一种对石蜡组织的egfr外显子基因突变检测试剂盒的制作方法

专利名称：一种对石蜡组织的egfr外显子基因突变检测试剂盒的制作方法
技术领域：
本实用新型涉及一种检测试剂盒，尤其是涉及一种对石蜡组织的EGFR外显子基因突变检测试剂盒。
背景技术：
EGFR是一种蛋白酪氨酸激酶受体(RTK)，位于第7号染色体pl3 q22区，全长200kb，由28个外显子组成，编码1186个氨基酸，其糖蛋白分子量约170kDa。EGFR家族有4 个结构相似的受体分子ErbBl (EGFR)、ErbB2 (HER2)、ErbB3 (HER3)、ErbB4 (HER4)。EGFR诱导癌症至少通过3种机制EGFR配体的过表达，EGFR的扩增或EGFR的突变活化。在这3种机制中，EGFR的突变活化是导致肿瘤细胞异常生物学行为的最主要因素。基于EGFR在肿瘤细胞过表达的特点，目前已开发出多种EGFR靶向药物。按照作用机制，可将其分为5种1)作用于EGFR激酶区的小分子酪氨酸激酶抑制剂(EGFR-TKI)，如吉非替尼(Gefitinib)、厄洛替尼(Erlotinib) ；2)作用于EGFR胞外域部分的单克隆抗·体(mAb),如西妥昔单抗(Cetuximab)、帕尼单抗(Vectibix) ；3)利用RNAi作用机理,特异性降解EGFR ；4)与EGFR单克隆抗体偶联的细胞毒素、细胞杀伤因子、放射性粒子等，选择性杀死富含EGFR的肿瘤细胞；5)阻碍EGFR的二聚化/寡聚化进而抑制EGFR的激活。其中EGFRTKI药物在治疗非小细胞肺癌(NSCLC)临床疗效明显，已被推荐为晚期患者的一线药物。常用的EGFR-TKI包括吉非替尼和厄洛替尼，是目前NSCLC患者最有效的靶向药物。但EGFR-TKI并非对所有患者都有效。EGFR外显子18、19或21发生突变的患者，吉非替尼有效率可高达80%，而野生型患者基本无效。EGFR敏感突变是药物有效的前提1-4。但部分EGFR-TKI初始治疗有效的患者后期会发生耐药，与EGFR E20突变密切相关5。以NSCLC为例，EGFR E20突变发生率为I. 6%，约占EGFR突变9%，50%的EGFR-TKI耐药由EGFR E20的I790M点突变所致。因此通过检测EGFR基因有没有突变，可以筛选出抗EGFR (表皮生长因子受体)靶向药物治疗有效的肿瘤患者，实现肿瘤病人的个体化治疗，从而延长患者生存期。对于有突变的患者，则能减少不必要的治疗费用和毒副作用。目前检测EGFR基因突变的检测试剂原料需多方配备，实验过程分步进行，耗时较长，容易污染，准确性不高，所以探索一种检测EGFR基因突变快速可靠的方法已经成为临床实验研究的热点问题。

