组蛋白脱乙酰基酶抑制剂和免疫调节药物的组合的制作方法

组蛋白脱乙酰基酶抑制剂和免疫调节药物的组合的制作方法
【专利摘要】本发明涉及用于治疗有需要的受试者的淋巴瘤的包含HDAC抑制剂和免疫调节药物的组合。本文也提供用于治疗有需要的受试者的淋巴瘤的方法，其包括向所述受试者施用有效量的一种以上组合。
【专利说明】组蛋白脱乙酰基酶抑制剂和免疫调节药物的组合
[0001] 相关申请的交叉引用
[0002] 本申请要求美国临时申请序列No.61/911,086(2013年12月3日提交）和62/061， 368(2014年10月8日提交)的优先权，所述美国临时申请各自以引用的方式整体并入本文。 [000 3] 背景
[0004] 组蛋白脱乙酰基酶(HDAC)酶代表淋巴瘤中有吸引力的治疗靶标，但不幸的是，非 选择性HDAC抑制剂已在患者中导致剂量限制性毒性。
[0005] 免疫调节（IMiD)类别的药物，包括来那度胺（1611&11(1〇11^(^)和泊马度胺 (pomalidomide)，在多种淋巴瘤模型中展现抗淋巴瘤性质，并且已在淋巴瘤患者中显示临 床活性。
[0006] 归因于以上疗法的剂量限制性毒性，本领域中对用于治疗淋巴瘤的更有效以及更 小毒性组合物和方法存在持续需要。为满足这些需要，本文提供用于治疗淋巴瘤的包含 HDAC抑制剂和免疫调节药物的药物组合和方法。本发明的组合和方法被良好耐受，并且不 展现先前疗法的剂量限制性毒性。
[0007] 发明概述
[0008] 本文提供用于治疗有需要的受试者的淋巴瘤的药物组合。本文也提供用于治疗有 需要的受试者的淋巴瘤的方法。
[0009] 在一些实施方案中，提供用于治疗有需要的受试者的淋巴瘤的包含组蛋白脱乙酰 基酶(HDAC)抑制剂和免疫调节药物aMiD)的组合。举例来说，本发明的一实施方案提供一 种用于治疗淋巴瘤的药物组合，其包含治疗有效量的组蛋白脱乙酰基酶6(HDAC6)特异性抑 制剂或其药学上可接受的盐以及免疫调节药物(MiD)或其药学上可接受的盐。本发明的另 一实施方案提供一种用于治疗淋巴瘤的药物组合，其包含治疗有效量的组蛋白脱乙酰基酶 6(HDAC6)特异性抑制剂或其药学上可接受的盐以及免疫调节药物（MiD)或其药学上可接 受的盐，其中所述组合在以下剂量下施用：当单独施用一种或两种化合物时将不有效，但所 述量在组合的情况下有效。
[0010]在其它实施方案中提供用于治疗有需要的受试者的淋巴瘤的方法，其包括向所述 受试者施用有效量的包含组蛋白脱乙酰基酶(HDAC)抑制剂和免疫调节药物（MiD)的组合。 举例来说，本发明的一实施方案提供一种用于治疗有需要的受试者的淋巴瘤的方法，其包 括向所述受试者施用治疗有效量的包含组蛋白脱乙酰基酶6(HDAC6)特异性抑制剂或其药 学上可接受的盐以及免疫调节药物（MiD)或其药学上可接受的盐的药物组合。
[0011] 在特定实施方案中，HDAC6特异性抑制剂是式I化合物：
[0012]
[0013] 或其药学上可接受的盐，
[0014] 其中，
[0015] 环B是芳基或杂芳基；
[0016]办是芳基或杂芳基，其各自可任选被0H、卤基或Ch-烷基取代；
[0017] 并且
[0018] R 是!1或&-6-烷基。
[0019]在优选实施方案中，式I化合物是：
[0020]
[0021]或其药学上可接受的盐。
[0022]在其它实施方案中，式I化合物是：
[0023]
[0024]或其药学上可接受的盐。
[0025] 在其它特定实施方案中，HDAC6特异性抑制剂是式II化合物：
[0026]
(II)
[0027]或其药学上可接受的盐，
[0028]其中，
[0029] Rx和Ry连同各自所连接的碳一起形成环丙基、环丁基、环戊基、环己基、环庚基或环 辛基；
[0030] 各Ra独立地是&-6-烷基、Ci-6-烷氧基、卤基、OH、-N〇2、-CN或-NH2;并且
[0031] m是0、1 或2。
[0032] 在优选实施方案中，式II化合物是：
[0033]
[0034]或其药学上可接受的盐。
[0035] 在其它优选实施方案中，式II化合物是：
[0036]
Ο
[0037]或其药学上可接受的盐。
[0038] 在组合和/或方法的一些实施方案中，免疫调节药物是式III化合物：
[0039]
[0040] 或其药学上可接受的盐，
[0041 ]其中，
[0042] X和Y中的一个是C = 0，X和Y中的另一个是CH2或C = 0;并且
[0043] R2 是!1或&-6-烷基。
[0044] 在优选实施方案中，式III化合物是：
[0045]
[0046] 或其药学上可接受的盐。
[0047] 在其它优选实施方案中，式III化合物是：
[0048]
[0049] 或其药学上可接受的盐。
[0050] 在一些实施方案中，HDAC抑制剂和免疫调节药物与药学上可接受的载体一起施 用。
[0051 ]在一些实施方案中，HDAC抑制剂和免疫调节药物以单独剂型施用。在其它实施方 案中，HDAC抑制剂和免疫调节药物以单一剂型施用。
[0052] 在一些实施方案中，HDAC抑制剂和免疫调节药物在不同时间施用。在其它实施方 案中，HDAC抑制剂和免疫调节药物在大致上相同时间施用。
[0053]在一些实施方案中，HDAC抑制剂和IMiD的组合在治疗有需要的受试者方面实现协 同作用。
[0054]在组合和/或方法的一些实施方案中，HDAC6特异性抑制剂是式I化合物：
[0055]
[0056] 或其药学上可接受的盐，
[0057] 其中，
[0058] 环B是芳基或杂芳基；
[0059]办是芳基或杂芳基，其各自可任选被0H、卤基或Ch-烷基取代； [0060] 并且
[0061 ] R是!1或&-6-烷基;并且 [0062]免疫调节药物是式III化合物：
[0063]
[0064]或其药学上可接受的盐，
[0065]其中，
[0066] X和Υ中的一个是C = 0，Χ和Υ中的另一个是CH2或C = 0;并且
[0067] R2 是!1或&-6-烷基。
[0068] 在组合和/或方法的特定实施方案中，HDAC6特异性抑制剂是：
[0069]
[0070]或其药学上可接受的盐;并且
[0071] 免疫调节药物是：
[0072]
[0073]或其药学上可接受的盐。
[0074]在组合和/或方法的特定实施方案中，HDAC6特异性抑制剂是：
[0075]
[0076] 或其药学上可接受的盐;并且 [0077]免疫调节药物是：
[0078]
[0079]或其药学上可接受的盐。
[0080] 在组合和/或方法的特定实施方案中，HDAC6特异性抑制剂是：
[0081]
[0082]或其药学上可接受的盐;并且 [0083]免疫调节药物是：
[0084] ----·￡.
