具有β-1,3和β-1,4/1,6键的β-低聚半乳糖的协同混合物的制作方法

专利名称：具有β-1,3和β-1,4/1,6键的β-低聚半乳糖的协同混合物的制作方法
技术领域：
本发明涉及包含两种结构不同的β -低聚半乳糖的营养组合物。该混合物特别适用于婴幼儿营养物。
背景技术：
非消化性低聚糖(NDO)是人乳的主要组分。人NDO促进以双歧杆菌为主的有益微生物菌丛(microbiota)的生长。还已知一些人NDO能够直接防止病原体和毒素的吸附。富含双歧杆菌的微生物丛的存在与例如特应性皮炎、食物变态反应和哮喘的特应性疾病风险的降低和病原体感染风险的降低有关。因此认为是非消化性低聚糖(NDO)使得在人乳喂养婴幼儿中观察到的特应性疾病的感染发生率与在配方乳喂养的婴幼儿中观察到的相比更低。NDO是人乳中先天免疫系统的一种重要因子，母亲借此保护婴幼儿，婴幼儿具有初始的 (naive)和不成熟的获得性免疫系统，和没有完全发育的先天免疫系统。人乳是优选的婴幼儿食物。但是，母乳喂养不总是可行或想要的。在这些情况下婴幼儿配方乳或较大婴幼儿配方乳是很好的替代品。这些配方乳具有最优组成，以尽可能模仿母乳的有益效果。该最优组成包括NDO的存在。WO 2007/067053公开了包含植物衍生的益生元菊粉和半乳糖醛酸低聚糖以及由乳糖合成的益生元反式低聚半乳糖以减少感染的婴幼儿配方乳。WO 2005/039597涉及酸性低聚糖和中性低聚糖用于增强免疫系统并且治疗和/ 或预防免疫系统相关疾病的用途。WO 01/642255涉及包含益生元以增强免疫应答的营养组合物。EP 1 644 482涉及能够产生新的半乳糖苷酶活性的新的双歧双歧杆菌 (Bifidobacterium bifidum)菌株，所述活性将乳糖转变为新的低聚半乳糖混合物。所述低聚糖混合物可以被纳入很多食品或动物饲料中，以通过促进消化道中双歧杆菌的生长并且抑制病原微生物菌丛的生长而改善消化道健康。已知很多婴幼儿配方乳均包含ND0，但还可进一步改进对肠道微生物菌丛和/或先天免疫系统具有改善作用的NDO混合物。

发明内容
发明人意外地发现β_1，3低聚半乳糖和β_1，4和/或β_1，6低聚半乳糖以及优选地还包含低聚果糖的混合物与单一组分相比具有更高的刺激免疫系统的效应。观察到增强的接种应答，表明Thl应答增强。因此本发明的结合物特别有利于Thl应答低于健康成人的人受试者，特别是新生婴幼儿。本发明的结合物适用于治疗和/或预防感染，并且/或者用于在接种前、接种期间和/或接种后支持接种应答。本发明的结合物特别适于治疗和/或预防可通过增强Thl应答和/或Thl/Th2平衡来防止和/或治疗的疾病，特别是变态反应、特应性皮炎、哮喘、食物变态反应、变应性鼻炎(例如，花粉变态反应)、尘螨变态反应和其他形式的超敏感性如全身性过敏反应和急性荨麻疹。
具体实施例方式因此本发明涉及包含至少两种不同的β-低聚半乳糖(BGOS)A和B的营养组合物，其中a) BGOS A的结构为Galn-Glu和/或feilm，η = 2至6而m = 2至7，并且以半乳糖残基之间的键的总数计，两个半乳糖残基之间的β_1，4和β-1，6键的总和至少占80%，并且b)BG0S B的结构为Galn-Glu和/或feilm，n = 2至6而m = 2至7，并且以键的总数计，两个半乳糖残基之间的β -1，3键至少占80 %，并且c) BGOS A和BGOS B之间的重量比例是1至5。β-低聚半乳糖本发明涉及包含至少两种不同的β -低聚半乳糖A和B的营养组合物，其中A的结构为Galn-Glu和/或feilm，n = 2至6而m = 2至7，并且以键的总数计两个半乳糖残基之间的β_1，4和β _1，6键的总和占至少80% ；并且其中B的结构为Galn-Glu和/或 Galffl, η = 2至6而m=2至7，并且以半乳糖残基之间的键的总数计两个半乳糖残基之间的β-1，3键占至少80%，并且其中A和B之间的重量比例是1至5，更优选地是1.25至 4，甚至更优选1. 