专利名称：一种啤酒严格厌氧菌检测专用培养基的制作方法
技术领域：
本发明涉及到一种啤酒严格厌氧菌检测专用培养基，属于微生物发酵领域。
背景技术：
严格厌氧菌在国外较多报道，国内啤酒业较少报道有检出。一是国内很少有专门针对严格厌氧菌的检测内容，二是严格厌氧菌对氧的要求比较苛刻，而国内早期啤酒酿造对氧的质控水平较低。目前随着中国啤酒酿造质控水平的提高，啤酒中溶氧量的越来越低， 以前只在国外培养到的绝对厌氧菌如果胶杆菌(Pectinatus sp.)和巨球菌(Megasphaera cerevisiae)的污染风险不断增加。严格厌氧菌的生长会产生过多的乙酸、丁酸、乳酸等多种脂肪酸以及H2S和甲醇硫等一些严重影响风味的物质，使被污染啤酒产生令人讨厌的臭鸡蛋气味的生长会产生过多的乙酸、丁酸、乳酸等多种脂肪酸以及H2S和甲醇硫等一些严重影响风味的物质，使被污染啤酒产生令人讨厌的臭鸡蛋气味。因此，对严格厌氧菌的检测技术和选择培养基进行预研，建立起实用的检测技术，能够增强对产品的质量控制和检测水平，应对可能出现的严格厌氧菌污染风险。由于严格厌氧菌的独特的特性，现在很少有报道关于该种类有害菌的培养分离报道，本发明开发了一种利用严格厌氧菌产生独特的代谢产物的特性，与培养基中的组分产生显色反应的筛选培养基。
发明内容
该发明培养基配方和制作方法如下酵母浸提物0. 3-0. 6 %，蛋白胨0. 2-0. 4 %，乳酸钠1_3 %，抗坏血酸 0. 1-0. 3% ；硫代硫酸钠(Na2S204 · 5H20) :0. 01-0. 03%，醋酸铅0. 01-0. 03%，亚甲蓝(美兰):0. 0002-0. 0005%，苯乙醇(PEA) 0. 1-0. 3%，琼脂粉(ager) 1. 5%0各成分精确称量后装入一定体积(根据实验需要)的锥形瓶内加蒸馏水，各成分混勻后，在电炉上加热煮沸3-5分钟(培养基由蓝色变成无色)，各成分完全溶解为止。温度降到50°C左右倒平板使用。该平板一定要在严格厌氧的厌氧盒或者厌氧罐或者厌氧管中使用。
图1是有氧时培养基。图2是无氧时培养基。图3是pc和乳酸菌混合接种。图 4是pf和乳酸菌混合接种。
具体实施例方式实施例1培养基的配制方法称取酵母浸提物0. 5g，蛋白胨0. 3g，乳酸钠1. 7g，抗坏血酸0. Ig ；硫代硫酸钠 (Na2S204 ·5Η20) :0. Olg，醋酸铅0. 02g，亚甲蓝(美兰):0. 0002g，苯乙醇(PEA) :0. 2g，琼脂粉(ager) 1. 5g。各成分精确称量后装入一定体积(根据实验需要)的锥形瓶内加蒸馏水100ml， 各成分混勻后，在电炉上加热煮沸3-5分钟(培养基由蓝色变成无色)，各成分完全溶解为止。温度降到50°C左右倒平板使用。该平板一定要在严格厌氧的厌氧盒或者厌氧罐或者厌氧管中使用。实施例2培养基的使用方法接种菌种为果胶杆菌的两个菌株Pectinatus cerevisiiphilus和 Pectinatusfrisingensis以及乳酸菌，接种梯度为10_3梯度，在厌氧培养两个星期。 醋酸铅和被果胶杆菌释放的硫化氢反应生成硫化铅形成了黑色菌落。由于乳酸菌不产生硫化氢，它们的菌落仍然是乳白色的。因此可以很明显的区分鉴定出严格厌氧菌。具体的菌落颜色和效果可以见说明书附图部分。
权利要求
1.一种啤酒严格厌氧菌检测鉴定专用培养基，其配方如下酵母浸提物0. 3-0. 6 %，蛋白胨0. 2-0. 4 %，乳酸钠:1-3%,抗坏血酸0. 1-0. 3 % ； 硫代硫酸钠(Na2S204 · 5H20) :0. 01-0. 03 %，醋酸铅.0· 01-0. 03 %，亚甲蓝(美兰) 0. 0002-0. 0005%，苯乙醇(PEA) 0. 1-0. 3%，琼脂粉(ager) 1. 5%0
2.如权利要求1所述的啤酒严格厌氧菌检测鉴定专用培养基，其制作使用方法如下 将以上各成分精确称量后装入一定体积(根据实验需要)的锥形瓶内加蒸馏水，各成分混勻后，在电炉上加热煮沸3-5分钟(培养基由蓝色变成无色)，各成分完全溶解为止，温度降到50°C左右倒平板使用。该平板一定要在严格厌氧的厌氧盒或者厌氧罐或者厌氧管中使用。
3.如权利要求1所述的啤酒严格厌氧菌检测鉴定专用培养基，其各组分优选为称取酵母浸提物0. 5g，蛋白胨0. 3g，乳酸钠1. 7g，抗坏血酸0. Ig ；硫代硫酸钠 (Na2S204 *5H20) :0. Olg，醋酸铅0. 02g，亚甲蓝(美兰):0. 0002g，苯乙醇(PEA) :0.2g，琼脂粉(ager) 1. 5g，溶解于IOOml水中。
4.如权利要求1所述的啤酒严格厌氧菌检测鉴定专用培养基用于分离啤酒中严格厌氧菌的用途。
全文摘要
本发明提供一种啤酒严格厌氧菌检测鉴定专用培养基，利用严格厌氧菌产生独特的代谢产物的特性，与培养基中的组分产生显色反应的筛选培养基，醋酸铅和被果胶杆菌释放的硫化氢反应生成硫化铅生成黑色菌落。其他污染菌不产生硫化氢，它们的菌落仍然是乳白色的。因此可以很明显的区分鉴定出严格厌氧菌，该发明对严格厌氧菌的检测鉴定更简单明了，能够增强对产品的质量控制和检测水平，应对可能出现的严格厌氧菌污染风险，效果显著。
文档编号C12R1/01GK102533929SQ201110383270
公开日2012年7月4日 申请日期2011年11月28日 优先权日2011年11月28日
发明者宋绪磊, 林智平, 王德良, 袁雪萍, 贾凤超, 郭立芸 申请人:中国食品发酵工业研究院, 北京燕京啤酒股份有限公司