专利名称：一种抗流感牛奶及其制备方法
技术领域：
本发明涉及一种预防流感的牛奶及其制备方法，特别涉及一种从红曲菌中提取活性成分制备红曲抗流感牛奶的方法。
背景技术：
红曲古代称丹曲，是以红曲霉为主的一种独特的酒曲，色泽红艳、口味香醇，它具有耐酸、耐高温的特性，在工艺制造上也有独到之处。所以，《本草纲目》里评价它说“此乃人窥造化之独到巧者也”和“盖奇药也”。近年来，由于合成色素的安全性受到挑战，天然色素日益受到人们的重视，特别是具有保健功能的红曲色素更受消费者的青睐。红曲除作为安全食用着色剂外还含有降低血 脂等有效的生理活性物质及防腐、保鲜物质，具有“天然、营养、多功能”的多重优点，是一种适应国际发展大趋势的优良食品添加剂，其巨大的应用潜力备受世人关注。红曲具有独特的医疗功效。元钦膳太医忽思慧在《饮膳正要》中说，红曲有“健脾、益气、温中”之功效。《本草纲目》也记载，红曲主治“消食治血，健脾养胃”。随着现代人们健康意识的加强和科技水平的进步，对于红曲的药理活性物质研究甚丰，主要物质类型及其功能有如下几种I、降胆固醇活性物质在发达国家，冠心病是死亡的主要原因之，美国一年有80万人死于该病，约占年死亡率的40%。而成年人胆固醇70%来自于体内生物合成，30%是由食物摄入，在胆固醇合成途径中，已经查明经甲基戊二酰辅酶以A (HMG-CoA)还原酶是控制合成速度的关键酶。因此，抑制了这个酶的活性，就能有效地减少或阻断体内胆固醇的合成，从而达到防治高血脂病的目的。1979年远藤章等首先报道从红色红曲霉M. ruber的发酵液中分离出一种强有力的HMG-CoA还原酶的抑制剂,这种物质称为莫纳可林K (monacolin K),现已知的莫钠可林K 及关联物质有 Monacolin J, K, L, X 和 Dihydrornrnevinolin 和 Dihydrornevinolin L0Monacolin类物质的浓度只要达到O. 001 O. 005ug / ml,胆固醇的合成就会受阻。向动物血液中注入少量的Monacolin K，不仅可以降低胆固醇，而且对重症高胆固醇血症患者也极为有效。特别是对导致动脉硬化最严重的低密度脂蛋白有优先降低的作用，这是这类活性物质药理的一大特点。这类降胆固醇药物已进入临床应用。2、降血压、降血糖活性物质V-胺基丁酸(GABA)GABA为大脑的化学传递物质，可调节大脑的兴奋及抑制。除了治疗各种癫痫外，还具有降血压、降血糖作用。日本国立健康研究所进行饲料添加“红曲培养物”的动物试验中，发现添加O. 2% O. 3% “红曲培养物”的饲料可使患有先天性高血压症老鼠的血压由超过200mmHg降至180mmHg以下,其有效成分为Y -胺基丁酸及Glucosamine或红曲霉的其他细胞壁成分。日人山内等直接以红曲培养物做饲料进行试验,可使兔子的血清胆固醇降低15% 18%，饲喂后O. 5h体内血糖比对比组降低23% 33%，I小时后血糖仍降低19% 29%。3、麦角固醇麦角固醇是维生素D2的前体，当它受到紫外线照射后即转化为维生素D2。维生素D2可用于防治婴幼儿佝偻病，对促进孕妇、老年人对钙、磷的吸收有明显的生理作用。自然界中维生素D2含量并不丰富，一般食品中含量很少，因此需要适当补充，尤其是婴幼儿及孕妇、乳母等。红曲霉菌中许多菌株能够产生麦角固醇，有的高达2%以上。另外，麦角固醇还是生产“考的松”、激素黄酮体的原料。在食品中添加红曲，对人类防治维生素D缺乏症有重要作用。红曲抗流感牛奶是一种健康、安全并具有一定医疗作用的新型功能性食品，长期饮用红曲抗流感牛奶，可以增加机体免疫功能，抵抗流感等呼吸道病毒的感染，减轻感冒患者的症状，同时还能改善肠道微生态环境，清除肠道中病原菌和腐败菌及其产生的毒素，促进机体健康。红曲抗流感牛奶对人体安全无害。具有很好的经济效益和社会效益。目前关于红曲抗流感牛奶的研究鲜有报道。
