专利名称：编码乙酰乳酸合酶的基因的制作方法
技术领域：
本发明涉及编码支链氨基酸生物合成途径中的限速酶-乙酰乳酸合酶的基因。
背景技术：
乙酰乳酸合酶(此后称为“ALS”)是支链氨基酸，如亮氨酸、缬氨酸和异亮氨酸的生物合成途径中的限速酶，是已知的对于植物生长重要的酶。已知ALS存在于许多种高等植物中。此外，在多种微生物中发现了 ALS，例如酵母(酿酒酵母 (Saccharomycescerevisiae))、大肠杆菌(Escherichia coli)禾口鼠伤寒沙门氏菌 (Salmonella typhimurium)。已知在大肠杆菌和鼠伤寒沙门氏菌中存在ALS的三种同工酶。每种同工酶都是杂寡聚体，其中由控制酶催化活性的大分子量的催化亚基和通过结合支链氨基酸而具有反馈抑制剂功能的小分子量调节亚基组成(Chipman等，Biochim. Biophys. Acta. 1385， 401-419,1998) ο催化亚基分别位于IIv IH, IIv GM和IIv BN操纵子上。另外，酵母中的 ALS是单体酶，同细菌中的一样，其中包括催化亚基和调节亚基(Pang等，BioChemitry，38， 5222-5231，1999)。催化蛋白亚基位于ILV2基因座。已知在植物中的ALS同上述微生物中一样由催化亚基和调节亚基组成(Hershey 等，Plant Molecular Biology. 40，795-806，1999)。例如，烟草(双子叶植物)中的 ALS 的催化亚基由两个基因座，SuRA和SuRB编码(Lee等，EMBO J. 7,1241-1248,1988)；玉米中的由两个基因座，alsl 和 als2 编码(Burr 等，Trends in Genetics 7,55-61,1991 ；Lawrence 等，Plant Mol. Biol. 18，1185-1187，1992)。双子叶植物包括烟草、拟南芥、油菜籽、棉花、 苍耳属、苋属和地肤属中编码催化亚基的基因的核苷酸序列已经完全测定(见Chipman等， Biochim. Biophys. Acta. 1385，401-419，1998 和专利申请 W097/08327 的 PCT 国际公开的国内再公开)。但是，单子叶植物中只有玉米和水稻的该核苷酸序列被完全测定(Kaku等， the 26thConference of Pesticide Science Society of Japan, LectureAbstract,plOl, 2001)。同时，除草剂例如磺酰脲除草剂、咪唑啉酮除草剂、三唑嘧啶除草剂和嘧啶羧基除草剂(此后称之为“PC除草剂”)已知是通过抑制ALS来抑制植物生长的(Ray，Plant Physiol. 75,827-831,1984 ；Shaner 等，Plant Physiol. 76,545-546,1984 ；Subramanian 等，Plant Physiol. 96，310-313，1991 ；Shimizu 等，J. Pestic Sci. 19，59-67，1994)。如表1和表2所示，已知的对这些除草剂抗性的植物包含的编码ALS的基因中有一个或两个核苷酸被取代，该取代能诱导不同物种的保守区域中一个或两个氨基酸的取代。表 权利要求
1.编码由SEQID NO :4的氨基酸序列组成的蛋白的基因，该蛋白具有对嘧啶羧基除草剂的抗性和乙酰乳酸合酶活性。
2.一种由权利要求1所述基因编码的乙酰乳酸合酶蛋白。
3.一种具有权利要求1所述基因的重组载体。
4.一种具有权利要求3所述重组载体的转化体。
5.一种培养具有权利要求1所述基因，并且具有对嘧啶羧基除草剂的抗性的植物的方法，其包括在嘧啶羧基除草剂存在下对植物进行培养。
6.一种选择具有权利要求1所述基因的转化体细胞的方法，其以所述基因作为选择标
全文摘要
本发明涉及编码乙酰乳酸合酶的基因。本发明提供一个编码下列蛋白(a)或(b)的基因，该蛋白显示高水平的对PC除草剂或磺酰脲除草剂的抗性(a)由SEQ ID NOS2、4、6和8中任意一种氨基酸序列组成的蛋白；(b)由通过对SEQ ID NOS2、4、6和8中任意一种氨基酸序列进行替换、缺失或添加至少一个或多个氨基酸而衍生得到的氨基酸序列组成的蛋白，该蛋白具有对嘧啶羧基除草剂的抗性和乙酰乳酸合酶活性。
文档编号C12N15/29GK102212536SQ201110060729
公开日2011年10月12日 申请日期2003年2月21日 优先权日2002年3月29日
发明者永山孝三, 河合清, 清水力, 田中喜之, 福田笃德, 角康一郎 申请人:独立行政法人农业生物资源研究所, 组合化学工业株式会社