5至3. 5。举例来说，Gal-Gal和Gal-Gal-Glu在两个半乳糖残基之间具有 0% 或 100% β-1，3，或者 0% 或 100% β-1，4，或者 0% 或 100% β_1，6 的键 ％。此外， Gal-Gal-Gal和Gal-Gal-Gal-Glu在两个半乳糖残基之间具有0%或50%或100% β -1，3， 或者0%或50%或100% β-1，4，或者0%或50%或100% β_1，6的键％。举例来说，还应注意Gal-Gal-Gal或Gal-Gal-Gal-Glu可在两个半乳糖残基之间具有50%的β _1，4和 50%的β_1，6的键％。这样的低聚糖在BGOS A的定义范围内。本文中上文描述的“至少两种不同的β -低聚半乳糖A和B”也称作“BGOS A和B 的结合物”。本文中β-低聚半乳糖(BG0Q还可以指反式低聚半乳糖(TOS)。BGOS和TOS 被认为是同义词。BGOS被定义为经β键连接在一起的至少两个半乳糖单糖单元的低聚糖。 可选地，在末端存在一个末端葡萄糖单元。本发明的BGOS的聚合度(DP)为2至7。形成BGOS的合适方法是用β -半乳糖苷酶处理乳糖。依赖于所用酶的特异性，从乳糖中水解出半乳糖单元并经β-键连接至另一个乳糖单元以形成三糖。半乳糖单元还可以偶联至另一个单个的半乳糖单元以形成二糖。继而连接更多的半乳糖单元以形成低聚糖。这样形成的大部分低聚糖的DP为7或更低。制备β _1，6和/或β _1，4 GOS即BGOS A的合适方法是使用来自环状芽孢杆菌 (Bacillus circulans)的β -半乳糖苷酶。市售的BGOS源是来自荷兰Borculo Domo的 Vivinal-TOS0 Vivinal-GOS 包含主要带有 β_1，4 和 0_1，6键的8605。生产β -1，3 GOS即BGOS B的合适方法是使用来自嗜热链球菌(S. thermophilus) 的β -半乳糖苷酶。特别地，使用在FR2723960的实施例4或ΕΡ0778885的实施例6中公开的方法中的来自菌株CNCM I 1470和/或CNCM I 1650的β -半乳糖苷酶是合适的。嗜热链球菌CNCM 1-1620由Compagnie Gervais Danone于1995年8月23日按照布达佩斯条约保藏于法国巴黎的法国微生物保藏中心。嗜热链球菌CNCM 1-1470由Compagnie Gervais Danone于1994年8月25日按照布达佩斯条约保藏于法国巴黎的法国微生物保藏中心。两个菌株均在WO 96/069 中公开。本发明的BGOS是非消化性的。人消化酶(包括人乳糖酶)均不能水解BGPS。因此，当BGOS被摄入时，它能完整地到达大肠并且能够由肠道微生物菌丛发酵。BGOS A和B都应该以相互充足的量存在。此外，BGOS B应该以比BGOS A低的量存在，因为人乳中的NDO中β-1，4和β_1，6糖苷键比β_1，3糖苷键更多。BGOS B的量相对较低的BGOS A和BGOS B的混合物显示出对免疫系统的改善效应。因此，A和B之间的重量比为1至5，更优选1.25至4，甚至更优选1.5至3. 5。这样的重量比确保BGOS A和B 的最优改善效应。优选地，本发明的营养组合物每IOOml包含的BGOS A和B的总和为至少250mg，更优选至少400mg，甚至更优选至少600mg。优选地，所述组合物每IOOml包含的BGOS A和B 的总和不超过2500mg，更优选不超过1500mg。