改良哺乳动物表达载体及其用途的制作方法

专利名称：改良哺乳动物表达载体及其用途的制作方法
专利说明相关申请本申请要求于2008年1月15日提交的美国临时申请序列号61/021282和于2008 年10月10日提交的美国临时申请序列号61/104546的优先权，所述专利各自的内容在此 整体引入。
背景技术：
蛋白质包括生物制品的稳定生产可以通过用载体转染宿主细胞来完成，所述载体 包括编码蛋白质的DNA。载体在细胞系中的维持可以通过各种方法来达到，包括通过附加型 复制起点的染色体外复制。附加型载体包含当序列由复制起始因子结合时促进载体复制的 复制起点。附加型载体具有超过需要插入宿主基因组内的载体的几个优点。例如，附加型 载体减少细胞中可能起因于载体整合到宿主基因组内的表型改变。附加型载体还可以使用 标准DNA提取方案从转染细胞中分离出。由于治疗蛋白质即生物制品的发展重要性，必须采取努力以最佳化蛋白质生产， 同时改善总体生产过程的效率。因此，效率中的改善必须针对载体的蛋白质生产能力加重。 需要更佳的表达系统，其提供有效的克隆选择，以及高水平的所需蛋白质产物。减少生物制 品特别是抗体产生中涉及的克隆步骤数目是有利的，以改善时间需要且使成本降到最低。 提供供应足够蛋白质生产用于小和大规模细胞培养也是有利的。本发明通过提供根据下文 详述将是显而易见的另外优点克服了常规载体的局限性。发明概述重组蛋白质可以通过哺乳动物细胞瞬时转染而产生，特别是在药学药物开发过程 期间。各种宿主细胞可以用于表达蛋白质，包括哺乳动物细胞例如COS和人胚肾(HEK)细 胞。附加型载体依赖于复制起点和结合起点的反式作用的复制起始因子。复制起始因子例 如结合EB病毒的OriP的EB病毒核抗原(EBNA)，可以克隆到附加型载体内，或可替代地，可 以通过载体转染到其内的宿主细胞表达。因此，附加型载体可以对特定细胞系特异，所述特 定细胞系表达激活通过复制起点的复制所需的反式作用因子。本发明消除了关于用于重组蛋白质表达的不同附加型载体主链的需要。本发明提 供了包括至少2个不同的附加型复制起点的附加型载体，这允许相同载体在不同细胞类型 中用于蛋白质表达。不同复制起点允许载体在不同类型的哺乳动物细胞中用于蛋白质表 达，所述哺乳动物细胞提供必需的反式作用复制因子且允许载体复制。通过消除再克隆目 的基因用于蛋白质生产的需要，本发明改善了效率且减少了与多重载体相关的成本，同时 维持蛋白质生产水平。本发明的一个令人惊讶的方面是给载体添加核苷酸即第二个复制起 点，不会负面影响载体在所需水平上生产蛋白质的能力。在一个优选实施方案中，本发明的载体包括抗体重或轻链恒定区。因此，抗体轻或 重链可变区可以分别克隆到载体内轻或重链恒定区的上游，进一步改善表达系统的效率。 附加型载体促进表达SV40T Ag或EB病毒核抗原的哺乳动物细胞(例如C0S7或HEK293-6E 细胞)中的高蛋白质生产。本发明提供了关于蛋白质得率、生产效率和减少成本的最佳元件组合，和生物制品蛋白质例如抗体的生产，所述元件是用于特别是在医药工业中的蛋白质生产的所有重要 元件。本发明的其他特征和优点在下文详述和权利要求中描述。在一个方面，本发明提供了包括下述的表达载体a)衍生自EB病毒(EBV)的OriP 复制起点；(b)SV40复制起点；(c)用于插入目的基因的插入位点；和(d)编码抗体重或轻 链恒定区的核酸序列，与插入位点可操作地连接。在一个实施方案中，目的基因是抗体重或 轻链可变区，例如鼠类、人源化、嵌合或人抗体重或轻链可变区。在一个具体实施方案中，抗 体重链可变区是选自阿达木单抗(adalimumab)、ABT_325和ABT-874的抗体的重链可变区。 在另一个具体实施方案中，抗体轻链可变区是选自阿达木单抗、ABT-325和ABT-874的抗体 的轻链可变区。抗体重链恒定区是例如鼠类、人源化、嵌合或人的，并且可以是选自Yl，z， a;yl,z, non-a ； γ 2, η+ ； γ 2, η-；和γ 4的抗体重链恒定区。Y 1，z，non-a抗体重链恒定 区可以进一步包括在重链恒定区的位置234处的丙氨酸突变。