[0085]或其药学上可接受的盐。
[0086] 在组合和/或方法的特定实施方案中，HDAC6特异性抑制剂是：
[0087]
[0088]或其药学上可接受的盐;并且 [0089]免疫调节药物是：
[0090]
[0091] 或其药学上可接受的盐。
[0092] 在组合和/或方法的一些实施方案中，HDAC6特异性抑制剂是式II化合物：
[0093]
[0094] 或其药学上可接受的盐，
[0095] 其中，
[0096] Rx和Ry连同各自所连接的碳一起形成环丙基、环丁基、环戊基、环己基、环庚基或环 辛基；
[0097] 各Ra独立地是&―6-烷基、6-烷氧基、卤基、OH、-N〇2、-CN或-NH2;并且
[0098] m是0、1或2;并且
[0099]免疫调节药物是式III化合物：
[0100]
[0101] 或其药学上可接受的盐，
[0102] 其中，
[0103] X和Y中的一个是C = 0，X和Y中的另一个是CH2或C = 0;并且
[0104] R2 是!1或&-6-烷基。
[0105] 在组合和/或方法的特定实施方案中，HDAC6特异性抑制剂是：
[0106]
[0107]或其药学上可接受的盐;并且 [0108]免疫调节药物是：
[0109]
[0110] 或其药学上可接受的盐。
[0111] 在组合和/或方法的特定实施方案中，HDAC6特异性抑制剂是：
[0112]
[0113] 或其药学上可接受的盐;并且
[0114] 免疫调节药物是：
[0115]
[0116] 或其药学上可接受的盐。
[0117]在组合和/或方法的特定实施方案中，HDAC6特异性抑制剂是：
[0118]
Μ
[0119]或其药学上可接受的盐;并且 [0120]免疫调节药物是：
[0121]
[0122] 或其药学上可接受的盐。
[0123] 在组合和/或方法的特定实施方案中，HDAC6特异性抑制剂是：
[0124]
[0125] 或其药学上可接受的盐;并且
[0126] 免疫调节药物是：
[0127]
[0128] 或其药学上可接受的盐。
[0129] 本发明的一实施方案包括一种用于通过施用包含HDAC抑制剂和免疫调节药物的 组合来降低细胞周期进展的方法。
[0130] 本发明的另一实施方案包括一种用于通过施用包含HDAC抑制剂和免疫调节药物 的组合来增加细胞凋亡的方法。
[0131] 本发明的另一实施方案包括一种用于通过施用包含HDAC抑制剂和免疫调节药物 的组合来遏制癌症中转录调控子的方法。
[0132] 其它目标、特征和优势将根据以下详细描述而变得显而易知。详细描述和特定实 施例仅为了说明而给出，因为在本发明的精神和范围内的各种变化和修改将根据这个详细 描述而变得为本领域技术人员显而易知。此外，实施例说明本发明的原理。
[0133] 附图简述
[0134] 图1A-F显示在用HDAC6抑制剂和IMiD处理Mino套膜细胞淋巴瘤(MCL)细胞之后的 Fa/CI协同图。图1A显示在用化合物A和来那度胺(顶部)或泊马度胺(底部)处理Mino MCL细 胞之后的Fa/CI协同图。图1B显示在用化合物B和来那度胺（顶部）或泊马度胺（底部）处理 Mino MCL细胞之后的Fa/CI协同图。图1C显示在用化合物C和来那度胺（顶部）或泊马度胺 (底部）处理Mino MCL细胞之后的Fa/CI协同图。图1D显示在用化合物A和泊马度胺处理 JekolMCL细胞之后的Fa/CI协同图。图1E显示在用化合物B和来那度胺（顶部）或泊马度胺 (底部)处理JekolMCL细胞之后的Fa/CI协同图。图1F显示在用化合物C和来那度胺(顶部)或 泊马度胺(底部）处理Jeko 1MCL细胞之后的Fa/CI协同图。组合指数(CI)值〈1的数据点指示 导致细胞存活力协同降低的处理组合。
[0135] 图2A显示用DMS0、化合物Β(2μΜ)、来那度胺(2μΜ)、泊马度胺（ΙμΜ)、或化合物B与任 一 IMiD的组合处理Jekol套膜细胞淋巴瘤细胞4天对细胞周期抑制的作用。与增殖降低一 致，与任一 IMiD组合处理导致细胞周期进展进一步降低。
[0136] 图2B显示用DMS0、化合物Α(2μΜ)、来那度胺(2μΜ)、泊马度胺（ΙμΜ)、或化合物A与任 一頂iD的组合处理Mino套膜细胞淋巴瘤细胞4天对细胞周期抑制的作用。与增殖降低一致， 与任一頂iD组合处理导致细胞周期进展进一步降低。
[0137] 图2C显示用DMS0、化合物Β(2μΜ)、来那度胺(2μΜ)、泊马度胺（ΙμΜ)、或化合物B与任 一頂iD的组合处理Mino套膜细胞淋巴瘤细胞4天对细胞周期抑制的作用。与增殖降低一致， 与任一頂iD组合处理导致细胞周期进展进一步降低。
[0138] 图3A显示用DMS0、化合物Α(2μΜ)、来那度胺(2μΜ)、泊马度胺（ΙμΜ)、或化合物A与任 一頂iD的组合处理Jekol套膜细胞淋巴瘤细胞4天对诱导凋亡的作用。与任一頂iD组合处理 导致细胞凋亡协同增加。
[0139] 图3B显示用DMS0、化合物Β(2μΜ)、泊马度胺（ΙμΜ)、或化合物B与泊马度胺的组合处 理Jekol套膜细胞淋巴瘤细胞4天对诱导凋亡的作用。与任一頂iD组合处理导致细胞凋亡协 同增加。
[0140]图4是由Jekol套膜细胞淋巴瘤细胞获得的免疫印迹照片，其显示化合物A和泊马 度胺的组合导致进一步遏制全都是癌症中关键转录调控子的MYC、IRF4和IKZF3的表达。凋 亡标志物(裂解的PARP)也由于组合处理而增加。
[0141] 详细描述
[0142] 本申请大体上涉及用于治疗淋巴瘤的包含组蛋白脱乙酰基酶(HDAC)抑制剂和免 疫调节药物（MiD)的组合和方法。
[0143]
[0144] 以下列出的是用于描述本发明的各种术语的定义。除非另外在特定情况下加以限 定，否则当术语在整篇本说明书和权利要求中个别地或作为较大基团的一部分使用时，这 些定义适用于它们。
[0145] 术语"约"通常指示某一值的至多10%、5%或1 %的可能变化。举例来说，"约25mg/ kg"将通常以它的最广泛意义指示值22 · 5-27 · 5mg/kg，即25 ± 2 · 5mg/kg。
[0146] 术语"烷基"是指饱和直链或支链烃部分，在某些实施方案中，分别含有1个与6个 之间或1个与8个之间的碳原子。Ch烷基部分的实例包括但不限于甲基、乙基、丙基、异丙 基、正丁基、叔丁基、新戊基、正己基部分；并且Ch烷基部分的实例包括但不限于甲基、乙 基、丙基、异丙基、正丁基、叔丁基、新戊基、正己基、庚基和辛基部分。
[0147] 烷基取代基中的碳原子数目可通过前缀"Cx-y"指示，其中X是取代基中碳原子的最 小数目，并且y是最大数目。同样，C x链意指含有X个碳原子的烷基链。
[0148] 术语"烷氧基"是指-0-烷基部分。
[0149] 术语"环烷基"或"亚环烷基"表示源于单环或多环饱和或部分不饱和碳环化合物 的单价基团。C 3-8-环烷基的实例包括但不限于环丙基、环丁基、环戊基、环己基、环庚基和环 辛基;并且C 3-12_环烷基的实例包括但不限于环丙基、环丁基、环戊基、环己基、双环[2.2.1 ] 庚基和双环[2.2.2]辛基。也涵盖通过移除单一氢原子而源于具有至少一个碳-碳双键的单 环或多环碳环化合物的单价基团。所述基团的实例包括但不限于环丙烯基、环丁烯基、环戊 烯基、环己烯基、环庚烯基、环辛烯基等。