优选地，本发明的营养组合物包含的BGOS A 和B的总和为以干重计为至少1重量％，更优选至少2重量％，甚至更优选至少4重量％。 优选地，所述组合物包含的BGOS A和B的总和以总组合物干重计不超过20重量％，更优选不超过10重量％。更低的量导致有效性较低的组合物，而更高量BGOS的存在可引起副作用，例如渗透压失调、腹痛、胃气胀、气体形成和/或气胀。本发明的组合物优选地还包含低聚果糖(FOS)。通过本发明的方法得到的制品优选地包含低聚果糖。本发明使用的低聚果糖是指以单体亚基计包含超过50%、优选超过65%果糖单元的碳水化合物，其中至少50%、更优选至少75%、甚至更优选至少90%的果糖单元通过糖苷键、优选β _2，1糖苷键连接在一起。葡萄糖单元可存在于果糖单元链的还原性末端。所述低聚果糖优选地具有2至250、更优选2至100、甚至更优选10 至60的DP或平均DP。低聚果糖包含果聚糖、水解果聚糖、菊粉、水解菊粉和合成的低聚果糖。所述制品优选地包含平均聚合度(DP)为3至6的短链低聚果糖，更优选地包含水解菊粉和合成低聚果糖。所述制品优选地包含平均DP超过20的长链低聚果糖。所述制品优选地同时包含短链和长链低聚果糖。适用于本发明方法的低聚果糖也是市售的，例如 RaftilineHP(Orafti)。本发明的营养组合物优选地每IOOml包含至少25mg、更优选至少 40mg、甚至更优选至少60mg的FOS。所述组合物优选地每IOOml包含不超过250mg、更优选不超过150mg的F0S。本发明的营养组合物优选地包含以干重计至少0. 15重量％、更优选至少0. 25重量％、甚至更优选至少0. 4重量％的F0S。所述组合物优选地包含以所述总组合物干重计不超过1. 5重量％、更优选不超过1重量％的FOS。FOS的存在显示出对免疫系统进一步改善的效应。营养组合物本发明的BGOS A和B结合物优选地存在于营养组合物中。本发明的组合物不是人乳。本发明的组合物优选地是经肠给予的，更优选经口给予。本发明的组合物优选地是营养配方乳，优选地是婴幼儿配方乳。本发明的组合物可有利地作为婴幼儿完全营养物应用。本发明的组合物优选地包含脂质、蛋白质和可消化性碳水化合物，并且优选以液体形式给予。本发明包括干的食物，优选粉末，其附带有关于混合所述干的食物混合物与合适液体(优选水)的说明书。
本发明有利地提供一种组合物，其中脂质提供5至50%的总热量，蛋白质提供5至 50%的总热量，而可消化性碳水化物提供15至85%的总热量。本发明有利地提供一种组合物，其中脂质提供20至50%的总热量，蛋白质提供5至30%的总热量，而可消化性碳水化物提供30至70%的总热量。优选地，在本发明的组合物中，脂质提供35至50%的总热量， 蛋白质提供7. 5至12. 5%的总热量，而可消化性碳水化物提供40至55%的总热量。对于蛋白质的总热量％的计算，需要考虑由蛋白质、脂质和氨基酸提供的总热量。本发明优选地包含至少一种选自动物脂质(人脂质除外)和植物脂质的脂质。本发明的组合物优选地包含植物脂质和至少一种选自鱼油、动物油、藻油、真菌油和细菌油的油的结合物。本发明的组合物优选地包含长链多不饱和脂肪酸(LC-PUFA)。LC-PUFA是包含两个或多个不饱和键的长度为20至M个碳原子、优选20或22个碳原子的脂肪酸或脂肪酰链。LC-PUFA可以以游离脂肪酸形式、甘油三酯形式、甘油二脂形式、单甘油酯形式、磷脂形式或上述一种或多种形式的混合物的形式提供。所述营养组合物中使用的蛋白质优选地选自非人动物蛋白质(优选乳蛋白质)、 植物蛋白质(优选大豆蛋白质和/或大米蛋白质)、它们的水解物、游离氨基酸和这些物质的混合物。本发明的组合物优选包含酪蛋白、乳清蛋白、水解酪蛋白和/或水解乳清蛋白。所述蛋白质优选地包含完整蛋白质，更优选包含完整的牛乳清蛋白和/或完整的牛酪蛋白。