巨噬细胞抑制因子1在肝病中的应用的制作方法
【专利摘要】本发明涉及巨噬细胞抑制因子1在肝病中的应用。具体而言，本发明涉及巨噬细胞抑制因子1在制备诊断和／或监测受试者中肝病的试剂或试剂盒中的用途。本发明还涉及诊断和／或监测受试者中肝病的试剂或试剂盒，其包括本发明所述检测巨噬细胞抑制因子1的试剂。本发明的巨噬细胞抑制因子1和甲胎蛋白有很好的互补性，能够大幅提高肝癌的检出效率，具有良好的应用前景。
【专利说明】巨噬细胞抑制因子1在肝病中的应用
【技术领域】
[0001]本发明涉及肝病诊断监测领域。具体而言，本发明涉及巨噬细胞抑制因子I在肝病诊断和监测中的应用。
【背景技术】[0002]肝病尤其是肝癌严重威胁人类健康，其中原发性肝癌是原发于肝脏的肝细胞或肝内胆管上皮细胞的恶性肿瘤，为死亡率极高、严重危害人类健康的恶性肿瘤之一。世界范围内肝癌发病率有逐年上升的趋势，在我国恶性肿瘤发病中排名第四，发病人数约占全球的半数以上，发病率约为28.7 / 10万。由于解剖特点发病早期常缺乏典型症状，易于被忽视而延误治疗，出现明显症状时患者已进入中晚期，丧失最佳治疗时机。早期诊断和手术治疗是提高肝癌病人生存率的关键。对于肝癌的高危人群，现在最常用的监测手段是定期检测血浆中甲胎蛋白水平和影像学检查如超声等。然而，甲胎蛋白的敏感性和特异性都不令人满意，敏感度可达60~70%，特异性约90%左右。也有报道称CEA、AFP、CA199的联合检查可提高诊断的阳性率(司序，谭桂菊，吉林医学2008年8月第29卷第16期)。另外，使用甲胎蛋白作为标志物，还有30%-40%的肝癌病例不能早期检出(即AFP阴性患者)。在AFP阴性肝癌(58例)的研究表明，4种肿瘤标志物单项检测阳性率分别为AFU64%、CEA28%,CA19922%, TSGF66% (现代中西医结合杂志，2011年2月，20 (6)，660-662)。因此探索新的具有更高敏感性、特异性和准确性并可能具有早期诊断价值的肝癌肿瘤标志物对于提高我国肝癌临床诊断水平乃至提高疗效具有重要意义和必要性。
[0003]巨噬细胞抑制因子I (MICl)，也被称为生长分化因子15 (⑶F15)，是TGF- ^超家族中的一个重要成员。MICl广泛参与细胞凋亡、侵袭及转移等生物学过程。正常人血清中的成熟MIC-1蛋白呈低水平稳定表达，在病理状态下如肿瘤、急性损伤及炎症其表达水平可一过性显著升高。尽管MICl的具体生物学功能尚未阐明，但是大量研究提示MICl涉及炎症、凋亡和肿瘤的发生。但截止目前，MICl在肝癌中的功能尚不明确，国际上也未见MIC-1与肝癌的诊断和治疗监测的相关研究。
【发明内容】
[0004]本发明的研究结果表明，巨噬细胞抑制因子I(MIC-1)能够作为肝病尤其是肝癌的标志物用于肝病诊断和/或监测中。本发明的研究还发现MIC-1与AFP联合可以大幅提高肝癌的检出效率。因此，MIC-1单独或与AFP联合可用于诊断和/或监测受试者中的肝病，包括用于制备诊断和/或监测受试者中肝病的试剂或试剂盒。
[0005]因此，本发明一方面涉及巨噬细胞抑制因子I在诊断和/或监测受试者中肝病的用途。
[0006]在本发明的一个实施方案中，所述肝病包括肝癌、肝脏良性肿瘤和慢性肝炎，优选肝癌。本发明的分析检测结果发现，MIC-1与AFP有较好的互补性，在AFP阴性患者当中，令人吃惊的发现高达73%的患者呈现MIC-1血清阳性。因此在本发明的一个实施方案中，所述肝病是甲胎蛋白阴性肝癌。
[0007]在本发明的另一个方案中，本发明的巨噬细胞抑制因子I可以进一步与不同于巨噬细胞抑制因子I的其它肝病标志物联合使用，从而有利于提高特异性，这样的肝病标志物可以是本领域已知的任何肝病标志物(TSG、IAP、GGT、IAP、PHC、CEA、CA199)。本领域有大量文献公开了这样的标志物。在一个实施方案中，不同于巨噬细胞抑制因子I的其它肝病标志物可以是已知的肝癌标志物如甲胎蛋白，已知的肝脏良性肿瘤标志物或已知的慢性肝炎标志物。在本发明的一个实施方案中，例如在肿瘤如肝癌筛查中，鉴于MIC-1与AFP有较好的互补性，本发明的巨噬细胞抑制因子I进一步与甲胎蛋白联合使用，从而提高可以大幅提高肝癌的检出效率。
[0008]本发明的研究表明与本发明的MIC-1在肝癌的早期显诊断方面显著高于AFP。因此，在本发明的一个实施方案中，本发明的MIC-1用于早期诊断I期肝癌或II期肝癌。
[0009]在本发明的一个实施方案中，本发明的试剂或试剂盒可用于组织原位检测和/或监测巨噬细胞抑制因子I的表达(例如mRNA水平)，或者用于检测和/或监测巨噬细胞抑制因子I的血清水平。
