专利名称：30个陆地棉主栽品种的dna指纹图谱的制作方法
技术领域：
本发明属于农业生物技术领域，尤其是利用分子标记技术对品种进行DNA指纹图 谱构建，实现了品种鉴别的简便、快速、准确。
背景技术：
当前我国农作物种子纯度低劣状况普遍存在，各级农作物品种市定机构和种子生 产部门对品种纯度鉴定日益重视，因此，采用高效、快速、准确的检测方法进行品种鉴定和 纯度检测是十分必要的。上世纪八十年代兴起的基于DNA变异的各种分子标记技术，带动 了 DNA指纹图谱技术的快速发展。这种电泳图谱所揭示的多态性直接反序基因组DNA间的 差异，不受环境影响，数量多、准确性高，具有高度的个体特异性和环境稳定性，被称为“DNA 指纹图谱”，利用分子标记技术构建DNA指纹图谱是鉴别品种或品系的有力工具。目前，利 用各种分子标记技术，许多重要作物如番茄、油菜、水稻、小麦、玉米、大豆等都进行了品种 鉴定和纯度检测的研究，其中，番茄、水稻和小麦等主栽品种的SSR指纹图谱数据库已构建 完成。棉花的指纹图谱构建研究已有一些报道。然而，一些研究由于处于分子标记发展的 早期阶段，其用于指纹图谱构建的供试材料主要局限在较少的目标材料上，而且对本文涉 及的30个棉花主栽品种未见相关报道。由于某一引物扩增到的等位基因数会随建库材料 的增加而增加，利用有限试材进行指纹分析会导致引物多态信息量的降低，从而影响目标 材料图谱的特异性。若在研究中增加了其他背景材料，一些目标材料的特异引物很可能就 不是唯一的了。本研究利用SSR分子标记技术，对在我国不同生态棉区曾经或正在种植的的30个 棉花主栽品种，进行DNA指纹图谱分析，供试材料的遗传基础丰富且数量较多，利用各材料 的特异引物或引物组合，以及20对核心引物的数字指纹代码，可简便、快速、准确地鉴别品 种纯度及真伪，有效保护品种的知识产权和育种家的权益。
发明内容
以我国不同生态棉区曾经或正在种植的主要来源于岱字棉、斯字棉、福字棉、乌干 达棉的30个陆地棉主栽品种为材料(表1)，从定位在棉花沈条染色体上的2503对SSR引 物(标记)中筛选到重复性好、多态性丰富的20对核心引物。20对核心引物的电泳结果表 明，30个品种中有4个品种具有各自的特异引物，可将其与其它品种区分开，其中，中棉所 64的特异引物有2个分别是NAU4903和DPL0209，辽棉19的特异引物有2个分别是NAU2251 和NAU2092，泗棉4号的特异引物是NAU4903，鑫秋1号的特异引物是NAU1043 (
图1、图3)； 其他沈个品种可利用至少2对引物组合与其他品种区分开，如利用引物NAU2092/NAU1043 可将冀棉958与其他品种区分开(图2、图幻；为更方便、准确地鉴别各品种，提高其与生产 上其他品种的区分能力，构建了 30个品种20对核心引物的十进制数字指纹代码(表2)。表130个主栽品种的名称、系谱来源、生育期类型及审定年份
权利要求
1.30个棉花主栽品种的DNA指纹图谱，其特征是30个棉花主栽品种包括中棉所12、 中棉所41、中棉所45、中棉所50、中棉所58、中棉所64、辽棉19、鲁棉研19、鲁棉研21、鲁 棉研22、鲁棉研观、鲁棉研四、晋棉四、晋棉36、晋棉45、泗棉3号、泗棉4号、豫棉15、陕 2365、冀棉958、邯棉802、邯郸885、徐州142、徐州514、鑫秋1号、百棉1号、SGK958、国欣 棉3号、科棉4号、中植棉2号；DNA指纹图谱指的是基于SSR分子标记的DNA指纹图谱。
2.根据权利要求1所述的内容，其特征是基于SSR分子标记的DNA指纹图谱指的是 30个品种的特异引物指纹图谱和引物组合指纹图谱，以及20对核心引物的数字指纹代码。