本发明的组合物优选地包含选自蔗糖、乳糖、葡萄糖、果糖、固体玉米糖浆液、淀粉和麦芽糊精的可消化性碳水化合物，更优选乳糖。所述组合物优选地包含短双歧杆菌(Bifidobacterium breve)。短双歧杆菌是革兰氏阳性、有分支的杆状细菌。对于16 S rRNA，本发明的短双歧杆菌优选地与短双歧杆菌的模式株ATCC 15700具有至少95%的同一性，更优选至少97%的同一性(Mackebrandt & Goebel，1994，Int.J.Syst. Bacteriol. 44 :846-849)。优选的短双歧杆菌菌株是从健康人乳喂养的婴幼儿粪便中分离的那些菌株。一般地，这些菌株可从乳酸细菌的生产者购得，但是它们也可以直接从粪便中分离、鉴别、表征和生产。所述短双歧杆菌可以是存活的或非存活的。根据一个优选的实施方案，所述短双歧杆菌是由Compagnie Gervais Danone于1999年5月31日根据布达佩斯条约保藏于法国巴黎的法国微生物保藏中心(CNCM)的短双歧杆菌CNCM 1-2219菌株，其在EP 1189517 中被公开。发现该菌株的存在导致接种应答的进一步增强。本发明的组合物优选地包含有存活的和/或非存活的短双歧杆菌。对于存活的短双歧杆菌的情况，优选存在所述组合物每克干重至少IO3菌落形成单位(CfU)的量，或者， 对于非存活的短双歧杆菌的情况，优选存在等同于所述组合物每克干重至少IO3Cfu的量。 本发明的组合物每克干重优选包含IO3至IO13Cfu短双歧杆菌，或者对于非存活的短双歧杆菌的情况，本发明的组合物每克干重包含IO3至IO13Cfu的等值量(equivalence of cfu), 优选IO4至1012、更优选IO5至1011、最优选IO5至IOltlCfu或cfu的等值量的短双歧杆菌。 等同于每克干重至少IO3Cfu的非存活的短双歧杆菌的量是指等同于每克干重至少IO3Cfu 存活的短双歧杆菌的量的非存活的短双歧杆菌。cfu的等值量可通过进行以下方式来确定，在包含非存活的短双歧杆菌的产品 (即婴幼儿配方乳)中用WO 2005039319中描述的短双歧杆菌探针和引物进行5，核酸酶测定，并将此结果与由已加入已知量的干的存活的短双歧杆菌cfu的可比产品(例如常规婴幼儿配方乳)得到的校准曲线比较。可如上所述获得市售的干的存活的双歧杆菌。在由活的短双歧杆菌获得的校准曲线中具有与包含灭活的短双歧杆菌的产品相同5’核酸酶测定反应的cfu值被认为是非存活的短双歧杆菌cfu的等值量。或者，组合物中每克干重的 cfu量可以在临灭活步骤前确定。所述短双歧杆菌优选被加热杀死。也很重要的是，所述液体食物不含过多的热量密度，但是仍提供足以喂养受试者的热量。因此，所述液体食物的热量密度优选为0. 1至2. 5kcal/ml，甚至更优选为0. 5至 1. 5kcal/ml，最优选为 0. 6 至 0. 8kcal/ml。本发明的营养组合物优选为液体形式。它优选地具有有限的粘度，这样它能以例如液体婴幼儿食物和液体临床食物(可通过奶嘴、软管或吸管喂食，同时保持低粘度)的形式给予。在一个优选的实施方案中，本发明的组合物的粘度在20°C和IOOiT1的剪切速率下低于600mPa. s，优选低于250mPas，更优选低于60mPa. s，甚至更优选低于35mPa. s，最优选低于6mPa. s。在本文件中当使用术语粘度时，这是指通过以下方法测定的物理参数所述粘度可使用Carri-Med CSL流变仪来测定。使用的几何体是圆锥形(6cm 2deg丙烯酸圆锥)并且板和几何体之间的空隙设为55um。在20秒内使用0至150s—1的线性连续斜剪切速度。应注意，本发明还包括带有制备水性溶液(例如，通过加入某个比例的水，随后形成指定的粘度)的说明书的粉末形式的组合物。