醇和甘油三酯。
总胆固醇水平的结果
如图14所示，与未处理的正常组(139.75 mg/dl)相比，以1%胆固醇和35% 酒精处理的对照组的血液总胆固醇水平增加至2倍(308.43 mg/dl);然而，以比较 实施例2和实施例2中制备的提取物处理的组对于升高的总胆固醇水平显示出显 著降低效应，其中，HF2、 HF3和HF4处理组(HF2: 189.87 mg/dl; HF3: 185.54 mg/dl; HF4: 169.85 mg/dl)显示出对于升高的总胆固醇水平有力的降低效应(见 图14)。
总甘油三酯水平的结果
如图15所示，与未处理的正常组(63.6mg/dl)相比，以1%胆固醇和35%酒 精处理的对照组的血液总甘油三酯水平增加2倍以上(173.2mg/dl);然而，以比 较实施例2和实施例2中制备的提取物处理的组对于升高的总甘油三酯水平显示 出显著降低效应，与图14中的结果相似；其中，HF2、 HF3和HF4处理组(HF2: 165.5 mg/dl; HF3: 158.1 mg/dl; HF4: 143.0 mg/dl)显示出对于升高的血液甘油 三酯水平有力的降低效应(见图15)。
因此确定比较实施例2和实施例2中制备的提取物对于升高的血液胆固醇 和甘油三酯显示出有力的降低效应。
实验例5.肝脏组织变化的确定
为了研究实施例2中获得的发明性组合提取物(HF2、 HF3和HF4)对于肝脏 组织形态学变化的效应(与比较实施例2中相比)，按照文献(Hematoxylin and Eosin (H&E) staining, http:〃www.protocol-online.org)中的程序进行了以下实验。
在进行了 3-2中类似的歩骤以后，从实验大鼠传送肝脏，将肝脏组织以10% 福尔马林固定，通过H&E方法染色(Hematoxylin and Eosin staining, http:〃www.protocol陽online.org)。
肝脏形态学变化的结果
如图16所示，与未处理的正常组相比，以1%胆固醇和35%酒精处理的对照组显示出数目增多的脂肪滴(临近血管)以及干细胞形状的不正常的形态学；然 而就脂肪滴数目和肝脏组织的大致排列来说，HF4处理组与正常组类似(见图16)。
因此确定以HF2、 HF3和HF4特别是HF4处理的组对于酒精性脂肪肝引起 的肝脏组织形态学变化显示出有力的抑制效应。
实验例6.HMG-HMG-CoA基因表达的变化
有报道指出HMG-CoA (3-羟基-甲基戊二酰-辅酶A)还原酶在调节胆固醇的 合成和解离途径中具有重要作用；酶的数目由于摄入酒精而升高，导致升高的胆 固醇合成。因此，为了研究实施例2中获得的发明性组合提取物(HF2、 HF3和 HF4)对于HMG-CoA-还原酶基因表达的改变的效应，按照文献(Gene C. N, Reed C. H. Selective compensatory induction of hepatic HMG-CoA reductase in response to inhibition of cholesterol absorption. Exp. Biol. Mes. 231:559-569, 2006)中的程序进《亍 了以下实验。
在进行了 3-2中类似的步骤以后，从实验大鼠传送肝脏，使用Trizole试剂 (Gibco, BRL, USA)分离肝脏组织中的RNA。使用M-MLV逆转录酶(Gibco, BRL, USA)将提取的RNA合成cDNA，使用针对HMG-CoA-还原酶基因的引物 (SeqJl(F): TGA GGG AAC CCT GAC ACT TA， Seq.#2(R): CTT CAA ATT TTG GGCACTCA)进行RT-PCR。 HMG-CoA基因表达的结果
如图17所示，与未处理的正常组(0.805)相比，以1%胆固醇和35%酒精处 理的对照组显示出升高的HMG-CoA基因表达(1.852);然而与对照组相比，以 HF2、 HF3和HF4处理的组显示出降低大约L5倍的基因表达水平(HF2: 1.633; HF3: 1.290; HF4: 1.224)。
因此确定以HF2、 HF3和HF4特别是HF4处理的组对于酒精性脂肪肝引起 的胆固醇生产降低显示出有力的抑制效应(见图17)。
实验例7.急性毒性的评估
为了测定发明性提取物的毒性，在大鼠上进行了急性毒性测试。将15只雄性 和雌性SD大鼠分成3组，向每5只大鼠施用3种剂量的发明性提取物，即1 g/kg、 2g/kg和5g/kg，持续14天，以水处理对照组。观测4周毒性的症状，例如体重 改变、血清学分析和组织学测试。
作为实验的结果，施以发明性提取物的大鼠没有死亡的例子；没有显著性非 正常体重增加和组织学测试等。与这些结果相一致，确定发明性提取物是安全的。
以下将描述配制方法和各种赋形剂，但是本发明不限于这些。以下描述代表 性的制剂的例子。
注射液的制备
HF4 100 mg焦亚硫酸钠 3.0 mg
尼泊金甲酯 0.8 mg
尼泊金丙酯 0.1 mg
蒸馏水 最佳注射剂量
将活性成分溶解来制备注射液，控制pH至大约7.5，然后将所有的成分注入 2ml试剂瓶(ample)中，通过常规注射液制备方法进行消毒。 粉末的制备
HF3 ' 500 mg
玉米淀粉 100 mg
乳糖 100 mg
云母 10 mg
通过将以上成分混合并注入密封的包装来制备粉末。 药片的制备
HF2 200 mg
玉米淀粉 100 mg
乳糖 100 mg
硬脂酸镁 最佳剂量 通过将以上成分混合并压成片来制备药片 胶囊的制备
HF1 100 mg
乳糖 50 mg
玉米淀粉 50 mg
云母 2 mg
硬脂酸镁 最佳剂量
将以上成分混合并通过常规的白明胶制备方法填充白明胶胶囊。 液体的制备
HF2 1000 mg
糖 20g .
