一种检测小肠结肠炎耶尔森氏菌的核酸侧向流试纸条的制备方法及其应用的制作方法
【专利摘要】本发明公开了本发明公开了食源性病原微生物-小肠结肠炎耶尔森氏菌的快速核酸试纸条检测试剂盒制备及其应用方法，还公开了针对小肠结肠炎耶尔森氏菌的特异性核酸PCR扩增用引物的设计方法，用核酸侧向流核酸试纸条检测PCR扩增产物的方法以及用途。本发明的方法使用特异性核酸序列扩增产物可用于检测其他来源病原微生物目的核酸序列的扩增产物，其特异性由扩增引物保证。
【专利说明】—种检测小肠结肠炎耶尔森氏菌的核酸侧向流试纸条的制备方法及其应用
【技术领域】
[0001]本发明属于分子生物学和免疫学领域，涉及食品及加工原料中小肠结肠炎耶尔森氏菌的核酸扩增产物侧向流免疫胶体金试纸条试剂盒的制备和应用方法。
【背景技术】
[0002]为有效控制食品生产和进出口贸易中因致病性微生物引起的食源性疾病，保证食品领域的公共安全，需要开发灵敏、便捷、准确的食源性病原微生物检测方法。在食源性疾病危险因素中，在我国流行的食源性疾病中，微生物性食物中毒位居第一，而在食源性病原微生物中其中最典型的致病菌是小肠结肠炎耶尔森氏菌、福氏志贺氏菌、金黄色葡萄球、单增李斯特菌、大肠杆菌0157:H7等病原菌。小肠结肠炎耶尔森氏菌是人和动物肠道内寄生的一种革兰氏阴性菌，属肠杆菌科耶尔森菌属，是肠道正常菌丛中的一种，在一定条件下可引起人和动物致病，引起胃肠道症状外，还能引起呼吸系统、心血管系统、骨骼结缔组织等疾患，甚至可引起败血症，造成死亡。该菌还是重要的食源性致病菌，很多国家都已将该菌列为进出口食品的常规检测项目。
[0003]在传统的食品生产、质量监督和进出口检验检疫中常规的细菌培养及鉴定方法，检验步骤繁琐，检验周期长，同时对于有些细菌仍无法给出快速和准确的鉴定，不能完全满足农产品及进 出口检验检疫的检测要求。基于核酸扩增的方法检测对象是来自病原微生物的DNA，经特异性扩增后进行产物鉴定，这类方法因灵敏度高，特异性好，耗时少而发展迅速。
[0004]荧光定量PCR技术是一种高灵敏度核酸检测和定量方法，基本原理是在实时荧光定量PCR反应中，引入了一种荧光化学物质，随着PCR反应的进行，PCR反应产物不断积累，荧光信号强度也等比例增加。荧光定量PCR具有灵敏度高、特异性和可靠性更强、能实现多重反应、自动化程度高、无污染性，具有实时性和准确性等特点，特别是依赖探针结合的TaqMan方法，目前已广泛应用于分子生物学研究和医学研究等领域。
【发明者】郑文杰, 李宗梦, 张宏伟, 刘培, 曲鹏, 奚文辉, 郝育杰, 尹长城, 刘斯奇 申请人:天津出入境检验检疫局动植物与食品检测中心