一种组蛋白去乙酰酶抑制剂(e)-3-(2-(1-(4-氯苯甲酰基)-5-甲氧基-2-甲基-1氢-吲哚 ...的制作方法
【技术领域】
[0001] 本发明属于药物化学技术领域，尤其设及组蛋白去乙酷化酶抑制剂 巧)-3-(2-(1-(4-氯苯甲酯基）-5-甲氧基-2-甲基-1氨-吗I噪-3-基）乙酷氨基）-N-径 基下-2-締酷胺及其制备方法和应用。
【背景技术】
[0002] 组蛋白去乙酷化酶化DACs)是一类功能复杂的水解酶。在细胞核中，由DNA链缠 绕着的组蛋白八聚体构成的核小体是构成染色体的结构单元，组蛋白去乙酷化酶化DACs) 能将组蛋白中的赖氨酸残基末端氨基上的乙酷基水解掉（如反应式I)，从而导致组蛋白的 正电荷密度增高，继而引起组蛋白与负电性的DNA的亲和力增强，基因转录被抑制，（参见 Christian,A.Η.，etal.Curr.Opin.Chem.Biol.，1997，1，300;Kouzarides,T.， Curr.Opin.Genet.Dev.，1999，9，40);Wolffe,A.P.Sci.Washington, 1996， 272，371。此外，核小体组蛋白的去乙酷化还与染色质组装，DM修复与重组密切相关，（参 见化1〇,S.E.,etal.CancerLett. , 2005, 220, 1;Vidanes,G.M.,etal.Cell, 2005，121，973)。近来，越来越多的非组蛋白被证实为HDACs的底物，如转录因子，细胞 骨架蛋白，分子伴侣等，（参见Glozak,M.A. ,etal.Gene, 2005, 363, 15)。正是由于 HDACs具有如此复杂的功能，它的表达和活性失调与许多疾病密切相关，包括：癌症，神经 变性疾病，病毒感染，炎症，白血病，追疾和糖尿病等，其中，癌症无疑是对人类生命健康威 胁最为严重的疾病。研究表明，HDACs与肿瘤细胞发生发展密切相关，如：抑制肿瘤细胞分 化和调亡，促进肿瘤细胞增殖，迁移和血管生成，增强肿瘤细胞对化疗药物的抵抗力等，（参 见Witt, 0.,etal.CancerLetter. , 2009, 277, 8)。
[0003]目前在人体中发现了HDACs家族有18个成员，根据其结构，功能和分布的不同可 分为四类。其中，I类化DAC1，2,3和 8)，II类（IIa:HDAC4,5,7和 9;Hb:HDAC6，10)，IV 类（HDAC11)属于锋离子依赖性水解酶，而III类HDACs(SIRT1-7)是NAD+依赖性的。研 究表明，与肿瘤密切相关的主要是锋离子依赖性HDACs,HDA巧Φ制剂（HDACsInhibitors， HDAU)能有效抑制癌细胞增殖，促进细胞调亡。而且，皿ACi具有抗瘤谱广，毒副作用低的 优点，它们对实体瘤，白血病，淋己瘤都具有很好的抑制活性。因此，针对HDACs为祀点设计 抑制剂已成为抗肿瘤药物研究的热点。
[0004]目前报道的HDACi药效团大都包括如下Ξ个部分：锋离子馨合基团狂BG)，疏水性 的长链化inker)和蛋白表面识别区（SurfaceReco即itionDomain)。锋离子馨合基团可W 馨合HDACs活性中屯、的锋离子，从而抑制酶的活性。目前已知的活性最强，应用最广的锋离 子馨合基团是异径朽酸基团。然而，现在很多处于临床研究的化合物没有很好的药效，虽然 它们在临床前的研究中表现出了很优异的活性。但是，上市的HDA巧审制剂（SAHA和FK228) 在治疗实体瘤方面药效很差，它们还存在着半衰期短，难吸收和药物代谢动力学性质较差 的缺点。
【发明内容】
[0005]本发明针对现有技术的不足，提供一种组蛋白去乙酷酶抑制剂及其制备方法和应 用，本发明采用异径目亏酸基团为锋离子馨合基团，吗I噪美辛是一种上市抗炎药，已经表现出 了抗肿瘤潜力，将其作为HDACi结构母核，并引入脂肪性Linker,可W改善其脂水分配系 数，促进药物的吸收。