在另一个实施方案中，Yl， z，non-a抗体重链恒定区可以进一步包括在重链恒定区的位置235或237处的丙氨酸突变。在一个实施方案中，抗体轻链恒定区是人κ同种型或人λ同种型。在一个实施 方案中，抗体重链恒定区是鼠类Yl同种型或鼠类Y2a同种型。在另一个实施方案中，抗 体轻链恒定区是鼠类κ同种型。在一个实施方案中，抗体重链恒定区是Fc结构域。在一 个实施方案中，重或轻链抗体可变区对于插入位点是5'。在一个实施方案中，表达载体进一步包括与插入位点可操作地连接的启动子，其 中启动子是EF-I α启动子或巨细胞病毒(CMV)启动子。在一个实施方案中，表达载体进一步包括可选标记，例如氨苄青霉素抗性基因。在一个实施方案中，CMV启动子包括与SEQ ID NO :1的核苷酸1-608至少80%、至 少85%、至少90%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%或至少99%等同的核酸序 列。在一个具体实施方案中，CMV启动子包括SEQ ID NO 1的核苷酸1_608。在一个实施方案中，EF-I α启动子是人的。在一个实施方案中，EF_1 α启动子包 括与SEQ ID NO :2的核苷酸76-1267至少80%、至少85%、至少90%、至少95%、至少96%、 至少97%、至少98%或至少99%等同的核酸序列。在一个具体实施方案中，EF-I α启动子 包括SEQ IDNO 2的核苷酸76-1267。在一个实施方案中，OriP复制起点包括与SEQ ID NO 1的核苷酸1795-3545至少 80%、至少85%、至少90%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%或至少99%等同的
核酸序列。在一个实施方案中，SV40复制起点包括与SEQ ID NO 1的核苷酸5834-6140至少 80%、至少85%、至少90%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%或至少99%等同的 核酸序列。在一个具体实施方案中，SV40复制起点包括SEQ ID NO :1的核苷酸5834-6140。本发明的示例性表达载体包括与选自下述的序列至少80 %、至少85 %、至少 90%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%或至少99%等同的核酸序列SEQ ID NO: 1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、26、27、28、 29、30、31和32。在一个具体实施方案中，表达载体包括选自SEQ ID NO :1、2、3、4、5、6、7、 8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、26、27、28、29、30、31 和 32 的 核酸序列。本发明的表达载体还在

图1、2和14-15中提供。本发明的另外载体在图8_13中描述。在另一个方面，本发明提供了包括本发明的载体的哺乳动物宿主细胞。哺乳动物 宿主可以是COS细胞，例如COS 7细胞，或人胚肾(HEK)细胞，例如HEK-293细胞。在另一个方面，本发明提供了包括本发明的载体的试剂盒。在另一个方面，本发明提供了产生重组蛋白质的方法，其包括将本发明的表达载 体引入哺乳动物宿主细胞内，在合适条件下培养哺乳动物宿主细胞，以便表达蛋白质，并且 回收蛋白质。在另一个方面，本发明提供了包括编码信号肽的核酸序列的表达载体。在一个实 施方案中，目的基因与编码信号肽的核酸可操作地连接。附图简述当连同附图一起阅读时，本发明的下述和其他目的、特征和优点以及本发明自身， 根据优选实施方案的下述描述将得到更全面理解，其中图1显示空pHyb-C载体的图。