发明内容
本发明目的在于公开一种从红曲菌中提取红曲素的方法，本发明另一目的在于公开一种含有上述红曲素的牛奶及其制备方法。本发明目的是通过如下技术方案实现的本发明的乳液原料组成为牛奶100体积份，红曲素O. 0Γ2体积份。本发明乳液的原料组成优选为牛奶100体积份，红曲素O. 5体积份。本发明乳液的原料组成优选为 牛奶100体积份，红曲素O. 25体积份。本发明乳液的原料组成优选为牛奶100体积份，红曲素I. 5体积份。其中红曲素的制备方法如下I、红曲菌种培养(I)配制斜面菌种培养基称量切成小块状去皮马铃薯40 60重量份，向其中加入90-110体积份去离子水，煮沸I小时后将所得混合物过滤，所得过滤清液中加入O. 5重量份蛋白胨，根据滤液体积加琼脂I. 5% 2%，加热待混合液全部溶化后分装入灭菌试管中，放入高压灭菌锅内，使用O. 06 O. IMPa压力灭菌20 40min，灭菌后将试管略倾斜制成斜面，等待其自然冷却；(2)红曲菌接种培养在无菌条件下在(I)处所得斜面菌种培养基中接种红曲霉原菌，在生化培养箱内经32 35°C培养7 8天，用无菌移液管吸取O. 2^1%的无菌冰醋酸溶液5体积份至试管斜面培养种子内，搅匀后用无菌吸管吸取2 3体积份菌液备用；(3)红曲菌种三角瓶培养将2(Γ40重量份大米装入三角瓶中，洗净后浸泡3 4小时，将水倒出并浙净多余的水，O. 06、. IMPa压力下灭菌2(Γ30分钟，冷却后用无菌竹筷将米团打散，加入(2)处所备用的菌液I体积份，摇匀后放入25 30°C生化培养箱培养，待米粒开始发红后，每天摇动三角瓶，将瓶壁上的水珠滚到米上，视情况加入无菌水调节湿度，培养1(Γ15天，将曲种倒出.在4(T45°C下进行烘干，使水分降到12%以下，但不低于7%，得红曲菌种A ; 将红曲菌种A加入100体积份的3%冰醋酸制成悬浮液B，待扩大培养使用；(4)扩大培养选择颗粒饱满、新鲜的大米，除去杂物，将8(Γ120重量份的大米装入三角瓶中，洗净后浸4飞h，洗净后浙净多余水分，蒸5 15min，以米透心为度，浙净多余的水，O. 06、· IMPa压力下灭菌30min，降温至35 40°C后接种(3)中获得的菌种A悬浮液B ;每100重量份灭菌后的米接种悬浮液B 15体积份，用无菌竹筷搅拌均匀，于25 35°C无菌生化培养箱中培养3 4天，培养期间每天摇动三角瓶，将瓶壁上的水珠滚到米上；(5)待全部米粒都呈深红色，根据曲料干湿程度，进行第一次凋湿，湿度70-90%，向曲料上喷洒一定量的冰醋酸溶液至溶液pH为3. 5，并拌匀，即为洗曲，保持32 35°C保温培养,每7、小时摇动三角瓶混勻一次；2、24小时后进行洗曲第二次，每隔4小时翻拌一次；3、24小时后进行洗曲第三次，每隔6h翻拌一次；4、每批曲7 8天可得，4(T45 °C下烘干，得成曲C ;5、成曲C加入:Γ5体积倍无菌超纯水，制成均浆；加入3 8体积倍无菌超纯水，放置-10°C -30°C反复冻融2 3次；在温度4 8°C下将冻融的均浆以每分钟8000转离心1(Γ30分钟，去除沉淀；用切向流超滤设备截留分子量〈30000道尔顿上清液，即为红曲素；除菌过滤，收集备用。