专利名称：一种从甘薯块根中提取超氧化物歧化酶的方法
技术领域：
本发明涉及一种提取超氧化物歧化酶的方法，特别是一种从甘薯块根中提取超氧 化物歧化酶的方法。
背景技术：
超氧化物歧化酶广泛存在于生物体内，其功能为清除对生物体有强烈毒性的超氧 自由基，过多的自由基被认为是使细胞衰老到死亡的主要原因之一。近年来，发展了一些提 取SOD的方法，并将其用于医药、保健、食品、化妆品和日用化学品等领域，取得了很好的效 果，特别是对消炎、抗衰老、抗辐射损伤和抑制肿瘤生长等均有较好的作用。目前，SOD制剂大多从动物血液或组织中提取制备，使得原材料不易收集、运输、储 存和清洗，而且极易携带病原微生物，极不安全。已有一些SOD制品是从谷物包括玉米、大 豆等作物种提取制备的，这些原料虽然来源广泛，生产的SOD也安全，但是利用粮食作物生 产SOD不利于我国的粮食安全。
发明内容
本发明针对现有技术的不足，提供了一种从非粮食作物甘薯的块根中大量提取 SOD的方法。该方法原料来源广泛，成本极低廉，经特殊的热激处理，SOD得率高，纯度高，适
合大量生产。本发明方法具有如下步骤a、将甘薯块根洗净，置于38°C热激48小时，诱导大量超氧化物歧化酶的产生；b、将诱导的甘薯块根粉碎并加入4°C下预冷的0. 05M磷酸钾缓冲液勻浆抽提；C、过滤，弃残渣，滤液在常温下2500rpm离心取上清液；d、上清液加入2M醋酸，调节pH值为4. 0，再次常温2500rpm离心，取上清液；e、上清液加入2M氢氧化钠调整pH至7. 5，常温2500rpm离心，收集上清液；f、上清液中加入固体硫酸铵是上清液饱和度达到80%，4°C沉淀；g、常温下，5000-6000rpm离心，收集沉淀，既得粗酶制剂。具体的，本发明方法可按如下步骤实施1.将甘薯块根洗净，置于38°C热激48小时，热激可诱导甘薯产生大量超氧化物歧 化酶，利于提高产率；2.将诱导的甘薯块根粉碎，一边搅拌一边加入1 1(重量体积比)4°C下预冷的 0. 05M磷酸钾缓冲液勻浆抽提；3.过滤勻浆，弃残渣，滤液在常温下2500rpm离心取上清液；4.上清液加入2M醋酸，调节pH值为4. 0，再次常温2500rpm离心，取上清液；5.上清液加入2M氢氧化钠调整pH至7. 5，常温2500rpm离心，收集上清液；6.上清液中加入固体硫酸铵是上清液饱和度达到80%，4°C沉淀；7.常温下，5000-6000rpm离心，收集沉淀，既得粗酶制剂。
本发明具有如下优点本发明工艺简单，操作方便，原料来源特别丰富，成本极其 低廉，适宜大规模生产。副产品主要为淀粉，同样具有较大经济价值。通过将甘薯块根热激 处理，可诱导SOD大量产生，大大提高了 SOD的得率，一般可达到15U/gfV。
具体实施例方式实施例一使用本发明方法提取甘薯超氧化物歧化酶SOD1、原料浸提称取甘薯块根500g，洗净，置于38°C温箱热激处理48小时。取出块根粉碎成小 块，加入300ml 4°C预冷的0. 05M磷酸钾缓冲液，边加边勻浆抽提；勻浆后用140目尼龙布 过滤，残渣加200ml4°C预冷的0. 05M磷酸钾缓冲液，再次勻浆抽提；过滤抽提液，收集并合 并两次的抽提液。滤液在室温下于2500rpm离心15min，去上清液。2、选择性酸碱变性于上述上清液中加入2M醋酸，调节pH至4. 0，室温下于2500rpm离心15min，除 去碱性蛋白，收集上清；上清液中加入2M氢氧化钠，调节pH至7. 5，室温下于2500rpm离心 15min,除去酸性蛋白，收集上清。3、粗酶制备上清液中加入固体硫酸铵，边加边搅拌至饱和度达到80%，置于4°C下3-4小时， 使蛋白沉淀。常温下于5000-6000rpm离心20min，收集沉淀既得甘薯SOD粗酶制剂。经测定，由本发明方法提取的甘薯超氧化物歧化酶SOD比活力达到了 216v/mg，活 力回收达到了 51.6%，50(^甘薯产酶45511^。表1分离纯化结果
权利要求
1. 一种从甘薯块根中提取超氧化物歧化酶的方法，其特征是具有如下步骤a、将甘薯块根洗净，置于38°C热激48小时，诱导大量超氧化物歧化酶的产生；b、将诱导的甘薯块根粉碎并加入4°C下预冷的0.05M磷酸钾缓冲液勻浆抽提；c、过滤，弃残渣，滤液在常温下2500rpm离心取上清液；d、上清液加入2M醋酸，调节pH值为4.0，再次常温2500rpm离心，取上清液；e、上清液加入2M氢氧化钠调整pH至7.5，常温2500rpm离心，收集上清液；f、上清液中加入固体硫酸铵是上清液饱和度达到80%，4°C沉淀；g、常温下，5000-6000rpm离心，收集沉淀，既得粗酶制剂。
全文摘要
本发明涉及一种从甘薯块根中提取超氧化物岐化酶的方法。采用甘薯为原料，经清洁、热激诱导、粉碎、匀浆，以预冷的磷酸钾缓冲液抽提、过滤、离心，上清液经选择性酸碱变性处理，硫酸铵沉淀，得到粗酶制剂。本发明所得甘薯SOD无有害物质，纯度高，得率高，原料成本低，来源丰富，适合大规模生产。
文档编号C12N9/08GK102086449SQ20091021648
公开日2011年6月8日 申请日期2009年12月2日 优先权日2009年12月2日
发明者黄晓川 申请人:黄晓川