专利名称：一种芽孢八叠球菌及其应用的制作方法
技术领域：
本发明涉及微生物技术领域，具体涉及一种芽孢八叠球菌及其应用。
背景技术：
现代农业大规模家禽养殖和加工过程中产生的大量羽毛等角蛋白废弃物每年在全球范围内可至上千万吨，我国也达几十万吨。一方面，这些羽毛成为自然界中最丰富的角蛋白来源，但同时也成为环境治理中一个亟待解决的问题。而另一方面，研究人员发现，角蛋白富含有大量的蛋白质和氨基酸，对其营养成分的研究表明羽毛中含粗蛋白超过80 %， 各种氨基酸总量超过70 %。可见，若加以恰当处理，羽毛等角蛋白废弃物可达到生物转化的目的。自然界中角蛋白并未有聚积的现象，其原因就在于某些特殊微生物能分泌一类酶，称为角蛋白酶(keratinase，EC 3. 4. 21/24/99. 11 )，它能够特异性地分解角蛋白，使其降解为多肽和氨基酸。最早发现的能分解角蛋白的微生物是1899年Ward报道的马爪甲团囊菌(Pnygerm，之后相继发现了 30余种可降解角蛋白的微生物，主要包括真菌、放线菌和细菌3类。其中，产生蛋白酶的细菌多来自芽孢杆菌，其中研究最为深入的是地衣芽孢杆菌和枯草芽孢杆菌，个别菌株所产角蛋白酶已进行了商业化生产，如地衣芽孢杆菌PWD-I (.Bacillius licheniforrmis PWD-1)纯化后角蛋白酶活性很高，商品名称为 Versazyme 0我国在羽毛角蛋白分解菌的培养和筛选的研究领域落后于国外，分离与筛选出的高效菌种并不多，且多是真菌与放线菌，因而筛选高产而且具较好稳定性角蛋白酶新的菌群也是一个研究热点，不仅充分利用了蛋白资源，同时也大大减少了由此造成的环境污染， 具有显著的经济利益和深远的社会效益。
发明内容
本发明的目的在于针对现有技术中的上述不足，提供一种芽孢八叠球菌。本发明的另一目的是提供上述芽孢八叠球菌的应用。本发明通过以下技术方案实现上述目的
一种芽孢八叠球菌，分类命名为 Sporosarciim guangzhouensis GIMN 1. 015T=47，本发明中简称广州芽孢八叠球菌，该菌于2011年10月27日保藏于中国典型培养物保藏中心 (CCTCC)，地址中国.武汉·武汉大学，保藏编号为CCTCC NO: M2011367。该菌的16S rDNA核苷酸序列如SEQ ID NO: 1所示。该菌在平板上培养24h后的菌落呈淡黄色，圆形，表面光滑半透明，边缘整齐；革兰氏染色为阳性，菌体杆状，具有周身纤毛，运动，无荚膜，芽孢端生，椭圆形。经生理生化测定，本发明的广州芽孢八叠球菌的脲酶试验为阳性，氧化酶试验为阴性；能水解酪蛋白，对明胶、淀粉、吐温80及酪氨酸不具水解性；硝酸还原测定为阳性，苯丙氨酸测定为阴性；不能利用D-葡萄糖、D-甘露糖及D-木糖。生长温度范围15、5 °C，以
3及生长pH值范围为5. 5 11.5。该菌株具有分解羽毛的功能，能够产生角蛋白酶，经测定，该菌培养48小时后，蛋白酶活性达105U/ml，因此可用于生产角蛋白酶的工业生产中，对角蛋白酶的研究和利用具有重要价值。
图1.广州芽孢八叠球菌的透射电子显微镜照片(6000倍)。图2.广州芽孢八叠球菌及部分相关菌株依据16S rDNA序列构建的系统发育树。图3.广州芽胞八叠球菌降解羽毛的效果图，其中试管47为加入广州芽胞八叠球菌的实验组，CK为空白对照组。
具体实施例方式以下结合具体实施例进一步解释本发明，但不对本发明构成任何限定。以下实施例中除特殊说明外，均为本领域常规试剂和方法步骤。实施例1广州芽孢八叠球菌的分离
