专利名称：一种新型的细菌限制型培养基的制作方法
技术领域：
本发明涉及一种新型的细菌限制型培养基，适合于培养大肠杆菌，志贺氏菌，耶尔森氏菌等多种兼性厌氧型革兰氏阴性细菌。本培养基各种营养成分根据细菌生长所需的最低营养进行调配，既可以使细菌得到充足的营养物质，又可以通过缺失一个或多个成分而设立细菌生长的营养压力条件，从而广泛适用于实验室中有关微生物营养需求、代谢、分类鉴定、生物量测定、菌中选育及遗传分析等多种领域。
背景技术：
细菌的生长需要从外界获取营养物质，这些营养物质主要以有机和无机化合物的形式为微生物所利用，也有小部分以分子态的气体形式被利用。根据营养物质在机体中生理功能的不同，可以将他们分为碳源、氮源、无机盐、生长因子和水五大类。培养基是人工配置，适合微生物生长繁殖或产生代谢产物的营养物质，已有细菌培养基的种类繁多，对细菌的生长繁殖作用不一常用的LB、麦芽汁培养基等天然培养基虽然营养成分丰富，但重复性差，不适合实验室的定量分析；而常用的合成培养基又不能根据实际需要变换营养成分，或者变换成分后细菌就不在生长。因此，实验人员希望能有一种重复性强、每种成分都可以根据需要进行调节、细菌生长速度不会受到很大影响的培养基能够问世。本 发明的目的在于提供一种能克服已有产品不足的细菌限制型培养基，具有稳定性好、便于重复、细菌生长速度快、所有成分可依照需要调节等特点。发明内容本发明的要点在于选择合适的组分进行合理混配，经pH调节、过滤除菌而成的一种新型的细菌限制型培养基。本发明所涉及的配方包含五大类基本营养要素碳源、氮源、无机盐、生长因子和水。碳源是在微生物生长过程中为微生物提供碳素来源的物质，它们在细胞内经过一系列复杂的化学变化后成为微生物自身的细胞物质和代谢产物，并且通常碳源物质也是微生物的能源物质。细菌对碳源物质具有选择性，糖类是一般微生物较容易利用的良好碳源和能源物质；此外，有机酸、醇、脂类、CO2及碳酸盐等也可作为微生物利用的碳源物质。在本发明中，我们采取了微生物最易采用的葡萄糖酸钾作为主要的碳源物质，并配以柠檬酸以保障培养基中碳源的充足。为微生物提供氮素来源的是氮源物质，这类物质主要用来合成细胞中的含氮物质，一般不能作为能源。能被微生物利用的氮源物质包括蛋白质及其不同程度的降解产物(胨、肽、氨基酸等)、铵盐、硝酸盐、嘌呤、嘧啶等。大分子的蛋白质通常要被进一步降解成小分子的肽和氨基酸后才能被微生物吸收利用，以此在本发明中，我们采用了 20种最易被细胞利用的左旋氨基酸直接作为氮源物质，并配以铵盐以使细菌可以用最快的速度开始生长繁殖。无机盐是为细菌的生命活动提供除碳、氮源之外的各种重要元素，是微生物生长必不可少的一类营养物质，它们在机体的生理功能主要是作为酶活性中心的组成部分、维持生物大分子和细胞结构的稳定性、调节并维持细胞的渗透压平衡、控制细胞的氧化还原电位和作为某些微生物生长的能源物质等。微生物生长所需的无机盐一般有磷酸盐、硫酸盐、氯化物以及含有钠、钾、钙、镁、铁等金属元素的化合物。根据细菌生长的基本所需，本发明中采用的无机盐成分有K2HP04、MnCl2、Na2S203、葡萄糖酸钾、CaCl2、FeSO4, MgCl2等，这些成分也可以根据人为需要进行调整，从而进行细菌的营养压力实验。生长因子通常指那些微生物生长所必须而且需要量很小，但微生物自身不能合成或合成量不足以满足机体生长需要的有机化合物，最早发现的生长因子在化学本质上都是维生素。维生素在机体中所起的作用主要是作为酶的辅基或辅酶参与新陈代谢。本发明采用了硫胺素(VBl)、DL-泛酸钙(VB5)、D-生物素(VH)这三种维生素作为培养基中的生长因子。