^M本发明的BGOS A和B的结合物被发现协同刺激免疫系统。尤其是接种应答被增强，其表明Thl应答增强。这两种组分的结合物的效应比所述单个组分的效应高。本发明的结合物可有利地用于治疗和/或预防疾病，因此本发明涉及治疗和/或预防哺乳动物的疾病的方法，所述方法包括将包含BGOS A和B的本发明的组合物给予所述哺乳动物。换言之，本发明还涉及将本发明的包含BGOS A和B的组合物用于制备治疗和/ 或预防疾病的组合物、优选营养组合物的用途。换言之，本发明涉及一种组合物或营养组合物，其包含本发明的包含BGOS A和B的组合物，用于治疗和/或预防疾病。所述哺乳动物优选地是人，甚至更优选为人婴幼儿。因此本发明还涉及本发明的包含BGOS A和B的组合物用于制备治疗和/或预防婴幼儿疾病的组合物、优选营养组合物的用途。或者换言之，本发明涉及本发明的包含BGOS A和B的组合物或营养组合物，其用于治疗和/或预防婴幼儿疾病。 在本发明的上下文中，婴幼儿年龄为0至6岁，优选为0至4岁，优选为0至2岁， 最优选年龄为0至1岁。本发明还涉及用于向婴幼儿提供营养的方法，所述方法包括将本发明的包含BGOS A和B的组合物给予所述婴幼儿。换言之，本发明还涉及本发明的包含BGOS A和B的组合物用于制备向婴幼儿提供营养的营养组合物的用途。换言之，本发明涉及本发明的包含BGOS A和B的组合物和营养组合物，其用于向婴幼儿提供营养或用于喂养婴幼儿。本发明的包含BGOS A和B的组合物可有利地用于增强Thl应答、增加Hil/Th2平衡、修复Thl/Th2应答中的不平衡、保持有利的Thl/Th2平衡并且/或者用于治疗并预防与 Thl/Th2不平衡有关的疾病。因此，宣称例如刺激免疫系统的成熟、通过增强免疫系统来增强对病原体的抗性和/或支持免疫系统的组合物是本发明的一部分。在另一方面，本发明提供用于治疗和/或预防免疫系统相关疾病的方法，所述方法包括给予所述哺乳动物一种组合物，所述组合物包含治疗有效量的本发明的包含BGOS A和B的组合物。在另一方面， 本发明提供增强哺乳动物中的免疫应答的方法，所述方法包括给予所述哺乳动物本发明的包含BGOS A和B的组合物。新生人婴儿的免疫系统的特征是Th2应答过量。在免疫系统的成熟过程中，Thl应答增强并且Thl/Th2平衡转变为在健康成人中观察到的值。因此，本发明的结合物尤其有益于人婴幼儿。本发明帮助婴幼儿免疫系统的成熟。在另一个实施方案中，本发明的方法涉及将本发明的包含BGOS A和B的组合物给予0至6岁、优选0至4岁、优选0至2岁、更优选0至1岁的人。在一个优选的实施方案中，本发明的方法涉及刺激0至6岁、优选0至 4岁、优选0至2岁、更优选0至1岁的人受试者的免疫系统成熟。过低的Thl/Th2平衡导致对外来组分极端敏感，其能够导致多种免疫反应，例如， 变态反应和相关疾病，例如，特应性皮炎、哮喘、食物变态反应、变应性鼻炎(例如，花粉变态反应)、尘螨变态反应和其他形式的超敏感性，例如全身性过敏反应和急性荨麻疹。因此， 本发明的包含BGOS A和B的组合物尤其有利于治疗和/或预防选自以下的疾病变态反应、食物变态反应、特应性皮炎、哮喘、变应性结膜炎、变应性鼻炎、尘螨变态反应和荨麻疹。 本发明的包含BGOS A和B的组合物增加Thl/Th2平衡。Thl应答的增强导致对病原细菌和/或病毒的应答增强。因此，本发明的包含BGOS A和B的组合物适于治疗和/或预防感染。本发明的包含BGOS A和B的组合物适于治疗和 /或预防肠道感染、腹泻、肠道炎症、全身感染和/或呼吸道感染。本发明的结合物还被发现适用于支持接种过程，例如，增强接种过程的效应。本发明的结合物适于支持接种前、接种期间和/或接种后的接种应答。因此，本发明的包含BGOS A和B的组合物可有利地用于治疗和/或预防感染，并且/或者用于增强接种应答。