一种检测精浆果糖试剂盒的制作方法
【专利摘要】本发明公开一种检测精浆果糖试剂盒，涉及一种生物化学试剂盒，属于医用领域。该试剂盒中试剂包括试剂A和试剂B；试剂A包括己糖激酶15-30KU/L、磷酸葡萄糖异构酶10-30KU/L、NADP+1.2mmol/L、缓冲液70mmol/L、防腐剂0.95g/L；试剂B包括葡萄糖-6-磷酸脱氢酶10-30KU/L、ATP15-30mmol/L、防腐剂0.95g/L。其有益效果在于：适用于全自动生化分析仪让精浆果糖测定便捷、准确，且减少操作误差，测定时间缩短，实现了大批量标本同时测定，适宜大规模推广使用。
【专利说明】一种检测精浆果糖试剂盒
【技术领域】
[0001]本发明涉及一种生物化学试剂盒，属于医用领域，具体地说是一种检测精浆果糖试剂盒。
【背景技术】
[0002]近年来，随着人们对优生优育的要求逐步提高，精液分析也成为临床常用的评价男性生育功能的重要检测手段，而男性副性腺功能对男性生殖功能的影响越来越受到人们的重视。精浆中的一些生化标志物可反映性腺功能，其中精浆果糖来自精囊液，由精囊腺分泌，是精子运动的能量来源。睾酮的水平影响精囊果糖的分泌，雄激素不足可造成果糖含量降低，因此果糖含量能间接反映睾丸间质细胞分泌睾酮的功能。
[0003]精浆果糖可作为精囊分泌功能的指标。精浆果糖测定可用于鉴别单纯性输精管阻塞所致的无精子症和输精管、精囊发育不良引起的无精子症。精浆果糖测定对判断男性生育力具有重要意义。研究发现，精浆果糖浓度减少的病例，精子存活率常较低，精子的活动力明显减弱。果糖含量与精子浓度明显相关，精子浓度越高，果糖分解率越高，故果糖含量随精子浓度的增加而降低。
[0004]鉴于此，精浆果糖的检测就显得尤为重要。目前，我国部分男科实验室展开了精浆果糖的检测，传统使用的方法有气相层析法、吲哚法、间苯二酚法、酶法。以上检测方法具体阐述如下:气相层析法原理是利用精浆中果糖与其他各组分物理化学的差异，在流动相经过固定相时，由于各组分在两相间的吸附、解析或其他亲和力的不同，各组分的移动速度也不同，而使果糖能从其他 组分得到分离，并使果糖浓缩和富集，据色谱图的峰高或面积来计算其含量。气相层析法具有精确度高，特异性好，对标本需求量少的特点，但由于此法对仪器设备的要求高，难于在临床推广，常将它作为测定果糖的参考方法。
[0005]WHO推荐的精浆果糖定量检测方法为吲哚法，其原理为果糖与吲哚在强酸、加热环境中生成有色复合物，该有色物质在470nm波长有最大吸收峰，其吸光度大小与果糖含量成正比。适用仪器为酶标仪相较全自动生化分析仪操作繁琐，不利于推广；反应特异性不够理想；在浓盐酸环境下反应，由于浓盐酸易挥发，易造成反应重复性差，尤其是标本检测量大时，由于操作时间的延长，这种现象更为明显；生物安全性差，强酸易污染环境及易腐蚀仪器。
[0006]间苯二酚法测定精浆果糖的原理是利用果糖在酸性环境中与间苯二酚保温，生成一种紫红色复合物，据其颜色的深浅求出果糖含量。适用仪器为半自动生化分析仪，且操作过程要求水浴保温较全自动生化分析仪操作繁琐，不利于推广；间苯二酚乙醇液在室温下放置过久会影响显色效果，不宜久贮，需新鲜配制；在浓盐酸环境下反应，由于浓盐酸易挥发，易造成反应重复性差，尤其是标本检测量大时，由于操作时间的延长，这种现象更为明显；生物安全性差，强酸易污染环境及易腐蚀仪器。
[0007]酶法测定精浆果糖的原理为己糖激酶分解果糖为果糖-6-磷酸，后者可变构为葡萄糖-6-磷酸，葡萄糖-6-磷酸脱氢酶催化葡萄糖-6-磷酸和NAD+生成NADH，通过监测340nm波长处NADH的吸光度值，并消除标本中葡萄糖对结果的影响后,可检测出标本中果糖的浓度。但该技术适用仪器为酶标仪较全自动生化分析仪操作繁琐，不利于推广；精浆样本测定前需要去蛋白测定试剂为冻干粉，测定前需溶解，步骤繁琐。
【发明内容】