除了选择适宜的营养物质，培养基的配置还需要考虑到pH条件的控制和营养物质浓度及合适的配比。每种微生物对最适pH的要求不同，以鼠疫耶尔森氏菌为例，最适pH为7. 2，为了控制培养基的pH值，我们在配比各成分后用NaOH或者HCl进行条件，然后加入pH缓冲液HEPES，以保证在细菌培养的过程中产酸产气不会过多的影响培养基的pH值。本发明产品的制备方法是(I)按配比将所述组分10X盐溶液、2X稳定氨基酸溶液、IOX维生素溶液、100XHEPESU00X葡萄糖酸钾、100 X L-色氨酸、50 X L-天冬酰胺、50 X L-谷氨酰胺、100 X CaCl2溶液及IOOXFeSO4溶液混合，并搅拌均匀；(2)用NaOH或者盐酸调节溶液pH至7. 2 ;(3)加入Na2S2O3,补充去离子水至最终体积IOOml ；(4)无菌滤器过滤除菌，4°C储存。本发明同已有的细菌培养基相比具有如下优点(I)根据细菌生长所需的基本营养物质进行调配，可以使细菌得到充足的营养物质从而快速生长；(2)重复性强，可进行各种元素的准确定量；(3)每种成分都可以根据需要进行调节，可以通过缺失一个或多个成分，方便快捷地设立细菌生长的营养压力条件；(4)广泛适用于实验室中有关微生物营养需求、代谢、分类鉴定、生物量测定、菌中选育及遗传分析等多种领域；(5)稳定性好，储存液可以保存半年以上；(6)对人体无毒、无刺激，无腐蚀性、无不良气味。
具体实施方式
下面结合实施例对本发明作进一步的详细说明按照下表所列数据及其所属步骤进行配置I.盐溶液(10 X 储存液)IOOml
成份(分子量)IOx储存液浓度终浓度配置IOOOml
_mmol/L (用量g)_(mmol/L)_所需质量_
K2HPO43.H2O (228.22) 25 (0.57055)2.50.57055柠檬酸Η2θ(210.14) 100 (2.1014) 10.0 2.1014NH4C1 (53.49) 100 (0.5349) 10.0 0.5349MnCk.4 H2O (197.92)_0.1 (0.00198)_OOl_0.00198_2. IOX 维生素储存液(IOOml)
权利要求
1.本发明涉及一种新型的细菌限制性培养基，其特征在于具有如下的配方10X盐溶液、2X稳定氨基酸溶液、IOX维生素溶液、100XHEPESU00X葡萄糖酸钾、100XL-色氨酸、50 X L-天冬酰胺、50 X L-谷氨酰胺、100 X CaCl2溶液及100 XFeS04溶液以一定比例进行混合。
2.—种权利要求I所述细菌限制性培养基的制备方法，其特征在于具有如下步骤 (1)按配比将所述组分10X盐溶液、2X稳定氨基酸溶液、IOX维生素溶液、100XHEPESU00X葡萄糖酸钾、100 X L-色氨酸、50 X L-天冬酰胺、50 X L-谷氨酰胺、100XCaC12溶液及100XFeS04溶液混合，并搅拌均匀； (2)用NaOH或者盐酸调节溶液pH至7.2 ; (3)加入Na2S203，补充去离子水至最终体积IOOml； (4)无菌滤器过滤除菌，4°C储存。
全文摘要
本发明涉及一种新型的细菌限制型培养基。此培养基适合于培养大肠杆菌，志贺氏菌，耶尔森氏菌等多种兼性厌氧型革兰氏阴性细菌。本培养基各种营养成分根据细菌生长所需的最低营养进行调配，既可以使细菌得到充足的营养物质，又可以通过缺失一个或多个成分而设立细菌生长的营养压力条件；相比传统的天然培养基，本培养基具有重复性强，对细菌生长所需的所有微量元素都能严格控制等优点，可以应用于实验室中有关微生物营养需求、代谢、分类鉴定、生物量测定、菌中选育及遗传分析等多种领域。
文档编号C12R1/19GK102952763SQ20111025192
公开日2013年3月6日 申请日期2011年8月30日 优先权日2011年8月30日
发明者张洪涛, 曲奕 申请人:张洪涛, 曲奕