红曲素的制备方法优选为I、红曲菌种培养(I)配制斜面菌种培养基称量切成小块状去皮马铃薯50重量份，向其中加入100体积份去离子水，煮沸I小时后将所得混合物过滤，所得过滤清液中加入O. 5重量份蛋白胨，根据滤液体积加琼脂2%，加热待混合液全部溶化后分装入灭菌试管中.放入高压灭菌锅内，使用O. IMPa压力灭菌30分钟，灭菌后将试管略倾斜制成斜面，等待其自然冷却；(2)红曲菌接种培养在无菌条件下在(I)处所得斜面菌种培养基中接种红曲霉原菌，在生化培养箱内经32 35°C培养7 8天，用无菌移液管吸取O. 2%的无菌冰醋酸溶液5体积份至试管斜面培养种子内，搅匀后用无菌吸管吸取2体积份菌液备用；(3)红曲菌种三角瓶培养将40重量份大米装入三角瓶中，洗净后浸泡T4h，将水倒出并浙净多余的水，O. IMPa压力下灭菌30min，冷却后用无菌竹筷将米团打散，加入(2)处所备用的菌液I体积份，摇匀后放入3(T35°C生化培养箱培养，待米粒开始发红后，每天摇动三角瓶，将瓶壁上的水珠滚到米上，视情况加入无菌水调节湿度，培养12天，将曲种倒出，在4(T45°C下进行烘干，使水分降到12%以下，但不低于7%，得红曲菌种A ;将红曲菌种A加入100体积份的3%冰醋酸制成悬浮液B，待扩大培养使用；(4)扩大培养选择颗粒饱满、新鲜的大米，除去杂物，将100重量份大米入三角瓶中，洗净后浸4 6h，洗净后浙净多余水分，蒸5 15分钟，以米透心为度，浙净多余的水，O. IMPa压力下灭菌30分钟，降温至35 40°C后接种(3)中获得的菌种A悬浮液B ;每100重量份灭菌后的米接种悬浮液B15体积份，用无菌竹筷搅拌均匀，于25 30°C无菌生化培养箱中培养3 4天，培养期间每天摇动三角瓶，将瓶壁上的水珠滚到米上；(5)待全部米粒都呈深红色，根据曲料干湿程度，进行第一次凋湿，向曲料上喷洒一定量的冰醋酸溶液至溶液PH为3. 5，并拌匀，即为洗曲，保持32 35°C保温培养，每7 8小时摇动三角瓶混勻一次；2、24小时后进行洗曲第二次，每隔4小时翻拌一次3、24小时后进行洗曲第三次，每隔6小时翻拌一次4、每批曲7 8天可得，4(T45 °C下烘干，得成曲C ;5、成曲C加入5体积倍无菌超纯水,制成均衆；加入4体积倍无菌超纯水,放置于_20°C反复冻融3次；在温度4°C下将冻融的均浆，以每分钟8000转离心20分钟，去除沉淀；用切向流超滤设备截留分子量〈30000道尔顿的上清液，即为红曲素；除菌过滤，收集备用；每15(Γ250体积份鲜奶中加入通过红曲素的制备方法所制备的红曲素O. θΓ . 5
体积份，即为红曲抗流感牛奶。上述红曲霉原菌可以天然分离，也可以向保藏机构(菌株保藏编号CPCC400017，中国医学科学院医药生物技术研究所)购买。本发明的红曲素抗流感牛奶健康、安全，长期服用具有预防流感和改善感冒患者症状的效果，同时改善肠道微生态环境，清除肠道中病原菌和腐败菌及其产生的毒素，促进机体健康。红曲牛奶对人体安全无害。下述实验例用于进一步说明但不限于本发明。实验例I本发明红曲牛奶(实施例I制备)抵抗小鼠流感病毒感染实验动物染毒及处死方法选用中山大学动物实验中心6 8周龄SPF级雌性BALB/c小鼠(2(T22g)，以乙醚将小鼠轻度麻醉后，分别滴鼻感染流感病毒，感染剂量为每只50uL的IX 104PFU/mL的流感病毒。