[0150] 术语"芳基"是指具有一个或多个稠合或非稠合芳族环的单环或多环碳环系统，包 括但不限于苯基、萘基、四氢萘基、茚满基、茚基等。在一些实施方案中，芳基具有6个碳原 子。在一些实施方案中，芳基具有6至10个碳原子。在一些实施方案中，芳基具有6至16个碳 原子。
[0151] 术语"杂芳基"是指具有至少一个芳族环的单环或多环（例如双环或三环或更多 环)稠合或非稠合部分或环系统，其中一个或多个成环原子是杂原子，诸如氧、硫或氮。在一 些实施方案中，杂芳基具有约1至6个碳原子，并且在其它实施方案中，具有1至15个碳原子。 在一些实施方案中，杂芳基含有5至16个环原子，其中1个环原子选自氧、硫和氮;0、1、2或3 个环原子是独立地选自氧、硫和氮的额外杂原子;并且其余环原子是碳。杂芳基包括但不限 于吡啶基、吡嗪基、嘧啶基、吡咯基、吡唑基、咪唑基、噻唑基、噁唑基、异噁唑基、噻唑基、噻 二唑基、噁二唑基、苯硫基、呋喃基、吲哚基、喹啉基、异喹啉基、苯并咪唑基、苯并噁唑基、喹 喔啉基、吖啶基等。
[0152]术语"齒基"是指卤素，诸如氟、氯、溴和碘。
[0153]术语"组合"是指两种或更多种用以治疗本公开中所述的治疗病状或病症的治疗 剂。治疗剂的所述组合可呈单一丸剂、胶囊或静脉内溶液形式。然而，术语"组合"也涵盖两 种或更多种治疗剂呈单独丸剂、胶囊或静脉内溶液形式时的情况。同样，术语"组合疗法"是 指施用两种或更多种治疗剂以治疗本公开中所述的治疗病状或病症。所述施用涵盖以大致 上同时的方式共同施用这些治疗剂，诸如以活性成分的比率固定的单一胶囊形式或以各活 性成分的多个或单独容器(例如胶囊)形式。此外，所述施用也涵盖以依序方式在近似相同 时间或在不同时间使用各类型的治疗剂。在任一情况下，治疗方案都将提供药物组合在治 疗本文所述的病状或病症方面的有益作用。
[0154]术语"HDAC"是指组蛋白脱乙酰基酶，其是从核心组蛋白中的赖氨酸残基移除乙酰 基，由此导致形成凝聚和转录沉默染色质的酶。当前存在18种已知组蛋白脱乙酰基酶，其被 分类成四组。I类HDAC，包括HDAC1、HDAC2、HDAC3和HDAC8，与酵母RPD3基因相关。II类HDAC， 包括 HDAC4、HDAC5、HDAC6、HDAC7、HDAC9 和 HDAC10，与酵母 Hdal 基因相关。III类 HDAC，也称为 长寿蛋白（sirtuin)，与Sir2基因相关，并且包括SIRTIUV类HDAC，仅含有HDAC11，具有I 类HDAC与II类HDAC两者的特征。除非另外规定，否则术语"HDAC"是指18种已知组蛋白脱乙 酰基酶中的任何一个或多个。
[0155] 术语"HDAC6特异性"意指化合物对HDAC6的结合程度比对任何其它类型的HDAC酶 (诸如HDAC1或HDAC2)实质上更大，诸如大5倍、10倍、15倍、20倍或大于20倍。也就是说，化合 物对HDAC6超过对任何其它类型的HDAC酶具有选择性。举例来说，结合HDAC6的IC 5Q是10nM， 而结合HDAC1的IC5Q是50nM的化合物是HDAC6特异性的。另一方面，结合HDAC6的IC 5Q是50nM， 而结合HDAC1的IC5Q是60nM的化合物不是HDAC6特异性的。
[0156] 术语"抑制剂"与术语拮抗剂同义。
[0157] 组蛋白脱乙酰基酶(HDAC)抑制剂
[0158] 本文提供用于治疗有需要的受试者的淋巴瘤的药物组合。本文也提供用于治疗有 需要的受试者的淋巴瘤的方法。
[0159] 本发明的组合和方法包含组蛋白脱乙酰基酶(HDAC)抑制剂。HDAC抑制剂可为任何 HDAC抑制剂。因此，HDAC抑制剂对于特定类型的组蛋白脱乙酰基酶可为选择性或非选择性 的。优选地，HDAC抑制剂是选择性HDAC抑制剂。更优选地，HDAC抑制剂是HDAC6抑制剂。
[0160] 在一些实施方案中，HDAC6特异性抑制剂是式I化合物：
[0161]
[0169]
[0170] 或其药学上可接受的盐。
[0171 ]根据式I的选择性HDAC6抑制剂的制备和性质提供于国际专利申请No . PCT/ US2011/021982中，所述国际专利申请的整个内容以引用的方式并入本文。
[0172] 在其它实施方案中，HDAC6特异性抑制剂是式II化合物：
[0173]
[0174] 或其药学上可接受的盐，
[0175] 其中，
[0176] Rx和Ry连同各自所连接的碳一起形成环丙基、环丁基、环戊基、环己基、环庚基或环 辛基；
[0177] 各RA独立地是&-6-烷基、&- 6-烷氧基、卤基、OH、-N〇2、-CN或-NH2;并且
[0178] m是0、1 或2。
[0179] 代表性式II化合物包括但不限于：
[0180]
123 或其药学上可接受的盐。 2 根据式II的选择性HDAC6抑制剂的制备和性质提供于国际专利申请No . PCT/ 3 US2011/060791中，所述国际专利申请的整个内容以引用的方式并入本文。
[0183] 在一些实施方案中，本文所述的化合物是未溶合的。在其它实施方案中，一种或多 种化合物呈溶合形式。如本领域中所知，溶剂合物可具有任何药学上可接受的溶剂，诸如 水、乙醇等。
[0184] 免疫调节药物aMiD)
[0185] 本发明的组合和方法包含免疫调节药物（MiD) <JMiD可为任何免疫调节药物。优 选地，頂iD是式III沙利度胺(thalidomide)。
[0186] 在一些实施方案中，免疫调节药物是式III化合物：
[0187]
[0188] 或其药学上可接受的盐，
[0189] 其中，
[0190] X和Y中的一个是C = 0，X和Y中的另一个是CH2或C = 0;并且
[0191] R2 是!1或&-6-烷基。
[0192] 代表性式III化合物包括但不限于：
[0193]
123456 或其药学上可接受的盐。 2 根据式III的免疫调节药物的制备和性质提供于美国专利No . 5，635，517;6，281， 230; 6，335，349;和6，476，052;以及国际专利申请No. PCT/US97/013375中，所述专利各自以 引用的方式整体并入本文。 3 在一些实施方案中，本文所述的化合物是未溶合的。在其它实施方案中，一种或多 种化合物呈溶合形式。如本领域中所知，溶剂合物可具有任何药学上可接受的溶剂，诸如 水、乙醇等。 4 组合/药物组合 5 本文提供用于治疗有需要的受试者的淋巴瘤的组合。在一些实施方案中，提供用 于治疗有需要的受试者的淋巴瘤的包含组蛋白脱乙酰基酶(HDAC)抑制剂和免疫调节药物 (niiD)的组合。 6 在组合的一些实施方案中，HDAC抑制剂是HDAC6抑制剂。在特定实施方案中，HDAC6 特异性抑制剂是式I化合物：
[0200]
[0201] 或其药学上可接受的盐。
[0202] 在优选实施方案中，式I化合物是：
[0203]
[0204] 或其药学上可接受的盐。
[0205]在其它实施方案中，式I化合物是：
[0206]
[0207] 或其药学上可接受的盐。
[0208] 在其它特定实施方案中，HDAC6特异性抑制剂是式II化合物：
[0209]
[0210] 或其药学上可接受的盐。
[0211]在优选实施方案中，式II化合物是：
[0212]
[0213]或其药学上可接受的盐。
[0214]在其它优选实施方案中，式II化合物是：
[0215]
[0216] 或其药学上可接受的盐。
[0217] 在组合的一些实施方案中，免疫调节药物是式III化合物：
