专利名称：长链非编码rna作为疾病诊断血液分子标志物的应用的制作方法
技术领域：
本发明属于分子生物学领域，具体地，本发明涉及长链非编码RNA作为疾病诊断血液分子标志物的应用。
背景技术：
癌症是目前威胁人类生存、影响健康的最主要疾病。前列腺癌(Prostatecancer, PCa)是发达国家发病率最高的男性恶性实体肿瘤之一，占全球癌死亡率第6位。我国前列腺癌的发病率近年来一直处于显著的上升趋势。在北京、上海、广州等医学、经济发达城市，前列腺癌发病率已位于当地十大常见肿瘤之列。来自上海市疾病控制中心的资料显示，前列腺癌的发病率自2002年起已跃居男性泌尿生殖系恶性肿瘤的首位。流行病学数据还显示，中国前列腺癌发病率已从1993年的1.71/10万男性人口增加到2005年的
7.9/10万男性人口，年增幅13%。依次推算，预计至2020年，我国前列腺癌发病率将超过40/10万人口男性，接近欧美国家水平，成为危害男性健康的主要肿瘤“杀手”。早期前列腺癌局限于包膜内，但当肿瘤扩散到包膜外或远处转移时，肿瘤的治疗就显得相当困难，且预后效果很差。因此，前列腺癌的早期诊断就显得尤为重要。前列腺特异性抗原(Prostate specific antigen, PSA)作为目前诊断前列腺癌最为公认、应用最为广泛的分子诊断标记物，在目前前列腺癌的诊断方面起着极为重要的作用，但它在明显提高肿瘤诊断率的同时也有着越来越大的局限性。例如，PSA处于正常范围(<4.0ng/ml)，前列腺穿刺阳性率为15.2% ；^PSA的诊断灰区(4-10ng/ml)，前列腺穿刺及反复穿刺阴性率为78%和90%。美国一项临床随机对照试验表明，PSA作为PCa的诊断标记物不能降低癌死亡率。因此亟需找到PCa特异性更高的分子诊断标记物和相关的检测技术。
发明内容
本发明的目的就是提供长链非编码RNA作为疾病诊断血液分子标志的应用。在本发明的第一方面，提供了一种分离的IncRNA，所述的IncRNA选自:(I)序列如SEQ ID Ν0:η所示的IncRNA，其中η为选自1-9的正整数；或(2)与SEQ ID Ν0:η所示序列互补的IncRNA，其中η为选自1_9的正整数。在另一优选例中，所述的IncRNA为序列如SEQ ID NO:2, SEQ ID Ν0:6、或SEQ IDNO:7 所示的 IncRNA。在另一优选例中，所述的IncRNA为序列SEQ ID N0:7所示的IncRNA。在另一优选例中，所述的IncRNA分离自人或非人哺乳动物的血液。在另一优选例中，所述的血液为血浆和/或血清。在另一优选例中，所述的血液不包括血细胞。在另一优选例中，所述的非人哺乳动物为小鼠、大鼠、兔、猪、牛、羊等。在另一优选例 中，所述的IncRNA分离自人。
在本发明的第二方面，提供了一种IncRNA集，所述的IncRNA集由序列如SEQIDNO: 1-9中所示的至少2种IncRNA所构成。在另一优选例中，所述的IncRNA集至少包括如SEQ ID N0:6所示的IncRNA。在另一优选例中，所述的IncRNA集由序列如SEQ ID NO: 1-9中所示的9种IncRNA所构成。在本发明的第三方面，提供了一种分离的前体IncRNA，所述的前体IncRNA能在人细胞内剪切并表达成第一方面所述的IncRNA。在另一优选例中，所述的前体IncRNA分离自人或非人哺乳动物的血液。在本发明的第四方面，提供了一种分离的多核苷酸，所述的多核苷酸能被人细胞转录成第一方面所述的IncRNA。
在另一优选例中，所述的多核苷酸具有式I所示的结构:Seq正向-X-Seq反向式I,式I 中，SeqttS能在人细胞中表达成所述的IncRNA的核苷酸序列；Seqfi^1为与本上互补或完全互补的核苷酸序列；X为位于Seqtt和Seq&^^间的间隔序列，并且所述间隔序列与Seqtt和Seq反向不互补；并且式I所示的结构在转入人细胞后，形成式II所示的二级结构:
权利要求
1.一种分离的IncRNA,其特征在于,所述的IncRNA选自: (1)序列如SEQID Ν0:η所示的IncRNA，其中η为选自1_9的正整数；或 (2)与SEQID Ν0:η所示序列互补的IncRNA，其中η为选自1_9的正整数。
2.如权利要求1所述的IncRNA，其特征在于，所述的IncRNA分离自人或非人哺乳动物的血液。
3.一种IncRNA集，其特征在于，所述的IncRNA集由序列如SEQ ID N0:l_9中所示的至少2种IncRNA所构成。
4.一种分离的多核苷酸，其特征在于，所述的多核苷酸能被人细胞转录成权利要求1所述的IncRNA。
5.—种载体，其特征在于，它含有权利要求1所述的IncRNA,或权利要求4所述的多核苷酸。
6.权利要求1所述的IncRNA、或权利要求3所述的IncRNA集的用途，其特征在于，用于制备癌症诊断的芯片或试剂盒。
7.一种IncRNA芯片，其特征在于，所述的IncRNA芯片包括: 固相载体；以及有序固定在所述固相载体上的寡核苷酸探针，所述的寡核苷酸探针特异性地对应于SEQ ID NO: 1-9所示的部分或全部序列。
8.权利要求7所述的IncRNA芯片的用途，其特征在于，用于制备癌症诊断的试剂盒。
9.一种试剂盒，其特征在于，所述的试剂盒中含有权利要求7所述的IncRNA芯片。
10.一种分离并检测血液中IncRNA或其片段的方法，所述的IncRNA或其片段是以表达丰度不同的片段存在，其特征在于，包括步骤: (1)获得样本血液的总RNA，并且逆转录所述的RNA，获得DNA； (2)对所述的DNA进行检测和分离，获得相对应的血液中IncRNA或其片段的信息。
全文摘要
本发明涉及长链非编码RNA作为疾病诊断血液分子标志物的应用。具体地，本发明人成功分离并检测了人或非人哺乳动物血液中长链非编码的RNA(lncRNA)；人或非人哺乳动物的血液中的长链非编码的RNA是以表达丰度不同的片段稳定存在的；血液中来源于lncRNA MALAT-1的短链RNA(命名为MD-miniRNA)来源于前列腺癌(Prostate cancer,PCa)细胞，并分泌释放入血；体外培养的PCa细胞能分泌MD-miniRNA，并释放到培养液中；在移植瘤小鼠血浆中能检测到MD-miniRNA的高表达。此外，MD-miniRNA的表达与PCa的发病呈现正相关，MD-miniRNA对区分前列腺穿刺阳性和阴性病人的敏感性和特异性都分别高达40%以上和80%以上。因此，MD-miniRNA是一种新型的癌症(尤其是前列腺癌)血液分子诊断标记物，能显著提高诊断的准确性。
文档编号C12N15/63GK103146688SQ20121033760
公开日2013年6月12日 申请日期2012年9月12日 优先权日2012年9月12日
发明者孙颖浩, 任善成, 王富博, 沈剑 申请人:上海长海医院