[0008]本发明提出一种改进后的精浆果糖试剂盒，该试剂具有样本无需去蛋白处理，且试剂为液体试剂，具有无需使用前溶解的优点，使得操作简单、准确度高、重复性好、抗干扰能力强的优点。
[0009]为实现上述目的，本发明所述一种检测精浆果糖试剂盒，所述试剂盒包括试剂A和试剂B，所述试剂A各组分及其浓度范围:己糖激酶15KU/L、磷酸葡萄糖异构酶30KU/L、NADP+L 2mmol/L、缓冲液70mmol/L、防腐剂0.95g/L ;上述各组分分别加入纯化水混匀即可；试剂B各组分及其浓度范围:葡萄糖-6-磷酸脱氢酶10-30KU/L、ATP15-30mmol/L、防腐剂0.95g/L ;上述各组分分别加入纯化水混匀即可。
[0010]所述缓冲液为磷酸盐缓冲液、三羟甲基氨基甲烷缓冲液、PIPES缓冲液、HEPES缓冲液、TAPS缓冲液、甘氨酸缓冲液或硼酸缓冲液中的一种。
[0011]所述缓冲液的pH值为6.1-7.5。
[0012]所述防腐剂为叠氮钠、乙基汞硫代硫酸钠、对羟基苯甲酸、对羟基苯甲酸乙酯或苯酚广谱杀菌剂中的一种。
[0013]所述防腐剂的pH为7.0-9.0。
[0014]本发明所述一种检测精浆果糖试剂，其实现技术方案原理如下:己糖激酶分解果糖为果糖-6-磷酸，后者能够变构为葡萄糖-6-磷酸，葡萄糖-6-磷酸脱氢酶催化葡萄糖-6-磷酸和NAD+生成NADH，样本中的果糖含量与酶促反应产物的吸光度的变化值成正比，通过测定340nm波长处NADPH上升的吸光度值即可计算出果糖的浓度。
【权利要求】
1.一种检测精浆果糖试剂盒，其特征在于:所述试剂盒包括试剂A和试剂B，所述试剂A各组分及其浓度范围:己糖激酶15KU/L、磷酸葡萄糖异构酶30KU/L、NADP+L 2mmol/L、缓冲液70mmol/L、防腐剂0.95g/L ;上述各组分分别加入纯化水混匀即可；试剂B各组分及其浓度范围:葡萄糖-6-磷酸脱氢酶10-30KU/L、ATP15-30mmol/L、防腐剂0.95g/L ;上述各组分分别加入纯化水混匀即可。
2.如权利要求1所述一种检测精浆果糖试剂盒，其特征在于:所述缓冲液为磷酸盐缓冲液、三羟甲基氨基甲烷缓冲液、PIPES缓冲液、HEPES缓冲液、TAPS缓冲液、甘氨酸缓冲液或硼酸缓冲液中的一种。
3.如权利要求1所述一种检测精浆果糖试剂盒，其特征在于:所述缓冲液的pH值为6.1-7.5。
4.如权利要求1所述一种检测精浆果糖试剂盒，其特征在于:所述防腐剂为叠氮钠、乙基汞硫代硫酸钠、对羟基苯甲酸、对羟基苯甲酸乙酯或苯酚广谱杀菌剂中的一种。
5.如权利要求1所述一种检测精浆果糖试剂盒，其特征在于:所述防腐剂的pH为7.0_9.0 ο
6.如权利要求1所述一种检测精浆果糖试剂的测试方法，其特征在于:在样品杯中加12 u I待测品，再加入240 u I试剂A混勾后在恒温lmin，然后加入试剂B60 U I，混勾后在37°C恒温5-6min，340nm波长处以空白调零测定吸光度，读取结果。
7.如权利要求6所述一种检测精浆果糖试剂的测试方法，其特征在于:所述待测品为精浆样品，其制备方法为:将`采集的精浆与蒸馏水以1:4的体积比混合，充分混匀后的样本在 15-25°C稳定 8h。
8.如权利要求6所述一种检测精浆果糖试剂的测试方法，其特征在于:所述待测品为精浆样品，其制备方法为:将采集的精浆与蒸馏水以1:4的体积比混合，充分混匀后的样本在2-8°C稳定24h。
9.如权利要求6所述一种检测精浆果糖试剂的测试方法，其特征在于:所述检测方法为:终点法；其检测主波长为340nm ;检测副波长:670nm±10nm ;反应温度为37°C ;反应时间为6min。
【文档编号】C12Q1/32GK103667421SQ201310653263
【公开日】2014年3月26日 申请日期:2013年12月6日 优先权日:2013年12月6日
【发明者】赖仕彬, 党英萍, 陈友波 申请人:重庆博士泰生物技术有限公司