[0218]
[0219]或其药学上可接受的盐。
[0220] 在优选实施方案中，式III化合物是：
[0221]
[0222] 或其药学上可接受的盐。
[0223] 在其它优选实施方案中，式III化合物是：
[0224] ινπ.2:
[0225] 或其药学上可接受的盐。
[0226] 在一个实施方案中，本文提供一种包含HDAC6特异性抑制剂和免疫调节药物的组 合疗法，其中所述HDAC6特异性抑制剂是式I化合物：
[0227]
[0228]或其药学上可接受的盐，
[0229] 其中，
[0230] 环Β是芳基或杂芳基；
[0231]办是芳基或杂芳基，其各自可任选被0Η、卤基或Ch-烷基取代；
[0232] 并且
[0233] R是!1或&-6-烷基;并且
[0234] 所述免疫调节药物是式III化合物：
[0235]
[0236] 或其药学上可接受的盐，
[0237] 其中，
[0238] X和Y中的一个是C = 0，X和Y中的另一个是CH2或C = 0;并且
[0239] R2 是!1或&-6-烷基。
[0240] 在组合的特定实施方案中，HDAC6特异性抑制剂是：
[0242] 或其药学上可接受的盐;并且[0243] 免疫调节药物是： f
[0241]
[0244]
[0245] 或其药学上可接受的盐。
[0246] 在另一实施方案中，本文提供一种包含HDAC6特异性抑制剂和免疫调节药物的组 合疗法，其中所述HDAC6特异性抑制剂是式II化合物：
[0247]
[0248] 或其药学上可接受的盐，
[0249] 其中，
[0250] Rx和Ry连同各自所连接的碳一起形成环丙基、环丁基、环戊基、环己基、环庚基或环 辛基；
[0251] 各Ra独立地是&―6-烷基、6-烷氧基、卤基、OH、-N〇2、-CN或-NH2;并且
[0252] m是0、1或2;并且
[0253] 所述免疫调节药物是式III化合物：
[0254]
[0255] 或其药学上可接受的盐，
[0256] 其中，
[0257] X和Y中的一个是C = 0，X和Y中的另一个是CH2或C = 0;并且
[0258] R2 是!1或&-6-烷基。
[0259] 在组合的特定实施方案中，HDAC6特异性抑制剂是：
[0260]
[0261 ]或其药学上可接受的盐;并且
[0262] 免疫调节药物是：
[0263]
[0264] 或其药学上可接受的盐。
[0265] 尽管式I、II和III化合物是以它们的中性形式描绘，但在一些实施方案中，这些化 合物是以药学上可接受的盐形式使用。如本文所用，"药学上可接受的盐"是指公开的化合 物的衍生物，其中通过使现存酸或碱部分转化成它的盐形式来改性母体化合物。药学上可 接受的盐的实例包括但不限于碱性残基(诸如胺）的无机酸或有机酸盐;酸性残基(诸如羧 酸)的碱盐或有机盐;等。本发明的药学上可接受的盐包括母体化合物的例如由无毒无机或 有机酸形成的常规无毒盐。本发明的药学上可接受的盐可通过常规化学方法由含有碱性或 酸性部分的母体化合物合成。通常，所述盐可通过使这些化合物的游离酸或碱形式与化学 计量的适当碱或酸在水中或在有机溶剂中或在两者的混合物中反应来制备;通常，如乙醚、 乙酸乙酯、乙醇、异丙醇或乙腈的非水性介质是优选的。适合盐的清单见于Remington's Pharmaceutical Sciences,第17版，Mack Publishing Company，Easton,Pa.，1985,第1418 页以及Journal of Pharmaceutical Science,66,2(1977)中，其各自以引用的方式整体并 入本文。
[0266] 施用/剂量
[0267] 在一些实施方案中，HDAC抑制剂(式I或II化合物)与免疫调节药物(式III化合物） 同时施用。同时施用通常意指两种化合物在精确相同时间进入患者。然而，同时施用也包括 以下可能性:HDAC抑制剂和MiD在不同时间进入患者，但时间差异足够小以致不向首先施 用的化合物提供用以在其次施用的化合物进入之前对患者起作用的时间。所述延迟时间通 常对应于小于1分钟，并且更通常小于30秒。在其中化合物呈溶液形式的一个实例中，同时 施用可通过施用含有化合物的组合的溶液来实现。在另一实例中，可采用同时施用单独溶 液，其中一个含有HDAC抑制剂，而其中另一个含有IMiD。在其中化合物呈固体形式的一个实 例中，同时施用可通过施用含有化合物的组合的组合物来实现。或者，同时施用可通过施用 两种单独组合物来实现，一种包含HDAC抑制剂，而另一种包含頂iD。
[0268] 在其它实施方案中，不同时施用HDAC抑制剂和頂iD。在一些实施方案中，在頂iD之 前施用HDAC抑制剂。在其它实施方案中，在HDAC抑制剂之前施用頂iD。非同时施用情况下的 时间差异可大于1分钟、5分钟、10分钟、15分钟、30分钟、45分钟、60分钟、2小时、3小时、6小 时、9小时、12小时、24小时、36小时或48小时。在其它实施方案中，向首先施用的化合物提供 用以在施用其次施用的化合物之前对患者起作用的时间。通常，时间差异不延伸超出首先 施用的化合物用以完成它在患者中的作用的时间，或超出首先施用的化合物在患者中被完 全或大致上消除或去活化的时间。
[0269] 在一些实施方案中，HDAC抑制剂和免疫调节药物中的一个或两个以治疗有效量或 剂量施用。"治疗有效量"是HDAC6抑制剂(式I或II化合物)或免疫调节药物(式III化合物） 的在单独向患者施用时有效治疗淋巴瘤的量。在给定情况下对于特定受试者被证明是"治 疗有效量"的量可能并非对于100%的针对所考虑的疾病或病状加以类似治疗的受试者都 是有效的，尽管所述剂量被熟练从业者视为"治疗有效量"。化合物的对应于治疗有效量的 量强烈取决于癌症类型、癌症阶段、所治疗的患者的年龄和其它事实。一般来说，这些化合 物的治疗有效量在本领域中是熟知的，诸如提供于以上引用的支持性参考文献中。
[0270] 在其它实施方案中，HDAC抑制剂和免疫调节药物中的一个或两个以亚治疗有效量 或剂量施用。亚治疗有效量是HDAC抑制剂(式I或II化合物)或免疫调节药物(式III化合物） 的在单独向患者施用时不随时间完全抑制预定靶标的生物活性的量。
[0271 ] 无论以治疗量抑或以亚治疗量施用，HDAC抑制剂和免疫调节药物的组合都应有效 治疗淋巴瘤。举例来说，如果在与式I或II化合物(HDAC抑制剂)组合时，组合有效治疗淋巴 瘤，那么式III化合物(免疫调节药物)的亚治疗量可为有效量。
[0272] 在一些实施方案中，化合物的组合在治疗淋巴瘤方面展现协同作用（即大于累加 作用）。术语"协同作用"是指例如像HDAC抑制剂和IMiD的两种药剂产生的例如减缓癌症或 其症状的症状性进展的作用大于单独施用的各药物的作用的简单累加的举动。可例如使用 适合方法计算协同作用，所述方法诸如S形-Emax等式(Holford，N·Η·G·和Scheiner，L·B·， Clin · Pharmacokinet · 6:429-453( 1981))、Loewe累加性等式（Loewe，S ·和Muischnek，H.， Arch.Exp .Pathol Pharmacol · 114: 313-326( 1926))和中值效应等式（Chou，T.C.和 Talalay，P·，Adv.Enzyme Regul · 22:27-55(1984))。以上提及的各等式都可应用于实验数 据以产生相应图形来有助于评估药物组合的作用。与以上提及的等式相关的相应图形分别 是浓度-作用曲线、等效线图解曲线和组合指数曲线。
