专利名称：一种涂抹平板菌落的方法
技术领域：
本发明属于微生物领域，具体涉及一种涂抹平板菌落的方法。
背景技术：
涂抹平板计数是根据微生物在固体培养基上所形成的单个菌落，即是由一个单细胞繁殖而成，这一培养特征设计的计数方法，即一个菌落代表一个单细胞。计数时，首先将待测样品制成均匀的系列稀释液，尽量使样品中的微生物细胞分散开，使成单个细胞存在(否则一个菌落就不只是代表一个细胞)，再取一定稀释度、一定量的稀释液接种到平板中， 使其涂抹均匀分布于平板中的培养基内。经培养后，由单个细胞生长繁殖形成菌落，统计菌落数目，即可计算出样品中的含菌数。此法所计算的菌数是培养基上长出来的菌落数，故又称活菌计数，是国家食品卫生标准规定的重要微生物活菌检测计数方法之一。广泛应用于某些成品检定(如杀虫菌剂等)、生物制品检验、土壤含菌量测定以及食品、环境卫生和科研等领域。涂抹平板计数法的关键在于涂抹效果，这直接影响到计数结果的准确性。目前，国内外大都采用涂抹棒(或刮铲)进行平板涂抹。但涂抹棒(或刮铲)涂抹的缺点是操作要求比较高，且费时、费力，最重要的是涂抹棒(或刮铲)在来回涂抹的时产生的剪切力，会使细胞结构破裂而死亡，从而出现检测结果偏低的现象。
发明内容
本发明的目的是提供一种更加方便、快速和可靠的涂抹平板菌落的方法，以克服现有技术中用涂抹棒(或刮铲)时操作要求比较高，且费时、费力以及检测结果偏低等缺点。本发明的涂抹平板菌落的方法，其特征在于，将经均质处理使所含活菌分散均匀的样液移到含培养基的培养皿中，然后倒入若干个已灭菌的钢珠，盖上培养皿盖，晃动培养皿，使里面的钢珠动起来，并朝不同方向做无规则运动，使样液分散均匀，再停止晃动，将钢珠倒出，反转培养皿，常规条件下培养。优选，所述的培养皿为直径为9cm的培养皿，所述的钢珠的直径为3mm,表面光洁度为Vll,所述在培养皿中倒入若干个已灭菌的钢珠，其数量为6 10个/个培养皿，进一步优选为7个。本发明的有益效果如下I.本发明利用钢珠涂板，钢珠涂板可以克服用涂抹棒或刮铲时产生的剪切力，减少因此导致的细胞结构破裂死亡，提高了涂抹平板计数的准确率。2.本发明通过轻微晃动培养皿，使钢珠做无规则的运动来涂抹，能迅速将样液涂布均匀，不需要不停的转动涂抹棒或刮铲，较涂抹棒或刮铲操作简便，省力。3.本发明可以通过多个培养皿的重叠，同时晃动达到多个培养皿进行涂抹，解决了用涂抹棒(或刮铲)一次只能涂抹一个的问题，这既省力又省时，提高效率，明显减少了常规用涂抹棒(或刮铲)涂抹的工作量。4.本发明在整个涂抹过程中，培养皿开启的时间很短，所以培养基与外界接触的时间短，从而克服了涂抹棒(或刮铲)涂抹时始终要使培养皿处于开启的状态，与外界接触时间较长的缺点，显著降低涂抹时被污染的机率。
具体实施例方式以下实施例是对本发明的进一步说明，而不是对本发明的限制。以下实施例(除实施例I夕卜)所用的钢珠直径为3mm的小钢珠，其表面光洁度VII，可以在2mL离心管中装入7粒直径3_的小钢珠，然后置于121 °C高压灭菌O. 5h备用。涂抹棒为澳大利亚进口的微生物实验专用耐高温有机塑料涂抹棒，外三角边长6cm，内三角边长4. 5cm,直径为O. 5cm，手柄长18. 5cm。实施例I :以产酸克雷伯氏菌(Klebsiella oxytoca)为样品材料,从斜面培养基上挑取一环产酸克雷伯氏菌SZ7-1到LB培养液(公知培养基，250mL的三角瓶装50mL培养液)中，然后在30°C温度下，150r/min转速的摇床中震荡培养24h。用移液枪取ImL培养好的菌液，采用梯度稀释法稀释至10_7，并从最后稀释好的、摇晃打散使活菌分散均匀的试管中取IOOyL加入不同的灭菌的、含有LB固体培养基的直径9cm的培养皿中。将培养皿上盖开启一小口，在不同的培养皿中倒入不同个数的已经灭菌好的直径为3_、表面光洁度Vii的小钢珠，钢珠的个数见表I所示，合上培养皿盖子，然后轻轻的晃动培养皿，使里面的钢珠动起来，并朝不同方向做无规则运动，使菌液分布均匀，几秒钟后，停止晃动，将钢珠倒出，盖上培养皿盖，反转培养皿，置于室温下常规培养。待长出单菌落后进行统计，其结果如表I所示。表I :不同钢珠数目涂布试验结果(CFU/mL)
权利要求
1.一种涂抹平板菌落的方法，其特征在于，将经均质处理使所含活菌分散均匀的样液移到含培养基的培养皿中，然后倒入若干个已灭菌的钢珠，盖上培养皿盖，晃动培养皿，使里面的钢珠动起来，并朝不同方向做无规则运动，使样液分散均匀，再停止晃动，将钢珠倒出，反转培养皿，常规条件下培养。
2.根据权利要求I所述的涂抹平板菌落的方法，其特征在于，所述的培养皿为直径为9cm的培养皿，所述的钢珠的直径为3mm，表面光洁度为VII，所述在培养皿中倒入若干个已灭菌的钢珠，其数量为6 10个/个培养皿。
3.根据权利要求2所述的涂抹平板菌落的方法，其特征在于，所述的钢珠数量为7个/个培养皿。
全文摘要
本发明公开了一种涂抹平板菌落的方法。它是将经均质处理使所含活菌分散均匀的样液移到含培养基的培养皿中，然后倒入若干个已灭菌的钢珠，盖上培养皿盖，晃动培养皿，使里面的钢珠动起来，并朝不同方向做无规则运动，使样液分散均匀，再停止晃动，将钢珠倒出，反转培养皿，常规条件下培养。本发明利用钢珠涂板，钢珠涂板可以克服用涂抹棒或刮铲时产生的剪切力，减少因此导致的细胞结构破裂死亡，提高了涂抹平板计数的准确率。本发明通过轻微晃动培养皿，使钢珠做无规则的运动来涂抹，能迅速将样液涂布均匀，不需要不停的转动涂抹棒或刮铲，较涂抹棒或刮铲操作简便，省力。
文档编号C12N1/00GK102876577SQ201210371239
公开日2013年1月16日 申请日期2012年9月28日 优先权日2012年9月28日
发明者康丽华, 袁辉林, 王胜坤, 陆俊锟, 廖绍波, 马海宾, 江业根 申请人:中国林业科学研究院热带林业研究所