特征包括SV40真核生物复制起点、巨细胞病毒真 核生物表达启动子(PCMV)、三联前导序列(TPL)、剪接供体位点(SD)、腺病毒主要晚期增强 子元件(enh MLP)、剪接受体位点(SA)、关于目的基因的开放读码框(ORF)区随后为多腺苷 酸信号(PA)、二重对称元件(DS)、EB病毒衍生的真核生物复制起点(OriP)、复制区(FR)、 氨苄青霉素抗性标记(AmpR)和细菌复制起点(pMBlori)。图2显示空pHyb-E载体的图。特征包括SV-40真核生物复制起点、EF-Ia真核生 物启动子、关于目的基因的开放读码框(ORF)区随后为多腺苷酸信号(pA)、二重对称元件 (DS)、EB病毒衍生的真核生物复制起点(OriP)、复制区(FR)、氨苄青霉素抗性标记(AmpR) 和细菌复制起点(pMBlori)。图3显示通过COS细胞产生的重组Fc融合蛋白滴度，所述COS细胞经由电穿孔用 pBOS、pTT3、pHybC 和 pHybE 载体转染。图4显示通过HEK-293-6E细胞产生的重组Fc融合蛋白滴度，所述HEK-293-6E细 胞使用PEI用pBOS、pTT3、pHybC和pHybE载体转染。图5显示通过HEK-293-6E产生的抗体滴度，所述HEK-293-6E使用PEI用构建为 表达IgG抗体的pBOS、pTT3、pHybC和pHybE载体转染。图6显示通过COS产生的抗体滴度，所述COS经由电穿孔用构建为表达IgG抗体 的 pBOS、pTT3、pHybC 和 pHybE 载体转染。图7显示通过COS产生的抗体滴度，所述COS经由电穿孔用表达IgG抗体的 pHyb-E-Swa I (vl)或 pHyb_E(v2)载体构建体转染。图 8 显示 pHybC-mBR3-mCg2a 载体(也称为 “pHybC-mBR3_Fc”)的图。图 9 显示 pHybE-mBR3-mCg2a 载体(也称为 “pHybE-mBR3_Fc”)的图。图 10 显示 pHybC-E7-hCk 载体(也称为 “pHybC_E7”)的图。图 11 显示 pHybC-D2-hCgl，z，a 载体(也称为 “pHybC_D2”)的图。图 12 显示 pHybE-D2-hCgl，ζ, a 载体(也称为 “pHybE_D2”)的图。图 13 显示 pHybE-E7-hCk 载体(也称为 “pHybE_E7”)的图。图14 显示 pHybE-hCgl，ζ, aV2(也称为 “pJP 182”)的图。图 15 显示 pHybE-hCgl，ζ, non_aV2 (也称为 “pJP183”)的图。
图 16 显示 pHybE-hCgl，z，non_a，mut (234，235) V2 (也称为 “pJP184” )的图。图 17显示pHybE-hCgl，z，non-a，mut(234，237)V2(也称为“pJP185”)的图。图 18 显示 pHybE_hCg2，n+V2(也称为 “pJP186”)的图。图 19 显示 pHybE-hCg2，n_V2(也称为 “pJP187”)的图。图 20 显示 pHybE_hCg4 V2 (也称为 “pJP188”)的图。图 21 显示 pHybE-mCgl V2 (也称为 “pJP189，，)的图。图 22 显示 pHybE_mCg2a V2 (也称为 “pJP190，，)的图。图 23 显示 pHybE-hCk V2 (也称为 “pJP191 ”)的图。图 24 显示 pHybE-hCl V2 (也称为 “pJP192”)的图。图 25 显示 pHybE-mCk V2 (也称为 “pJP193”)的图。发明详述I.定义为了本发明可以更容易理解，首先在本文中定义了特定术语。如本文所使用的，术语“核酸”或“核酸分子”意欲包括DNA、RNA、mRNA、cDNA、基因 组DNA及其类似物。核酸分子可以是单链或双链，但优选是双链DNA。核酸可以进行分离， 或整合到另一个核酸分子例如表达载体或真核生物宿主细胞的染色体内。“分离的”核酸分子是与核酸的天然来源中存在的其他核酸分子分离的核酸分子。 例如，就基因组DNA而言，术语“分离的”包括与基因组DNA与之天然结合的染色体分离的 核酸分子。