[0273] 在不同实施方案中，视所用的组合和有效量而定，化合物的组合可抑制癌症生长， 实现癌症停滞，或甚至实现大致上或完全癌症消退。
[0274] 尽管各种量的HDAC抑制剂和IMiD应导致对淋巴瘤的有效治疗，但所述量在组合时 应优选不对患者具有过度毒性（即所述量优选在如由医学指导方针确定的毒性限度内）。在 一些实施方案中，为防止过度毒性和/或提供对淋巴瘤的更有效治疗，提供关于总施用剂量 的限制。通常，本文考虑的量是每天量;然而，本文也考虑半天和两天或三天循环。
[0275] 不同剂量方案可用于治疗淋巴瘤。在一些实施方案中，1天一次、两次、三次或四 次，持续3、4、5、6、7、8、9或10天施用每日剂量，诸如任何上述示例性剂量。视癌症的阶段和 严重性而定，较短治疗时间（例如多达5天)可连同高剂量一起采用，或较长治疗时间（例如 10天或大于10天、或数周、或1个月或长于1个月）可连同低剂量一起采用。在一些实施方案 中，每隔一天施用每日一次或两次剂量。在一些实施方案中，各剂量含有待以单一剂量形式 递送的HDAC抑制剂与IMiD两者，而在其它实施方案中，各剂量含有待以单独剂量形式递送 的HDAC抑制剂和頂iD。
[0276] 呈纯净形式或呈适当药物组合物形式的式I、II或III化合物或它们的药学上可接 受的盐或溶剂合物形式可通过本领域中已知的任何接受的施用模式或试剂来施用。化合物 可例如口服、经鼻、胃肠外(静脉内、肌肉内或皮下）、经表面、经皮、阴道内、膀胱内、脑池内 或经直肠施用。剂型可为例如固体、半固体、冻干粉末、或液体剂型，例如像片剂、丸剂、软质 弹性或硬质明胶胶囊、粉剂、溶液、混悬液、栓剂、气雾剂等，优选呈适于简单施用精确剂量 的单位剂型。一特定施用途径是口服，特别是其中可根据待治疗的疾病的严重性程度调整 适宜每日剂量方案的口服。
[0277] 如上所讨论，药物组合的HDAC抑制剂和IMiD可以单一单位剂量或单独剂型施用。 因此，短语"药物组合"包括呈单一剂型或单独剂型的两种药物的组合，即整篇本申请中所 述的药学上可接受的载体和赋形剂可与HDAC抑制剂和IMiD以单一单位剂量组合，以及当分 开施用这些化合物时与HDAC抑制剂和頂iD个别地组合。
[0278] 助剂和佐剂可包括例如防腐剂、湿润剂、、混悬剂、甜味剂、调味剂、芳香剂、乳化剂 和分散剂。防止微生物的作用通常由各种抗细菌剂和抗真菌剂，诸如对羟基苯甲酸酯、氯丁 醇、苯酚、山梨酸等提供。也可包括等张剂，诸如糖、氯化钠等。可通过使用延迟吸收的试剂 (例如单硬脂酸铝和明胶)来致使对可注射药物形式的吸收延长。助剂也可包括湿润剂、乳 化剂、pH缓冲剂和抗氧化剂，例如像柠檬酸、脱水山梨醇单月桂酸酯、油酸三乙醇胺、丁基化 羟基甲苯等。
[0279] 可制备具有包衣和壳体，诸如肠溶包衣和本领域中熟知的其它包衣和壳体的固体 剂型。它们可含有镇静剂，并且可具有使它们以延迟方式在肠道的某一部分中释放一种或 多种活性化合物的组成。可使用的包埋组分的实例是聚合物质和蜡。活性化合物也可呈微 囊封形式，适当时，连同一种或多种以上提及的赋形剂一起。
[0280] 用于口服施用的液体剂型包括药学上可接受的乳剂、溶液、混悬液、糖浆和酏剂。 所述剂型例如通过将本文所述的HDAC抑制剂或免疫调节药物或其药学上可接受的盐和任 选药物佐剂溶解、分散(等)于载体，例如像水、盐水、右旋糖水溶液、甘油、乙醇等;增溶剂和 乳化剂，如例如乙醇、异丙醇、碳酸乙酯、乙酸乙酯、苯甲醇、苯甲酸苯甲酯、丙二醇、1，3_ 丁 二醇、二甲基甲酰胺；油，特别是棉籽油、花生油、玉米胚芽油、橄榄油、蓖麻油和芝麻油、甘 油、四氢呋喃甲醇、聚乙二醇以及脱水山梨醇的脂肪酸酯;或这些物质的混合物等中以由此 形成溶液或混悬液来制备。
[0281] 通常，视预定施用模式而定，药学上可接受的组合物将含有约1重量％至约99重 量％的本文所述的化合物或其药学上可接受的盐以及99重量％至1重量％的药学上可接受 的赋形剂。在一个实例中，组合物将为约5重量％与约75重量％之间的本文所述的化合物或 其药学上可接受的盐，其余部分是适合药物赋形剂。
[0282] 制备所述剂型的实际方法为本领域技术人员所知，或将为本领域技术人员显而易 知。参照例如Remington's Pharmaceutical Sciences,第18版，（Mack Publishing Company,Easton,Pa.,1990)。
[0283] 治疗方法
[0284] 本发明涉及用于治疗有需要的受试者的淋巴瘤的方法，其包括向所述受试者施用 本发明的药物组合。因此，本文提供用于治疗有需要的受试者的淋巴瘤的方法，其包括向所 述受试者施用治疗有效量的包含HDAC抑制剂和免疫调节药物的组合。
[0285] 本文考虑的受试者通常是人。然而，受试者可为需要治疗的任何哺乳动物。因此， 本文所述的方法可应用于人应用与兽医学应用两者。
[0286] 术语"治疗（treat ing/treatment)"指示方法已至少缓和异常细胞增殖。举例来 说，方法可降低患者中淋巴瘤生长速率，或防止淋巴瘤继续生长或扩散，或甚至降低淋巴瘤 的总体延伸。
[0287] 因此，在一个实施方案中，本文提供一种用于治疗有需要的受试者的淋巴瘤的方 法，其包括向所述受试者施用治疗有效量的化合物A或其药学上可接受的盐和化合物E或其 药学上可接受的盐。
[0288] 在另一实施方案中的是一种用于治疗有需要的受试者的淋巴瘤的方法，其包括向 所述受试者施用治疗有效量的化合物A或其药学上可接受的盐和化合物F或其药学上可接 受的盐。
[0289] 在另一实施方案中的是一种用于治疗有需要的受试者的淋巴瘤的方法，其包括向 所述受试者施用治疗有效量的化合物B或其药学上可接受的盐和化合物E或其药学上可接 受的盐。
[0290] 在另一实施方案中的是一种用于治疗有需要的受试者的淋巴瘤的方法，其包括向 所述受试者施用治疗有效量的化合物B或其药学上可接受的盐和化合物F或其药学上可接 受的盐。
[0291] 在另一实施方案中的是一种用于治疗有需要的受试者的淋巴瘤的方法，其包括向 所述受试者施用治疗有效量的化合物C或其药学上可接受的盐和化合物E或其药学上可接 受的盐。
[0292] 在另一实施方案中的是一种用于治疗有需要的受试者的淋巴瘤的方法，其包括向 所述受试者施用治疗有效量的化合物C或其药学上可接受的盐和化合物F或其药学上可接 受的盐。
[0293] 在另一实施方案中的是一种用于治疗有需要的受试者的淋巴瘤的方法，其包括向 所述受试者施用治疗有效量的化合物D或其药学上可接受的盐和化合物E或其药学上可接 受的盐。
[0294] 在另一实施方案中的是一种用于治疗有需要的受试者的淋巴瘤的方法，其包括向 所述受试者施用治疗有效量的化合物D或其药学上可接受的盐和化合物F或其药学上可接 受的盐。
[0295] 在方法的一些实施方案中，受试者先前为免疫调节药物所难治。
[0296] 本发明涉及用于通过施用包含HDAC抑制剂和免疫调节药物的组合来降低细胞周 期进展的方法。
[0297] 本发明涉及用于通过施用包含HDAC抑制剂和免疫调节药物的组合来增加细胞凋 亡的方法。
[0298] 本发明涉及用于通过施用包含HDAC抑制剂和免疫调节药物的组合来遏制癌症中 转录调控子的方法。