因此，本发明的结合物有利地用于患有免疫缺陷的人受试者，特别是患有免疫衰老的老年人受试者，患有AIDS或感染了人免疫缺陷病毒的人受试者，和/或癌症患者，更尤其是正在或已经接受化疗、放射的癌症患者以及恶病质癌症患者。本发明的结合物有利地用作老年人的营养物。老年人的Thl应答下降。老年人对病毒感染并发症尤其敏感。在一个优选的实施方案中，本发明的包含BGOS A和B的组合物被用于治疗和/或预防老年人的免疫衰老。在一个实施方案中，本发明涉及向老年人提供营养。老年人是阳岁或更大年龄、特别是65岁或更大年龄的人。因此在各种实施方案中，本发明涉及本发明的包含BGOS A和B的组合物用于制备组合物(优选营养组合物)的用途，后一组合物用于-刺激免疫系统，-增强接种应答，-预防和/或治疗选自以下的疾病哮喘、变态反应、特应性皮炎、变应性结膜炎、 尘螨变态反应、荨麻疹和变应性鼻炎，-预防和/或治疗选自感染、腹泻和肠道炎症的疾病，-改善免疫系统，所述改善选自增强Thl应答、增加Thl/Th2平衡和降低Th2应答，-治疗和/或预防老年人的免疫衰老，-HIV 和 / 或 AIDS 患者，
-癌症患者，尤其是正在或已经接受化疗和/或放射的癌症患者以及恶病质癌症 患者.，-患有慢性阻塞性肺病的患者，和/或-患有糖尿病的患者。在本发明的上下文中，“预防”疾病或某一疾患还指“治疗有疾病或某一疾患风险的人”。与仅有单组分相比，键不同的BGOS A和B的混合物优选地导致改善的发酵和/或改善的肠道微生物菌丛，所述菌丛优选地富含乳酸产生菌，尤其是双歧杆菌和/或乳杆菌。 优选地形成更多的醋酸和/或乳酸。有机酸的产生优选地导致肠道PH的降低。在一个实施方案中，本发明涉及本发明的包含BGOS A和B的组合物用于制备用于改善肠道微生物菌丛的组合物(优选营养组合物)的用途。优选地通过增加乳酸产生菌的量和/或活性来改善肠道微生物菌丛。优选地所述乳酸产生菌选自双歧杆菌和乳杆菌。实施例实施例1 提高的BGOS A和B对Thl应答增强的效应方法在小鼠模型中测试包含(a)BGOS A和低聚果糖的结合物、(b)BGOSB和(c)BGOS A 和B以及低聚果糖的结合物的饮食的作用，其中通过迟发型超敏反应(DTH)应答测量对抗原的应答。被疫苗中存在的抗原局部攻击后耳中的该DTH应答是Thl细胞增殖的测量指标。 在对感染和/或接种的应答期间，Thl细胞响应抗原的攻击而增殖。当所述耳随后被所述抗原攻击时这些Thl细胞浸润所述耳并引起肿胀。耳中Thl细胞的浸润需要M小时，因此肿胀迟发。在初次接种和/或感染中Thl细胞增殖越多，观察到被抗原攻击时DHT越强烈。^ffi Vivinal-GOS(Borculo Domo Ingredients, Netherlands) BGOS A 白勺源。使用I aftilineHP，Orafti，Tiense，Belgium作为低聚果糖(FPS)的来源。饮食(a)和 (c)包含来自Vivinal GOS的非消化性低聚糖FPS的重量比为9 1，并且来自Vivinal GOS的非消化性低聚糖和FPS的总和为以所述小鼠饮食总重量计1重量％。Vivinal GOS 包含至少67重量％的BGOS A，其余主要是非消化性(ial-Glu 二糖。饮食(b)和(c)包含这样的制品作为BGOS B的来源，所述制品按照FR2723960实施例4所述方法将乳糖和嗜热链球菌菌株CNCM 1-1620孵育后得到。加入以总饮食重量计3重量％的该制品。该制品中 BGOS的量为约M5mg/g。BGOS B的量为约22;3mg/g，其余的BGOS为BGOS A。所述制品的其余部分主要包含乳糖和非消化性Gal-Glu 二糖。BGOS中的大部分由三糖(约88重量％ ) 和四糖(约12重量％ )组成。