多糖 20 g
柠檬香料 20 g
将活性成分溶解，然后将所有的成分注入1000 ml试剂瓶(ample),通过常规 液体制备方法进行消毒。 健康食品的制备
HF3 1000 mg
维生素混合物 最佳剂量 维生素A醋酸酯 70 mg
维生素E 1.0 mg维生素Bl
维生素B2
维生素B6
维生素B12
维生素C
生物素
烟酰胺
叶酸
泛酸钙
矿物混合物
硫酸亚铁
氧化锌
碳酸镁
磷酸二氢钾
柠檬酸钾
碳酸钙
氯化镁
0.13 mg 0.15 mg 0.5 mg 0.2 mg 10 mg 10 mg 1/7 mg 50 mg 0.5 mg 最佳剂量 1.75 mg 0.82 mg. 25.3 mg 15 mg 55 mg 90 mg 100 mg 24.8 mg
上述维生素和矿物混合物可以多种方式变化。不应该认为这样的变化偏离了 本发明的主旨和范围。 健康饮料的制备
HF4 1000 mg
1000 mg 訓g
杏浓縮物 2 g
牛磺酸 lg 蒸馏水 900 ml
将活性成分溶解，混合，在85'C搅拌1个小时，过滤，然后将所有的成分注 入1000ml试剂瓶(ample)，通过常规健康饮料制备方法进行消毒。
因此本发明被描述，显而易见的是本发明可以很多方式改变。不应该认为 这样的变化偏离了本发明的主旨和范围，对本领域技术人员来说显而易见的所有 的这样的改变都被认为包括在以下权利要求的范围之内。
工业实用性
本发明所述组合草药组合物对于升高的GOT、 GPT、胆固醇、甘油三酯、LDL-胆固醇显示出有力的抑制效应，以及对于降低的HDL-胆固醇显示出有力的升高效 应，以及预防和治疗肝硬化和脂肪肝。本发明所述发明性组合物在预防和治疗肝病中是有用的，可用作安全且有效 的肝脏保护性试剂。 序列表文字
SEQ ID NO. 1: TGA GGG AAC CCT GAC ACT TA SEQ ID N0.2: CTT CAA ATT TTG GGC ACT CA
权利要求
1、一种药物组合物，其包含可有效预防和治疗肝病剂量的作为活性成分的组合草药的提取物，所述的组合草药由云芝Coriolus versicolor和黄芪Astragalusmembranaceus Bunge组成。
2、 根据权利要求1所述的药物组合物，其中所述药物组合物包含云芝和黄芪 以基于每种草药干重(w/w%)的比率混合，比率介于0.1-10:1。
3、 根据权利要求1所述的药物组合物，其中除了如权利要求l所述的组合草 药外，所述草药还包含至少一种草药，选自五味子Schisandra chinensis或茵陈蒿 Artemisia capillaris，以用于预防和治疗肝病。
4、 根据权利要求3所述的药物组合物，其中所述药物组合物包含云芝、黄芪 和五味子以基于每种草药干重(w/w%)的比率混合，比率介于0.1-10:0.1-10:1。
5、 根据权利要求3所述的药物组合物，其中所述药物组合物包含云芝、黄芪 和茵陈蒿以基于每种草药干重(w/w%)的比率混合，比率介于0.1-10:0.1-10:1。
6、 根据权利要求3所述的药物组合物，其中所述药物组合物包含云芝、黄芪、 五味子和茵陈蒿以基于每种草药干重(w/w。/。)的比率混合，比率介于0.1-10:0.1-10: 0.1-10:1。
7、 根据权利要求1或3所述的药物组合物，其中所述提取物选自粗提物、低 碳醇不可溶性成分提取物或非极性溶剂可溶性提取物。
8、 根据权利要求7所述的药物组合物，其中所述粗提物在蒸馏水，Cl-C4低 碳醇例如甲醇、乙醇等，或其混合物中可溶。
9、 根据权利要求7所述的药物组合物，其中所述低碳醇不可溶性成分提取物 包含通过以下步骤制备的提取物以低碳醇溶液例如乙醇和水的混合溶液提取粗 提物以分离低碳醇可溶性成分和低碳醇不可溶性成分；并收集低碳醇不可溶性成 分提取物。
10、 根据权利要求7所述的药物组合物，其中此处公开的非极性溶剂可溶性 提取物包含通过以下歩骤制备的提取物以非极性溶剂例如己垸、氯仿、二氯甲 垸或乙酸乙酯来分离粗提物；并收集非极性溶剂可溶性提取物。