[0299] 试剂盒
[0300] 在其它实施方案中，提供试剂盒。本发明的试剂盒包括以下包装:其包括本发明的 化合物或组合物。在一些实施方案中，试剂盒包括HDAC抑制剂或其药学上可接受的盐和 MiD或其药学上可接受的盐。
[0301] 短语"包装"意指含有本文呈现的化合物或组合物的任何容器。在一些实施方案 中，包装可为盒或包封。用于包装药物产品的包装材料为本领域技术人员所熟知。药物包装 材料的实例包括但不限于瓶、管、吸入器、栗、袋、小瓶、容器、注射器、瓶和适于所选制剂和 预定施用和治疗模式的任何包装材料。
[0302] 试剂盒也可含有不含于包装内，而是附着于包装外部的物品，例如吸移器。
[0303] 试剂盒可进一步含有用于向患者施用本发明的化合物或组合物的说明书。试剂盒 也可包括关于本文化合物的由诸如美国食物与药品管理局的管理机构批准的用途的说明 书。试剂盒也可含有针对化合物的标签或产品插页。包装和/或任何产品插页可自身由管理 机构批准。试剂盒可包括在包装中呈固相或呈液相(诸如提供的缓冲液）的化合物。试剂盒 也可包括用于制备用以进行方法的溶液的缓冲液和用于将液体从一个容器转移至另一容 器的吸移器。 实施例
[0304] 已出于说明以及描述本发明的某些特定实施方案的目的在以下阐述实施例。然 而，权利要求的范围将不以任何方式受限于本文阐述的实施例。对公开的实施方案的各种 变化和修改将为本领域技术人员显而易知，并且可在不脱离本发明的精神和随附权利要求 的范围下进行此类变化和修改，包括不限于与本发明的化学结构、取代基、衍生物、制剂和/ 或方法相关的那些。对本文流程中的结构中的变量的定义与本文呈现的各式中的相应位置 的定义相当。
[0305]式I化合物的合成提供于PCT/US2011/021982中，所述专利以引用的方式整体并入 本文。式II化合物的合成提供于PCT/US2011/060791中，所述专利以引用的方式整体并入本 文。式III化合物的合成提供于美国专利No. 5，635,517 ;6,281，230 ;6,335,349;和6，476， 052中；以及国际专利申请NO.PCT/US97/013375中，所述专利各自以引用的方式整体并入本 文。
[0306] 实施例1:合成2_(二苯基氨基)-N-(7_(羟基氨基)-7_氧代庚基）嘧啶-5-甲酰胺 (化合物A)
[0307]
[0308]
[0309]
[0310]
[0311] ? 2
[0312] 将苯胺（3.78,40!11111〇1)、2-氯嘧啶-5-甲酸乙酯1(7.58,40111111〇1)、1( 2(：03(118， 80mmo 1)于DMF(100ml)中的混合物脱气，并且在120 °C下在Ν2下搅拌过夜。冷却反应混合物 至室温并用EtOAc (200ml)稀释，接着用饱和盐水(200ml X 3)洗涤。分离有机层并经Na2S〇4 干燥，蒸发至干燥并通过硅胶色谱法(石油醚/Et0Ac = 10/l)纯化以产生呈白色固体的所需 产物(6.2g，64%)。
[0313] 合成中间体3
[0314] 2
3
[0315] 将化合物2(6 · 2g，25mmol)、鹏苯（6 · 12g，30mmol)、CuI (955mg，5 · Ommol)、Cs2C〇3 (16.3g，50mmo 1)于TEOS (200ml)中的混合物脱气并用氮气吹扫。在140 °C下搅拌所得混合物 14小时。在冷却至室温之后，残余物用Et0Ac(200ml)和95%Et0H(200ml)稀释，添加载有 NH4F-H20的硅胶[50g，通过向硅胶(500g，100-200目）中添加含NH4F(100g)的水（1500ml)来 预先制备]，并且使所得混合物在室温下保持2小时，过滤固化物质并用EtOAc洗涤。蒸发滤 液至干燥，并且残余物通过硅胶色谱法(石油醚/EtOAc = 10/1)纯化以产生黄色固体（3g， 38%)〇
[0316] 合成中间体4
[0317]
[0318] 添加2N NaOH( 200ml)至化合物3 (3 · 0g，9 · 4mmo 1)于EtOH( 200ml)中的溶液中。在60 °C下搅拌混合物30分钟。在蒸发溶剂之后，溶液用2N HC1中和以产生白色沉淀。混悬液用 Et0Ac(2x 200ml)萃取，并且分离有机层，用水（2x 100ml)、盐水（2x 100ml)洗涤，并且经 Na2S〇4干燥。移除溶剂产生棕色固体(2.5g，92%)。
[0319] 合成中间体6
[0320] v .4
6
[0321] 将化合物4(2.58,8.58111111〇1)、氨基庚酸酯5(2.528，12.87111111〇1)、似1'1](3.91 8， 10.30mmol)、DIPEA(4.43g，34.32mmol)的混合物在室温下搅拌过夜。在过滤反应混合物之 后，蒸发滤液至干燥，并且残余物通过硅胶色谱法(石油醚/Et0Ac = 2/l)纯化以产生棕色固 体(2g，54%)〇
[0322] 合成2_(二苯基氨基)-N-(7_(羟基氨基)-7-氧代庚基)嘧啶-5-甲酰胺
[0323]
[0324] 在0 °C 下揽摔化合物6 (2 · 0g，4 · 6mmo 1)、氛氧化纳（2N，20mL)于MeOH( 50ml)和DCM (25ml)中的混合物10分钟。冷却羟胺(50 % ) (10ml)至0 °C，并且添加至混合物中。在室温下 搅拌所得混合物20分钟。在移除溶剂之后，混合物用1M HC1中和以产生白色沉淀。过滤粗产 物并通过制备型HPLC纯化以产生白色固体(950mg，48%)。
[0325] 实施例2:合成2-((2-氯苯基）（苯基)氨基)-N-(7_(羟基氨基)-7-氧代庚基)嘧啶-5_甲酰胺(化合物B)
[0326]
[0328]
[0327] 反应流程:
DH
[0329] 合成中间体2:参见实施例1中中间体2的合成。
[0330] 合成中间体3:将化合物2(69 · 2g，1当量）、1_氯_2_碘苯（135 · 7g，2当量）、Li2C03 (42.048,2当量）、1(尤03(39.328，1当量）、(：11(1当量45以111)于0130(6901111)中的混合物脱气并 用氮气吹扫。在140 °C下搅拌所得混合物。反应物的后处理以93 %产率产生化合物3。
[0331 ]合成中间体4:参见实施例1中中间体4的合成。
[0332]合成中间体6:参见实施例1中中间体6的合成。
[0333] 合成2-((2-氯苯基）（苯基)氨基)-N-(7_(羟基氨基)-7_氧代庚基)嘧啶-5-甲酰胺 (化合物B):参见实施例1中化合物A的合成。
[0334] 实施例3:合成2-((1-(3-氟苯基)环己基)氨基)-N_羟基嘧啶-5-甲酰胺(化合物C)
[0335]
[0336] 合成1-(3-氟苯基)环己烷甲腈:
[0337] 向2-(3-氟苯基）乙腈（10(^，0.74111〇1)于无水01^(10001111)中的溶液中添加1，5-二 溴戊烷（170g，0.74mol)，在冰浴下逐滴添加 NaH(65g，2.2当量）。在添加之后，将所得混合物 在50 °C下剧烈搅拌过夜。混悬液用冰水小心猝灭，用乙酸乙酯（3*500ml)萃取。浓缩合并的 有机溶液以提供粗物质，其在快速管柱上纯化以产生呈灰白色固体的1-(3-氟苯基)环己烷 甲腈（100g，67%)。