正常空白组同等条件下用蒸馏水滴鼻，在病毒感染后第5天和14天，每组分别处死5只小鼠。分组和处理将小鼠随机分为3组(每组10只)，分为预防组(先给正常小鼠灌胃15天然后再感染流感病毒，继续灌胃10天红曲牛奶，每天50微升)、治疗组(病毒感染小鼠后连续灌胃红曲抗流感牛奶10天，每天50微升)，同时用普通牛奶组作为对照。I、本发明红曲牛奶对检测CTL细胞活性的影响肺实质细胞的制备将剪碎的肺组织放在振荡器上与胶原酶D (200ug/mL)和DNA酶I (40ug/mL)37°C条件下作用I小时，加入10毫升RPMI 1640培养基(含10%胎牛血清、2X10-5mol/L的2-巯基乙醇和抗生素)，消化15分钟，将上述液体用不锈钢滤网过滤，用淋巴细胞分离液进行密度梯度离心，收集单细胞悬液。用O. IMOI的流感病毒感染鼠淋巴瘤EL-4细胞作为靶细胞，与淋巴细胞在C02中37°C培养4h，采用乳酸脱氢酶释放实验检测CTL细胞活性。表I :淋巴细胞增殖试验结果
权利要求
1.ー种抗流感牛奶，其特征在于100体积份牛奶中含有红曲素O. 0Γ2体积份；其中红曲素由以下方法制成 A、红曲菌种培养 (O配制斜面菌种培养基称量切成小块状去皮马铃薯50重量份，向其中加入100体积份去离子水，煮沸I小时后将所得混合物过滤，所得过滤清液中加入O. 5重量份蛋白胨，根据滤液体积加琼脂I. 5°/Γ2%，加热待混合液全部溶化后分装入灭菌试管中，放入高压灭菌锅内，使用O. 06、. IMPa压カ灭菌2(T40min，灭菌后将试管略倾斜制成斜面，等待其自然冷却； (2)红曲菌接种培养在无菌条件下在(I)处所得斜面菌种培养基中接种红曲霉原菌，在生化培养箱内经32 35°C培养7 8天，用无菌移液管吸取O. 2^1%的无菌冰醋酸溶液5体积份至试管斜面培养种子内，搅匀后用无菌吸管吸取2 3体积份菌液备用； (3)红曲菌种三角瓶培养将2(Γ40重量份大米装入三角瓶中，洗净后浸泡3 4h，将水倒出并浙净多余的水，O. 06、. IMPa压カ下灭菌2(T30min，冷却后用无菌竹筷将米团打散，加入(2)处所备用的菌液I体积份，摇匀后放入25 30°C生化培养箱培养，待米粒开始发红后，每天摇动三角瓶，将瓶壁上的水珠滚到米上，视情况加入无菌水调节湿度，培养1(Γ15天，将曲种倒出.在4(T45°C下进行烘干，使水分降到12%以，但不低于7%，得红曲菌种A;将红曲菌种A加入100体积份的3%冰醋酸制成悬浮液B，待扩大培养使用； (4)扩大培养选择颗粒饱满、新鲜的大米，除去杂物，将8(Γ120重量份的大米装入三角瓶中，洗浄后浸4 6h，洗浄后浙净多余水分，蒸5 15min，以米透心为度，浙净多余的水，O.06、· IMPa压カ下灭菌30min，降温至35 40°C后接种(3)中获得的菌种A悬浮液B ;每100重量份灭菌后的米接种悬浮液B 15体积份，用无菌竹筷搅拌均匀，于25 35°C无菌生化培养箱中培养3 4天，培养期间每天摇动三角瓶，将瓶壁上的水珠滚到米上； (5)待全部米粒都呈深红色，根据曲料干湿程度，进行第一次凋湿，向曲料上喷洒一定量的冰醋酸溶液至溶液PH为3. 5，并拌匀，即为洗曲，保持32 35°C保温培养，每7 8小时摇动三角瓶混匀一次； B、24小时后进行洗曲第二次，每隔4小时翻拌一次； C、24小时后进行洗曲第三次，每隔6小时翻拌一次； D、每批曲7 8天可得，4(T45°C下烘干，得成曲C； E、成曲C加入3飞体积倍无菌超纯水，超声波20-30分钟制成均浆；加入3 8体积倍无菌超纯水，放置-10°C'3(TC反复冻融2 3次；在温度4 8°C下将冻融的均浆以每分钟8000转离心1(Γ30分钟，去除沉淀；用切向流超滤设备截留分子量〈30000道尔顿上清液，即为红曲素；除菌过滤，收集备用。