[0006] 本发明的技术方案如下： 具有结构式I的组蛋白去乙酷化酶抑制剂，巧)-3-(2-(1-(4-氯苯甲酯基）-5-甲氧 基-2-甲基-1氨-吗I噪-3-基）乙酷氨基）-N-径基下-2-締酷胺，药学上可接受的盐，溶 剂合物或前药，
本发明还提供了运些化合物在预防或治疗与组蛋白去乙酷化酶活性异常表达相关的 哺乳动物疾病的药物中的应用。所述的与组蛋白去乙酷化酶活性异常表达的相关哺乳动物 疾病包括：癌症，神经变性疾病，病毒感染，炎症和糖尿病等。
[0007] 因此，本发明还设及含有结构式I化合物的药物组合物。
[000引发明详述 所用的定义和术语 本文中所用的术语和定义含义如下： "药学上可接受的盐"是指化合物具有疗效且无毒的盐形式。其可由任一酸性基团（如 簇基）形成阴离子盐，或由任一碱性基团（如氨基）形成阳离子盐。本领域已知许多运样 的盐。在任何酸性基团（如簇基）上形成的阳离子盐，或是在任何碱性基团（如氨基）上 形成的阴离子盐。运些盐有许多是本领域已知的，如阳离子盐包括碱金属（如钢和钟）和 碱±金属（如儀和巧）的盐W及有机盐（如锭盐）。还可通过使用相应的酸处理碱性形式 的（I)方便地获得阴离子盐，运样的酸包括无机酸如硫酸、硝酸、憐酸等；或有机酸如乙酸、 丙酸、径基乙酸、2-径基丙酸、2-氧代丙酸、草酸、丙二酸、班巧酸、马来酸、富马酸、苹果酸、 酒石酸、2-径基-1，2, 3-丙Ξ酸、甲横酸、乙横酸、苯甲横酸、4-甲基苯横酸、环己基亚横酸、 2-径基苯甲酸、4-氨基-2-径基苯甲酸等。运些盐是熟练技术人员熟知的，熟练的技术人 员可制备本领域知识所提供的任何盐。此外，熟练技术人员可根据溶解度、稳定性、容易制 剂等因素取某种盐而舍另一种盐。运些盐的测定和最优化在熟练技术人员的经验范围内。
[0009]"前药"是指药物经过化学结构修饰后得到的在体外无活性或活性较小、在体内经 酶或非酶的转化释放出活性药物而发挥药效的化合物。
[0010] 所述化合物的制备方法，反应步骤及反应式如下： 制备方法包括如下步骤： 合成路线：W吗I噪美辛为原料，先与3-氨基己豆酸甲醋缩合，再与径胺钟亲核反应，最 后制得终产物；反应式如下： 合成路线：
上述合成路线2反应式中的试剂：（1) 3-氨基己豆酸甲醋，0-苯并Ξ氮 挫-N，N，Ν'，Ν' -四甲基脈四氣棚酸，Ξ乙胺，二氯甲烧；（2)径胺钟，无水甲醇； 制备所述组蛋白去乙酷酶抑制剂的中间体，该中间体是：巧)-甲基3-(2-(1-(4-氯苯 甲酯基）-5-甲氧基-2-甲基-1氨-吗I噪-3-基）乙酷氨基）下-2-締酸醋。
[0011] 由于锋离子依赖性组蛋白去乙酷化酶（HDACs)各亚型催化中屯、的高度同源性，我 们选择含有组蛋白去乙酷化酶的化la细胞提取物(包含HDAC1,HDAC2,HDAC3和HDAC8) 来进行酶活性测试。HDACs活性巧光分析方法(两步法)，能快速、方便检测HDACs活性， 操作简单，灵敏度高。第一步，含一个乙酷化侧链的赖氨酸HDACs巧光底物（Boc-Lys (acetyl) -AMC)，用含有组蛋白去乙酷化酶的化la细胞提取物样本解育，使底物脱去乙酷 基，激活底物。第二步，用膜酶水解Boc-Lys-AMC，产生AMC运一巧光基团（即发色团），在发 射波长/激发波长（390nm/460nm)测定巧光强度，从而根据抑制剂组及对照组的巧光强度 计算抑制率，并求算IC50值。酶活性测试原理见反应式II。
[0012] 化合物的细胞活性的测试使用嚷挫兰检测方法（MTT法)，人组织细胞淋己瘤细胞 株（U937)，人红白血病细胞株（K562)，人急性白血病细胞株（化60)的细胞悬液分别接种于 96孔板，每孔中加入含不同浓