[0338] 合成1-(3-氟苯基)环己烷甲酰胺:
[0339] 在110°C下加热1-(3-氟苯基)环己烷甲腈（10(^，0.49111〇1)于??4(5001111)中的溶液 约5-6小时。在完成之后，用饱和NaHC03溶液小心碱化所得混合物直至PH=8-9。收集沉淀并 用水(1000ml)洗涤以提供呈白色固体的1-(3-氟苯基)环己烷甲酰胺(95g，87%)。
[0340] 合成1-(3-氟苯基)环己胺:
[0341] 向1-(3-氟苯基)环己烷甲酰胺(95g，0.43mol)于n-Bu0H(800ml)中的溶液中添加 NaC10(260ml，1.4当量），接着在0°C下添加3N Na0H(400ml，2.8当量），并且将反应物在室温 下搅拌过夜。将所得混合物用EA(2*500ml)萃取，合并的有机溶液用盐水洗涤，干燥以提供 粗物质，其用处理来进一步纯化以产生呈白色粉末的HC1盐(72g，73%)。
[0342] 合成2-(1-(3-氟苯基)环己基氨基)嘧啶-5-甲酸乙酯:
[0343] 向1-(3-氟苯基)环己胺盐酸盐（2.29g lOmmol)于二噁烷(50ml)中的溶液中添加 2-氯嘧啶-5-甲酸乙酯（1.87g，1.0当量)和DIPEA(2.58g，2.0当量）。将混合物在110-120°C 下加热过夜。所得混合物直接在硅胶柱上纯化以提供呈白色固体的偶联产物（1.37g，40%)
[0344] 合成2-(( 1-(3-氟苯基)环己基)氨基)-N_羟基嘧啶-5-甲酰胺:
[0345] 向2_( 1_(3_氣苯基）环己基氨基）啼啶_5_甲酸乙酯（100mg，0 · 29mmol)于MeOH/DCM (10ml，1:1)中的溶液中添加含50%NH20H的水(2ml，过量），接着在0°C下添加含饱和NaOH的 MeOH( 2ml，过量），并且搅拌反应物3-4小时。在完成之后，浓缩所得混合物，并且用2N HC1酸 化至PH = 4-5。收集沉淀并用水（10ml)洗涤以移除ΝΗ20Η，并且干燥以提供呈白色粉末的2-((1-(3-氟苯基)环己基)氨基)-N-羟基嘧啶-5-甲酰胺(70mg，73%)。
[0346] 实施例4:合成N-羟基-2-((1-苯基环丙基)氨基)嘧啶-5-甲酰胺(化合物D)
[0347]
[0348]
[0349]
[0350] 合成中间体2:在氮气氛围下冷却化合物1苯甲腈（250g，1.0当量）和Ti(0iPr)4 (1330ml，1.5当量）于MBTE(3750ml)中的溶液至约-10至-5°C。历经60分钟的时期逐滴添加 EtMgBr(1610ml，3.0M，2.3当量），在此期间保持反应物的内部温度低于5°C。使反应混合物 升温至15-20 °C，持续1小时。历经60分钟的时期逐滴添加 BF3-醚（1300ml，2.0当量），同时维 持内部温度低于15°C。在15-20Γ下搅拌反应混合物1-2小时，并且在剩余低水平的苯甲腈 时终止。逐滴添加 IN HCl(2500ml)，同时维持内部温度低于30°C。逐滴添加 Na0H(20%， 3000ml)以使pH达到约9.0，同时仍然维持温度低于30 °C。反应混合物用MTBE( 3L X 2)和 Et0Ac(3LX2)萃取，并且用无水Na2S04干燥合并的有机层并在减压下浓缩(低于45°C)以产 生红色油状物。添加 MTBE(2500ml)至油状物中以产生澄清溶液，并且在用干燥HC1气体鼓泡 后，固体沉淀。过滤这个固体并在真空中干燥，从而产生143g化合物2。
[0351] 合成中间体4:将化合物2(620g，1.0当量）和DIPEA(1080g，2.2当量）溶解于匪P (3100ml)中并搅拌20分钟。添加化合物3(680g，1.02当量），并且加热反应混合物至约85-95 °C，持续4小时。使溶液缓慢冷却至室温。将这个溶液倾于H 20(20L)上，并且在强烈搅拌下有 许多固体从溶液沉淀析出。过滤混合物，并且在50 °C下在减压下干燥滤饼24小时，从而产生 896g化合物4 (固体，86 · 8 % )。
[0352] 合成N-羟基-2-((1-苯基环丙基)氨基)嘧啶-5-甲酰胺(化合物D):在搅拌下冷却 皿60!1的溶液（10001111)至约0-5°(：。添加冊2011?：1(11078，10当量），随后小心添加他0〇13 (100(^，12.0当量）。在0-5°(：下搅拌所得混合物1小时，并且过滤以移除固体。一次性添加化 合物4 (450g，1.0当量)至反应混合物中，并且在10 °C下搅拌2小时直至化合物4被消耗。通过 添加 HC1(6N)将反应混合物调整至约8.5-9的pH，从而导致沉淀。在减压下浓缩混合物。在强 烈搅拌下添加水(3000ml)至残余物中，并且通过过滤收集沉淀。将产物在烘箱中在45°C下 干燥过夜(340g，79%产率）。
[0353] 实施例5:HDAC酶测定
[0354]将用于测试的化合物在DMS0中稀释至50倍最终浓度，并且制备十点3倍稀释系列。 将化合物在测定缓冲液（50mM HEPES(pH7.4)、100mM KCK0.001%吐温-20(Tween-20)、 0.05%BSA、20yM TCEP)中稀释至6倍于它们的最终浓度。将HDAC酶(购自BPS Biosciences) 在测定缓冲液中稀释至1.5倍于它们的最终浓度。在测定缓冲液中在6倍于它们的最终浓度 下稀释三肽底物和胰蛋白酶（在〇.〇5μΜ最终浓度下）。用于这些测定中的最终酶浓度是 3 · 3ng/ml (HDAC1)、0 · 2ng/ml (HDAC2)、0 · 08ng/ml (HDAC3)和2ng/ml (HDAC6)。所用最终底物 浓度是 16以]?(!104(：1)、1(^]\1(!10402)、17以]\1(!10403)和14以]\1(!10406)。一式两份添加5以1化合物 和20μ1酶至黑色不透明384孔板的孔中。将酶和化合物在室温下一起孵育10分钟。添加5μ1 底物至各孔中，将板振荡60秒，并且放置至Victor 2微量滴定板读取器中。监测荧光显色持 续60分钟，并且计算反应的线性速率。使用Graph Pad Prism，通过四参数曲线拟合来确定 IC50。
[0355] 实施例6:HDAC6抑制剂在淋巴瘤细胞杀灭方面与IMiD协同
[0356] 在这个实验中，显示组合HDAC6抑制剂(化合物A、化合物B)与来那度胺(化合物E) 或泊马度胺(化合物F)在体外导致Mino和Jekol套膜细胞淋巴瘤(MCL)细胞的存活力协同降 低。通过证明任一 IMiD分子(来那度胺或泊马度胺)与化合物C(其对HDAC6的选择性超过对I 类HDAC的选择性大于300倍)的协同相互作用来验证抑制HDAC6与这个协同作用的相关性。
[0357] 简要来说，对于存活力测定，将细胞接种于384孔板中，并且用HDAC6抑制剂(化合 物A、化合物B或化合物C)与来那度胺或泊马度胺组合以剂量矩阵形式一式四份处理。在孵 育这些细胞72小时之后，经由MTS测定(Aqueous One，Promega)评估总细胞存活力。随后确 定各剂量组合的受影响分数(Fa)，并且使用Chou-Talalay的方法评估组合指数(CI)<XI值 小于1代表协同作用，值等于1表明累加作用，并且值大于2指示拮抗作用。如可在图1A-F中 的Fa-CI图中所见，跨越广泛范围的Fa，所有HDAC6抑制剂都显示与测试的頂iD协同的有力 证据。这由Fa-CI图中大量数据点(代表个别剂量组合)低于高度严格截断值0.7所证实。