2.如权利要求I所述的红曲牛奶，其特征在于100体积份牛奶中含有红曲素O.5体积份。
3.如权利要求I所述的红曲抗流感牛奶，其特征在于100体积份牛奶中含有红曲素0.25体积份。
4.如权利要求I所述的红曲抗流感牛奶，其特征在于100体积份牛奶中含有红曲素1.5体积份。
5.如权利要求1-4任一所述的红曲抗流感牛奶，其特征在于按常规方法将红曲素加入到鲜奶中，制成红曲牛奶。
6.如权利要求1-4任一所述的红曲牛奶，其特征在于红曲素的制备方法包括如下步骤 A、红曲菌种培养 (O配制斜面菌种培养基称量切成小块状去皮马铃薯50重量份，向其中加入100体积份去离子水，煮沸I小时后将所得混合物过滤，所得过滤清液中加入O. 5重量份蛋白胨，根据滤液体积加琼脂2%，加热待混合液全部溶化后分装入灭菌试管中.放入高压灭菌锅内，使用O. IMPa压カ灭菌30分钟，灭菌后将试管略倾斜制成斜面，等待其自然冷却； (2)红曲菌接种培养在无菌条件下在(I)处所得斜面菌种培养基中接种红曲霉原菌，在生化培养箱内经32 35°C培养7 8天，用无菌移液管吸取O. 2%的无菌冰醋酸溶液5体积份至试管斜面培养种子内，搅匀后用无菌吸管吸取2体积份菌液备用； (3)红曲菌种三角瓶培养将40重量份大米装入三角瓶中，洗浄后浸泡3 4h，将水倒出并浙净多余的水，O. IMPa压カ下灭菌30min，冷却后用无菌竹筷将米团打散，加入(2)处所备用的菌液I体积份，摇匀后放入3(T35°C生化培养箱培养，待米粒开始发红后，每天摇动三角瓶，将瓶壁上的水珠滚到米上，视情况加入无菌水调节湿度，培养12天，将曲种倒出，在4(T45°C下进行烘干，使水分降到12%以，但不低于7%，得红曲菌种A ;将红曲菌种A加入100体积份的3%冰醋酸制成悬浮液B，待扩大培养使用； (4)扩大培养选择颗粒饱满、新鲜的大米，除去杂物，将100重量份大米入三角瓶中，洗浄后浸4 6h，洗浄后浙净多余水分，蒸5 15min，以米透心为度，浙净多余的水，O. IMPa压力下灭菌30min，降温至35 40°C后接种(3)中获得的菌种A悬浮液B ;姆100重量份灭菌后的米接种悬浮液B15体积份，用无菌竹筷搅拌均匀，于25KTC无菌生化培养箱中培养3 4天，培养期间每天摇动三角瓶，将瓶壁上的水珠滚到米上； (5)待全部米粒都呈深红色，根据曲料干湿程度，进行第一次凋湿，向曲料上喷洒一定量的冰醋酸溶液至溶液PH为3. 5，并拌匀，即为洗曲，保持32 35°C保温培养，每7 8小时摇动三角瓶混匀一次； B、24小时后进行洗曲第二次，每隔4小时翻拌一次 C、24小时后进行洗曲第三次，每隔6小时翻拌一次 D、每批曲7 8天可得，4(T45°C下烘干，得成曲C； E、成曲C加入5体积倍无菌超纯水，超声波20-30分钟制成均浆；加入4体积倍无菌超纯水，放置于_20°C反复冻融3次；在温度4°C下将冻融的均浆，以每分钟8000转离心20分钟，去除沉淀；用切向流超滤设备截留分子量〈30000道尔顿上清液即为红曲素；除菌过滤，即得。