将雌性6 周龄 C57B1/6 小鼠(Harlan Nederland BV, Horst, the Netherlands) 在规律的12小时光照/黑暗下分组圈养。组大小为每组10只动物，阴性对照组为3只动物。对所述动物给予半合成饮食(Research Diet Services, Wijk bij Duurstede, the Netherlands)。根据AIN93G说明书(Reeves et al(1993)J Nutrition 123(11) :1923-31) 制备对照饮食，添加低聚糖的饮食基于这些说明书。在适应新住所和饮食20天后开始接种。在第O天，在接种前采集血样。在第1天， 皮下给予首次接种。3周后，给予加强免疫(第22天)。加强注射9天后(第31天)，用数显外径千分尺(Mitutoyo，Veenendaal，the Netherlands)测量基础耳厚度，并且通过在小
9鼠耳廓皮内注射抗原溶液诱导迟发型超敏(DTH)应答。此后Mh (第32天)，测定所述DHT 应答，取血液样本并且处死所述小鼠。得到的结果是24h后的耳厚度减去t = 0时的耳厚度。所述接种为皮内注射100μ 1的抗原溶液和Stimune佐剂(Specol， Cedi-diagnostics BV, Lelystad, the Netherlands)白勺 1 1
是 Influvac 2002/2003 (Solvay Pharmaceuticals, ffeesp, theNetherlands)在 PBS 中的 1 100稀释液。^if Iuvac是三价蛋白质疫苗，包含3 X 30 μ g/ml三种不同流感菌株的血球凝集素。对于所述DTH应答，对小鼠在两耳皮内注射25 μ 1经渗析的hf Iuvac作为DTH 攻击。结果包含1重量％ BGOS A的结合物的饮食诱导DTH应答统计学显著的100%的增强 (参见表1)。BGOS B也诱导DTH应答统计学显著的112%的增强。值得注意的是，BGOS A和B显示出192%的最大应答增强。这些结果显示由给予BGOS A和BGOS B提供的对Thl应答增强的更进一步的提高效应。表1 :DTH 应答
组平均 DTH μιη Δ DTH相对DTH
__(S.E.)__μιη__
假实验(Sham)__24.3 (0.6)__0__0_
安慰剂__66.5 (0.3)__42.21.00_
MaBGOSA__108.9 (0·3)*__84.6 2.00_
组 b BGOS B__113.6 (0·3)*__89.3 2.12_
组 c BGQS Α + Β147.6 (0.2)*a 123.2 2.92*与安慰剂相比ρ < 0. 05a 与组 a 禾口 b 相比 ρ < 0. 05该实验的结果表明本发明可以有利地用于支持接种应答。该实验的结果还表明它可以有利地用于具有低Thl应答的受试者，尤其是婴儿。该实验的结果还表明它可以有利地用于具有低Thl应答的受试者，尤其是患有或者有风险患有免疫衰老的老年人、HIV患者、AIDS患者和/或正在或者已经接受化疗和/或放射的癌症患者或者恶病质的癌症患者、 患有COPD的患者和/或患有糖尿病的患者。该模型可指示基础免疫变化，其对于免疫系统功能障碍的所有疾病都是有益的。已知婴幼儿、老年人、HIV感染者、癌症患者、COPD患者和 /或糖尿病患者的免疫系统不能以完全能力行使功能。对于所有上述情况额外的帮助均可能是有益的。实施例2 婴幼儿配方乳通过使用脱脂乳、乳清蛋白、乳糖、植物脂质、矿物质、维生素和本领域已知的微量元素作为组分来制备婴幼儿配方乳。使用根据FR2723960实施例4以及实施例1中描述的方法将乳糖与嗜热链球菌菌株CNCM 1-1620孵育后得到的制品作为BGOS B的来源。