3.根据权利要求2所述的内容，其特征是特异引物指纹图谱或引物组合指纹图 谱，必须是本研究获得的4个品种的特异引物和沈个品种的引物组合。具体如下中棉 所64的特异引物为NAU4903和DPL0209 ；辽棉19的特异引物为NAU2251和NAU2092 ；泗 棉4号的特异引物为NAU4903 ；鑫秋1号的特异引物为NAU1043 ；中棉所12的引物组合 为NAU1255/NAU2251 ；中棉所41的引物组合为NAU1043/NAU5104 ；中棉所45的引物组合 为NAU0905/NA似627 ；中棉所50的引物组合为NAU1085/NAU3110 ；中棉所58的引物组合 为NAU1043/NAU1085 ；鲁棉研19的引物组合为NAU1255/NAU5262 ；鲁棉研21的引物组合 为NAU0905/NAU2092 ；鲁棉研22的引物组合为NAU1043/NAU2121 ；鲁棉研28的引物组合 为NAU3110/NAU40M/NAU5104 ；鲁棉研四的引物组合为NAU1(^8/NAU5104 ；晋棉29的引 物组合为NAU0905/NAU1085 ；晋棉36的引物组合为NAU2251/NAU3839 ；晋棉45的引物组 合为NAU2251/NAU5262/NAU2092 ；泗棉3号的引物组合为DPL0209/NAU1085 ；豫棉15的引 物组合为NAU1043/NA似627 ；陕2365的引物组合为NA似869/NAU5104 ；冀棉958的引物组 合为NAU2092/NAU1043 ；邯棉802的引物组合为DPL0209/NAU1028 ；邯郸885的引物组合 为 NAU2092/NAU40M ；徐州 142 的引物组合为 NAU2092/NAU40M/NAU1043 ；徐州 514 的引物 组合为NAU1085/NAU3703 ；百棉1号的引物组合为NAU1028/NAU5104 ；SGK958的引物组合 为NAU1085/NA似627 ；国欣棉3号的引物组合为DPL0209/NAU1255 ；科棉4号的引物组合为 NAU2092/NAU2627 ；中植棉 2 号的引物组合为 NAU3110/NAU3703。
4.根据权利要求2所述的内容，其特征是20对核心引物的数字指纹代码，必须是本研 究获得的 20 对核心引物，分别为 NAU1(^8、NAU3703、NAU5104、NAU0905、NA^627、NAU1255、 NAU2092、、NAU3337、NAU4024、NAU5262、NAU3110、NAU2251、NAU1043, DPL0209、NAU1085、 NAU3254、NAU2869、NAU3839、NAU4903和NAU2121 ；数字指纹代码是这些引物的十进制或相 应的二进制数字指纹代码。
5.根据权利要求4所述的内容，其特征是30个品种的20对核心引物十进制数字代码 分别见下表，其相应的二进制数字指纹代码与其信息一一对应，本发明不做赘述。品种NAUK^S-NALBVCn-NAUSltM-NAUOWS-NAUieST-NAUUM-MALKOW-NAUSS—W-NAlWf^tNAUSM〗-NAU3110-N A( 1225 丨-NAU 丨 043-DPL0209-NAU 丨 085-NAU3254-NAU2869-NAU3839-NAU4903-NAlj2l21 中棉所 12 4-4-2-10-12-10-02-10-04-25-50-42-24-098-050-005-330-198-166-0810_
全文摘要
本发明属于农业生物技术领域。当前我国农作物种子纯度低劣状况普遍存在，各级农作物品种审定机构和种子生产部门对品种纯度鉴定日益重视。本研究利用SSR分子标记技术，构建在我国不同生态棉区曾经或正在种植的30个陆地棉主栽品种的DNA指纹图谱。20对重复性好、多态性丰富的SSR核心引物电泳结果表明，30个品种中有4个品种具有各自的特异引物，可将其与其他品种区分开；其26个品种可利用至少2对引物组合与其他品种区分开。为更方便、准确地鉴定各品种，构建了30个品种20对核心引物的数字指纹代码。本发明为30个陆地棉主栽品种的真伪鉴定、育种利用和新品种权益保护提供了理论依据，为我国育成棉花品种标准指纹库的构建奠定了重要基础。
文档编号C12Q1/68GK102146448SQ20111000593
公开日2011年8月10日 申请日期2011年1月13日 优先权日2011年1月13日
发明者付远志, 张志勇, 张金宝, 李成奇, 王清连, 胡根海 申请人:河南科技学院