实用新型内容为了解决上述技术问题，本实用新型提供一种对石蜡组织的EGFR外显子基因突变检测试剂盒，包括盒体I、盒盖2，盒体I内设置垫板3和隔离墙4，隔离墙4的一侧垫板上设置有 PCR 管 5、EGFR18-p 引物瓶 6、EGFR19_p 引物瓶 7、EGFR20_p 引物瓶 8、EGFR20_pl引物瓶9、EGFR21-p引物瓶10、装酶混合物的试剂瓶11 ;隔离墙4的另一侧设置有去离子水瓶12、醋酸钠溶液瓶13、100%酒精瓶14、70%酒精瓶15。[0007]将盒盖2盖住后，隔离墙4的两侧分别形成密闭空间，能防止试剂挥发等引起的污染，使得实验更准确。所述引物的浓度为5 U mol/L。所述引物序列和扩增片段大小如下表所示
引物__序歹丨■!__片段大小_
EGFRl8-p-R 5'-CTCTGTGTTCTTGTCCCCCC-3' 166bp EGFRl 8-p-F S'-GCCTGTGCCAGGGACCTT ACy__
EGFRl9-p-F 5'-CGTCTTCCTTCTCTCTCTGT-3' 148bp
EGFRi9-p-R 5^ccacacagcaaagcagaaac-s ^__EGFR2Q-p-F 5'-ATGCGAAGCCACACTGACGT_3' 139bp
EGFR2Q-p-R 5/-AAGGGCATGAGCTGCGTGAT-3>__
egfr21-p-f 5 ^ccaggaacgtactggtgaaa-s^ i27bp
EGFR21-P-R 5'-TGACCTAAAGCCACCTCCTT-3'__
EGFR2Q-pl-F S'-ATCACGCAGCTCATGCCCTT^ 129bp EGFR2Q-pl-R S'-CGTATCTCCCTTCCCTGATT^__所述酶混合物包括浓度为0. 4mmol/L 的 dNTPs, 4mmol/L 的 Mg2+, 2xBuffer,
I.25U/25 u I 的 HsTaq0本实用新型与现有产品相比，具有如下积极有益的效果本试剂盒结构简单、设计合理、使用方便、检测过程不易受污染；本试剂盒在检测石蜡组织的EGFR外显子基因突变时具有敏感性高、特异性强、耗时短等优点；本试剂盒中设置的隔离墙，使得一个空间变为两个空间，能有效防止试剂挥发等引起的污染，使得实验更准确。

图I为本实用新型的整体结构示意图。
具体实施方式
以下结合附图和实施例对本实用新型进行进一步说明。如图I所示，本实用新型的一个实施例为对石蜡组织的EGFR外显子基因突变检测试剂盒，包括盒体I、盒盖2，盒体I内设置垫板3和隔离墙4，隔离墙4的一侧垫板上设置有 PCR 管 5、EGFR18-p 引物瓶 6、EGFR19_p 引物瓶 7、EGFR20_p 引物瓶 8、EGFR20_pl 引物瓶9、EGFR21-p引物瓶10、装酶混合物的试剂瓶11 ;隔离墙4的另一侧设置有去离子水瓶12、醋酸钠溶液瓶13、100%酒精瓶14、70%酒精瓶15。将盒盖2盖住后，隔离墙4的两侧分别形成密闭空间，能防止试剂挥发等引起的污染，使得实验更准确。所述引物的浓度为5 y mol/L。所述引物序列和扩增片段大小如下表所示
权利要求1. 一种对石蜡组织的EGFR外显子基因突变检测试剂盒，其特征在于，它包括盒体(I)、盒盖(2)，盒体(I)内设置垫板(3)和隔离墙(4)，隔离墙(4)的一侧垫板上设置有PCR管(5)、EGFR18-p 引物瓶(6)、EGFR19_p 引物瓶(7)、EGFR20_p 引物瓶(8)、EGFR20_pl 引物瓶(9)、EGFR21-p引物瓶(10)、装酶混合物的试剂瓶(11);隔离墙⑷的另一侧垫板上设置有去离子水瓶(12)、醋 酸钠溶液瓶(13)、100%酒精瓶(14)、70%酒精瓶(15)。
专利摘要本实用新型公开了一种对石蜡组织的EGFR外显子基因突变检测试剂盒，包括盒体1、盒盖2，盒体1内设置垫板3和隔离墙4，隔离墙4的一侧垫板上设置有PCR管5、EGFR18-p引物瓶6、EGFR19-p引物瓶7、EGFR20-p引物瓶8、EGFR20-p1引物瓶9、EGFR21-p引物瓶10、装酶混合物的试剂瓶11；隔离墙4的另一侧设置有去离子水瓶12、醋酸钠溶液瓶13、100％酒精瓶14、70％酒精瓶15。本试剂盒结构简单、设计合理、使用方便、检测过程不易受污染；本试剂盒中设置的隔离墙，使得一个空间变为两个空间，能有效防止试剂挥发等引起的污染，使得实验更准确。
文档编号C12Q1/68GK202519263SQ2012201629
公开日2012年11月7日 申请日期2012年4月17日 优先权日2012年4月17日
发明者冯继锋, 吴建中, 唐金海, 曹海霞, 马蓉 申请人:冯继锋, 吴建中, 唐金海, 曹海霞, 马蓉