终浓度以总组合物婴幼儿配方乳的干重计为5. 4重量％。使用Vivinal GOS作为BGOSA的来源。 还使用低聚果糖(Raftilin HP)。如本领域已知将所述组分巴氏消毒、混合、均质、灭菌并喷雾干燥为粉末。复原为即饮配方乳后的婴幼儿配方乳的最终组成每IOOml包含-68kcal_1.45g蛋白质(乳中的酪蛋白和乳清蛋白，尤其是水解的)-8. 6g可消化性碳水化合物(主要是乳糖和麦芽糊精)-3. Ig脂肪(主要是植物脂肪)_0.8g，包含非消化性低聚糖〇其中0. 08g低聚果糖(来源raftininHP)〇其中0. 22g由嗜热链球菌菌株形成的非消化性低聚糖(约73重量％ BGOS B， 07. 3重量％ BGOS A，其余是Gal-Glu非消化性二糖)〇其中0.5g以Vivinal GOS存在的非消化性低聚糖(至少67重量％ BG0SA，其余主要是fel-Glu非消化性二糖)本领域已知的微量元素、矿物质、维生素和其他微量营养物 (牛磺酸、胆碱、肌醇、核苷酸、肉碱)。
权利要求
1.包含至少两种不同的低聚半乳糖A和B的营养组合物，其中a)A的结构为(^ln-Glu和/或Galm，n = 2至6而m = 2至7，并且以半乳糖残基之间的键的总数计两个半乳糖残基之间的β -1，4和-β 1，6键的总和占至少80%，并且b)B的结构为(^ln-Glu和/或Galm，n= 2至6而m = 2至7，并且以键的总数计两个半乳糖残基之间的β_1，3键占至少80%，并且c)A和B之间的重量比例是1至5。
2.权利要求1的组合物，以干重计β-低聚半乳糖A和B的总和占至少1重量％。
3.前述权利要求任一项的组合物，还包含低聚果糖。
4.前述权利要求任一项的组合物，包含以热量计5至50%的蛋白质、15至85%的碳水化合物和5至50%的脂质。
5.前述权利要求任一项的组合物，还包含灭活的或活的短双歧杆菌(Bifidobacterium breve)。
6.权利要求5的组合物，本组合物每克干重包含IO3至IO13Cfu短双歧杆菌，或者对于非存活的短双歧杆菌的情况，包含IO3至IO13Cfu的等值量。
7.前述权利要求任一项的组合物，用于喂养婴幼儿。
8.前述权利要求任一项的组合物，用于预防和/或治疗疾病。
9.前述权利要求任一项的组合物，用于刺激免疫系统。
10.前述权利要求任一项的组合物，用于增强接种应答。
11.权利要求8的组合物，用于预防和/或治疗选自以下的疾病哮喘、变态反应、特应性皮炎、变应性结膜炎、尘螨变态反应、荨麻疹和变应性鼻炎。
12.权利要求8的组合物，用于预防和/或治疗选自感染、腹泻和肠道炎症的疾病。
13.前述权利要求任一项的组合物，用于-改善免疫系统，所述改善选自增强Thl应答、增加Thl/Th2平衡和降低Th2应答，-治疗和/或预防老年人的免疫衰老，-HIV和/或AIDS患者，-癌症患者，尤其是正在或已经接受化疗和/或放射的癌症患者以及恶病质癌症患者，-患有慢性阻塞性肺病的患者，和/或-患有糖尿病的患者。
14.前述权利要求任一项的组合物，用于通过增加乳酸产生菌的量和/或活性来改善肠道微生物菌丛。
全文摘要
本发明涉及包含至少两种不同的β-低聚半乳糖(BGOS)A和B的营养组合物，其中BGOS A中的两个半乳糖残基之间的大部分键是β-1，4和/或β-1，6，而BGOS B中两个半乳糖残基之间的大部分键是β-1，3。这样的混合物显示出对免疫系统的优异作用并且尤其适用于婴幼儿营养物。
文档编号A23L1/29GK102458152SQ201080025688
公开日2012年5月16日 申请日期2010年6月14日 优先权日2009年6月12日
发明者A·J·纳奥塔, B·斯塔尔 申请人:N.V. 努特里奇亚