[0010]在本发明的一个实施方案中，所述巨噬细胞抑制因子I的血清水平的临界值设为600pg / ml，从而可以提高灵敏度，有利地用于肝癌的筛查，特别是I或II期肝癌的诊断。
[0011]在本发明的一个实施方案中，所述巨噬细胞抑制因子I的血清水平的临界值设为IOOOpg / ml,从而提高诊断和/或监测特异性。
[0012]本发明另一方方面涉及诊断和/或监测受试者中肝病的试剂或试剂盒，其中包括上文描述的试剂或试剂盒。在本发明发现MIC-1可用于肝病的检测或监测后，这样的试剂和/或试剂盒可通过本领域常规技术容易地制备。例如所述试剂和/或试剂盒可以包括检测MIC-1和/或AFP的抗体，优选单克隆抗体，或者用于检测MIC-1和/或AFP表达的引物和/或探针等。所述试剂或试剂盒还可以包括常规的进行PCR反应的缓冲液、聚合酶、dNTPs混合物等。本发明的试剂盒还可以包括使用说明书等。
【专利附图】
【附图说明】
[0013]图1.肿瘤组织中MIC-1的表达水平显著高于癌旁正常组织和肝硬化组织。
[0014]图2.免疫组化显示MIC-1在肿瘤组织中的该表达和分布。
[0015]图3.肿瘤组织和癌旁MIC-1水平的western blot分析。
[0016]图4.肿瘤标志物MIC-1诊断肝癌的ROC曲线。
【具体实施方式】
[0017]为评估肝细胞癌中MICl中的作用，我们首先研究了 80组配对肝癌组织和对应患者治疗前血清样本中的MICl表达。通过对80组肝癌组织和邻近配对组织的mRNA进行分析，我们发现70% (56 / 80)的肝细胞癌中MICl存在高表达，显着高于癌旁肝组织(P<0.001)和无癌肝硬化组织(P〈0.001)(图1)，免疫组化结果显示肝癌组织中MICl弥散性分布于肝细胞的细胞质中(图2)。对4份代表性的患者组织样本提取总蛋白进行Westernblot分析(图3)，结果进一步证实肝癌组织中MICl的表达显著高于癌旁组织和无癌肝硬化组织；结果提示MIC-1在肝癌的发生发展中可能具有重要作用。此外，研究发现肿瘤组织中的MIC-1表达与血清样品成显著正相关(r=0.551, P<0.001)，组织中MICl表达阳性的患者血清MICl中位值(N=56)显著高于阴性组(N=24) (P〈0.001)。研究提示血清中MIC-1水平的显著升高与肝癌组织MIC-1的过表达存在显著相关，对血清中的MIC-1血清进行检测，可以反应患者肿瘤组织中MIC-1的表达改变，MIC-1能够作为肝癌肿瘤标志物在肝癌的诊断和治疗监测中发挥重要作用。
[0018]为探索MICl在肝病中的应用价值，我们分别检测440肝癌、30肝脏良性肿瘤、30慢性肝炎和500正常对照组血清MIC-1浓度，结果恶性肿瘤组MIC-1浓度显著高于良性肿瘤(P〈0.001)、慢性炎症(P<0.001)和正常对照组(P<0.001);慢性肝炎组MIC-1水平显著高于良性肿瘤(P〈0.001)和正常对照组(P〈0.001);良性肿瘤组MIC-1水平显著高于正常对照组(P〈0.001)，结果见表1。 [0019]表1:肝癌、肝脏良性疾病、慢性炎症和正常对照组中的MIC-1血清浓度比较
[0020]
【权利要求】
1.巨噬细胞抑制因子I在制备诊断和/或监测受试者中肝病的试剂或试剂盒中的用途。
2.权利要求1所述的用途，其中所述肝病包括肝癌、肝脏良性肿瘤和慢性肝炎，优选肝癌，更优选为甲胎蛋白阴性肝癌。
3.权利要求1或2所述的用途，其中所述巨噬细胞抑制因子I进一步与不同于巨噬细胞抑制因子I的其它肝病标志物联合使用，所述其它肝病标志物可以是肝癌标志物如甲胎蛋白，肝脏良性肿瘤标志物或慢性肝炎标志物。
4.权利要求3所述的用途，其中所述其它肝病标志物是甲胎蛋白，所述肝病是肝癌。
5.权利要求1-4任一项所述的用途，其中所述肝癌为I期肝癌或II期肝癌。
6.权利要求1-5中任一项所述的用途，其中所述试剂或试剂盒用于检测和/或监测肝组织中巨噬细胞抑制因子I的表达。
7.权利要求1-6中任一项所述的用途，其中所述试剂或试剂盒用于检测和/或监测巨噬细胞抑制因子I的血清水平。
8.权利要求7所述的用途，其中所述巨噬细胞抑制因子I的血清水平的临界值设为600pg/ml。
9.权利要求7所述的用途，其中所述巨噬细胞抑制因子I的血清水平的临界值设为IOOOpg / mlo
10.诊断和/或监测受试者中肝病的试剂或试剂盒，其中所述试剂或试剂盒包括权利要求1-9中任一项中定义的试剂或试剂盒。
【文档编号】C12Q1/68GK103616519SQ201310612603
【公开日】2014年3月5日 申请日期:2013年11月28日 优先权日:2013年11月28日
【发明者】张伟, 王小兵, 田海梅, 李艳芬, 李茉 申请人:张伟