优选地，“分离的”核酸分子不含在核酸由之衍生的生物体的基因组DNA中天然 侧接核酸的序列(即，位于核酸的5'和3'末端处的序列)。此外，“分离的”核酸分子例 如cDNA分子可以基本上不含其他细胞材料，或当通过重组技术产生时不含培养基，或当化 学合成时基本上不含化学前体或其他化学制品。在本文中可互换使用的术语“重组载体”或“载体”指能够转运它已与之连接的另 一种核酸的核酸分子。一种类型的载体是“质粒”，这指另外的DNA区段可以连接到其内的 环状双链DNA环。可替代地，载体可以是线性的。另一种类型的载体是病毒载体，其中另外 的DNA区段可以连接到病毒基因组内。特定载体能够在它们引入其内的宿主细胞内自主复 制(例如，具有细菌复制起点的细菌载体和附加型哺乳动物载体)。其他载体(例如，非附 加型哺乳动物载体)可以在引入宿主细胞内后整合到宿主细胞的基因组内，并且从而连同 宿主基因组一起复制。在一个优选实施方案中，本发明的载体是附加型哺乳动物载体。如 本文所使用的，术语“构建体”也指载体。特定载体能够指导它们与之可操作地连接的基因的表达。“表达载体”或“重组表 达载体”是编码在宿主细胞中表达的基因的核酸分子，并且此外，包含必需元件以控制基因 的表达。一般地，表达载体包括转录启动子、目的基因和转录终止子。基因表达通常置于启 动子的控制下，并且此种基因被说成与启动子“可操作地连接”。类似地，如果调节元件调节 核心启动子的活性，那么调节元件和核心启动子是可操作地连接的。在一个实施方案中，本 发明的表达载体包括超过一个复制起点，从而使载体不限制于一种细胞类型。如本文所使用的，术语“附加型复制载体”或“附加型载体”指一般且非常优选不 整合到宿主细胞的基因组内而是平行存在的载体。如本文所使用的，附加型复制载体在细 胞周期过程中复制，并且在这个复制过程中，依赖于在细胞分裂前和后存在的拷贝数，载体拷贝在统计上分布于所得到的细胞中。优选地，附加型复制载体可以在宿主细胞的核中发 生，并且优选在细胞周期的S期过程中复制。此外，附加型复制载体在细胞周期的S期过程 中在宿主细胞的核中复制至少一次，即一次或多次。在一个非常优选的实施方案中，附加型 复制载体在细胞周期的S期过程中在宿主细胞的核中复制一次。如本文所使用的，术语“复制序列的起点”或“复制起点”在本文中可互换使用，指 当存在于载体中时起始复制的序列。复制起点可以由复制起始因子或可替代地DNA解旋酶 识别。如本文所使用的，“重组”指通过其核酸材料例如DNA例如在微生物中在2个核酸 分子之间交换的过程。如本文所使用的，“同源重组”指通过其核酸材料经由序列同源性或 优选地序列同一性(例如高度序列同一性)的区域或区段在2个核酸分子之间交换的过 程。在示例性实施方案中，核酸材料位于生物体的染色体或附加体上。在另一个示例性实 施方案中，核酸材料染色体外定位于例如质粒上。重组可以在线性和/或环状DNA分子之 间发生。如本文所使用的，术语“目的基因”指加入本发明的载体中的外源DNA序列。目的 基因例如可以包括编码序列，其可以由内含子分隔或是编码开放读码框的cDNA。如本文所 使用的，“目的基因”指加入本发明的载体中用于最终蛋白质表达的DNA序列。目的基因克 隆至其的载体区域在本文中称为“插入位点”。优选地，目的基因包括使用本发明的载体表 达的抗体或融合蛋白的部分。例如，将抗体阿达木单抗的重链可变区即目的基因克隆到包 括重链恒定区的本发明的载体中。在本发明的一个实施方案中，载体包括抗体轻或重链恒定区，其对于用于目的基 因的插入位点是3'，并且与之可操作地连接。因此，在一个实施方案中，目的基因是抗体轻 或重链的可变区，其与本发明的载体中编码的抗体轻或重链恒定区可操作地连接。当核苷酸序列置于与另一个核苷酸序列的功能关系内时是“可操作地连接的”。例 如，如果当表达时，序列在具有蛋白质或多肽的框内编码信号肽，那么编码信号肽的DNA与 编码蛋白质或多肽的DNA可操作地连接。同样地，如果蛋白质或多肽的表达得到促进或增 强，那么启动子或增强子与编码蛋白质或多肽的核苷酸序列可操作地连接。在一个实施方 案中，可操作地连接的核苷酸序列是邻接的(例如，在信号序列的情况下)。