土样取自广东省广州市华南农业大学校内，混入鸡羽毛，待羽毛分解后收集土样，自然阴干，4°C保存备用。取IOg上述土样放入装有90mL无菌水的三角瓶中(带玻璃珠)，在180 rpm转速下振荡30分钟，静置10分钟后，取上层液稀释10倍后，依次制成10-4、10_5、10-6 土壤稀释液，取0. ImL均勻涂布在NA琼脂培养基平板上，翻转平板置于30°C培养箱中培养2天。对每个菌落形态不同的菌株做2个平行纯化平板。挑取初筛单菌落于羽毛补给性培养基中， 置于30°C摇床，120rpm培养，以未接种的培养基作对照，观察羽毛降解情况。NA琼脂培养基配方蛋白胨10. 0g，牛肉膏粉3. 0g，氯化钠5g，琼脂20. 0g，水 IOOOml ；pH 7. 4士0. 2。羽毛补给性培养基配方蛋白胨10. 0g，牛肉膏粉3. 0g，氯化钠5. OgjK 1000ml， 0. 1% 天然羽毛，pH 7. 4士0. 2。经过羽毛补给性培养基的进一步培养，筛选出分解羽毛效率最高的菌株，经过形态学及生理生化和DNA鉴定后，命名为分orosarciaa guangzhouensis GIMN 1.015τ=47，简称广州芽孢八叠球菌。实施例2广州芽孢八叠球菌的生物学性状及生理生化和分子鉴定 1.形态特征
广州芽孢八叠球菌在电镜下的形态见于图1，该芽孢八叠球菌在平板上培养24h后的菌落呈淡黄色，圆形，表面光滑半透明，边缘整齐；革兰氏染色为阳性，菌体杆状，具有周身纤毛，运动，无荚膜，芽孢端生，椭圆形。2.生理生化特征
经生理生化测定，本发明的广州芽孢八叠球菌的脲酶试验为阳性，氧化酶试验为阴性； 能水解酪蛋白，对明胶、淀粉、吐温80及酪氨酸不具水解性；硝酸还原测定为阳性，苯丙氨酸测定为阴性；不能利用D-葡萄糖、D-甘露糖及D-木糖。生长温度范围15 45°C，以及生长PH值范围为5. 5 11.5。
将实施例1筛选出的广州芽孢八叠球菌(5 guangzhouensis GIMN1. 015 τ=47)和与其同源性最高的芽孢八叠球菌菌株(具体名称见表1)进行微生物学特性分析，结果见表 1.
表1.广州八叠球菌和与其同源性最高的芽孢八叠球菌菌株微生物学特征比较
权利要求
1.一种芽孢八叠球菌,分类命名为分orosarciaa guangzhouensis GIMN 1. 015τ=47, 该菌于2011年10月27日保藏于中国典型培养物保藏中心，保藏编号为CCTCC NO: M2011367。
2.根据权利要求1所芽孢八叠球菌，其特征在于该菌的16SrDNA核苷酸序列如SEQ ID N0:1所示。
3.权利要求1或2所述芽孢八叠球菌在分解角蛋白中的应用。
4.权利要求1或2所述芽孢八叠球菌在生产角蛋白酶中的应用。
全文摘要
本发明公开了一种芽孢八叠球菌及其应用。该芽孢八叠球菌(SporosarcinaguangzhouensisGIMN1.015T=47)于2011年10月27日保藏于中国典型培养物保藏中心，保藏编号为CCTCCNO:M2011367。该菌株的16SrDNA核苷酸序列如SEQIDNO:1所示。本发明的广州芽孢八叠球菌能够产生角蛋白酶，经测定，该菌培养48小时后，蛋白酶活性达105U/ml，因此可用于生产角蛋白酶，对角蛋白酶的研究和利用具有重要的价值。
文档编号C12R1/01GK102399726SQ201110371310
公开日2012年4月4日 申请日期2011年11月21日 优先权日2011年11月21日
发明者姚青, 朱红惠, 欧文韵, 羊宋贞, 顾振红 申请人:华南农业大学