11、 根据权利要求1或3所述的药物组合物，其中所述肝病选自脂肪肝、急 性或慢性肝炎、肝肿大、肝脓肿、肝硬化或肝癌。
12、 根据权利要求11所述的药物组合物，其中所述肝病选自脂肪肝、肝硬化 或肝炎。
13、 一种制备如权利要求1或3所述药物组合物的方法，包括以下步骤将 草药洗涤、干燥并以合适的比率(W/W)混合，或者，在此阶段将另外的草药共混 合以制备粗制药物组合物；将草药研磨成粉；将研磨成粉的组合物与5-20倍体积 的蒸馏水，醇例如甲醇、乙醇等，或其混合物混合；然后，在0至室温的温度范 围内冷吸，持续12至48小时，或者，在80至12(TC的温度范围内加热，持续1-24 小时，进行2-5次；过滤并在80-12(TC减压下将提取物浓縮；提取物以10-60倍体 积的水通过共沸蒸馏进行浓縮1-5次，然后通过冻干或真空干燥进行干燥以获得干 燥粗提物形式的粗制药物组合物。
14、 一种健康功能食品，其包含可有效预防和改善肝病剂量的作为活性成分 的组合草药的提取物，所述的组合草药由云芝和黄芪组成，通过保护肝细胞而预 防和改善肝病。
15、 根据权利要求14所述的健康功能食品，其中所述食品包含云芝和黄芪， 以基于每种草药干重(w/w%)的比率混合，比率介于0.1-10:1。
16、 根据权利要求14所述的健康功能食品，其中除了如权利要求l所述的组 合草药外，所述食品还包含至少一种草药，选自五味子或茵陈蒿，以用于预防和 治疗肝病。
17、 根据权利要求16所述的健康功能食品，其中所述食品包含云芝、黄芪和 五味子，以基于每种草药干重(w/w%)的比率混合，比率介于0.1-10:0.1-10:1。
18、 根据权利要求16所述的健康功能食品，其中所述食品包含云芝、黄芪和 茵陈蒿，以基于每种草药干重(w/w%)的比率混合，比率介于0.1-10:0.1-10:1。
19、 根据权利要求16所述的健康功能食品，其中所述食品包含云芝、黄芪、 五味子和茵陈蒿，以基于每种草药干重(w/wQ/。)的比率混合，比率介于0.1-10:0.1-10: 0.1-10:1。
20、 根据权利要求14或16所述的健康功能食品，其中所述提取物选自粗提 物、低碳醇不可溶性成分提取物或非极性溶剂可溶性提取物。
21、 根据权利要求20所述的药物组合物，其中所述粗提物在蒸馏水，Cl-C4 低碳醇例如甲醇、乙醇等，或其混合物中可溶。
22、 根据权利要求20所述的健康功能食品，其中所述低碳醇不可溶性成分提 取物包含通过以下步骤制备的提取物以低碳醇溶液例如乙醇和水的混合溶液提 取粗提物以分离低碳醇可溶性成分和低碳醇不可溶性成分；并收集低碳醇不可溶 性成分提取物。
23、 根据权利要求20所述的健康功能食品，其中此处公开的非极性溶剂可溶 性提取物包含通过以下步骤制备的提取物以非极性溶剂例如己烷、氯仿、二氯 甲烷或乙酸乙酯来分离粗提物；并收集非极性溶剂可溶性提取物。
24、 根据权利要求14或16所述的健康功能食品，其中所述肝病选自脂肪肝、 急性或慢性肝炎、肝肿大、肝脓肿、肝硬化或肝癌。
25、 根据权利要求24所述的健康功能食品，其中所述肝病选自脂肪肝、肝硬 化或肝炎。
26、 如权利要求1或3所述的提取物在制备用于预防或治疗肝病的药物例如 肝脏保护性试剂中的用途。
27、 一种治疗哺乳动物中肝病的方法，所述方法包括向所述哺乳动物施用 有效量的如权利要求1或3所述的提取物及其药学上可接受的载体。
全文摘要
本发明涉及一种用于肝病预防和治疗需要的组合草药组合物，其包含云芝(Coriolus versicolor)、黄芪(Astragalus membranaceus Bunge)，还包含至少一种草药，选自五味子(Schisandra chinensis)或茵陈蒿(Artemisia capillaris)，还涉及使用以上粗制药物组合物的方法，以及作为肝脏保护性试剂的药物组合物。
文档编号A23L1/29GK101563092SQ200780046695
公开日2009年10月21日 申请日期2007年12月18日 优先权日2006年12月20日
发明者李正植 申请人:李正植