可替代地，可操 作地连接的核苷酸序列可以是非邻接的(例如，在增强子的情况下)。在一个实施方案中， 编码抗体轻或重链恒定区的核酸序列与目的基因例如重或轻链可变区可操作地连接。术语“启动子”包括足以指导在真核生物细胞中的转录的任何核酸序列，包括 诱导型启动子、阻遏型启动子和组成型启动子。一般地，启动子包括这样的元件，其足以 致使以细胞类型特异性、组织特异性或时间特异性方式，或通过外部信号或试剂诱导的 可控制的启动子依赖性基因表达。此种元件可以位于特定基因的5'或3'或内含子序 列区中。通常，基因表达将是组成性的，尽管需要时可以在本发明中采用可调节启动子。 基因表达还可以通过转录调节加以控制，使用热、光或金属，例如通过使用金属硫蛋白 (metallothionine)基因或热休克基因。“上游”和“下游”是用于描述核苷酸序列或载体中存在的2个元件之间的相对定 向的术语。与其他元件比较，其为另一个元件的“上游”的元件位于与序列的5'末端更接 近的位置中(即如果分子是线性的，那么更接近于具有与核糖或脱氧核糖主链的5'碳附着的磷酸基的分子末端)。当与其他元件比较时，元件位于与序列的3'末端更接近的位置 中时(即在线性分子中具有与核糖或脱氧核糖主链的3'碳附着的羟基的分子末端)，它被 说成是“下游的”。如本文所使用的，术语“填充序列，，指优选在载体中的核酸序列，其侧面为在5 ‘ 和3'末端处的限制酶位点。填充序列位于载体中在用于编码目的基因的核酸的插入位点 处。在克隆过程期间，使用合适的限制酶从载体中消化掉填充序列，并且将编码目的基因的 核酸连接或同源重组到载体内在填充序列的先前位置处。优选地，填充序列足够大以提供 在5'和3'限制酶位点之间的足够距离，从而使得限制酶可以有效地切割载体。此外，优 选填充序列的长度不同于编码目的基因的核酸大小，例如约300个碱基对或更小或约400 个碱基对或更大的填充序列长度可以用于编码其为约350个碱基对的目的基因的核酸。在 另一个实施方案中，填充序列大小为约lkb。如本文所使用的，术语“重组宿主细胞”(或简单地“宿主细胞”)意指重组表达载 体已引入其内的细胞。应当理解此种术语不仅意指特定的实验对象细胞还指此种细胞的后 代。因为由于突变或环境影响，特定修饰可以在后代中发生，所以此种后裔事实上可能不等 同于亲本细胞，但仍包括在如本文所使用的术语“宿主细胞”的范围内。如本文所提及的，术语“抗体”包括完整抗体及其任何抗原结合片段(即，“抗原结 合部分”)或单链。“抗体”指包括通过二硫键互联的至少2条重(H)链和2条轻(L)链的 糖蛋白，或其抗原结合部分。每条重链由重链可变区(本文缩写为Vh)和重链恒定区组成。 重链恒定区由3个结构域——CHUCH2和CH3组成。每条轻链由轻链可变区(本文缩写为 Vl)和轻链恒定区组成。轻链恒定区由1个结构域CL组成。V1^nt区可以进一步再分成 称为互补决定区(CDR)的高变性区域，由称为构架区(FR)的更保守区域点缀。每个Vh* Vl由3个⑶Rs和4个FRs组成，从氨基末端到羧基末端以下述顺序排列FR1、⑶Rl、FR2、 ⑶R2、FR3、⑶R3、FR4。重和轻链的可变区包含与抗原相互作用的结合结构域。Vh和Vl组合 的6个CDRs构成抗原结合位点。在由2条H链和2条L链组成的抗体的情况下，抗体可以 包含2个等同的抗原结合位点，结合相同抗原的2个不同抗原结合位点，或结合不同抗原的 2个抗原结合位点。抗体的恒定区可以介导免疫球蛋白与宿主组织或因子的结合，包括免疫 系统的各种细胞(例如，效应细胞)和经典补体系统的第一种组分(Clq)。如本文所使用的，术语抗体的“抗原结合部分”(或简单地“抗体部分”)指抗体的 一个或多个片段，其保留与抗原(例如，IL-Ia、IL-I β)特异性结合的能力。抗体的抗原 结合功能可以通过全长抗体的片段来执行。