7.如权利要求5所述的红曲抗流感牛奶，其特征在于红曲素的制备方法包括如下步骤 A、红曲菌种培养 (O配制斜面菌种培养基称量切成小块状去皮马铃薯50重量份，向其中加入100体积份去离子水，煮沸I小时后将所得混合物过滤，所得过滤清液中加入O. 5重量份蛋白胨，根据滤液体积加琼脂2%，加热待混合液全部溶化后分装入灭菌试管中.放入高压灭菌锅内，使用O. IMPa压カ灭菌30分钟，灭菌后将试管略倾斜制成斜面，等待其自然冷却；(2)红曲菌接种培养在无菌条件下在(I)处所得斜面菌种培养基中接种红曲霉原菌，在生化培养箱内经32 35°C培养7 8天，用无菌移液管吸取O. 2%的无菌冰醋酸溶液5体积份至试管斜面培养种子内，搅匀后用无菌吸管吸取2体积份菌液备用； (3)红曲菌种三角瓶培养将40重量份大米装入三角瓶中，洗浄后浸泡3 4h，将水倒出并浙净多余的水，O. IMPa压カ下灭菌30分钟，冷却后用无菌竹筷将米团打散，加入(2)处所备用的菌液I体积份，摇匀后放入3(T35°C生化培养箱培养，待米粒开始发红后，每天摇动三角瓶，将瓶壁上的水珠滚到米上，视情况加入无菌水调节湿度，培养12天，将曲种倒出，在4(T45°C下进行烘干，使水分降到12%以，但不低于7%，得红曲菌种A ;将红曲菌种A加入100体积份的3%冰醋酸制成悬浮液B，待扩大培养使用； (4)扩大培养选择颗粒饱满、新鲜的大米，除去杂物，将100重量份大米入三角瓶中，洗浄后浸4飞小吋，洗浄后浙净多余水分，蒸5 15分钟，以米透心为度，浙净多余的水，O.IMPa压カ下灭菌30min，降温至35 40°C后接种(3)中获得的菌种A悬浮液B ;每100重量份灭菌后的米接种悬浮液B15体积份，用无菌竹筷搅拌均匀，于25 30°C无菌生化培养箱中培养3 4天，培养期间每天摇动三角瓶，将瓶壁上的水珠滚到米上； (5)待全部米粒都呈深红色，根据曲料干湿程度，进行第一次凋湿，向曲料上喷洒一定量的冰醋酸溶液至溶液PH为3. 5，并拌匀，即为洗曲，保持32 35°C保温培养，每7 8小时摇动三角瓶混匀一次； B、24小时后进行洗曲第二次，每隔4小时翻拌一次 C、24小时后进行洗曲第三次，每隔6小时翻拌一次 D、每批曲7 8天可得，4(T45°C下烘干，得成曲C； E、成曲C加入5体积倍无菌超纯水，超声波20-30分钟制成均浆；加入4体积倍无菌超纯水，放置于_20°C反复冻融3次；在温度4°C下将冻融的均浆，以每分钟8000转离心20分钟，去除沉淀；用切向流超滤设备截留分子量〈30000道尔顿上清液，即为红曲素；除菌过滤，即得。
全文摘要
本发明公开了一种抗流感牛奶及其制备方法。本发明抗流感牛奶是通过在普通牛奶中添加一种从红曲菌中提取的红曲活性提取物——红曲素，其中制备红曲素的过程中，采用培养、洗曲、分子截留、过滤等步骤，制得的红曲素分子量<30000道尔顿。本发明的含红曲素的牛奶健康、安全，长期服用具有预防流感的效果，同时改善肠道微生态环境，清除肠道中病原菌和腐败菌及其产生的毒素，促进机体健康。抗流感牛奶对人体安全无害，对肠道中一些有益微生物不会产生影响。
文档编号A23C9/152GK102845525SQ201210369998
公开日2013年1月2日 申请日期2012年9月28日 优先权日2012年9月28日
发明者陆家海, 杜启科, 王银香, 于忠波 申请人:山东银香大地乳业有限公司, 王银香