[0358] 实施例7:HDAC抑制剂与免疫调节药物（BliD)组合以协同方式 [0359]在套膜细胞淋巴瘤(MCL)细胞中起促进凋亡的作用
[0360]组蛋白脱乙酰基酶(HDAC)抑制剂已作为单一药剂在皮肤和外周T细胞淋巴瘤中显 示显著临床益处，并且已得到Π )Α批准用于这些适应症。瑞可诺司他(Ricolinostat)(化合 物A)是首创类口服可用的HDAC6选择性抑制剂(选择性超过I类HDAC约11倍）。本文描述对瑞 可诺司他与頂iD组合在MCL细胞系中的潜在活性的评估。
[0361] 图2A-C显示用化合物A或化合物B和/或IMiD处理套膜细胞淋巴瘤细胞导致细胞周 期进展降低。图2A显示用DMS0、化合物Β(2μΜ)、来那度胺(2μΜ)、泊马度胺（ΙμΜ)、或化合物B 与任一 IMiD的组合处理Jekol套膜细胞淋巴瘤细胞4天对细胞周期抑制的作用。图2Β显示用 DMS0、化合物Α(2μΜ)、来那度胺（2μΜ)、泊马度胺（ΙμΜ)、或化合物A与任一IMiD的组合处理 Mino套膜细胞淋巴瘤细胞4天对细胞周期抑制的作用。图2C显示用DMS0、化合物Β(2μΜ)、来 那度胺(2μΜ)、泊马度胺（ΙμΜ)、或化合物Β与任一 IMiD的组合处理Mino套膜细胞淋巴瘤细胞 4天对细胞周期抑制的作用。
[0362] 图3A-B显示用化合物A或化合物B和IMiD处理套膜细胞淋巴瘤细胞导致细胞凋亡 协同增加。图3A显示用DMS0、化合物Α(2μΜ)、来那度胺(2μΜ)、泊马度胺（ΙμΜ)、或化合物A与 任一 IMiD的组合处理Jekol套膜细胞淋巴瘤细胞4天对诱导凋亡的作用。图3B显示用DMS0、 化合物Β(2μΜ)、泊马度胺（ΙμΜ)、或化合物B与泊马度胺的组合处理Jekol套膜细胞淋巴瘤细 胞4天对诱导凋亡的作用。
[0363]图4是Jekol套膜细胞淋巴瘤细胞的免疫印迹照片，其显示化合物A和泊马度胺的 组合导致进一步遏制MYC、IRF4和IKZF3的表达，其都是癌症中关键转录调控子。凋亡标志物 (裂解的PARP)也由于组合处理而增加。
[0364]用化合物A和B以及来那度胺或泊马度胺以剂量矩阵形式组合处理MCL株系在体外 导致细胞存活力协同降低。细胞生长降低伴随有在组合处理之后凋亡增加，以及关键致癌 性转录因子MYC和IRF4的表达降低。总之，这些数据支持继续评估化合物A和B与任一頂iD组 合在套膜细胞淋巴瘤中的活性。
[0365] 以引用的方式并入
[0366] 在整篇本申请中引用的所有参考文献(包括参考文献、授予的专利、公布的专利申 请和共同待决的专利申请)的内容都据此整体明确并入本文。除非另外定义，否则本文所用 的所有技术和科学术语都符合为本领域普通技术人员通常所知的含义。
[0367] 等效物
[0368] 本领域技术人员仅使用常规实验就将会认识到或能够确定本文所述的本发明的 特定实施方案的许多等效物。所述等效物意图由以下权利要求涵盖。
【主权项】
1. 一种用于治疗淋己瘤的药物组合，其包含治疗有效量的组蛋白脱乙酷基酶6化DAC6) 特异性抑制剂或其药学上可接受的盐W及免疫调节药物(IMiD)或其药学上可接受的盐。2. 如权利要求1所述的组合，其中所述HDAC6特异性抑制剂是式I化合物：或其药学上可接受的盐， 其中， 环B是芳基或杂芳基； 化是芳基或杂芳基，其各自可任选被0H、面基或Ci-6-烷基取代； 并且 R是Η或Ci-6-烷基。3. 如权利要求2所述的组合，其中所述式I化合物是：或其药学上可接受的盐。4. 如权利要求2所述的组合，其中所述式I化合物是：或其药学上可接受的盐。5. 如权利要求1所述的组合，其中所述HDAC6特异性抑制剂是式II化合物： 或其药学上可接受的盐，其中， Rx和Ry连同各自所连接的碳一起形成环丙基、环下基、环戊基、环己基、环庚基、环辛基； 各Ra独立地是Cl-6-烷基、打-6-烷氧基、面基、0H、-N02、-CN或-畑2 ;并且 m是0或1。6. 如权利要求5所述的组合，其中所述式II化合物是：或其药学上可接受的盐。7. 如权利要求5所述的组合，其中所述式II化合物是：或其药学上可接受的盐。8. 如权利要求1所述的组合，其中所述免疫调节药物是式ΙΠ 化合物：或其药学上可接受的盐， 其中， X和Y中的一个是C = 0，X和Y中的另一个是C出或C = 0;并且 R2是Η或Ci-6-烷基。9. 如权利要求8所述的组合，其中所述式ΠI化合物是：或其药学上可接受的盐。10. 如权利要求8所述的组合，其中所述式ΠI化合物是： 或其药学上可接受的盐。11. 一种用于治疗有需要的受试者的淋己瘤的方法，其包括向所述受试者施用治疗有 效量的包含组蛋白脱乙酷基酶6化DAC6)特异性抑制剂或其药学上可接受的盐W及免疫调 节药物(IMiD)或其药学上可接受的盐的药物组合。12. 如权利要求11所述的方法，其中所述HDAC6特异性抑制剂是式I化合物：或其药学上可接受的盐， 其中， 环B是芳基或杂芳基； 化是芳基或杂芳基，其各自可任选被0H、面基或Ci-6-烷基取代； 并且 R是Η或Ci-6-烷基。13. 如权利要求12所述的方法，其中所述式I化合物是：或其药学上可接受的盐。14. 如权利要求12所述的方法，其中所述式I化合物是：或其药学上可接受的盐。15. 如权利要求11所述的方法，其中所述HDAC6特异性抑制剂是式II化合物： 或其药学上可接受的盐，其中， Rx和Ry连同各自所连接的碳一起形成环丙基、环下基、环戊基、环己基、环庚基、环辛基； 各Ra独立地是Cl-6-烷基、打-6-烷氧基、面基、OH、-N02、-CN或-畑2 ;并且 m是0或1。16. 如权利要求15所述的方法，其中所述式II化合物是：或其药学上可接受的盐。17. 如权利要求15所述的方法，其中所述式II化合物是：或其药学上可接受的盐。18. 如权利要求11所述的方法，其中所述免疫调节药物是式ΙΠ 化合物：或其药学上可接受的盐， 其中， X和Y中的一个是C=0，X和Y中的另一个是C出或C=0;并且 R2是Η或Ci-6-烷基。19. 如权利要求18所述的方法，其中所述式ΙΠ 化合物是：或其药学上可接受的盐。20. 如权利要求18所述的方法，其中所述式ΠI化合物是：或其药学上可接受的盐。21. 如权利要求11所述的方法，其中所述受试者先前为免疫调节药物所难治。22. 如权利要求11所述的方法，其中所述HDA巧审制剂和所述免疫调节药物W单独剂型 施用。23. 如权利要求11所述的方法，其中所述HDA巧φ制剂和所述免疫调节药物W单一剂型 施用。24. 如权利要求11所述的方法，其中所述HDA巧审制剂和所述免疫调节药物在不同时间 施用。25. 如权利要求11所述的方法，其中所述HDA巧审制剂和所述免疫调节药物在大致上相 同时间施用。26. -种用于降低细胞周期进展的方法，其包括施用包含HDA巧Φ制剂和免疫调节药物 的组合。27. -种用于增加细胞调亡的方法，其包括施用包含皿A巧Φ制剂和免疫调节药物的组 么 η 〇28. -种用于遏制癌症中转录调控子的方法，其包括施用包含HDA巧Φ制剂和免疫调节 药物的组合。
【文档编号】A61K31/495GK105939716SQ201480074711
【公开日】2016年9月14日
【申请日】2014年12月3日
【发明人】S·N·夸耶尔, S·S·琼斯
【申请人】埃斯泰隆制药公司