在术语抗体的“抗原结合部分”内包括的结合 片段的例子包括(i)Fab片段，由\、VH、CL和CHl结构域组成的单价片段；(ii)F(ab' )2片 段，包括在铰链区处由二硫桥连接的2个Fab片段的二价片段；(iii)由Vh和Cm结构域组 成的Fd片段；(iv)由抗体单臂的\和Vh结构域组成的Fv片段，(ν)由Vh或\结构域组 成的dAb片段(Ward等人(1989) Nature 341 544-546)；禾口 (vi)分离的互补决定区(CDR)。 此外，尽管Fv片段的2个结构域，VL和VH，由分离的基因编码，但它们可以使用重组方法 通过合成接头进行连接，所述合成接头使得它们能够制备为其中VL和VH区配对以形成单 价分子的单条蛋白质链(称为单链Fv(ScFv)；参见例如，Bird等人(1988) Science 242 423-426 ；和 Huston 等人(1988) Proc. Natl. Acad. Sci. USA 85 :5879_5883)。此类单链抗体 也意欲包括在术语抗体的“抗原结合部分”内。这些抗体片段使用本领域技术人员已知的常规技术来获得，并且片段以与完整抗体相同的方式就效用进行筛选。在本发明的一个实 施方案中，抗体片段选自Fab、FcUFd'、单链Fv(ScFv)、ScFva和结构域抗体(dAb)。再进一步地，抗体或其抗原结合部分可以是更大免疫粘附分子的部分，由抗体或 抗体部分与一种或多种其他蛋白质或肽的共价或非共价结合形成。此种免疫粘附分子的 例子包括链霉亲和素核心区的使用，以制备四聚scFv分子(Kipriyanov等人(1995) Human Antibodies and Hybridomas 6 :93_101)，以及半胱氨酸残基、标记肽和C末端多组氨酸标 记的使用，以制备二价和生物素化的scFv分子(Kipriyanov等人(1994)Mol. Immunol. 31 1047-1058)。使用常规技术例如分别地完整抗体的木瓜蛋白酶或胃蛋白酶消化，可以由完 整抗体制备抗体部分例如Fc、Fab和F(ab' )2片段。此外，抗体、抗体部分和免疫粘附分子 可以使用标准重组DNA技术获得。术语“结构域”指不依赖于蛋白质的其余保留其三级结构的折叠蛋白质结构。一 般地，结构域负责蛋白质的不连续功能性质，并且在许多情况下可以加入、去除或转移给其 他蛋白质，而无蛋白质和/或结构域的其余部分的功能丧失。单个抗体可变结构域意指包 括抗体可变结构域特征性序列的折叠多肽结构域。它因此包括完整抗体可变结构域和修饰 的可变结构域，例如其中一个或多个环已由并非抗体可变结构域特异性的序列替换，或抗 体可变结构域已截短或包括N或C末端延伸，以及保留全长结构域的至少部分结合活性和 特异性的可变结构域的折叠片段。本发明的可变结构域可以进行组合以形成结构域组；例如，互补结构域可以进行 组合，例如VL结构域与VH结构域组合。非互补结构域也可以进行组合，例如VH结构域和 第二个VH结构域。结构域可以以许多方式进行组合，涉及通过共价或非共价方式的结构域 连接。“dAb”或“结构域抗体”指特异性结合抗原的单个抗体可变结构域(Vh或多肽。 在一个实施方案中，本发明的载体用于表达dAb。短语“重组抗体”指通过重组方法制备、表达、产生或分离的抗体，例如使用转染 到宿主细胞内的重组表达载体表达的抗体，从重组、组合人抗体文库中分离的抗体，从对于 人免疫球蛋白基因是转基因的动物(例如小鼠)中分离的抗体(参见例如，Taylor等人 (1992) Nucl. Acids Res. 20 :6287_6295)，或通过任何其他方法制备、表达、产生或分离的抗 体，所述任何其他方法涉及特定免疫球蛋白基因序列(例如人免疫球蛋白基因序列)与其 他DNA序列的剪接。此种重组抗体的例子包括嵌合、CDR移植和人源化抗体。如本文所使用的，术语“人抗体”指具有相应于或衍生自人种系免疫球蛋白序列的 可变和恒定区的抗体，如例如由Kabat等人描述的(参见Kabat等人(1991) Sequences of Proteins of Immunological Interest,第 5 版，U. S. Department of Health and Human SerVices，NIH
发明者C-M·谢 申请人:雅培制药有限公司